革兰氏染色试验步骤ppt课件

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细菌的革兰染色法ppt课件

细菌的革兰染色法ppt课件
紫色 仍为紫色 脱去紫色 红色
三、实验材料 1.菌种
(1)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) (2)大肠杆菌(Escherichia coli)
培养24h,用于革兰氏染色。 2.染色液和试剂
草酸铵结晶紫染液、卢革氏碘液、95%酒精、番红染液、 生理盐水、乙醚-乙醇溶液、香柏油。 3.器材 废液缸、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显 微镜等。
实验二、细菌的革兰氏染色
一、实验目的 1. 掌握细菌革兰氏染色原理及方法、巩固油
镜的使用; 2. 初步掌握无菌操作技术。
二、实验原理 革兰氏染色法(Gram, 丹麦,1884年) (1)是细菌学上最常用的鉴别染色法,染色后,可将
细菌分为G+菌和G-菌。 (2)机理
主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。 ➢ G+菌细胞壁:肽聚糖含量高(90%)、交联程度高、
肽聚糖层厚、脂类含量少→用乙醇不易脱色; ➢ G-菌细胞壁:肽聚糖含量低(10%)、交联程度低,
肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高→用乙醇易脱色。
革兰氏染色程序和结果
步骤 方法
结果 阳性(G+) 阴性(G-)
初染 结晶紫 30s
紫色
媒染剂 碘液 30s
仍为紫色
脱色 95%乙醇 30s
保持紫色
复染 番红(或复红)30~60s 仍显紫色
四、实验方法
1.革兰氏染色 (1)步骤
取一干净载玻片→→在两端各加一滴生理盐水→→无 菌操作取菌种→→涂于生理盐水中(成菌膜) →→自 然干燥→→火焰固定→→初染(结晶紫,1min) →→水洗→→媒染(碘液,1min) →→水洗→→脱 色(乙醇,20-30s) →→水洗→→复染(蕃红, 2min) →→水洗→→自然干燥→→观察。

《革兰氏染色法》课件

《革兰氏染色法》课件

快速鉴定
可以快速鉴定临床样本中细菌 的种类,帮助医生开出正确的 用药方案。
菌落鉴定
对于未知菌落的鉴定,革兰氏 染色法是最常用的分类方法之 一。
监测传染病
在监测传染病方面,革兰氏染 色法可以定位不同类型的病原 细菌,并帮助实现区域或全球 性疫情监测。
革兰氏染色法的优缺点
优点
快速1、简单方便2、准确性高3
《革兰氏染色法》PPT课 件
本课程将深入介绍革兰氏染色法,并探讨其在现代细菌学中的应用。您将会 了解到该技术的历史、原理以及与其他检测方法的比较。
革兰氏染色蒂安·革兰于1884年 发明。
2 改进
3 应用
后来,该方法被不断改进, 特别是发展了一种逆转染 色的方法,可以检测兼性 杆菌等细菌。
缺点
一次只能染色一种菌2、对某些细菌检测效果差 3、需要显微镜等专业处理设备1
革兰氏染色法与其他细菌检测方法的比 较
1
PCR法
可以检测DNA序列比革兰氏染色法更具特异性1,但需要高昂的设备和消耗品,以及专 业的操作技能3。
2
荧光显微镜观察法
可用于活菌的鉴定3,但不能谈及细胞壁结构,也较为耗时2。
3
革兰氏染色法成为一项必 备技术,并促进了细菌检 测、临床诊断和医学研究 的发展。
革兰氏染色法的原理和步骤
原理 步骤
基于细胞壁的结构差异,将菌落分为革兰阳性和 革兰阴性两类。
准备细菌涂片,使用紫色染料固定,用酒精漂洗 去除过量染料,再用红色染料染色。经过显微镜 观察,可以分辨细菌类型。
革兰氏染色法在细菌检测中的应用
ELISA法
对于临床诊断中需要检测抗原和抗体的病种2,效果较好。但由于存在假阳性和假阴性 结果,不能作为最终的诊断依据1。

《革兰氏染色原理》课件

《革兰氏染色原理》课件
革兰氏阴性细菌在染色后呈红色。
3 抗生素耐药性
革兰氏阴性细菌对抗生素的耐药性较强。
革兰氏染色在微生物检测中的应用
实验室检测
革兰氏染色是微生物学实验室中 常用的检测方法之一。
临床诊断
革兰氏染色可用于诊断感染性疾 病和选择合适的抗生素治疗。
水质检测
革兰氏染色可用于水质检测,判 断是否存在细菌污染。
革兰氏染色的优点和局限
优点
• 简单、快速 • 可判断细菌类型 • 适用于大多数细菌
局限
• 不适用于非细菌微生物 • 无法判断细菌代谢活性 • 可能出现假阳性或假阴性结果
总结和展望
革兰氏染色是微生物学中重要的染色技术,具有广泛的应用前景。
5
5. 染色
滴上红粉碱,静置片上约30秒,然后冲 洗干净。
革兰氏阳性细菌特点
密集细胞壁
革兰氏阳性细菌细胞壁富含 胞壁多糖和肽聚糖。
染色结果
革兰氏阳性细菌在染色后呈 紫色。
抗生素敏感性
革兰氏阳性细菌通常对青霉 素等抗生素敏感。
革兰氏阴性细菌特点
1 薄细胞壁
革兰氏阴性细菌的细胞壁相对较薄。
2 染色结果
《革兰氏染色原理》PPT 课件
革兰氏染色原理简介:介绍革兰氏染色的基本概念和应用背景。
革兰氏染色步骤
1
1. 涂片
在载玻片上涂抹细菌样品。
2. 固定
2
用热空气固定细菌样品,使其附着在玻
片上。
3
3. 静置涂染剂
将紫晶染钟。
使用酒精或乙醚脱色涂片,直到紫色不
再溢出为止。

革兰氏染色教学ppt课件

革兰氏染色教学ppt课件
7
2.3、意义:
(1) 鉴别细菌:用此染色法可将所有细菌分为两大 类,这样可将致病菌的范围缩小,然后再进一步鉴定。 (2)选择药物:革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌在细胞 壁等结构上有很大差别,因而对抗生素的敏感性不 同。例如大多数阳性菌对青霉素敏感大多数阴性 菌对青霉素不敏感(脑膜炎球菌等除外),可供临床 实践中选用抗菌药物的参考。 (3)与致病性的关系:大多数革兰氏阳性菌的致病物 质主要为外毒素;而大多数革兰氏阴性菌的致病物 质主要为内毒素.
16
细菌结构模式图
17
2.7实验原理:
① G+细菌的细胞壁
• G+细菌细胞壁具有较厚(20-80nm)而致 密的肽聚糖层,多达20层,占细胞壁成分 的60%~90%,它同细胞膜的外层紧密相 连 ;有的G+细菌细胞壁中含有磷壁酸。细 胞生长中有自溶素(酶类)起作用,磷壁 酸对自溶素有调节功能,阻止胞壁过度降 解和壁溶。如果细胞壁的肽聚糖层被消溶, G+ 细 胞 成 为 原 生 质 体 ( protoplasts) , 细 胞壁不复存在,而只存留细胞膜。除链球 菌外,大多数G+细菌细胞壁中含极少蛋白
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2.4具体操作步骤:
2.4.1涂片: 左手持菌液试管,右手持接种环, 用接种环从试管培养液中取一环菌,从酒 精灯外焰穿过,于载玻片中央涂成薄层( 事先在背面做好标记圆圈)即可,或先滴 一小滴无菌水于载玻片中央,用接种环从 斜面上挑出少许,与载玻片上的水滴混合 均匀,涂成一薄层。拔或塞试管塞时,应 将试管口通过火焰略加烧灼,最后将接种 环在火焰上烧灼灭菌。
革兰染色
1
一、染色标本的制备
1、涂片:载玻片上滴加生理盐水一滴,接种环取待检 菌培养物少许,研入无菌生理盐水中,形成一个极薄的 均匀的菌膜,直径在1cm左右为宜。如果时液体培养物 则直接取少许菌液涂成菌膜。

《革兰氏染色法》课件

《革兰氏染色法》课件

将脱色后的涂片用番红染液复染,时间约为1-2分钟。番红是 一种酸性染料,可以和蛋白质结合,使菌体或细胞呈现红色 。
番红复染的作用是使菌体或细胞呈现红色,使其更加明显, 有助于观察和鉴别。同时,番红还可以与结晶紫形成鲜明的 对比,使观察更加准确。
冲洗与干燥
• 将染色完成的涂片用清水冲洗干净,然后晾干或用吸水纸吸干 水分。冲洗的目的是去除染色过程中残留的染料和媒染剂等物 质,以免对观察造成干扰。干燥的目的是使涂片固定,以便于 保存和观察。
背景
革兰氏染色法的发明对于细菌学的发展起到了重要的推动作 用,为后续的细菌分类、疾病诊断和治疗提供了有力支持。
染色原理
原理
革兰氏染色法的染色原理主要是通过 一系列的脱色处理和复染,使细菌着 色,从而根据颜色差异将细菌分为革 兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
操作流程
革兰氏染色法通常包括涂片、脱色、 媒染、染色和复染等步骤,通过这些 步骤的组合和调整,可以实现对不同 类型细菌的准确鉴别。
革兰氏染色法的结
03
果与意义
革兰氏阳性菌与阴性菌的染色特性
革兰氏阳性菌
被染成紫色或蓝紫色,不易被酒 精脱色,有厚重的革兰氏染色反 应。
革兰氏阴性菌
被染成红色或淡红色,易被酒精 脱色,有较弱的革兰氏染色反应 。
染色结果的分析与解读
根据染色结果判断细菌的种类和特性,有助于临床诊断和 治疗。
通过观察染色后细菌的形态和排列,可以初步判断细菌的 致病性。
重要性
革兰氏染色法对于临床医学、生物技术和食品工业等领域具有重要意义,能够 帮助科学家和医生快速准确地鉴别不同类型的细菌,从而采取相应的治疗和预 防措施。
发展历程与背景
发展历程
革兰氏染色法由丹麦细菌学家汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884 年发明,至今已有百余年历史。随着科学技术的不断进步, 该方法在操作流程和染料选择等方面不断得到优化和改进。

革兰氏染色课件PPT

革兰氏染色课件PPT

复染
复染:将脱色后的涂片用复染液进行复染处理,以便更好地观察菌体或组织的形态和结构。
复染时应注意控制复染时间,避免过长或过短,以免影响染色效果。
冲洗和干燥
冲洗
将染色和脱色处理后的涂片用清 水冲洗干净,以便观察菌体或组 织的染色效果。
干燥
将冲洗干净的涂片放在干净的纸 巾上自然干燥,以便后续观察。
Part
固定时应注意控制火焰温度,避免过高或过低,以免影响 染色效果。
染色
染色:将涂片浸入革兰氏染色液中, 染色一定时间后取出晾干。
染色时应注意控制染色时间,避免过 长或过短,以免影响染色效果。
脱色
脱色:将染色后的涂片用脱色液进行脱色处理,以去除菌体或组织表面的色素。
脱色时应注意控制脱色时间,避免过长或过短,以免影响染色效果。
复染与初次染色要匹配
复染的颜色要与初次染色相匹配,以 便更好地观察染色效果。
其他注意事项
染色液要新鲜
染色液使用前要确保新鲜,过期 或变质的染色液会影响染色效果

避免交叉污染
在染色过程中要避免不同染色液之 间的交叉污染,以免影响染色结果 。
注意安全
染色过程中要注意安全,避免染色 液溅到皮肤或眼睛上,如不慎溅到 应立即用大量清水冲洗并及时就医 。
革兰氏染色还可以用于研究细菌的生 物学特性和分类学研究,有助于深入 了解细菌的生态学和进化关系。
Part
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片:将待染色的菌体或组织薄而均匀地涂在洁净的玻片上,然后晾干或烘干, 以便后续染色。
涂片时应注意避免涂层过厚,以免影响染色效果。
固定
固定:将涂片在火焰上快速通过两次,使菌体或组织固定 在玻片上,以便后续染色。

微生物形态—革兰氏染色(食品微生物检验技术课件)

微生物形态—革兰氏染色(食品微生物检验技术课件)
Βιβλιοθήκη 枯草芽孢杆菌(1000倍镜)
1、涂片太厚影响脱色且不利于细胞形态观察,应注意涂菌量, 避免菌多菌厚或菌少菌薄对实验结果的影响。
2、干燥过程中注意火焰温度不宜太高。
3、染色过程中,初染、媒染、脱色、复染过程时间的把握;染 色剂滴加速度不宜过快,防止涂片上菌体的脱落。
为什么要选用对数期的菌来做革兰氏 染色实验?
1.涂片制备:涂片、干燥、固定;
2.染色:在已经制好的涂片菌膜处,滴加石炭复红染液染色12min;
3.水洗:斜置载玻片,倾去染液,用流水轻轻冲去染液至流水变清 ,注意水流不要直接重载涂菌处,以免菌体被冲掉;
4.干燥:自然干燥或电吹风吹干,也可用吸水纸吸干。
大肠杆菌(1000倍)
1.细菌涂片的制备 2.初染 3.媒染 4.脱色 5.复染
丹麦医生,C.Gram于1884年发明的 一种鉴别不同类型细菌的染色方法。
染色步骤: 结晶紫初染---碘液媒染---乙醇脱色
---番红复染
染色结果: 紫色:革兰氏阳性菌 红色:革兰氏阴性菌
普通光学显微镜、结晶紫染色剂、番红染色液、革兰碘液、95%乙 醇、接种环、酒精灯、载玻片、滴管、烧杯、洗瓶等。

实验二细菌革兰氏染色ppt课件

实验二细菌革兰氏染色ppt课件
兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 (3)在镜检时,以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 (4)设定阴性和阳性对照,确保实验的可靠性。
五、思考题
1、讲述革兰氏染色的原理并指出E.C和B.S分别属于革兰 氏阳性或阴性?
2、观察细菌为什么要染色?为什么细菌染色多采用碱性 染料?
3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚?革兰氏染色 成败的关键一步是什么?
crystal violet stain
wash with water
Counterstain wi在涂片时不可过厚,否则在染色脱色时,都不易均匀, 固定时,不可过热,以载玻片不烫手为宜。
(2)严格掌握脱色程度,是革兰氏染色的关键步骤。如脱 色
时间太长,阳性菌会误为革兰氏阴性菌,时间不足, 革
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高(50~90)
含量很低(~10)
含量较高(<50)

一般无(<2)
含量较高(~20)

含量较高
三、实验材料
1、菌种:大肠杆菌(E.C)、枯草杆菌(B.S) 2、染料:结晶紫、复红、碘液等 3、材料:95%酒精等
Heat fixing
Staining
实验二 细菌革兰氏染色
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
二、实验原理
C.Gram(革兰)于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染,其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
4、当对未知菌进行革兰氏染色时,怎样能证明你的染色 技术和结果的正确性?
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实验一 显微镜(油镜)的使用和细菌 的三种基本形态观察
一、实验目的
1、学习并掌握油镜的基本原理和使用方法。
2、观察和识别细菌的三种基本形态。
1
二、基本原理
1 、增加照明强度
在油镜与载玻片之间加入与玻片的折射率相仿的 镜油,使进入物镜的光线不会由折射或反射造成损失, 基本上全进入镜头,结果提高了照明强度,使图像更 加清晰。
位置,可变光阑开到最大。 5 、加香柏油:使油镜镜头浸入香柏油中。注意油镜镜头千万
不要压在玻片标本上。 6 、调焦: 转动粗调焦螺旋,再缓慢地提升油镜调焦至物像
清晰。注意下降或上升镜筒或载物台绝不可用力过猛。 7 、观察: 仔细观察细菌的三种基本形态 8 、显微镜用毕后的处理: 上升镜筒,取下玻片,清洁油镜
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二、基本原理
1 、革兰氏染色原理
通过结晶紫液初染和碘液媒染后,在细菌的细胞膜内可 形成不溶于水的结晶紫液和碘液的复合物,G+细菌由 于其细胞壁较厚,肽聚糖网层次多和交联致密,因此遇 脱色剂乙醇处理时,因失水而使网孔缩小,再加上它不 含类脂,故乙醇的处理不会溶出缝隙,因此能把结晶紫 与碘的复合物牢牢留在壁内,使其保持紫色。
5
棒状杆菌
6
螺旋菌
7
注意事项
1 、油镜工作距离短,故操作时要特别谨慎,切 忌用眼 睛对着目镜边观察边下降镜筒,而应从 侧面注视。
2 、调焦时,应特别注意,切勿将粗调节器向反 方向(由高向低)转动而损失镜头和玻片。
8Байду номын сангаас
实验报告 1、绘细菌三种基本形态图
2、简述油镜的工作原理
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实验二 细菌的芽孢染色和 革兰氏染色法
染色结果:阴性细菌(G-): 染成红色
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2 、芽孢染色原理
细菌的芽孢具有厚而致密的壁,透性低,不易着 色,若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色。 芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦着色后 又难以脱色这一特点,用着色力强的染色剂孔雀绿 或石炭酸,在加热条件下,延长染色时间,使染料 不仅进入菌体也进入芽孢内,进入菌体的染料经水 洗后被脱色,而芽孢一经着色就难以被水洗脱,当 用对比度大的复染剂番红复染后,芽孢仍保留初染 剂的绿色,而菌体则被染成复染剂的红色。
折射率(n) 空气 1.00 水 1.33 香柏油 1.52 玻璃 1.55
2
2 、增加显微镜的分辨率
分辨率是指显微镜能分辨两点间最小距离的能力。 D值愈小则表明分辨力愈强。
D=0.61λ/NA NA=n·sinα/2
λ:光波波长 NA:物镜的数值孔径值
n:介质折射率 α:镜口角(总是小于180°)
一、实验目的
1 、学习并掌握革兰氏染色和芽孢染色的 原理和方法。
2 、了解革兰氏染色和芽孢染色在细菌分 类鉴定中的重要性。
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二、基本原理
1 、革兰氏染色原理
革兰氏染色法是Gram发明的一种细菌鉴别染色法, 通过这种染色方法,可将细菌分为两大类: 一类被染成紫色,称为革兰氏阳性细菌; 一类被染成红色,称为革兰氏阴性细菌。 其染色原理主要根据两类细菌的细胞壁化学组成和 结构不同。
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三、实验器材
1 、菌种:大肠埃希氏菌(Escherichia coli) 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 或巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。
2 、试剂:革兰氏染液:草酸铵结晶紫染液、卢戈氏典液、 95%乙醇、番红复染液; 芽孢染液:5%孔雀绿染色液、 0.5%番红水溶液。
反之, G-细菌的细胞壁薄,外膜层类脂含量高,肽聚 糖层薄,交联度差,遇脱色剂乙醇后,以类脂为主的外
膜迅速溶解,这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫
与碘复合物的溶出,因此细胞褪成无色。再经番红、沙 黄等红色染料复染, 就使G-细菌呈现红色, 而G+细菌则 保留紫色染。色结果:阳性细菌(G+): 染成紫色
3
三、实验器材
1 、标本:细菌三型玻片。 2 、试剂:香柏油、镜头清洗液(V乙醚:V酒精=7:3)。 3 、器具:显微镜(有油镜)、擦镜纸、玻璃棒等。
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四、实验步骤
1 、放置标本:将染色的细菌三型玻片置于镜台上。 2 、找合适的视野: 先用低倍镜寻找合适的视野并将欲观察的
部位其移到视野中央。 3 、转换油镜:将油镜转到工作位置。 4 、调节聚光器与油镜数值孔径一致 : 将聚光器上升到最高
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染色结果(革兰氏染色)
枯草芽孢杆菌(革兰氏染色)
大肠杆菌(革兰氏染色)
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染色结果(革兰氏染色)
金黄色葡萄球菌(革兰氏染色)
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染色结果(芽孢染色)
枯草芽孢杆菌(芽孢染色)
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注意事项
1、革兰氏染色关键是脱色时间,如脱色时间过长,会 造成假阴性。如脱色时间过短,会造成假阳性。 2、革兰氏染色的菌种,选用培养18-24h菌龄的细菌 为宜。若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶使革兰氏阳 性菌转呈阴性反应。 3、芽孢染色的菌种的菌龄,应使大部分芽孢仍保留在 菌体内为宜。芽孢杆菌一般在37℃下培养12-14h效果 最佳。 4、在孔雀绿加热过程中,要及时补充染液,切勿让涂 片干涸。
3 、器具:显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、镊子、 木夹、香柏油、酒精乙醚液、擦镜纸等。
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四、实验步骤
1 、革兰氏染色
涂片: 用接种环挑取少许菌苔于水滴中混匀后,再挑取2-3 环菌悬液至另一载片上涂开。
干燥: 室温自然干燥或电吹风吹干
固定: 涂片朝上,通过火焰2-3次,
初染:滴加草酸铵结晶紫覆盖涂片区域染色2min,水洗。
染 媒染:滴加卢氏碘液,染色1min,水洗。
色 脱色:用滴管加95%乙醇冲洗脱色约30秒,立即水洗。
复染:滴加番红液复染约2min,水洗。
镜检 清洁显微镜
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2、芽孢染色
制片 染色 滴加孔雀绿染液于涂片上,用木夹夹住载玻片在
微火上 加热至染液冒蒸汽时开始计时5min。 加热过程中要及时添加染色液,切勿让标本干涸。 水洗 待玻片冷却后,用缓流自来水冲洗至流出的水无 色为止。 复染 用番红染色液复染2min 水洗 待玻片冷却后,用缓流自 来水冲洗至流出的水无 色 镜检为止。干燥后用油镜观察
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实验报告
1、绘枯草芽孢杆菌图
2、将革氏染色结果填于下表
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