实训2-革兰氏染色PPT课件
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革兰染色法 ppt课件
P3
PPT课件
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注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。
2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的 残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。
PPT课件
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研究细菌的致病性
• 革兰阳性菌可产生外毒素使人致病。 • 革兰阴性菌主要以内毒素使人致病。（ LPS作为G-菌内毒
素致病 ）
PPT课件
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细菌的特殊结构形态观察
实验步骤 • 观看鞭毛、荚膜、芽孢的示范片 • 绘图、写实验报告
PPT课件
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细菌的特殊结构
芽胞(nuclear material ornucleoid)
• 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同 染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细 菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别 细菌。
PPT课件
3
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革兰染色法
• 该染色法是丹麦细菌学家革兰于1884年创建的, 至今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别
PPT课件
4
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革兰染色法的原理
★渗透学说：与肽聚糖的结构有关
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
PPT课件
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染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
大肠杆菌(10×100)
PPT课件
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染色结果
螺形菌Spiral bacterium
PPT课件
微生物实验二细菌的简单染色和革兰氏染色_图文_图文
染色结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果
染色结果
大肠杆菌革兰氏染色结果
染色结果
金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果
四、实验结果
显微镜放大倍数＝物镜放大倍数×目镜放大倍数
绘图记录观察结果
思考题
1、在制作涂片中，为什么要进行固定这 一步？
2、革兰氏染色中哪一步关键，为什么？
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳 性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁 的结构和组成不同决定的。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂 结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用 乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红 )复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂 蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞 中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染 剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌 。
2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。 3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。 4、染色：待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上，覆盖涂
面染色1-2分钟。 5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的
水变无色为止（注：勿冲去菌体）。 6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。 7、镜检：油镜观察并绘图。
二、实验原理---简单染色
染色前必须固定细菌。其目的有二：一是 杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增 加其对染料的亲和力。常用的有加热和化 学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原 有的形。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+） 和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染 色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
革兰氏染色课件PPT
复染
复染：将脱色后的涂片用复染液进行复染处理，以便更好地观察菌体或组织的形态和结构。
复染时应注意控制复染时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
冲洗和干燥
冲洗
将染色和脱色处理后的涂片用清 水冲洗干净，以便观察菌体或组 织的染色效果。
干燥
将冲洗干净的涂片放在干净的纸 巾上自然干燥，以便后续观察。
Part
固定时应注意控制火焰温度，避免过高或过低，以免影响 染色效果。
染色
染色：将涂片浸入革兰氏染色液中， 染色一定时间后取出晾干。
染色时应注意控制染色时间，避免过 长或过短，以免影响染色效果。
脱色
脱色：将染色后的涂片用脱色液进行脱色处理，以去除菌体或组织表面的色素。
脱色时应注意控制脱色时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
复染与初次染色要匹配
复染的颜色要与初次染色相匹配，以 便更好地观察染色效果。
其他注意事项
染色液要新鲜
染色液使用前要确保新鲜，过期 或变质的染色液会影响染色效果
。
避免交叉污染
在染色过程中要避免不同染色液之 间的交叉污染，以免影响染色结果 。
注意安全
染色过程中要注意安全，避免染色 液溅到皮肤或眼睛上，如不慎溅到 应立即用大量清水冲洗并及时就医 。
革兰氏染色还可以用于研究细菌的生 物学特性和分类学研究，有助于深入 了解细菌的生态学和进化关系。
Part
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片：将待染色的菌体或组织薄而均匀地涂在洁净的玻片上，然后晾干或烘干， 以便后续染色。
涂片时应注意避免涂层过厚，以免影响染色效果。
固定
固定：将涂片在火焰上快速通过两次，使菌体或组织固定 在玻片上，以便后续染色。
革兰氏染色实验课件
手指皮肤细菌
菌落形态
教学目标：
1.巩固和掌握显微镜油镜的正确使用 2.学习细菌革兰氏染色的原理和方法 3.学会显微镜观察细菌的形态 3.对人体微生物染色检查，初步建立无菌操作的概念
显微镜的使用
油镜头的识别和重要参数 油镜的工作原理 油镜的使用方法和注意事项
油镜头的识别和重要参数
放大倍数 数值口径 工作距离
实验二 革兰氏染色
实验要求
坚持课前预习 不迟到，不早退，更不能无故缺课 严格按照正确规范实验方法进行实验，作好记录 保持实验室整洁 注意安全 实事求是、独立完成实验报告
课程导入
观察上次实验课细菌培养结果 菌落观察：37℃孵育18～24h后观察 1.大小 2.形状 3.表面（光滑？ 湿润？） 4.边缘（整齐？） 5.透明？ 6.颜色（色素？）
注意：操作过程中始终贯穿无菌操作观念，要把生物安全放在心 里。在新冠疫情的环境下，作为医学生更应该牢记生物安全。
方法与步骤
2.染色
初染
1min
（结晶紫） 水洗
媒染 1min （碘液） 水洗
脱色 （95%乙醇）
30s～1min 水洗
自然干燥 观察
30s 复染 水洗 （稀释石碳酸复红）
方法与步骤
实验报告
姓名、班级和学号 实验题目 实验原理（略写） 实验操作（略写） 实验结果
——画图 ——文字描述 分析和讨论 思考题
思考
1.影响实验结果的因素有哪些？ 2.为什么初染时间不能过长？
劳动教育
1.分组整理和打扫实验室 2.实验后废弃物的分类 3.生物安全（培养基灭菌，洗手）
3.观察 1）看颜色
2)看形态
紫色：G+
红色：G圆形：球菌 杆形：杆菌 弧形：弧菌
细菌革兰氏染色PPT课件
细菌革兰氏染色ppt课件
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用，帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一，通过对细菌的染色， 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合，实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术，用于快速识别细菌种类，对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域，革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色，分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行，避免 染色过度或不足，同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理，以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量，避 免脱色过度或不足，影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异，通过结 晶紫初染和碘液媒染后，由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同，酒精脱色时，细胞壁对染料的吸 附能力不同，从而导致被脱色的程度 不同，最终影响了复染后细菌的着色。
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用，帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一，通过对细菌的染色， 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合，实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术，用于快速识别细菌种类，对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域，革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色，分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行，避免 染色过度或不足，同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理，以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量，避 免脱色过度或不足，影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异，通过结 晶紫初染和碘液媒染后，由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同，酒精脱色时，细胞壁对染料的吸 附能力不同，从而导致被脱色的程度 不同，最终影响了复染后细菌的着色。
《革兰氏染色》课件
脱色剂酒精处理
用脱色剂酒精洗涤，洗去多余的洗脱剂 碘。
苏木精染色
滴加苏木精染色，使革兰氏阳性菌呈紫 色，革兰氏阴性菌呈红色定细菌感染、指导抗生素治疗。
3 环境检测
用于监测环境中的细菌种类和数量。
2 食品安全
可检测食品中的细菌污染程度，保障食品卫 生。
4 研究领域
革兰氏阳性菌会形成革兰碘复合物。
3
洗脱剂碘处理
4
再滴加洗脱剂碘，使革兰氏阳性菌染色
固定，保持紫色。
5
染色剂洗脱剂处理
6
滴加染色剂洗脱剂，洗去细菌的颜色，
革兰氏阴性细菌变为红色。
7
热固定菌涂片
将培养物涂在载玻片上，用火焰热固定， 使细菌附着在玻片上。
洗脱剂酒精处理
用洗脱剂酒精洗涤，去除细菌细胞的多 余染色，革兰氏阴性细菌会变为红色。
《革兰氏染色》PPT课件
本课程将介绍《革兰氏染色》的原理、步骤和应用。革兰氏染色是一种常用 的细菌分类和鉴定方法，具有重要的实际应用价值。
什么是革兰氏染色
细菌鉴定方法
革兰氏染色是一种细菌分类 和鉴定方法，可以将细菌分 成革兰氏阳性和革兰氏阴性 两类。
染色技术
通过染色剂革兰碘复合物和 洗脱剂酒精的作用，使细菌 在显微镜下呈现不同的染色 性质。
帮助科学家研究细菌的特征和鉴定新的细菌 种类。
革兰氏染色的局限性
革兰氏染色无法鉴定革兰氏阳性细菌的种属和鉴别菌株的具体种类，某些细 菌也可能出现不典型的染色结果。
总结和展望
革兰氏染色是一种简单、快速且常用的细菌分类和鉴定方法。未来的研究将进一步完善该技术，提高准确性和 应用范围。
显微镜下的革兰氏染色
实验室操作
科学研究
用脱色剂酒精洗涤，洗去多余的洗脱剂 碘。
苏木精染色
滴加苏木精染色，使革兰氏阳性菌呈紫 色，革兰氏阴性菌呈红色定细菌感染、指导抗生素治疗。
3 环境检测
用于监测环境中的细菌种类和数量。
2 食品安全
可检测食品中的细菌污染程度，保障食品卫 生。
4 研究领域
革兰氏阳性菌会形成革兰碘复合物。
3
洗脱剂碘处理
4
再滴加洗脱剂碘，使革兰氏阳性菌染色
固定，保持紫色。
5
染色剂洗脱剂处理
6
滴加染色剂洗脱剂，洗去细菌的颜色，
革兰氏阴性细菌变为红色。
7
热固定菌涂片
将培养物涂在载玻片上，用火焰热固定， 使细菌附着在玻片上。
洗脱剂酒精处理
用洗脱剂酒精洗涤，去除细菌细胞的多 余染色，革兰氏阴性细菌会变为红色。
《革兰氏染色》PPT课件
本课程将介绍《革兰氏染色》的原理、步骤和应用。革兰氏染色是一种常用 的细菌分类和鉴定方法，具有重要的实际应用价值。
什么是革兰氏染色
细菌鉴定方法
革兰氏染色是一种细菌分类 和鉴定方法，可以将细菌分 成革兰氏阳性和革兰氏阴性 两类。
染色技术
通过染色剂革兰碘复合物和 洗脱剂酒精的作用，使细菌 在显微镜下呈现不同的染色 性质。
帮助科学家研究细菌的特征和鉴定新的细菌 种类。
革兰氏染色的局限性
革兰氏染色无法鉴定革兰氏阳性细菌的种属和鉴别菌株的具体种类，某些细 菌也可能出现不典型的染色结果。
总结和展望
革兰氏染色是一种简单、快速且常用的细菌分类和鉴定方法。未来的研究将进一步完善该技术，提高准确性和 应用范围。
显微镜下的革兰氏染色
实验室操作
科学研究
细菌的革兰染色法ppt课件
紫色 仍为紫色 脱去紫色 红色
三、实验材料 1.菌种
（1）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） （2）大肠杆菌（Escherichia coli）
培养24h，用于革兰氏染色。 2.染色液和试剂
草酸铵结晶紫染液、卢革氏碘液、95%酒精、番红染液、 生理盐水、乙醚-乙醇溶液、香柏油。 3.器材 废液缸、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显 微镜等。
实验二、细菌的革兰氏染色
一、实验目的 1. 掌握细菌革兰氏染色原理及方法、巩固油
镜的使用； 2. 初步掌握无菌操作技术。
二、实验原理 革兰氏染色法（Gram, 丹麦，1884年） （1）是细菌学上最常用的鉴别染色法，染色后，可将
细菌分为G+菌和G-菌。 （2）机理
主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。 ➢ G+菌细胞壁：肽聚糖含量高（90％）、交联程度高、
肽聚糖层厚、脂类含量少→用乙醇不易脱色； ➢ G-菌细胞壁：肽聚糖含量低（10％）、交联程度低，
肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高→用乙醇易脱色。
革兰氏染色程序和结果
步骤 方法
结果 阳性（G+） 阴性（G-）
初染 结晶紫 30s
紫色
媒染剂 碘液 30s
仍为紫色
脱色 95％乙醇 30s
保持紫色
复染 番红（或复红）30～60s 仍显紫色
四、实验方法
1.革兰氏染色 （1）步骤
取一干净载玻片→→在两端各加一滴生理盐水→→无 菌操作取菌种→→涂于生理盐水中（成菌膜） →→自 然干燥→→火焰固定→→初染（结晶紫，1min） →→水洗→→媒染（碘液，1min） →→水洗→→脱 色（乙醇，20-30s） →→水洗→→复染（蕃红， 2min） →→水洗→→自然干燥→→观察。
三、实验材料 1.菌种
（1）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） （2）大肠杆菌（Escherichia coli）
培养24h，用于革兰氏染色。 2.染色液和试剂
草酸铵结晶紫染液、卢革氏碘液、95%酒精、番红染液、 生理盐水、乙醚-乙醇溶液、香柏油。 3.器材 废液缸、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显 微镜等。
实验二、细菌的革兰氏染色
一、实验目的 1. 掌握细菌革兰氏染色原理及方法、巩固油
镜的使用； 2. 初步掌握无菌操作技术。
二、实验原理 革兰氏染色法（Gram, 丹麦，1884年） （1）是细菌学上最常用的鉴别染色法，染色后，可将
细菌分为G+菌和G-菌。 （2）机理
主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。 ➢ G+菌细胞壁：肽聚糖含量高（90％）、交联程度高、
肽聚糖层厚、脂类含量少→用乙醇不易脱色； ➢ G-菌细胞壁：肽聚糖含量低（10％）、交联程度低，
肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高→用乙醇易脱色。
革兰氏染色程序和结果
步骤 方法
结果 阳性（G+） 阴性（G-）
初染 结晶紫 30s
紫色
媒染剂 碘液 30s
仍为紫色
脱色 95％乙醇 30s
保持紫色
复染 番红（或复红）30～60s 仍显紫色
四、实验方法
1.革兰氏染色 （1）步骤
取一干净载玻片→→在两端各加一滴生理盐水→→无 菌操作取菌种→→涂于生理盐水中（成菌膜） →→自 然干燥→→火焰固定→→初染（结晶紫，1min） →→水洗→→媒染（碘液，1min） →→水洗→→脱 色（乙醇，20-30s） →→水洗→→复染（蕃红， 2min） →→水洗→→自然干燥→→观察。
相关主题
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4
实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
革兰氏染色
实训目的 实训原理
实训材料
实训结果 实训步骤
4
5
实训目的
实实训原原理理 实训材料
实训步骤
实训结果
G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分 子形成一种透性屏障，当乙醇脱色 时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保 留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈 紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙 醇脱色不能使其结构收缩，其脂含 量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结 晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染 液复染后呈红色。
染色
钓 菌
单染 色法
复染 色法
G﹢菌：呈紫色
绘图
G ˉ 菌：呈红色
涂抹
水 洗
11
革兰氏染色具体步骤 实训目的
实训原理
实训材料 实实训步步骤骤
实训结果
①每次染色后必须水洗：斜置 载玻片，在自来水龙头下用小 股水流冲洗，直至洗下的水呈 无色为止。
②脱色后须立即水洗，防止过 度脱色。
革兰染色法： 初染（结晶紫）
6
实训目的
实实训原原理理 实训材料
实训步骤
实训结果
7
实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
革兰氏染色
实训目的 实训原理
实训材料
实训结果 实训步骤
7
8
实训目的
实训原理 实实训训材料料 实训步骤
实训结果
①菌种（大肠杆菌，金黄 色葡萄球菌）
②酒精灯
1
2
3
③接种环
④革兰氏染液（结晶紫、 碘液、酒精、番红）
⑤载玻片
4
5
6 ⑥光学显微镜
9
实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
革兰氏染色
实训目的 实训原理
实训材料
实训结果 实训步骤
9
10
细菌抹片制备及染色程实序训目的 实训原理 实训材料 实实训步步骤骤 实训结果
载玻片 准备
干燥
干燥
接种环 灭菌
固定
火焰 固定
化学 固定
镜检
固体被检物加蒸馏 水一滴
液体被检物不加蒸 馏水
二、选择题
革兰氏染色的关键操作步骤是（ C）
A.结晶紫染色
B.碘液固定
C.酒精脱色
D.复染
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实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
思考题
四、填空题
1.革兰氏染色的操作程序是 涂片,干燥,固定,结晶紫染色1分钟,水洗,碘液媒染1分钟,水洗,95%,
_ 的乙醇脱色25秒,水洗,蕃红复染3-5分钟,水洗,晾干
1
实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
革兰氏染色
实训目的 实训原理
实训材料
实训结果 实训步骤
1
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实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
革兰氏染色
实训目的 实训原理
实训材料
实训结果 实训步骤
2
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实实训目目的的 实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
由于细菌个体微小，基本上无色透明，故将其用适当染料染色观察，方能显示它的形态、大小、构造及 染色特性等，在细菌鉴别上有重要意义。
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实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
思考题
一、名词解释
革兰氏染色法：是细菌的一种鉴别染色法,细菌首先用结晶紫染色,再最后用蕃红复染。凡是菌体初染的结晶紫被酒精脱去了紫色后,
又被蕃红复染成红色的细菌称为革兰氏阴性细菌；凡是菌体初染的紫色不能
被酒精脱色,也不能被蕃红复染成红色的细菌称为革兰氏阳性细菌。
1min
媒染（碘液 ） 1min
30s 脱色（95%乙醇）
复染（番红）
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实训目的
实训原理
实训材料 实实训步步骤骤
实训结果
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实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
革兰氏染色
实训目的 实训原理
实训材料
实训结果 实训步骤
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实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训训结结果果
通过光学显微镜观察细菌细胞染色情况：细胞呈红色的为革兰氏阴性菌；呈紫色的为革兰氏阳性菌， 记录实验结果完成实验报告
革兰氏染色反应的成败关键是: 1).菌龄:12-24小时的纯培养物。 2).革兰氏染色操作技术其中严格控制酒精脱色时间和菌液涂布时应均匀而薄是关键。 3).培养基的组成。
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实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
_。
2. 革兰氏染色反应与细菌细胞壁的_ 结构 _和_组_ 成 _有关。在革兰氏染色过程中,当用95%酒精
处理后,就放在显微镜下观察,革兰氏阳性菌呈_ 紫_色,而革兰氏阴性菌呈 无色。
3. 细菌在革兰氏染色过程中,最后用蕃红复染的原因是 G-细菌经结晶紫染色、碘液媒染、酒精 ,
脱色后菌体紫色脱去,故需用蕃红复染,这样在光镜下才能见到红色的菌体 。
革兰氏阴性菌
革兰氏阳性菌
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实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
小结
1.革兰氏染色法是的主要步骤：是涂片,干燥,固定,结晶紫染色1分钟,水洗,碘液媒染1分钟,水 洗,95%的乙醇脱色25秒,水洗,蕃红复染3-5分钟,水洗,晾干 2.革兰氏染色法原理：是结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的 复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色 处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶 紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、 肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能 阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使 革兰氏阴性菌呈红色。 3.染色的差异主要是：由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所引起的。
4. 两个典型的革兰氏正反应细菌和革兰氏负反应细菌经革兰氏染色后都呈阴性反应往往是由于 _ 酒精脱色时间过长 和__ 菌体培养时间太长 引起。
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实训目的
实训原理
实训材料
实训步骤
实训结果
思考题
五、简答题 10．革兰氏染色反应的成败关键是什么?为什么革兰氏染色有十分重要的理论与实践意义?
答：因通过革兰氏染色,可把几乎所有的细菌都分成G+和G-菌两大类细菌,在细胞结构、 成分、形态、生理、生化、遗传、免疫、生态和药物敏感性等方面都呈现出明显的差 异。因此,任何细菌只要通过革兰氏染色,即可提供不少重要的生物学特性方面的信息。