最新植物生化制药 第五章 核酸类药物 课件幻灯片课件
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生物合成核酸类药物课件
酸、甘氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸等8种
氨基酸也有促进作用。
除组氨酸外的其他8种氨基酸可以用高浓度的苯
丙氨酸一种来代替。
氨基酸可通过促进菌体生长使肌苷产量增加。
第十六页,共34页幻灯片
发酵条件,如pH值、温度、通气搅拌等都是 影响肌苷积累的重要因素。
肌苷积累的最适pH值为6.0~6.2; 最适温度对枯草杆菌为30℃,对短小芽孢杆菌
(4)选育肌苷酸高产变异菌株,直接发酵 生产。
第二十六页,共34页幻灯片
一般采用方法(2)和方法(4)生产肌酸。
国外采用枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌的营养缺陷
型、抗代谢类似物、Mn2+不敏感抗生物素菌株, 以糖类等为基质的发酵法得到稳步发展,效 益显著。
工艺路线如下:
试管斜面培养→摇瓶种子培养→二级种子罐培 养→三级种子罐培养→发酵→板框压滤→脱色→ 活性炭吸附→浓缩结晶→精制
第二十七页,共34页幻灯片
4.肌苷酸的用途
肌苷酸可参与机体能量代谢以及蛋白质合成, 活化丙酮酸氧化酶,能使细胞在缺氧状态下 继续进行代谢。
肌苷酸的主要医用价值为白细胞或血小扳减少症、 各种急慢性肝炎、肺原性心脏病、中心性视网膜 炎、视神经萎缩症、放射线照射病、毛地黄中毒 症以及血吸虫病等的治疗。
由于腺嘌呤是肌苷酸的前体,而腺苷酸又是控制 IMP生物合成的主要因子,所以加入腺嘌呤的 多少,不仅影响菌体的生长,更影响肌苷积累。
腺嘌呤对肌苷积累最适浓度比菌体生长所需 要的最适浓度小一些,称为亚适量。
第十五页,共34页幻灯片
氨基酸促进肌苷积累、节约腺嘌呤用量。 其中组氨酸是必需的,异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨
肌苷主要应用于心脏疾病、肝脏病、白细胞减 少症、放射性照射病、贫血病、血吸虫病、视 网膜炎、神经萎缩、毛地黄中毒等症。
氨基酸也有促进作用。
除组氨酸外的其他8种氨基酸可以用高浓度的苯
丙氨酸一种来代替。
氨基酸可通过促进菌体生长使肌苷产量增加。
第十六页,共34页幻灯片
发酵条件,如pH值、温度、通气搅拌等都是 影响肌苷积累的重要因素。
肌苷积累的最适pH值为6.0~6.2; 最适温度对枯草杆菌为30℃,对短小芽孢杆菌
(4)选育肌苷酸高产变异菌株,直接发酵 生产。
第二十六页,共34页幻灯片
一般采用方法(2)和方法(4)生产肌酸。
国外采用枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌的营养缺陷
型、抗代谢类似物、Mn2+不敏感抗生物素菌株, 以糖类等为基质的发酵法得到稳步发展,效 益显著。
工艺路线如下:
试管斜面培养→摇瓶种子培养→二级种子罐培 养→三级种子罐培养→发酵→板框压滤→脱色→ 活性炭吸附→浓缩结晶→精制
第二十七页,共34页幻灯片
4.肌苷酸的用途
肌苷酸可参与机体能量代谢以及蛋白质合成, 活化丙酮酸氧化酶,能使细胞在缺氧状态下 继续进行代谢。
肌苷酸的主要医用价值为白细胞或血小扳减少症、 各种急慢性肝炎、肺原性心脏病、中心性视网膜 炎、视神经萎缩症、放射线照射病、毛地黄中毒 症以及血吸虫病等的治疗。
由于腺嘌呤是肌苷酸的前体,而腺苷酸又是控制 IMP生物合成的主要因子,所以加入腺嘌呤的 多少,不仅影响菌体的生长,更影响肌苷积累。
腺嘌呤对肌苷积累最适浓度比菌体生长所需 要的最适浓度小一些,称为亚适量。
第十五页,共34页幻灯片
氨基酸促进肌苷积累、节约腺嘌呤用量。 其中组氨酸是必需的,异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨
肌苷主要应用于心脏疾病、肝脏病、白细胞减 少症、放射性照射病、贫血病、血吸虫病、视 网膜炎、神经萎缩、毛地黄中毒等症。
第五章 核酸药物的分离ppt课件
4电场强度的影响低电压下dna迁移率与电压成正比电压增大时不同大小结构和电荷量的dna片段的迁移率增大的比例不同故其分离范围也是不同的55电场方向电场方向通过电场方向周期性的改变使不同通过电场方向周期性的改变使不同dnadna分子分离开来其实其并未改变迁移率分子分离开来其实其并未改变迁移率只是利用了这种方法来分离不同片段的只是利用了这种方法来分离不同片段的dnadna66碱基的组成和温度碱基的组成和温度琼脂糖凝胶对琼脂糖凝胶对dnadna碱基组成和温度的敏感碱基组成和温度的敏感性极低性极低7荧光标记染料荧光标记染料sybrgoldsybrgold其与其与dnadna结合的亲和力高结合的亲和力高sybrgoldsybrgolddnadna复合物产生光子的量是复合物产生光子的量是ebebdnadna复合物的复合物的10001000多倍多倍溴化乙锭溴化乙锭使迁移率降低使迁移率降低88缓冲液缓冲液实为离子强度的改变实为离子强度的改变在没有离子存在时在没有离子存在时如误用蒸馏水配制凝胶如误用蒸馏水配制凝胶电导率最小电导率最小dnadna几乎不移动几乎不移动在高离子强度在高离子强度的缓冲液中的缓冲液中如误加如误加1010电泳缓冲液电泳缓冲液则电导则电导很高并明显产热很高并明显产热严重时会引起凝胶熔化或严重时会引起凝胶熔化或dnadna变性
第五章 核酸药物的分离
5.2核酸药物分离
分离核酸的原则 1 保持核酸分子一级结构的完整性
2. 防止核酸的生物降解
2
分离提取核酸的主要步骤
细胞的破碎 核蛋白的解聚、变性蛋白的去除 核酸的沉淀 核酸的浓度测定 核酸的保存
2.1 2.2 2.3 2.4 2.5
5.2.1盐析法及沉淀法 特点:应用广,设备简单,沉淀易于过滤 原理: 1破坏了核酸和蛋白质分子间的氢键和盐键, 从而分开 2利用试剂选择性的沉淀蛋白质分子,和浓缩 核酸,从而分离
第五章 核酸药物的分离
5.2核酸药物分离
分离核酸的原则 1 保持核酸分子一级结构的完整性
2. 防止核酸的生物降解
2
分离提取核酸的主要步骤
细胞的破碎 核蛋白的解聚、变性蛋白的去除 核酸的沉淀 核酸的浓度测定 核酸的保存
2.1 2.2 2.3 2.4 2.5
5.2.1盐析法及沉淀法 特点:应用广,设备简单,沉淀易于过滤 原理: 1破坏了核酸和蛋白质分子间的氢键和盐键, 从而分开 2利用试剂选择性的沉淀蛋白质分子,和浓缩 核酸,从而分离
有机生化PPT课件药核酸的化学.PPT共48页
、人民应该为法律而战斗,就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ,并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ,而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令,就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律,其真实含 义是财 富。— —爱献 生
44、卓越的人一大优点是:在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
41、学问是异常珍贵的东西,从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间,才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话,只需要教育; 而要挑战别人所说的话,则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是:在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
41、学问是异常珍贵的东西,从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间,才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话,只需要教育; 而要挑战别人所说的话,则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
核酸化学PPT课件
DNA与RNA结构特点
DNA结构特点
DNA是一种长链生物聚合物,组成单 位为四种脱氧核苷酸,由碱基、脱氧 核糖和磷酸构成。
RNA结构特点
RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而 成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由 一分子磷酸、一分子核糖和一分子含氮 碱基构成。
碱基互补配对原则
碱基互补配对原则是指在DNA分子结构中,由于碱基之间的氢键具有固定的数目和DNA两条链之间的距离保持不变,使得碱基配 对必须遵循一定的规律,这就是A(腺嘌呤)一定与T(胸腺嘧啶)配对,G(鸟嘌呤)一定与C(胞嘧啶)配对,反之亦然。
多肽。
基因编辑技术
如CRISPR-Cas9等,可对基因组 进行定点编辑,实现基因敲除、
敲入、突变等操作。
05
核酸药物设计与应用
抗病毒药物设 利用病毒基因序列中的特异性区域,设计与之互 补的核酸药物,通过阻断病毒基因复制或表达, 达到抗病毒效果。
靶向病毒关键蛋白的药物设计 针对病毒生命周期中的关键蛋白,设计能够与之 结合的核酸药物,从而阻止病毒的组装、释放等 过程。
RNA转录过程及调控
RNA转录的基本过程 转录起始、链延长、链终止与释放
RNA转录的酶学 RNA聚合酶、转录因子等
RNA转录的特点
模板链的选择性、转录的不对称性、 转录后加工等
RNA转录的调控
转录起始的调控、转录延伸的调控、 转录终止的调控
核酸酶作用及降解产物
核酸酶的种类与特性
01
核酸内切酶、核酸外切酶等
核酸的降解过程
02
核酸酶的切割作用、降解产物的生成与性质
核酸降解产物的应用
03
用于核酸序列分析、核酸检测等
03
核酸性质与功能
中职化学(农林牧渔类)《核酸》课件
• 基因检测是预防疾病的重要手段。基因技术的发展,不仅为相关医学研 究打下了坚实的基础,而且促进了医学模式的改变,为解决长期困扰人 类的很多重大疾病如癌症、糖尿病、神经和精神疾病等的早期诊断、治 疗开辟了新的途径。
科学视野
二、核酸检测的原理
• 新冠肺炎疫情暴发后,核酸检测成为确诊是 否感染新冠肺炎的病原学检测的主要方法。
一、核酸的分类与组成
2. 核酸的组成 ➢ 核酸的基本结构单元是核苷酸,核苷酸本身由核苷和磷酸组成,而
核苷则由戊糖与含氮碱组成。组成核酸的基本成分是含氮碱、磷酸 和戊糖。
➢ 组成核酸的戊糖有两种,DNA 所含的糖为脱氧核糖,RNA 所含的糖 则为核糖。
➢ 核酸中的含氮碱是一类含氮的杂环化合物,包括嘌呤碱和嘧啶碱两 类。
三、核酸的应用
• 基因工程是指遗传工程或 DNA 重 组技术,是对基因进行重组、克 隆和表达的一系列技术的总称。
• 目前,包括人类基因在内的很多 生物 DNA 碱基序列的测定已经完 成,这为生命科学开启了新时代 。
科学视野
一、一切疾病的发生都与基因有关
• 如何利用基因检测帮助人们做到科 学养生,做到疾病的早发现、早诊 断、早治疗,成为 21 世纪医学界研 究的重点。
习题
1. 组成核酸的基本成分是
、
和
。核酸分为
和
两大类。
2. DNA 中含有的嘌呤碱基有
和
。RNA 中含有的
嘧啶碱基有
和
。
3. 查阅资料,讨论基因技术方面的突出成就给人类带来的机遇和挑战
分别有哪些?
• 常见的生物碱有烟碱、麻黄碱、咖啡碱、茶碱、吗啡碱、可可碱等。
专题小结
核酸
• 核酸是生物的遗传物质。核酸分为两大类,其中,DNA 是遗传信 息的携带者,RNA 是遗传信息的传递者。
科学视野
二、核酸检测的原理
• 新冠肺炎疫情暴发后,核酸检测成为确诊是 否感染新冠肺炎的病原学检测的主要方法。
一、核酸的分类与组成
2. 核酸的组成 ➢ 核酸的基本结构单元是核苷酸,核苷酸本身由核苷和磷酸组成,而
核苷则由戊糖与含氮碱组成。组成核酸的基本成分是含氮碱、磷酸 和戊糖。
➢ 组成核酸的戊糖有两种,DNA 所含的糖为脱氧核糖,RNA 所含的糖 则为核糖。
➢ 核酸中的含氮碱是一类含氮的杂环化合物,包括嘌呤碱和嘧啶碱两 类。
三、核酸的应用
• 基因工程是指遗传工程或 DNA 重 组技术,是对基因进行重组、克 隆和表达的一系列技术的总称。
• 目前,包括人类基因在内的很多 生物 DNA 碱基序列的测定已经完 成,这为生命科学开启了新时代 。
科学视野
一、一切疾病的发生都与基因有关
• 如何利用基因检测帮助人们做到科 学养生,做到疾病的早发现、早诊 断、早治疗,成为 21 世纪医学界研 究的重点。
习题
1. 组成核酸的基本成分是
、
和
。核酸分为
和
两大类。
2. DNA 中含有的嘌呤碱基有
和
。RNA 中含有的
嘧啶碱基有
和
。
3. 查阅资料,讨论基因技术方面的突出成就给人类带来的机遇和挑战
分别有哪些?
• 常见的生物碱有烟碱、麻黄碱、咖啡碱、茶碱、吗啡碱、可可碱等。
专题小结
核酸
• 核酸是生物的遗传物质。核酸分为两大类,其中,DNA 是遗传信 息的携带者,RNA 是遗传信息的传递者。
【新教材人教版化学】核酸PPT完美课件1
下列相关叙述中,错误的是( A )
A.小分子物质a只含有C、H、O、N B.过程④和③都发生于核糖体上 C.遗传信息位于A上,密码子位于D上 D.B折叠成E的过程可能在内质网上完成
解析: 从图中A、B、D的关系及染色体的成分可判断,A是DNA,D是RNA,B是多 肽,E是蛋白质,进一步可判断a是脱氧核苷酸,b是氨基酸。脱氧核苷酸含有的元素是 C、H、O、N、P,故A错误。
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【新教材人教版化学】核酸PPT完美课 件1
题组二 核酸与蛋白质及其内在关系
C 4.(2019·山东潍坊检mR测NA)下作列为翻关译于的蛋模白板质,t和RN核A酸作为的运叙输述氨中基,酸的正工确具的,是rRNA( 是组 ) 成核糖体(翻译的场所)的重要成分
A.在蛋白质的合成过程中蛋 胞,白 质R质 中N的 均A合 可仅成 合发在 成挥细 (模胞 主质 要板中在的的细作核胞用糖核体中上),但RNA在细胞核和细 B.蛋白质的合成在细胞质中,RNA的合成只在细胞核中
【新教材人教版化学】核酸PPT完美课 件1
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【新教材人教、核苷酸及碱基的情况
2.由于DNA含有A、T、C、G四种碱基,RNA含有 A、U、C、G 四种碱基,因此研究DNA的复制时可标记胸腺嘧啶(T),研究RNA的 形成时可标记尿嘧啶(U)。
【新教材人教版化学】核酸PPT完美课 件1
C.蛋白密码质子的只结位构于具mR有N多A上样,性反,密其码子根才本位原于因tR是NAD上NA的多样性
D.密码子既可位于mRNA上,也可以位于tRNA上
【新教材人教版化学】核酸PPT完美课 件1
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【新教材人教版化学】核酸PPT完美课 件1
5.如图是人体细胞中两种重要有机物A和E的元素组成及相互关系图。
核酸类药物ppt精选课件
肌苷类:有肌苷、肌苷二醛(IDA)、异丙肌苷(Inosiplex) 脱氧核苷类:有氮杂脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine)、
脱氧硫鸟苷、三氟胸苷
.
三、核苷酸及其衍生物 单核苷酸类:有腺苷酸(AMP)、尿苷酸(UMP)、肌苷
酸(IMP)、环腺苷酸(cAMP)、双丁酰环腺苷酸(DBC)、 辅酶A(CoA)等; 核苷二磷酸类:有尿二磷葡萄糖(UDPG)、胞二磷胆碱 (CDP-Choline)等; 核苷三磷酸类:有腺三磷(ATP)、胞三磷(CTP)、尿三 磷(UTP)、鸟三磷(GTP)等; 核苷酸类混合物:有5’-核苷酸、2’,3’-核苷酸、脱氧 核苷酸、核酪等。
质会使机体代谢失调,发生病态,提供这类物质, 有助于改善机体的物质代谢和能量平衡,加速受 损组织的修复. 临床上已广泛应用于放射病、血小板减少症、白 细胞减少症、慢性肝炎、心血管疾病等。 属于这一类的核酸药物有ATP、辅酶A、脱氧核 苷酸、CTP、UTP、腺苷、混合核苷酸、辅酶I等。
.
第二类为天然碱基、核苷、核苷酸结构类似物或聚 合物,这一类核酸类药物是当今人类治疗病毒、肿 瘤、艾滋病等的重要手段,也是产生干扰素、免疫 抑制的临床药物。
已经在临床上应用的抗病毒核苷酸类药物有以下一 些品种:氮杂鸟嘌呤、巯嘌呤、6一氯嘌呤、氟胞 嘧啶、氟尿嘧啶、呋喃氟尿嘧啶、氟苷、阿糖胞苷、 环胞苷、肌苷二醛、异丙基苷、脱氧巯鸟苷、环腺 苷酸、聚肌胞等。
.
反义核酸技术(简称反义技术)
利用这一技术研制的药物称为反义药物,根据核酸 杂交原理,反义药物能与特定基因杂交,在基因水 平干扰致病蛋白的产生过程,及干扰遗传信息从核 酸向蛋白质的传递。
第五章 核酸类药物
.
1868年瑞士青年生化学家米歇尔(Miescher),在用 胃蛋白酶分解细胞蛋白质的时候,发现酶不能分 解细胞核。经过化学分析,细胞核主要是由含磷 的物质构成的,它的性质又不同于蛋白质,起名 叫核素,20年以后,人们发现这种物质是强酸, 改称为核酸。
脱氧硫鸟苷、三氟胸苷
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三、核苷酸及其衍生物 单核苷酸类:有腺苷酸(AMP)、尿苷酸(UMP)、肌苷
酸(IMP)、环腺苷酸(cAMP)、双丁酰环腺苷酸(DBC)、 辅酶A(CoA)等; 核苷二磷酸类:有尿二磷葡萄糖(UDPG)、胞二磷胆碱 (CDP-Choline)等; 核苷三磷酸类:有腺三磷(ATP)、胞三磷(CTP)、尿三 磷(UTP)、鸟三磷(GTP)等; 核苷酸类混合物:有5’-核苷酸、2’,3’-核苷酸、脱氧 核苷酸、核酪等。
质会使机体代谢失调,发生病态,提供这类物质, 有助于改善机体的物质代谢和能量平衡,加速受 损组织的修复. 临床上已广泛应用于放射病、血小板减少症、白 细胞减少症、慢性肝炎、心血管疾病等。 属于这一类的核酸药物有ATP、辅酶A、脱氧核 苷酸、CTP、UTP、腺苷、混合核苷酸、辅酶I等。
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第二类为天然碱基、核苷、核苷酸结构类似物或聚 合物,这一类核酸类药物是当今人类治疗病毒、肿 瘤、艾滋病等的重要手段,也是产生干扰素、免疫 抑制的临床药物。
已经在临床上应用的抗病毒核苷酸类药物有以下一 些品种:氮杂鸟嘌呤、巯嘌呤、6一氯嘌呤、氟胞 嘧啶、氟尿嘧啶、呋喃氟尿嘧啶、氟苷、阿糖胞苷、 环胞苷、肌苷二醛、异丙基苷、脱氧巯鸟苷、环腺 苷酸、聚肌胞等。
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反义核酸技术(简称反义技术)
利用这一技术研制的药物称为反义药物,根据核酸 杂交原理,反义药物能与特定基因杂交,在基因水 平干扰致病蛋白的产生过程,及干扰遗传信息从核 酸向蛋白质的传递。
第五章 核酸类药物
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1868年瑞士青年生化学家米歇尔(Miescher),在用 胃蛋白酶分解细胞蛋白质的时候,发现酶不能分 解细胞核。经过化学分析,细胞核主要是由含磷 的物质构成的,它的性质又不同于蛋白质,起名 叫核素,20年以后,人们发现这种物质是强酸, 改称为核酸。
核酸类药物分析ppt课件
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核酸、核苷酸类药物是指具有药用价值的核酸、核苷酸、 核苷和碱基以及它们的类似物或衍生物。 按照化学结构和组成可分成四类: ①核酸碱基及其衍生物,如硫鸟嘌呤、氟尿嘧啶、阿昔洛韦等; ②核苷及其衍生物,如肌苷、利巴韦林、阿糖胞苷; ③核苷酸及其衍生物,如三磷酸腺苷二钠、胞磷胆碱钠、环磷 腺苷; ④多核苷酸,如寡聚核苷酸、核糖核酸Ⅰ、核糖核酸Ⅱ、抗肿 瘤免疫核糖核酸等。
《中国药典》从2005年版开始改用阳离子交换色 谱法对利巴韦林进行含量测定,结果有明显改善。
29
利巴韦林的含量测定。 色谱条件与系统适用性试验 用磺化交联的苯乙烯-
二乙烯基共聚物的氢型阳离子交换树脂为填充剂;以水(用 稀硫酸调节pH值至2.5±0.1) 为流动相;检测 波长为207nm。理论板数按利巴韦林峰计算不低于20 00。 离子交换色谱常使用水缓冲溶液作流动相,有时也通过加入 适量有机溶剂如甲醇或乙醇来提高分离度或改善样品的溶解 度。
(2)二苯胺反应 脱氧核糖核酸、脱氧核苷酸或脱氧核苷与酸共热水解产
生的脱氧核糖在乙醛存在下与二苯胺反应,生成蓝色化合物, 在595nm波长处有最大吸收。
核糖核酸、核糖核苷酸无此反应。
蓝色 595nm
11
2磷酸盐的鉴别 核酸、核苷酸类药物在酸性条件下加热水解产生的磷酸与过量
的钼酸铵[(NH4)3MoO4]反应,生成磷钼酸铵放冷析 出黄色沉淀。此反应为磷酸盐的一般鉴别试验。
收波长的吸光度来测定含量,也可用带紫外检测器的HP LC法定量。
核酸类原料药的杂质较少时,可用非水碱量法或紫外 分光光度法定量;杂质较多时则需采用具有分离、分析能 力的高效液相色谱法。
22
(一)非水碱量法 1原理
核苷或碱基衍生物、类似物等药物的碱性较弱,在水溶 液中用酸滴定时没有明显的突跃,难以获得满意的测定结果。 而在冰醋酸溶剂中,弱碱性基团的相对碱强度得到显著增加, 可被高氯酸滴定液定量滴定,根据消耗的高氯酸滴定液体积 即可计算该类药物的含量。
3
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核酸、核苷酸类药物是指具有药用价值的核酸、核苷酸、 核苷和碱基以及它们的类似物或衍生物。 按照化学结构和组成可分成四类: ①核酸碱基及其衍生物,如硫鸟嘌呤、氟尿嘧啶、阿昔洛韦等; ②核苷及其衍生物,如肌苷、利巴韦林、阿糖胞苷; ③核苷酸及其衍生物,如三磷酸腺苷二钠、胞磷胆碱钠、环磷 腺苷; ④多核苷酸,如寡聚核苷酸、核糖核酸Ⅰ、核糖核酸Ⅱ、抗肿 瘤免疫核糖核酸等。
《中国药典》从2005年版开始改用阳离子交换色 谱法对利巴韦林进行含量测定,结果有明显改善。
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利巴韦林的含量测定。 色谱条件与系统适用性试验 用磺化交联的苯乙烯-
二乙烯基共聚物的氢型阳离子交换树脂为填充剂;以水(用 稀硫酸调节pH值至2.5±0.1) 为流动相;检测 波长为207nm。理论板数按利巴韦林峰计算不低于20 00。 离子交换色谱常使用水缓冲溶液作流动相,有时也通过加入 适量有机溶剂如甲醇或乙醇来提高分离度或改善样品的溶解 度。
(2)二苯胺反应 脱氧核糖核酸、脱氧核苷酸或脱氧核苷与酸共热水解产
生的脱氧核糖在乙醛存在下与二苯胺反应,生成蓝色化合物, 在595nm波长处有最大吸收。
核糖核酸、核糖核苷酸无此反应。
蓝色 595nm
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2磷酸盐的鉴别 核酸、核苷酸类药物在酸性条件下加热水解产生的磷酸与过量
的钼酸铵[(NH4)3MoO4]反应,生成磷钼酸铵放冷析 出黄色沉淀。此反应为磷酸盐的一般鉴别试验。
收波长的吸光度来测定含量,也可用带紫外检测器的HP LC法定量。
核酸类原料药的杂质较少时,可用非水碱量法或紫外 分光光度法定量;杂质较多时则需采用具有分离、分析能 力的高效液相色谱法。
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(一)非水碱量法 1原理
核苷或碱基衍生物、类似物等药物的碱性较弱,在水溶 液中用酸滴定时没有明显的突跃,难以获得满意的测定结果。 而在冰醋酸溶剂中,弱碱性基团的相对碱强度得到显著增加, 可被高氯酸滴定液定量滴定,根据消耗的高氯酸滴定液体积 即可计算该类药物的含量。
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(1)核酸样品用硫酸消化,将有机磷转化成无机磷; (2)制定定磷标准曲线; (3)测定回收率和样品总磷量。
(NH4)MoO4+H2SO4
H2MoO4+(NH4) 2SO4
H3PO4+12H2MoO4
H3P(Mo3O10) 4
2. 定糖法
Vit • C
H3P(Mo3O10) 4+12H2O Mo2O3 • MoO3(钼蓝)
实例
醇脱氢酶 己糖激酶 胰蛋白酶 丙酮脱羧酶 顺丁烯二酸异构酶 丙酮羧化酶
三、酶类药物的临床应用
1. 消化酶类 2. 抗炎、黏痰溶解酶 3. 与纤维蛋白溶解作用有关的酶类 4. 抗肿瘤的酶类 5. 其它生理活性酶 6. 复合酶
表6-2 酶类药物一览表
第二节 酶类药物的一般制备方法
酶制备过程的特点: 一是某种酶在生物体内含量甚少,且有分布部位特异性。 二是酶可以通过测定其活力加以跟踪。 酶制备一般包括四个步骤:酶的原材料的选择与处理;酶的 提取;酶的纯化;酶活力的测定和纯度检测。
一、酶的原材料选择与预处理
(一)原材料的选择
(1)了解目的酶在生物材料中的分布特点,选择适宜的 生物材料。
(2)考虑生物在不同发育阶段及营养状况时,酶含量的 差别及杂质干扰的情况。
(3)原料来源是否丰富,原料易得,原料产地较近。 (4)提取步骤是否简便易行。 用植物组织作原料,要择时采集并就地去除不用部分, 将有用部分保鲜处理。
RNA中的戊核糖可在盐酸的水解作用下游离出来,进一步形成糠醛,然 后与地衣酚反应,反应物程鲜绿色,在670nm有最大吸收峰。
二、DNA的制备
1. 材料的选择与处理 2. 2. 提取与纯化 3. 3. 含量测定 4. (1)定磷法 同RNA 5. (2)定糖法 6. 又称二苯胺法,在酸性溶液中,将DNA与二苯胺共
NaOH,717树脂 流出液
pH6.5-7
[ 去阳离子 ] 732树脂
pH6→1→2
滤液
[ 去杂质 ] 蒸馏水、硅藻土
洗脱液(含ATP) [ 除热源、沉淀 ]
硅藻土、乙醇
ATP沉淀
[ 干燥 ] 乙醇,乙醚
减压
ATP成品
ATP的药理作用与临床应用
在生物体内,ATP广泛参与各种生化过程,除参与核 酸形成外,主要起着供应能量和磷酸基团的作用。
ATP除了作为危重病人抢救的辅助药物外,还可对慢 性肝炎、肝硬化、肾炎、心肌炎、冠状动脉硬化、进行性 肌肉萎缩、再生障碍性贫血、脑血管意外后遗症、中心性 血管痉挛性视网膜脉络膜炎、风性关节炎、耳聋、耳鸣 等有一定疗效。
第五章 酶类药物
第一节 概述
一、酶类药物发展简史
酶类药物是直接用各种剂型的酶以改变体内酶活力,或 改变体内某性质生物活性物质和代谢产物的数量等,从而达 到治疗某些疾病的目的。
1926年,Sumner将尿素酶结晶是药用酶工业化的起点。
1952年,Innerfield首次将结晶的胰蛋白酶用于治疗血栓性 静脉炎,真正揭开了酶在医疗应用的序幕。
20世纪60年代后期,逐渐发展到从微生物发酵液中获得大量 的酶。
70年代后,开始利用人的某些组织细胞培养技术和基因工程 手段来获取有关的酶,使酶类药物的应用得到了迅速发展。
3. 表面活性剂法
三、酶的纯化
不同的酶,因性质不同,其纯化工艺可能有很大不同。 评价一个纯化工艺好坏,主要看两个指标:酶比活和总活
力回收率。
(一)杂质的除去
1. 调pH和加热沉淀法(核糖核酸酶,溶菌酶的提取) 2. 蛋白质表面变性法(CAT用氯仿提取) 3. 选择性变性法(细胞色素C可用三氯醋酸提取) 4. 降解或沉淀核苷酸法 5. 利用结合底物保护法除去杂蛋白(D-甲基苯甲酸为D-氨
光合磷酸化法制备ATP的工艺流程
5′-AMP
[ 溶解,混合 ]
Na2HPO4,Tris,PMS 混合液
肌激酶,ATP(引子)
[ 光合 ] 叶绿体 pH3,1-1.5h
[ 沉淀 ]
三氯乙酸
反应液
上清液
10℃以下
[ 提取 ] 乙醇
ATP粗制品
10℃ 4-5h
[ 洗脱 ] NaCl溶液
pH3.8
吸附物
[ 吸附 ]
单纯蛋白质(单体酶)
酶 复合蛋白质
酶蛋白
辅酶或辅基(非蛋白部分)
金属 金属有机物 有机物分子
2. 酶的分类
表6-1 酶的国际分类
分类
名称
1 氧化还原酶 2 转移酶 3 水解酶 4 裂合酶 5 异构酶 6 连接酶或合成酶
催化反应的类型
电子转移 转移功能基团 水解反应 键的断裂 分子内基团的转移 键形成与水解偶联
(二)原材料的预处理
1. 机械法 2.反复冻融法 3. 超声波法 4. 酶解法 5. 丙酮粉法
二、酶的提取
1. 水溶液法 常用稀盐溶液或缓冲液提取,经过预处
理的原料,包括组织糜,匀浆,细胞颗粒,丙酮粉都 可用水溶液抽提。
水溶液的pH选择对抽提具有影响,应考虑的因素有: ① 酶的稳定性
② 酶的溶解性
对酶类药物的要求
1. 药用酶应在生理环境(pH中性)下具有最高活力和稳定性。 2. 对其作用的底物具有较高的亲和力。 3. 在血清中半衰期较长。 4. 要求纯度高,特别是对注射用的酶类药物纯度要求更高。 5. 酶应免疫源性较低或无免疫源性。
二、酶的分子组成及分类
1. 酶分子的组成
①单体酶 ②寡聚酶 ③多酶复合体
植物生化制药 第五章 核酸类 药物 课件
第一节 概述
核酸是以核苷酸为基本组成单位的生物大 分子,携带和传递遗传信息。
(二)提取与纯化
1. 提取 (1)乙醇沉淀法 (2)去污剂处理法 (3)酚法
2. 纯化 (1)密度梯度离心法 (2)柱色谱法 (3)凝胶电泳法
(三)含量测定
1. 定磷法
③ 酶与其他物质结合的性质
选择pH的总原则是,在酶稳定的pH范围内,选择偏离 等电点的适当的pH。
2. 有机溶剂法 某些结合酶,由于和脂质结合牢固,
需用有机溶剂除去脂质,且不能使酶变性。常用有机 溶剂是丁醇。
丁醇性质:亲脂性强、兼具亲水性、在脂与水分子间 能起表面活性剂的桥梁作用。
丁醇提取方法:均相法和两相法
热,形成蓝色化合物,该化合物在595nm有最大吸收。 当DNA浓度在20-200ug/mL时,光吸收度与DNA浓度 呈正比。
三、核苷酸、核苷及碱基的制备
(一)制备方法 1. 直接提取法 2. 水解法 (1)酶水解法 (2)碱水解法 (3)酸水解法 3. 化学合成法 4. 酶合成法 5. 微生物发酵法