实训2-革兰氏染色PPT课件

1min
媒染（碘液 ） 1min
30s 脱色（95%乙醇）
复染（番红）
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实训结果
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革兰氏染色
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实训训结结果果
通过光学显微镜观察细菌细胞染色情况：细胞呈红色的为革兰氏阴性菌；呈紫色的为革兰氏阳性菌， 记录实验结果完成实验报告
革兰氏染色反应的成败关键是: 1).菌龄:12-24小时的纯培养物。 2).革兰氏染色操作技术其中严格控制酒精脱色时间和菌液涂布时应均匀而薄是关键。 3).培养基的组成。
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染色
钓 菌
单染 色法
复染 色法
G﹢菌：呈紫色
绘图
G ˉ 菌：呈红色
涂抹
水 洗
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革兰氏染色具体步骤 实训目的
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实训结果
①每次染色后必须水洗：斜置 载玻片，在自来水龙头下用小 股水流冲洗，直至洗下的水呈 无色为止。
②脱色后须立即水洗，防止过 度脱色。
革兰染色法： 初染（结晶紫）
4. 两个典型的革兰氏正反应细菌和革兰氏负反应细菌经革兰氏染色后都呈阴性反应往往是由于 _ 酒精脱色时间过长 和__ 菌体培养时间太长 引起。
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思考题
五、简答题 10．革兰氏染色反应的成败关键是什么?为什么革兰氏染色有十分重要的理论与实践意义?
答：因通过革兰氏染色,可把几乎所有的细菌都分成G+和G-菌两大类细菌,在细胞结构、 成分、形态、生理、生化、遗传、免疫、生态和药物敏感性等方面都呈现出明显的差 异。因此,任何细菌只要通过革兰氏染色,即可提供不少重要的生物学特性方面的信息。
革兰氏阴性菌
革兰氏阳性菌
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小结
1.革兰氏染色法是的主要步骤：是涂片,干燥,固定,结晶紫染色1分钟,水洗,碘液媒染1分钟,水 洗,95%的乙醇脱色25秒,水洗,蕃红复染3-5分钟,水洗,晾干 2.革兰氏染色法原理：是结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的 复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色 处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶 紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、 肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能 阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使 革兰氏阴性菌呈红色。 3.染色的差异主要是：由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所引起的。
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思考题
一、名词解释
革兰氏染色法：是细菌的一种鉴别染色法,细菌首先用结晶紫染色,再用碘液固定,然后用95%
的酒精脱色,最后用蕃红复染。凡是菌体初染的结晶紫被酒精脱去了紫色后,
又被蕃红复染成红色的细菌称为革兰氏阴性细菌；凡是菌体初染的紫色不能
被酒精脱色,也不能被蕃红复染成红色的细菌称为革兰氏阳性细菌。
⑤载玻片
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6 ⑥光学显微镜
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细菌抹片制备及染色程实序训目的 实训原理 实训材料 实实训步步骤骤 实训结果
载玻片 准备
干燥
干燥
接种环 灭菌
固定
火焰 固定
化学 固定
镜检
固体被检物加蒸馏 水一滴
液体被检物不加蒸 馏水
_。
2. 革兰氏染色反应与细菌细胞壁的_ 结构 _和_组_ 成 _有关。在革兰氏染色过程中,当用95%酒精
处理后,就放在显微镜下观察,革兰氏阳性菌呈_ 紫_色,而革兰氏阴性菌呈 无色。
3. 细菌在革兰氏染色过程中,最后用蕃红复染的原因是 G-细菌经结晶紫染色、碘液媒染、酒精 ,
脱色后菌体紫色脱去,故需用蕃红复染,这样在光镜下才能见到红色的菌体 。
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由于细菌个体微小，基本上无色透明，故将其用适当染料染色观察，方能显示它的形态、大小、构造及 染色特性等，在细菌鉴别上有重要意义。
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革兰来自百度文库染色
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G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分 子形成一种透性屏障，当乙醇脱色 时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保 留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈 紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙 醇脱色不能使其结构收缩，其脂含 量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结 晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染 液复染后呈红色。
二、选择题
革兰氏染色的关键操作步骤是（ C）
A.结晶紫染色
B.碘液固定
C.酒精脱色
D.复染
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思考题
四、填空题
1.革兰氏染色的操作程序是 涂片,干燥,固定,结晶紫染色1分钟,水洗,碘液媒染1分钟,水洗,95%,
_ 的乙醇脱色25秒,水洗,蕃红复染3-5分钟,水洗,晾干
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①菌种（大肠杆菌，金黄 色葡萄球菌）
②酒精灯
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③接种环
④革兰氏染液（结晶紫、 碘液、酒精、番红）