第三节 黄酮类化合物的提取与分离

2019-5-18
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二、分离 较常用的分离方法有：
（一）柱层析法
分离黄酮类化合物常用的吸附剂或 载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。 此外，也有用氧化铝、氧化镁及硅 藻土等。
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1.硅胶柱层析：
此法应用范围最广，主要适于分离 异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及 高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及 黄酮醇类。少数情况下，在加水去 活化后也可用于分离极性较大的化 合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。
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有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合， 生成物易溶于水，可与不具上述结 构的黄酮类化合物相互分离。
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举例：从芹菜［Apium graveolens L.］种子 中分离芹菜双糖苷（graveobiodide） A及B
RO
O
OH
OH
RO
O
OCH3 OH
OH O
R=芹菜糖
醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水（不同 比例）、t-丁醇-甲醇(3:1)、乙醇等。
其它溶剂：如含水丙酮、甲醇-氯仿等。
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（二）梯度pH萃取法
梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同
的黄酮苷元的分离。根据黄酮类苷
元酚羟基数目及位置不同其酸性强
弱也不同的性质，可以将混合物溶
滤液
浓缩至小体积， 冰箱放置
沉淀(PbS)
黄色铅盐沉淀(B) 同铅盐(A)法进行复分解
晶块 溶于少量乙醇中，放置
黄色结晶 乙醇重结晶
黄色结晶 乙醇重结晶
浅黄色2蔟01状9-结5-1晶8 (graveobioside A)(I)
谢浅谢观黄赏色针晶(graveobioside B) (II)
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具黄酮类化合物与铅盐生成的沉淀， 滤集后按常法悬浮在乙醇中，通入 H2S进行复分解，滤除硫化铅沉淀， 滤液中可得到黄酮类化合物。但初 生态的PbS沉淀具有较高的吸附性， 因此现多不主张用H2S脱铅，而用硫 酸盐或磷酸盐，或用阳离子交换树 脂脱铅。
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第三节 黄酮类化合物的提取与分离百度文库
一、提取
黄酮苷类以及极性稍大的苷元（如
羟基黄酮、双黄酮等），一般可用 丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一些 多糖苷类可用沸水提取。在提取花 青素类化合物时，可加入少量酸 （0.1%盐酸，如果是黄酮苷应当慎 用，避免苷键发生水解）。
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大多数黄酮苷元宜用用氯仿、乙醚、 醋酸乙酯等中极性溶剂提取，而对 多甲氧基黄酮类游离苷元，甚至可 用苯等低极性溶剂进行提取。
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黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱时 有下列规律：
（1）苷元相同，洗脱先后顺序一般是： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元
（2）母核上增加羟基，洗脱速度减缓。
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（3）不同类型黄酮化合物，先后流出 顺序一般是：异黄酮二氢黄酮醇 黄酮黄酮醇
（4）分子中芳香核、共轭双键多者则 吸附力强，所以查耳酮往往比相应 的二氢黄酮难于洗脱。
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槐米中芦丁的提取
槐米（槐树Sophora japonica L. 花蕾）加约6倍 量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至 pH8~9，在此pH条件下微沸20~30分钟，趁热 抽滤，残渣同上再加4倍水煎1次，趁热抽滤。 合并滤液，在60~70℃下，用浓盐酸调至pH为5， 搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至中性， 60℃ 干 燥 得 芦 丁 粗 品 ， 于 水 中 重 结 晶 ， 70~80℃干燥得芦丁纯品。
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（三）根据分子中某些特定官能团进 行分离
在黄酮类成分的混合物中，具有邻 二酚羟基成分与无此结构的成分， 可用铅盐法分离。有邻二酚羟基的 成分可被醋酸铅沉淀，不具有邻二 酚羟基的成分可被碱式醋酸铅沉淀， 达到分离的目的。
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与黄酮类成分混存的其它杂质，如 分子中有羧基（如树胶、粘液、果 胶、有机酸、蛋白质、氨基酸等） 或邻二酚羟基（如鞣质等）时，也 可被醋酸铅沉淀达到去杂目的。
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（三）炭粉吸附法
主要适于苷类的精制工作。通常，在植 物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭， 搅拌，静置，直至定性检查上清液无黄 酮反应时为止。过滤，收集吸苷炭末， 依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/ 醇溶液进行洗脱，各部分洗脱液进行定 性检查（或用PPC鉴定）。
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分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小 大顺序洗脱。
分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分 子大小顺序洗脱。
总的洗脱顺序：糖多的苷糖少的苷 游离苷元（极性小大）
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葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有：
碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH）， 含盐水溶液(0.5mol/L NaCl等)。
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3. 葡聚糖凝胶(Sephadex gel)柱层析：
对于黄酮类化合物的分离，主要用 两 种 型 号 的 凝 胶 ： Sephadex-G 型 及 Sephadex-LH-20型。
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葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机 理是：
分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。 凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取 决于游离酚羟基的数目。但分离黄 酮苷时，则分子筛的属性起主导作 用。在洗脱时，黄酮苷类大体上是 按分子量由大到小的顺序流出柱体。
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2. 聚酰胺柱层析：
对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺 是较为理想的吸附剂。其吸附强度 主要取决于黄酮类化合物分子中羟 基的数目与位置及溶剂与黄酮类化 合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合 能力的大小。
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聚酰胺柱层析可用于分离各种类型 的黄酮类化合物，包括苷及苷元、 查耳酮与二氢黄酮等。
于有机溶剂（如乙醚）后，依次用
5%NaHCO3 、 5%Na2CO3 、 0.2% NaOH及4%NaOH水溶液萃取，来达
到分离的目的。
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酸 性 :7 ， 4- 二 OH 溶 于 5%NaHCO3 液 ) 7-或4-OH （5%Na2CO3液） 一般OH（0.2%NaOH） 5-OH （4% NaOH液）
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有时溶剂萃取过程也可以用逆流分 配法连续进行。常用的溶剂系统有： 水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。
溶剂萃取过程在除去杂质的同时， 往往还可以收到分离苷和苷元或极 性苷元与非极性苷元的效果。
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（二）碱提取酸沉淀法
黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水， 但却难溶于酸性水，易溶于碱性水， 故可用碱性水提取，再于碱水提取液 中加入酸，黄酮苷类即可沉淀析出。 此法简便易行，如芦丁、橙皮苷、黄 芩苷的提取都应用了这个方法。
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在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意 所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性 下，尤其加热时会破坏黄酮母核。在加 酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成 （金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物 又重新溶解，降低产品收率。
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当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性 杂质时，如花、果类药材，宜用石灰乳 或石灰水代替其它碱性水溶液进行提取， 以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉淀， 不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的 纯化处理。
I（具有邻二酚羟基）
OH O II（无邻二酚羟基）
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原料（种子）
石油醚浸泡脱脂
脱脂药料 乙醇提取
提取液
减压浓缩后，用醚处理杂质 醚不溶物
溶于热水中，煮沸，逐滴加入中性醋酸铅的热水溶液， 直至不再析出沉淀为止，乘热过滤
棕色沉淀(A)
滤液
悬浮乙醇中，通H2S，过滤
加入碱式醋酸铅的热水溶液至沉淀完全，过滤
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粗提物的精制处理方法有： （一）溶剂萃取法：
利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不 同，选用不同溶剂进行地萃取可达到精 制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液， 可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡 萝卜素等脂溶性色素。而某些药料水溶 液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋 白质、多糖类等水溶性杂质。