【CN109932513A】呼吸道病原体检测方法【专利】
呼吸道感染的病原体检测与筛查方法
呼吸道感染的病原体检测与筛查方法呼吸道感染是指引起鼻咽、喉、气管和肺部炎症的疾病。
病原体多样化，包括病毒、细菌和真菌等。
为了准确诊断和及时采取治疗措施，呼吸道感染的病原体检测与筛查方法至关重要。
本文将介绍几种常用的呼吸道感染的病原体检测与筛查方法。
一、病毒核酸检测法病毒是引起呼吸道感染的主要病原体之一。
核酸检测法可通过提取样本中的病毒核酸，并采用PCR技术进行扩增和分析，从而确定感染的病毒类型。
这种方法检测速度快、敏感性高，能够精确识别呼吸道病毒感染，例如流感病毒、冠状病毒等。
此外，核酸检测法还有助于判断病毒的基因型和耐药性，为治疗提供依据。
二、细菌培养法细菌感染是呼吸道感染的另一个主要原因。
细菌培养法是通过将样本分离培养于不同培养基中，培养出细菌菌落，并通过形态学和生理学特征进行鉴定。
这种方法适用于检测多种呼吸道细菌感染，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等。
细菌培养法虽然耗时较长，但结果准确可靠，可用于指导临床合理使用抗生素。
三、快速免疫学检测法快速免疫学检测法是通过检测呼吸道感染病人体液中的特定抗体或抗原，来确定病原体的存在。
这种方法操作简单、迅速，结果可在数分钟内得出。
对于流行病学调查和大规模筛查非常有用。
例如，利用快速免疫学检测法可以检测出呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒等病原体。
四、荧光定量PCR法荧光定量PCR法是在常规PCR技术的基础上发展起来的一种高通量方法。
它采用特定的引物和探针结合荧光信号的定量分析，可同时检测多种呼吸道病原体。
这种方法的优势在于高通量、高效率和高灵敏度，提高了检测效率和准确性，对于大规模筛查和快速诊断非常有意义。
五、新型检测方法的研发随着科学技术的不断进步，新型的呼吸道感染病原体检测方法也在不断研发中。
例如，基因芯片技术可以同时检测数百种病原体，为快速诊断提供有力的支持。
此外，基于质谱技术的代谢组学分析和微生物组学研究也在广泛应用于呼吸道感染的病原体检测与筛查领域。
总结起来，呼吸道感染的病原体检测与筛查方法是非常重要的临床实践，有助于准确诊断、采取针对性的治疗措施，并对疫情的控制和预防起到关键作用。
呼吸道病毒检测方法
呼吸道病毒检测方法
呼吸道病毒是引起呼吸道感染的主要病原体，包括流感病毒、腺病毒、冠状病毒等。
及时准确地检测呼吸道病毒对于临床诊断和治疗具有重要意义。
本文将介绍几种常见的呼吸道病毒检测方法，以供临床工作者参考。
首先，常见的呼吸道病毒检测方法包括核酸检测、抗原检测和病毒分离培养。
核酸检测是目前最常用的方法，其原理是通过提取患者呼吸道样本中的病毒核酸，然后进行PCR扩增和测序分析，以确定病毒的存在和类型。
这种方法的优点是准确性高，灵敏度强，可以检测多种呼吸道病毒，但缺点是需要专业实验室设备和技术支持，且周期较长。
其次，抗原检测是一种快速诊断方法，其原理是通过检测患者呼吸道样本中的病毒抗原，来判断病毒的存在和类型。
这种方法的优点是操作简便，结果快速，适合于临床急诊诊断，但其缺点是灵敏度不如核酸检测高，可能存在假阴性结果。
此外，病毒分离培养是一种传统的检测方法，其原理是将患者呼吸道样本接种到细胞培养物中，观察是否能够分离出病毒。
这种方法的优点是可以获得活病毒，有助于病毒学研究，但其缺点是耗时长，操作复杂，且存在污染和安全隐患。
除了以上几种方法外，近年来还出现了一些新的呼吸道病毒检测技术，如基因芯片技术、质谱技术等。
这些新技术在提高检测效率和灵敏度的同时，也带来了更高的成本和技术门槛，需要在临床实践中不断完善和推广。
总的来说，针对呼吸道病毒的检测方法有多种选择，临床工作者应根据实际情况选择合适的检测方法，并结合临床症状和流行病学史进行综合判断。
未来随着科技的不断进步，相信会有更多更好的呼吸道病毒检测方法出现，为临床诊断和治疗提供更多的选择和支持。
呼吸道疾病的病原体检测与鉴定技术
呼吸道疾病的病原体检测与鉴定技术随着呼吸道疾病在全球范围内的流行和威胁不断增加，对于准确、快速地确定病原体的检测与鉴定技术变得越来越重要。
病原体检测与鉴定技术是指通过分析病患的样本，确定其体内所携带的病原微生物的方法和技术。
本文将着重探讨呼吸道疾病的病原体检测与鉴定技术，包括传统方法和现代技术。
一、传统方法1. 细菌培养法细菌培养法是最早用于病原体检测与鉴定的方法之一。
它通过将样本在适宜培养基上进行培养，观察和鉴定生长的细菌。
这种方法虽然具有准确性较高的优势，但需要较长时间来等待细菌的生长，通常需要2-3天或更长的时间才能得到结果。
此外，细菌培养法对于不易培养的病原体无法应用，因此在呼吸道疾病的病原体检测中应用较少。
2. 核酸扩增技术（NAT）核酸扩增技术，包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR （qPCR），是一种常用的病原体检测与鉴定方法。
它们通过扩增和检测目标基因的特异性序列，来确定病原体的存在。
相对于传统细菌培养法，核酸扩增技术具有更高的灵敏度和更短的检测时间。
但是，核酸扩增技术对于操作人员技术要求较高，且在样品处理过程中容易出现污染，可能导致假阳性结果。
因此，在实际应用中需要科学严谨地操作。
二、现代技术1. 基因芯片技术基因芯片技术，也称为DNA芯片技术，是一种高通量的病原体检测与鉴定方法。
它通过将大量的寡核苷酸探针固定在玻璃或硅片上，同时与样本中的DNA进行杂交反应，从而检测和鉴定多种病原体。
基因芯片技术具有高度的自动化和高通量的优势，可以同时检测多种病原体，并且在检测过程中不需要特殊的操作技巧。
但是，由于芯片设计和制备的技术难度较大，以及较高的成本，使得该技术在一般实验室中应用较为有限。
2. 下一代测序技术下一代测序技术，也称为高通量测序技术，是近年来快速发展的一种病原体检测与鉴定方法。
它通过对待检样本中的DNA或RNA进行高通量测序，从而获得样本中所有的基因组序列信息，并通过比对分析确定其中的病原体。
一种呼吸道病毒的检测方法[发明专利]
![一种呼吸道病毒的检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/e5e3239e8e9951e79a89277d.png)
专利名称：一种呼吸道病毒的检测方法专利类型：发明专利
发明人：张婷,杨帆,金奇
申请号：CN201910346624.1
申请日：20190427
公开号：CN110093455A
公开日：
20190806
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供一种高效快速富集呼吸道病毒的高通量检测方法。
高效快速富集呼吸道病毒的高通量检测鉴定技术包括以下四个部分：呼吸道样本病毒的富集、建库、高通量测序及生物信息分析。
呼吸道样本病毒富集是本技术的核心部分，首先用生物物理的方法去除样本中除病毒以外的宿主的核酸，然后提取样本病毒核酸。
借助于Agilent 2100仪器的检测只用200pg的核酸用于建库，高能量测序和生物信息学分析的结果显示病毒的reads数从常规方法处理不到0.1％升高到84％以上，这种检测技术不仅可以快速检测样本感染病毒，而且提高病毒的全基因组序列的覆盖率(95‑100％以上)，大幅度的降低测序成本。
申请人：中国医学科学院病原生物学研究所
地址：100176 北京市大兴区经济技术开发区荣京东街6#
国籍：CN
代理机构：北京华科联合专利事务所(普通合伙)
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临床分析中的呼吸道感染病原体检测方法
临床分析中的呼吸道感染病原体检测方法呼吸道感染是一种常见的临床疾病，其病原体主要包括细菌、病毒和真菌等不同类型。
对于临床医生来说，及时准确地确定感染病原体对于选择合适的治疗方案和预防传播具有重要意义。
本文将介绍几种常见的呼吸道感染病原体检测方法。
一、细菌检测方法：1. 细菌培养法：这是目前最常用的细菌检测方法之一。
通过采集患者的呼吸道标本，如咽拭子、痰液或支气管肺泡灌洗液等，将其接种于含有适当培养基的培养皿中，利用培养器将其培养一段时间。
通过观察培养皿中是否有细菌的生长，医生可以初步确定感染病原体的种类。
2. 快速细菌检测方法：与传统的细菌培养法相比，快速细菌检测方法具有速度快、准确性高的优点。
其中，免疫学方法是常用的一种。
利用特定的抗体来检测患者体内是否存在某种特定的细菌，常见的方法包括荧光抗体法和ELISA法等。
二、病毒检测方法：1. PCR法：这是目前病毒检测的主要方法之一。
PCR法是一种基于核酸扩增的技术，在检测呼吸道病毒感染时，常采用鼻咽拭子或痰液等标本进行检测。
该方法通过扩增病毒的核酸片段，与特异性探针结合，从而确定感染的病毒种类及其数量。
2. 免疫学法：免疫学方法也可用于呼吸道病毒的检测。
常用的方法包括免疫荧光检测和酶联免疫吸附法等。
这些方法通过检测患者血清或呼吸道标本中的病毒抗原或抗体，来间接确定感染的病毒种类和病毒感染情况。
三、真菌检测方法：1. 经验性抗真菌药物治疗法：对于疑似真菌感染的患者，医生常常会根据临床表现给予经验性抗真菌药物治疗。
如果患者的症状明显好转，可以初步判断为真菌感染。
然而，要准确确定感染的真菌种类和抗真菌药物的敏感性，则需要进行进一步检测。
2. 真菌培养法：与细菌检测类似，真菌培养法也是一种常用的方法。
通过将患者的呼吸道标本接种于含有适当培养基的培养皿中，可以培养出真菌，并通过观察和鉴定菌落形态和产生的孢子来确定感染的真菌种类。
综上所述，对于临床分析中的呼吸道感染病原体检测方法，包括细菌、病毒和真菌检测。
一种检测呼吸道病原的核酸的试剂盒、检测方法及应用[发明专利]
![一种检测呼吸道病原的核酸的试剂盒、检测方法及应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d2a37a5cb94ae45c3b3567ec102de2bd9605deb9.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010666275.4(22)申请日 2020.07.10(71)申请人 上海科技大学地址 201210 上海市浦东新区华夏中路393号(72)发明人 刘佳 (74)专利代理机构 上海弼兴律师事务所 31283代理人 王卫彬 黄益澍(51)Int.Cl.C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/6844(2018.01)C12N 15/11(2006.01)C12N 15/113(2010.01)(54)发明名称一种检测呼吸道病原的核酸的试剂盒、检测方法及应用(57)摘要本发明提供了一种检测呼吸道病原的核酸的试剂盒，其包括CRISPR ‑Cas检测体系：如本发明所述的crRNA、Cas蛋白和核酸探针。
本发明还提供了一种呼吸道病原的核酸的检测方法、一种分离的核酸、crRNA、引物对及其应用。
本发明的试剂盒和检测方法不依赖于大型仪器而可通过肉眼直接进行结果观测，在温和的条件即可实现检测，检测更方便；使用本发明的试剂盒和检测方法可用于高效、快速地检测/诊断呼吸道病原(例如甲型流感、乙型流感以及新型冠状病毒等)，特异性和灵敏度均较高，可用于呼吸道病原的检测与筛查，例如快速区分包括甲型流感、乙型流感以及新型冠状病毒在内的多种呼吸道病原。
权利要求书2页 说明书21页序列表27页 附图12页CN 111748651 A 2020.10.09C N 111748651A1.一种crRNA，其特征在于，所述crRNA为检测呼吸道病原的核酸的crRNA，所述呼吸道病原为新型冠状病毒、甲型流感病毒和/或乙型流感病毒；其中；检测所述新型冠状病毒的crRNA的序列如SEQ ID NO:29-40、42、43、45-48中的一种或多种所示；检测所述甲型流感病毒的crRNA的序列如SEQ ID NO:50-52中的一种或多种所示；检测所述乙型流感病毒的crRNA的序列如SEQ ID NO:53-56中的一种或多种所示；所述crRNA优选用于CRISPR-Cas检测体系。
呼吸道病原体检测标准
呼吸道病原体检测标准呼吸道病原体检测是一种常见的临床检测方法，用于检测导致呼吸道感染的病原体。
呼吸道感染是人群中常见的传染病之一，病原体包括细菌、病毒和真菌等。
通过对呼吸道病原体进行检测，可以准确诊断患者的病情并采取相应的治疗措施。
为确保呼吸道病原体检测结果的准确性和稳定性，制定一份规范和标准的检测流程和方法是非常重要的。
1. 引言呼吸道病原体检测是用于检测呼吸道感染的病原体，包括细菌、病毒和真菌等。
准确的呼吸道病原体检测结果可以指导临床医生进行正确的治疗和管理。
本文制定了一份关于呼吸道病原体检测的标准，以确保检测结果的准确性和稳定性。
2. 标本采集（1）采集方法：采用专业的呼吸道标本采集工具，如喉拭子或鼻咽拭子，确保采集的标本质量良好。
（2）标本储存：采集的标本应储存在适当的容器中，并在低温条件下进行储存，以防止标本因菌群变化或其他因素影响检测结果。
3. 样本前处理（1）标本去污：对采集的标本进行脱污处理，以去除可能存在的外来污染物。
（2）样本分离：如果病原体种类复杂，需要对样本进行分离处理，以便于后续的检测步骤。
4. 基因提取（1）提取方法：采用合适的基因提取方法，如酚/氯仿法或商用基因提取试剂盒，提取标本中的病原体基因。
（2）提取质量控制：对提取的基因样本进行检测，以确保提取效果良好。
5. 基因扩增与检测（1）引物选择：根据目标病原体的基因序列，选择合适的引物对目标基因进行扩增。
（2）PCR扩增反应：在PCR反应中添加样本基因和合适的扩增反应体系，进行PCR扩增反应。
（3）检测方法：采用合适的检测方法，如聚合酶链式反应（PCR）、荧光定量PCR（qPCR）、循环阈值检测法（Ct法）等检测手段，对扩增的基因进行检测。
（4）阴性对照：每次实验都应设置阴性对照组，以排除实验中可能存在的假阳性或污染。
6. 结果判读与分析（1）阳性结果：根据阳性结果判断目标基因是否存在，以确定是否存在呼吸道病原体感染。
呼吸道感染的病原体检测技术
呼吸道感染的病原体检测技术呼吸道感染是指引起鼻咽、喉部、气管和支气管炎等呼吸道疾病的各种病原体感染。
这些病原体包括病毒、细菌和真菌等微生物。
快速、准确地检测出导致呼吸道感染的病原体对于疾病的诊断和治疗至关重要。
近年来，随着生物技术和医学影像技术的不断发展，呼吸道感染的病原体检测技术也得到了显著的提升。
一、传统检测方法在以前，传统的呼吸道感染病原体检测方法主要包括临床表现、体征检查和实验室培养等。
这些方法存在诊断时间长、检测结果不准确、需要大量的操作和培养时间长等问题。
对于急性呼吸道感染的患者来说，这意味着延迟的诊断和治疗。
二、分子诊断技术随着分子生物学和基因工程的飞速发展，分子诊断技术已被广泛应用于呼吸道感染的病原体检测中。
这种技术通过检测和分析病原体的核酸（DNA或RNA）序列，能够快速、准确地确定感染的病原体种类。
常用的分子诊断技术包括PCR（聚合酶链式反应）和实时荧光定量PCR（qPCR）等。
1. PCR技术PCR技术是一种通过酶的反应进行扩增病原体核酸的方法。
它具有灵敏度高、特异性强和结果可靠等优点。
通过PCR技术，医生可以快速检测出病原体的存在，并准确地鉴定出是哪一种病原体感染。
然而，PCR技术在操作上相对繁琐，需要专业的实验室设备和经验丰富的技术人员。
2. 实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术是在PCR技术基础上的进一步发展，它能够实时检测和定量检测样本中的病原体核酸。
相比于传统的PCR技术，实时荧光定量PCR技术具有更高的灵敏度和更快的反应速度。
它可以通过测定荧光信号的强度来确定样本中的病原体数量，从而准确评估感染的严重程度。
三、基因芯片技术基因芯片技术是一种将大量的核酸探针固定在芯片上的高通量分析技术。
通过基因芯片技术，医生可以同时检测多种不同的呼吸道感染病原体。
它能够通过与芯片上的特定核酸序列结合来识别和鉴定样本中的病原体。
基因芯片技术具有高效、高通量的特点，使得医生能够在短时间内检测出多种病原体。
一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法与应用[发明专利]
![一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法与应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/0b66b71cb5daa58da0116c175f0e7cd184251828.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010094825.X(22)申请日 2020.04.03(71)申请人 杭州启棣生物技术有限公司地址 311500 浙江省杭州市桐庐县江南镇金堂路733号112室(72)发明人 董灵 胡强 (74)专利代理机构 杭州凌通知识产权代理有限公司 33316代理人 王琼(51)Int.Cl.C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/6869(2018.01)(54)发明名称一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法与应用(57)摘要本发明涉及医学检测技术领域，为解决实时定量PCR法检测会导致大量“假阴性”病例出现的问题，以及流行病疫情爆发时对于大样本量检测的需求，本发明提出了一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法及其这种检测方法在呼吸道病毒感染上的应用，检测方法包括：获取样本并收集于含有RNA保护液的试管中；用RNA提取试剂盒提取RNA，利用一步法进行RNA逆转录及特定区域核酸的富集；一步法建立DNA文库并质检；进行二代测序；利用生物信息学技术对序列进行分析。
检测方法具有高精度，高敏感性，高通量，快速检测的优势。
权利要求书1页 说明书10页 附图2页CN 111139315 A 2020.05.12C N 111139315A1.一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，所述的检测方法为以下步骤：(1)取样、分组、孔板编码；(2)按组提取RNA，转移进入孔板，选用PP1引物进行富集目的片段；(3)分组纯化，定量，混合样本，形成样本池，再次纯化浓缩；(4)纯化后的样本池选用PP2引物进行扩增，再纯化，定量，混合所有样本池为一个终文库；(5)对终文库进行测序，分析。
2.根据权利要求1所述的一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，步骤(1)样本选自鼻咽或口咽吸痰或冲洗液、鼻咽或口咽拭子、气管吸痰和痰液、支气管肺泡灌洗液中的一种，然后收集含有RNA保护液的试管中。
用于检测呼吸道病原微生物的引物组、探针微球组、试剂盒及方法发明专利
用于检测呼吸道病原微生物的引物组、探针微球组、试剂盒及方法技术领域本发明涉及分子诊断领域，主要涉及用于检测呼吸道病原微生物的引物组、探针微球组、试剂盒及方法。
背景技术呼吸道病毒感染不仅可以引起多重严重的并发症，还具有潜在引发局部范围甚至世界大流行的可能。
近年来，新发呼吸道传染病如新型冠状肺炎、SARS等的爆发，为人类社会和国民经济带来巨大的冲击。
及时快速与准确地鉴别病原微生物，对预防疾病的传播与患者的诊断治疗至关重要。
目前传统实验室诊断技术多数操作繁琐、耗时费力，不利于早期快速诊断与疫情的应急处理，因此建立快速有效的检测多种常见呼吸道病原微生物的鉴别诊断平台，实现多种呼吸道病原微生物基因的同时快速检测，可为及时应对突发呼吸道传染病以及疫情监测提供技术手段。
由于病原种类很多，而病毒的分离培养周期长，技术难，用免疫学检测方法很难快速确定病原体。
自1988年首次提出多重PCR这个概念，经过多年的发展，多重PCR技术逐渐成熟。
基于多重PCR的检测方法也逐渐成熟，如CN112176109A 一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及使用方法；CN112176112A 一种禽流感病毒H5，H7，H9亚型三重荧光定量RT-PCR检测试剂盒及其应用等。
检测手段主要有毛细管电泳（或凝胶电泳）、实时荧光定量PCR检测、质谱、液相芯片等方式，其中，毛细管电泳操作繁琐，凝胶电压检测灵敏度有限；实时荧光定量PCR检测通量低；质谱仪器昂贵且检测耗时较长。
液相芯片技术是一种被用于高通量临床诊断的新型生物芯片技术，具有高通量、灵敏度高、重复性好、灵活性大等特点。
发明内容鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供用于检测呼吸道病原微生物的引物组、探针微球组、试剂盒及方法，针对呼吸道病原微生物检测的高通量多重检测需求，开发基于液相芯片技术的呼吸道传染病检测系统，重点解决编码微球制备技术、多重扩增技术、高通量检测技术等关键技术，为呼吸道病原微生物快速检测提供有力的工具。
用于检测呼吸道病毒的试剂盒及其应用[发明专利]
![用于检测呼吸道病毒的试剂盒及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/7fca85653d1ec5da50e2524de518964bcf84d2a5.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910677694.5(22)申请日 2019.07.25(71)申请人 廊坊诺道中科医学检验实验室有限公司地址 071000 河北省廊坊市经济技术开发区三号路8号1幢(72)发明人 卢孟孟 胖铁良 王文轩 马蒙蒙 孙晋华 李建中 (74)专利代理机构 北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙) 11369代理人 程丽娜(51)Int.Cl.C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/686(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称用于检测呼吸道病毒的试剂盒及其应用(57)摘要本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种用于检测呼吸道病毒的引物探针组合，包括16对引物及对应的16条探针。
本发明还提供了用于检测呼吸道病毒的试剂盒，包括用于检测呼吸道病毒的引物探针组合。
本发明还提供了用于检测呼吸道病毒的试剂盒在检测或辅助检测呼吸道病毒中的非诊断目的的应用。
应用本发明提供的用于检测呼吸道病毒的试剂盒能同时检测16种呼吸道病毒，实现多重检测，灵敏度高，快捷方便，可实现对样本进行批量检测。
权利要求书2页 说明书10页序列表9页 附图8页CN 110358865 A 2019.10.22C N 110358865A1.一种用于检测呼吸道病毒的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括：1)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物对1和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示的探针1；2)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物对2和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.34所示的探针2；3)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物对3序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.35所示的探针3；4)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物对4序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.36所示的探针4；5)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的引物对5序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.37所示的探针5；6)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的引物对6序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.38所示的探针6；7)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的引物对7序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.39所示的探针7；8)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示的引物对8序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.40所示的探针8；9)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示的引物对9序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.41所示的探针9；10)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示的引物对10序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.42所示的探针10；11)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示的引物对11序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.43所示的探针11；12)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示的引物对12序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.44所示的探针12；13)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示的引物对13序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.45所示的探针13；14)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28所示的引物对14序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.46所示的探针14；15)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30所示的引物对15序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.47所示的探针15；16)由多核苷酸序列如SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32所示的引物对16序列和由多核苷酸序列如SEQ ID NO.48所示的探针16。
一种十种呼吸道病原体联合检测试纸及其制备方法[发明专利]
![一种十种呼吸道病原体联合检测试纸及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/b700058368dc5022aaea998fcc22bcd127ff427f.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010862816.0(22)申请日 2020.08.25(71)申请人 齐鲁工业大学地址 250000 山东省济南市长清区大学路3501号(72)发明人 黄晓文 陈嘉词 林惠超 黄子煜 王磊 (74)专利代理机构 济南法友专利代理事务所(普通合伙) 37315代理人 陈利超(51)Int.Cl.G01N 33/569(2006.01)G01N 33/558(2006.01)G01N 33/58(2006.01)G01N 33/543(2006.01)(54)发明名称一种十种呼吸道病原体联合检测试纸及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种十种呼吸道病原体联合检测试纸及其制备方法。
包括从上至下依次叠加设置的第一硝酸纤维素层、防水双面胶带、第二硝酸纤维素层和PVC底板，本发明可以在一张纸上同时实现10种病原体的快速检测；通过两个样品滴加口，就可以实现10条检测线的同时检测，避免了频繁操作造成的污染以及大大降低了样品的消耗量，提高了检测结果的准确性；通过调整试纸包被的抗体，一张试纸可以实现同时检测多种类型病原体或多平行检测同种病原体；检测线和质控线位于同一横轴/纵轴上，方便对检测结果进行比较。
与其他试纸相比，更加高效且精准，可为病原体的现场快速检测提供技术支持。
权利要求书2页 说明书11页 附图4页CN 111965351 A 2020.11.20C N 111965351A1.一种十种呼吸道病原体联合检测试纸，其特征在于：包括从上至下依次叠加设置的第一硝酸纤维素层、防水双面胶带、第二硝酸纤维素层和PVC底板，第一硝酸纤维素层上设置有五条竖向设置的第一检测通道，第一检测通道的其中一端设置有第一试剂加入口，第一检测通道靠近第一试剂加入口处覆盖有结合垫，第一检测通道远离第一试剂加入口的一端上设置有第一质控线和第一检测线，第一质控线和第一检测线配合形成第一检测结果显示区，试剂从第一试剂加入口在自动虹吸作用下通过结合垫后流向第一质控线和第一检测线并显示检测结果，第一硝酸纤维素层其中一侧边缘与最外侧的第一检测通道之间设置有第二试剂加入口，第一硝酸纤维素层远离第二试剂加入口一侧边缘与最外侧的第一检测通道之间设置有第二检测结果显示区，第二检测结果显示区包括五条与第一检测通道相互垂直的辅助通道，五条辅助通道靠近第一检测通道的一端上均设置有第一渗透带，五条辅助通道远离第一检测通道的一端上均设置有第二质控线和第二检测线，第二硝酸纤维素层上设置有五条横向分布的第二检测通道，第二硝酸纤维素层上靠近第二检测通道的其中一端处设置有渗透试剂加入口，五条第二检测通道均与渗透试剂加入口导通，第二检测通道靠近渗透试剂加入口的一端上覆盖有结合垫，每个第二检测通道远离渗透试剂加入口的一端上设置有第二渗透带，贯穿防水双面胶带上开设有一个试剂渗透通孔和五个渗透带通孔，试剂渗透通孔内填充有第一亲水材料，每个渗透带通孔内填充有第二亲水材料，渗透试剂加入口位于第二试剂加入口正下方并通过试剂渗透通孔内填充的第一亲水材料导通，第二渗透带位于第一渗透带的正下方并通过渗透带通孔内填充的第二亲水材料导通，第二试剂加入口中的试剂通过试剂渗透通孔中的第一亲水材料流向渗透试剂加入口，渗透试剂加入口中的试剂在自动虹吸作用下分别流向第二检测通道，试剂经过结合垫后沿着第二检测通道流向第二渗透带，第二渗透带中的试剂通过渗透带通孔内填充的第二亲水材料引向第一渗透带，第一渗透带中的试剂沿着辅助通道流向第二检测结果显示区中的第二质控线和第二检测线并进行检测结果显示。
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910160836.0
(22)申请日 2019.03.04
(71)申请人 浙江大学
地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘
路866号
申请人 山东泰乐康健生物科技有限责任公
司
(72)发明人 陈瑜 王楠 郑书发 楼滨
(74)专利代理机构 山东众成清泰律师事务所
37257
代理人 丁修亭
(51)Int.Cl.
G01N 33/68(2006.01)
G01N 33/531(2006.01)
(54)发明名称
呼吸道病原体检测方法
(57)摘要
本发明公开了一种呼吸道病原体检测方法，
包括以下步骤：1）对给定的呼吸道病原样本进行
蛋白提取；2）以步骤1）提取到的蛋白为蛋白样本
形成RPPA；3）对步骤2）获得的RPPA通过PWG进行
微生物或病毒检测；其中，RPPA为Reverse Phase
Protein Array，即反相蛋白阵列；PWG为Planar
Wave Guide，即平面光导。
依据本发明呼吸道病
原体检测方法在样本中所含蛋白量相对较少时
不容易产生漏检。
权利要求书2页 说明书9页 附图10页CN 109932513 A 2019.06.25
C N 109932513
A
1.一种呼吸道病原体检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）对给定的呼吸道病原样本进行蛋白提取；
2）以步骤1）提取到的蛋白为蛋白样本形成RPPA；
3）对步骤2）获得的RPPA通过PWG进行微生物或病毒检测；
其中，RPPA为Reverse Phase Protein Array ，即反相蛋白阵列；
PWG为Planar Wave Guide，即平面光导。
2.根据权利要求1所述的呼吸道病原体检测方法，其特征在于，蛋白提取的方法为：
针对痰液：
t1）将痰液样本震荡混匀；
t2）在痰液样本中加入裂解液，然后混合均匀，获得混合液；
t3）对步骤t2）获得的混合液进行温育；
t4）对温育后的混合液进行离心分离，取上清，即获得蛋白样本；
针对咽拭子，第一提取方法：
y11）取下咽拭子头，置于EP管内；
y12）加入裂解液，裂解液完全淹没咽拭子头部；
y13）对浸入裂解液的咽拭子头进行温育，促咽拭子头上的起始样本裂解；
y14）将温育后的EP管置于离心机进行离心分离，取出咽拭子头，保留上清液，即获得蛋白样本；
针对咽拭子，第二提取方法：
y21）取下咽拭子头，将咽拭子头浸入病毒培养液中，混匀；
y22）取新咽拭子，蘸取步骤y21）中的病毒培养液，新咽拭子头吸收饱和后取下，置于EP 管内；
y33）向EP管内加入裂解液直至淹没新咽拭子头，温育裂解；
y44）将温育后的EP管置于离心机进行离心分离，取出咽拭子头，保留上清液，即获得蛋白样本。
3.根据权利要求2所述的呼吸道病原体检测方法，其特征在于，所述裂解液为AG4；
针对痰液样本，裂解液与痰液的体积比为1:1。
4.根据权利要求2所述的呼吸道病原体检测方法，其特征在于，还包括对抗体芯片的验证，对抗体芯片验证的方法为：
k1）对温育裂解后所获得的液体进行稀释；
k2）将稀释后的液体制备到第一多孔板中；
k3）将第一多孔板中的液体进一步制备到第二多孔板中，使第一多孔板中每一第一微孔适配于第二多孔板中的多个第二微孔，而在相应的多个第二微孔中制备出适配于第一微孔内液体的梯度稀释液体；
k4）将梯度稀释液体制备到PWG芯片上，然后进行芯片封闭；
k5）对芯片封闭后的PWG芯片进行温育；
k6）对温育后的PWG芯片进行洗涤，然后进行信号读取。
5.根据权利要求4所述的呼吸道病原体检测方法，其特征在于，步骤k1）中稀释所获得
的液体的浓度为0.1
~0.2微克/微升。
权 利 要 求 书1/2页
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CN 109932513 A。