培养基适用性验证

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培养基适用性

验证

方案起草人：

方案审核人：

方案批准人：

XXXXX药业股份

目录

1. 验证目的 (2)

2. 参照标准 (2)

3. 验证项目 (2)

4. 验证小组人员及职责 (3)

5. 验证可接受的标准 (3)

6. 验证步骤 (3)

7. 菌液制备 (6)

8. 适用性检查 (6)

9. 控制菌检查 (7)

10. 操作方法 (8)

11.结论 (11)

1. 验证目的：

需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数及测定和控制菌适用性检查。

2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。

3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查和控制菌适用性检查。

4.验证小组人员及职责：

4.1

4.2验证人员职责及要求

4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责

4.3.1验证领导组职责

4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

4.3.1.3负责验证方案的批准工作。

4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责

4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责

4.3.3.1负责验证方案的审核工作。

4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。

4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。

4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。

5. 合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

6. 试验材料：

6.1. 被验证产品：溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基、肠道菌增菌液培养基、RV沙门菌增菌液培养基、麦康凯琼脂培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、麦康凯液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基

6.2. 仪器设备：

6.2.1. LXD型压力蒸汽灭菌器

6.2.4.JMP-250霉菌培养箱(20～25℃)

6.2.5. SHP-250生化培养箱(30～35℃)

6.2.7 101-1电热鼓风干燥箱

6.3. 验证用培养基

6.4. 验证用菌株：(第代)

7. 菌液制备

7.1. 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、沙门菌的新鲜培养物胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时。取经30～35℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、沙门菌的新鲜培养物胰酪大豆胨液体新鲜培养物1ml加入到9mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，10倍稀释至10-6~10-7不大于100cfu∕ml的菌悬液备用。

7.2.取白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，于20～25℃培养48~72小时。取经20～25℃培养48~72小时的白色念珠菌用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，10倍稀释至10-5不大于100cfu∕ml的菌悬液备用。

7.3.取黑曲霉菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成每1ml含孢子数不大于100cfu∕ml的菌悬液备用。

8.适用性检查：

8.1.取铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养72小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20～25℃培养120小时，计数。

8.2取铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，

分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养70小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20～25℃培养120小时，计数。

复核人试验人

9.控制菌检查

控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。常用培养基适用性检测项目及所用菌株见下表。