化妆品用叔丁基羟基苯甲醚中苯甲醇检测方法

附件5：

化妆品用叔丁基羟基苯甲醚中苯、甲醇的检测方法

（征求意见稿）

1 适用范围

本方法规定了测定化妆品用叔丁基羟基苯甲醚中苯(CAS：71-43-2)、甲醇(CAS：67-56-1)的气相色谱法。

本方法适用于化妆品用叔丁基羟基苯甲醚中苯和甲醇的测定。

2 方法提要

样品在顶空瓶中经过加热提取后，用具有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪测定其中的苯和甲醇，以保留时间定性，标准加入单点法计算含量。本方法对苯的检出限为2.5μg，定量下限为7.5μg；对甲醇的检出限为10μg，定量下限为30μg。若取 5.0g样品测定，本方法对苯的检出浓度为0.00005％，最低定量浓度为0.00015％；本方法甲醇检出浓度为0.0002％，最低定量浓度为0.0006％。

3 试剂和材料

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。

3.1 N,N-二甲基甲酰胺。

3.2 苯，色谱纯。

3.3 甲醇，色谱纯。

ρ（苯）=500μg /mL，ρ（甲醇）=2000μg /mL］：分别准确称取苯（3.2）

3.4 混合标准储备溶液［

0.05g、甲醇（3.3）0.2g（精确至0.1mg），置于100mL容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺（3.1）定容至刻度，摇匀，配成苯和甲醇的质量浓度分别为500μg /mL、2000μg /mL的标准储备溶液。

3.5 系列浓度标准工作溶液：用N,N-二甲基甲酰胺（3.1）将上述（3.4）混合标准储备溶液分别配成苯浓度为0μg /mL、1.5μg /mL、5μg /mL、10μg /mL、25μg /mL、50μg /mL、100μg /mL，甲醇浓度为0μg /mL、6μg /mL、20μg /mL、40μg /mL、100μg /mL、200μg /mL和400μg /mL的系列浓度标准工作溶液。

4 仪器

4.1 气相色谱仪，配氢火焰离子化检测器。

4.2 顶空进样器。

4.3 顶空瓶：20mL。

4.4 分析天平：感量0.0001g。

5 分析步骤

5.1 样品处理

准确称取样品5.0g（精确至1mg），置于顶空瓶中，分别准确加入系列浓度标准工作溶液（3.5）

5mL ，密封后摇匀，作为加系列标准工作溶液的样品。置于顶空进样器中，待测。

5.2 顶空进样器条件

汽化室温度：70℃；定量管温度：90℃；传输线温度：100℃； 汽液平衡时间：15min 。 5.3 色谱参考条件

色谱柱：DB-624石英毛细管柱（30m×0.32mm×1.8μm ），或相当者；

柱温程序：初始温度60℃，保持4min ，再以40℃/min 的速率升温至100℃，保持2min ，再以40℃/min 的速率升温至200℃，保持2min ；

进样口温度：220℃； 检测器温度：230℃； 氮气流速：1.5mL/min ； 氢气流量：40mL/min ； 空气流量：400mL/min ； 尾吹气氮气流量：30mL/min ； 进样方式：分流进样，分流比5:1； 进样量：1.0mL 。

注：载气、空气、氢气流速随仪器而异，操作者可根据仪器及色谱柱等差异，通过试验选择最佳操作条件，使苯、甲醇与叔丁基羟基苯甲醚中其他组分峰获得完全分离。

5.4 定量测定

用加系列浓度标准工作溶液的样品（5.1）分别进样，以峰面积为纵坐标，标准加入量为横坐标进行线性回归，建立标准曲线，其线性相关系数应>0.99。按“6 计算”，计算样品中的苯、甲醇含量。

5.5 平行试验

按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 6结果计算

6.1 确定标准加入单点法中用于计算的标准参考量

选择加标为0 µg/mL 的样品作为样品取样量（m ），根据样品（m ）的峰面积（A i ），选择加入目标物标准品后目标物的峰面积（A s ）与2 A i 相当的加标样品（m i ）作为计算用标准（m s ），应用标准加入单点法对样品进行计算。

6.2 计算公式

[]1000

1000)/()/(100(⨯⨯⨯-⨯=

m m m A A m w i i s s 目标物）

式中：w （目标物）—— 样品中目标物的含量，%； m s —— 加入目标物标准品的量，μg ；

A i——样品中目标物的峰面积；

A s——加入目标物标准品后样品中目标物的峰面积；

m ——样品取样量，g；

m i——加入目标物标准品的样品取样量，g。

7 回收率和精密度

多家实验室验证，苯的方法回收率在95.2%～113.6%之间，相对标准偏差在1.0%～3.4%之间；甲醇的方法回收率在87.5%～107.3%之间，相对标准偏差在1.2%～3.4%之间。

8 色谱图

图1 苯与甲醇的气相色谱图

甲醇（2.984min）苯（6.730）

化妆品用叔丁基羟基苯甲醚中苯、甲醇检测方法起草说明

为加强化妆品原料的监督管理，国家食品药品监督管理局于2010年7月委托广东省食品药品监督管理局开展化妆品用叔丁基羟基苯甲醚（简称BHA）中苯、甲醇检测方法的起草工作，广东省食品药品监督管理局委托广东省药品检验所开展该项工作，现就起草工作有关情况说明如下：

一、起草的必要性

BHA是应用广泛的化妆品原料，常用作抗氧化剂，其生产工艺主要有对羟基苯甲醚催化法和叔丁基对苯二酚催化法。

（一）BHA合成方法简述及甲醇、苯有机溶剂残留原因

BHA的合成主要有两种方法，一是以对苯二酚为原料，甲醇（或硫酸二甲酯）为甲基化试剂，苯、甲苯或环己烷等作为萃取溶剂，制备得到中间体对羟基苯甲醚；对羟基苯甲醚在酸性催化剂作用下与异丁烯或叔丁醇反应得BHA；另一种是以叔丁基对苯二酚为原料，在催化剂作用下与硫酸二甲酯（或其他甲基化试剂）反应得BHA。由于对羟基苯甲醚易得，其制备也较简单，因此，目前的生产BHA以第一种方法为主。

图3. 方法一合成BHA路线图

由上述合成工艺可知，甲醇、苯等有机溶剂是合成BHA常见的残留溶剂。

（二）化妆品中残留溶剂控制的必要性

在药品行业，人用药品注册技术要求国际协调会( ICH )及欧盟、美国和我国药典都对药品中的残留溶剂做出限制：ICH于1997年7月17日通过了控制药品中残留溶剂的指导原则（ICH 原则），将药品生产及纯化过程中常用的69种有机溶剂按照对人体和环境的危害程度分为4类。第一类溶剂是指已知可以致癌并被强烈怀疑对人和环境有害的溶剂, 其残留量必须控制在规定的范围内；第二类溶剂是指无基因毒性但有动物致癌性的溶剂；第三类溶剂是指对人体低毒的溶剂，在无需论证的情况下，残留溶剂的量不高于0.5% 是可接受的, 但高于此值则须证明其合理性；第四类是尚无足够毒理学资料的溶剂。目前，各国药典对于残留溶剂的控制总类和残留量都已经与ICH 的要求一致。ICH 原则中，苯作为第一类溶剂，在药品中的限度为0.0002％；甲醇作为第二类溶剂，在药品中的限度为0.3％。

《化妆品卫生规范》（2007年版）规定，苯、甲醇均属于化妆品中禁用组分，不得作为化妆品