实验一 革兰染色法PPT课件
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手后方可离室。值日同学负责打扫实验室，并关好 水电、门窗方可离开。
2020/3/26
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1
实验一 革兰染色法
实验目的要求
1.掌握油镜的使用 2.熟悉革兰氏染色法原理、 步骤、结果、意义 3.掌握细菌的基本形态和特殊结构
2020/3/26
2
2
细菌染色的方法
• 单染法:采用一种染料染色,只能观察细菌的形态和 排列特征，不能观察细菌的染色特性和进行鉴别。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。 2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的
残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。
3. 选用幼龄的细菌。选用培养16h-24h菌龄的细菌为宜。若菌龄
太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。
2020/3/26
(1)先用低倍镜观察，再用高倍镜观察，找出适当的视野。 (2)将高倍镜转出，然后在涂片上加香柏油一滴。 (3)将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的颜色和形态。
2020/3/26
P3
9
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注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
★等电点学说：与细菌所带电荷有关
革兰阳性菌等电点低（pI）为2~3，在中性或碱性环境中所 带负 电荷多；革兰阴性菌pI为4~5，所带负电荷少，影响结合染色的多 少
2020/3/26
5
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实验材料与方法
• 材料: 菌种：葡萄球菌和大肠埃希菌混合物（18-24h）
牙垢 试剂：结晶紫染液、碘液
95%酒精、稀释苯酚复红液 其他：玻片、接种环、酒精灯
素致病 ）
2020/3/26
17
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细菌的特殊结构形态观察
实验步骤 • 观看鞭毛、荚膜、芽孢的示范片 • 绘图、写实验报告
2020/3/26
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细菌的特殊结构
芽胞(nuclear material ornucleoid)
枯草杆菌芽孢的观察
芽2孢020/：3/26休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境1。9
微生物实验课注意事项
• 禁止不穿白大衣进入实验室； • 禁止在实验室内吃东西、吸烟；不得高声喧哗，随
处走动；
• 严禁用酒精灯点燃酒精灯； • 严禁把实验室内任何物品带出室外；
• 病原材料污染桌面、地板等或误吸入口，应立即报 告教师进行处理；
• 爱护实验仪器设备，损坏仪器要赔偿； • 实验完毕，废弃物放入指定地点，桌面理清洁，洗
2020/3/26
大肠杆菌(10×100)
12
12
染色结果
螺形菌Spiral bacterium
2020/3/26
13
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革兰染色意义
★鉴别细菌 ★选择抗菌药物 ★研究细菌的致病性
2020/3/26
14
14
选择抗菌药物
• 常见的革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球 菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色 链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、 蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临 床重要等病原菌
10
10
实验完毕后的处理：
1.将浸过油的镜头按照下述方法擦拭干净： a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯（）将镜头擦2-3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。`
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
2020/3/26
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染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
• 革兰氏阳性菌通常对青霉素类、第一（或第二）代头孢菌 素等高度敏感 ，青霉素可为化脓性细菌感染可首选药物 。
2020/3/26
15
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选择抗菌药物
• 常见的革兰氏阴性菌：沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾 杆菌等）、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆 菌等）、霍乱弧菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细 菌感染中占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐 药
• 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同 染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细 菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别 细菌。
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革兰染色法
• 该染色法是丹麦细菌学家革兰于1884年创建的,至 今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别
2020/3/26
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革兰染色法的原理
无菌生理盐水、显微镜等
2020/3/26
6
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染 色 标 本 检 查 基 本 程 序
2020/3/26
涂片
干燥
固定
染 色 镜 检
7
7
革兰氏染色步骤与现象
初染1min
媒染1min
脱色15-20s
复染1min
G-
G+
结晶紫
碘液
95%乙醇
复红/苯酚
2020/3/26
注意：每一步染色后水冲，甩干水
8
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涂片观察（P3）
★渗透学说：与肽聚糖的结构有关
革兰阳性菌细胞壁主要由致密的Biblioteka Baidu聚糖网状结构组成，壁厚、类 脂质含量低，酒精不易渗透，反而形成一道屏障，阻止染料向细 胞外渗出。
革兰阴性菌细胞壁肽聚糖层较薄、交联度低，脂类含量高，酒精 易渗透进入细胞内，将染料脱出。
★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关
革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫-碘结合形成更大的 复合物，不易被酒精脱出。
• 革兰氏阴性菌对第三代头孢、氨基糖苷类、抗假单胞菌 属的青霉素类、多粘菌素等高度敏感，对头霉素类和第 二代头孢菌素也较敏感。例如氟哌酸对革兰染色阴性杆 菌有效，如肠道病、腹泻为常用药 。
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16
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研究细菌的致病性
• 革兰阳性菌可产生外毒素使人致病。 • 革兰阴性菌主要以内毒素使人致病。（ LPS作为G-菌内毒
19
细菌的荚膜的观察
荚膜（capsule)
荚膜2020：/3/26多糖，包裹在菌体外围，保护菌体
20
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细菌鞭毛的观察
鞭毛：运动，菌落形态。
2020/3/26
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本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净 交作业，值日同学留下 下周实验课（细菌的人工培养）
再见！
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实验一 革兰染色法
实验目的要求
1.掌握油镜的使用 2.熟悉革兰氏染色法原理、 步骤、结果、意义 3.掌握细菌的基本形态和特殊结构
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细菌染色的方法
• 单染法:采用一种染料染色,只能观察细菌的形态和 排列特征，不能观察细菌的染色特性和进行鉴别。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。 2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的
残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。
3. 选用幼龄的细菌。选用培养16h-24h菌龄的细菌为宜。若菌龄
太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。
2020/3/26
(1)先用低倍镜观察，再用高倍镜观察，找出适当的视野。 (2)将高倍镜转出，然后在涂片上加香柏油一滴。 (3)将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的颜色和形态。
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P3
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注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
★等电点学说：与细菌所带电荷有关
革兰阳性菌等电点低（pI）为2~3，在中性或碱性环境中所 带负 电荷多；革兰阴性菌pI为4~5，所带负电荷少，影响结合染色的多 少
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实验材料与方法
• 材料: 菌种：葡萄球菌和大肠埃希菌混合物（18-24h）
牙垢 试剂：结晶紫染液、碘液
95%酒精、稀释苯酚复红液 其他：玻片、接种环、酒精灯
素致病 ）
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细菌的特殊结构形态观察
实验步骤 • 观看鞭毛、荚膜、芽孢的示范片 • 绘图、写实验报告
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细菌的特殊结构
芽胞(nuclear material ornucleoid)
枯草杆菌芽孢的观察
芽2孢020/：3/26休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境1。9
微生物实验课注意事项
• 禁止不穿白大衣进入实验室； • 禁止在实验室内吃东西、吸烟；不得高声喧哗，随
处走动；
• 严禁用酒精灯点燃酒精灯； • 严禁把实验室内任何物品带出室外；
• 病原材料污染桌面、地板等或误吸入口，应立即报 告教师进行处理；
• 爱护实验仪器设备，损坏仪器要赔偿； • 实验完毕，废弃物放入指定地点，桌面理清洁，洗
2020/3/26
大肠杆菌(10×100)
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染色结果
螺形菌Spiral bacterium
2020/3/26
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革兰染色意义
★鉴别细菌 ★选择抗菌药物 ★研究细菌的致病性
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选择抗菌药物
• 常见的革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球 菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色 链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、 蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临 床重要等病原菌
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实验完毕后的处理：
1.将浸过油的镜头按照下述方法擦拭干净： a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯（）将镜头擦2-3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。`
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
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染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
• 革兰氏阳性菌通常对青霉素类、第一（或第二）代头孢菌 素等高度敏感 ，青霉素可为化脓性细菌感染可首选药物 。
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选择抗菌药物
• 常见的革兰氏阴性菌：沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾 杆菌等）、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆 菌等）、霍乱弧菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细 菌感染中占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐 药
• 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同 染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细 菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别 细菌。
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革兰染色法
• 该染色法是丹麦细菌学家革兰于1884年创建的,至 今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别
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革兰染色法的原理
无菌生理盐水、显微镜等
2020/3/26
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染 色 标 本 检 查 基 本 程 序
2020/3/26
涂片
干燥
固定
染 色 镜 检
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革兰氏染色步骤与现象
初染1min
媒染1min
脱色15-20s
复染1min
G-
G+
结晶紫
碘液
95%乙醇
复红/苯酚
2020/3/26
注意：每一步染色后水冲，甩干水
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涂片观察（P3）
★渗透学说：与肽聚糖的结构有关
革兰阳性菌细胞壁主要由致密的Biblioteka Baidu聚糖网状结构组成，壁厚、类 脂质含量低，酒精不易渗透，反而形成一道屏障，阻止染料向细 胞外渗出。
革兰阴性菌细胞壁肽聚糖层较薄、交联度低，脂类含量高，酒精 易渗透进入细胞内，将染料脱出。
★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关
革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫-碘结合形成更大的 复合物，不易被酒精脱出。
• 革兰氏阴性菌对第三代头孢、氨基糖苷类、抗假单胞菌 属的青霉素类、多粘菌素等高度敏感，对头霉素类和第 二代头孢菌素也较敏感。例如氟哌酸对革兰染色阴性杆 菌有效，如肠道病、腹泻为常用药 。
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研究细菌的致病性
• 革兰阳性菌可产生外毒素使人致病。 • 革兰阴性菌主要以内毒素使人致病。（ LPS作为G-菌内毒
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细菌的荚膜的观察
荚膜（capsule)
荚膜2020：/3/26多糖，包裹在菌体外围，保护菌体
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细菌鞭毛的观察
鞭毛：运动，菌落形态。
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本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净 交作业，值日同学留下 下周实验课（细菌的人工培养）
再见！
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