福际迈好成功第一步-核酸分离纯化
核酸提取纯化方法
核酸提取纯化方法核酸提取纯化是分子生物学研究中的基础步骤之一，该步骤的目的是从生物样本中提取出高质量、高纯度的核酸样本，以便进行后续实验。
在进行核酸提取纯化时，需要注意一些关键的因素，例如使用适当的酶、缓冲液和试剂，选择合适的提取方法和纯化方法等。
本文就核酸提取纯化方法做简要介绍。
核酸提取方法酚-氯仿法酚-氯仿法是一种常见的核酸提取方法，其原理是用酚和氯仿混合液溶解脂质膜，并分离出DNA或RNA。
该方法适用于多种细胞和组织样本的提取，且提取出的核酸质量高，且纯度高。
该方法的步骤如下：1.将组织或细胞打碎并加入含有盐和表面活性剂的缓冲液中。
2.将酚与氯仿以1:1的比例混合，加入细胞组织样本混合物，使其充分混合。
3.用离心机高速离心，分离上层酚相和下层水相。
4.将上层酚相转移到新的离心管中，再加入等体积的氯仿和去离子水混合液，混合均匀。
5.用离心机高速离心，分离上层酚相和下层水相，上层酚相即为提取的核酸。
硅胶柱法硅胶柱法是一种常用的核酸纯化方法，通常用于DNA或RNA的纯化和浓缩。
该方法会将提取的核酸样本与硅胶粒子混合，经离心去除杂质，然后将核酸吸附在硅胶柱中，最后用适当的缓冲液洗脱所需的核酸。
该方法的步骤如下：1.将提取得到的核酸样本与硅胶颗粒混合。
2.用离心机离心，分离硅胶与其他细胞成分和杂质。
3.将硅胶样本均匀放入硅胶柱中，用称量纸封端，并加入洗脱缓冲液，使其顺着硅胶柱流经。
4.加入适量的洗脱缓冲液冲洗硅胶柱，以去除杂质。
所需的核酸会留在硅胶柱上。
5.加入洗脱缓冲液，洗脱硅胶柱中的核酸。
结论在进行核酸提取纯化时，选择合适的提取方法和纯化方法非常重要。
酚-氯仿法和硅胶柱法是两种常见的核酸提取纯化方法，它们各自具有适用的范围和特点。
为了提高核酸提取纯化的效果，通常会进行PCR扩增检测，以保证提取的核酸质量和纯度达到要求。
核酸的分离纯化技术
核酸的分离纯化技术从细胞中提取核酸后，仍混杂着蛋白质、多糖和各种大小分子核酸同类物。
除去这些“杂质”的过程，也就是核酸提纯过程。
在核酸的分离纯化时，为防止核酸大分子的变性降解，必须在0～4℃的低温条件下操作。
核酸酶的水解作用，是过去制备具有活性核酸大分子的严重障碍，现普遍采用加入去污剂或加入EDTA、8-羟基喹啉、柠檬酸钠以除去核酸酶的激活剂Mg2+，就可以抑制核酸酶的活性，保证在提纯过程中核酸大分子的完整。
关于核酸分离纯化阶段中除去多糖、蛋白质及不同类型核酸之间分离的一些方法，分别介绍如下：（1）肝糖元、淀粉及粘多糖，由于其物理化学性质与核酸有许多相似之处，常在提取液中残存下来。
除去的方法常有：①取材前尽量减少组织中多糖的含量，如先使动物饥饿数天然后杀死，可使细胞内肝糖元大大减少。
②加入淀粉酶，将大分子多糖分解为小分子，在以后纯化步骤中逐渐被除去。
③在浓磷酸盐存在下，以2-甲氧基乙醇抽提核酸提取液，使多糖溶于下层水相，核酸在上面有机层中。
④以钙盐沉淀DNA，再以草酸钾处理，使之形成DNA钾盐回收，然后用离子交换法吸附DNA，使之与多糖分离。
（2）蛋白质的除去：由于核酸在细胞内以核蛋白体形式存在，不论采用哪种方法提取核酸，蛋白质都不同程度地存在于体系中。
因此，除去蛋白质是核酸分离纯化不可避免的步骤。
常用方法有下列几种：①加入去污剂如硫酸十二脂钠，从提取到分离纯化各阶段均可反复使用此法。
去污剂与氯仿法或苯酚法结合使用，效果更加理想。
②氯仿-戊醇或辛醇对提取液摇荡抽提，蛋白质在氯仿-水界面形成凝胶，离心后除去，核酸留在水溶液中。
此法在分离纯化中也常反复使用。
③苯酚水溶液抽提，在对氨基水杨酸等阴离子化合物存在下，DNA或RNA都可以进入水相，蛋白质则沉淀于酚层，然后取水相加入乙醇或2-乙氧基乙醇沉淀RNA 或DNA，残余的酚可用葡聚糖凝胶G-10或G-25除去。
（3）不同类型核酸的分离：两种类型核酸的制备过程中，DNA制品中混杂着少量RNA或RNA制品中混杂着少量DNA是经常发生的。
核酸的分离纯化及鉴定技术生化分析描述
核酸的分离纯化及鉴定技术生化分析描述一、核酸的分离纯化技术1.超声破碎法超声破碎法是一种通过超声波的振动作用破碎细胞膜，释放细胞内的核酸分子的方法。
该方法操作简便，效果较好。
2.酚-氯仿提取法酚-氯仿提取法是一种经典的核酸提取方法，通过酚和氯仿相间重复萃取的方法，将细胞或组织中的核酸分子提取到有机相中，然后用酒精沉淀。
3.离心沉淀法离心沉淀法是利用不同物质在不同离心力下沉降速度的不同，将核酸从其他组分中分离出来的方法。
可通过高速离心使核酸沉淀到底部，将上清液中的其他杂质倒掉，最后用缓冲液重悬核酸。
4.配对离心法配对离心法是利用核酸的碱基配对性质，在特定的条件下使目标DNA 与特异性探针配对，然后通过离心将核酸-探针复合物从其他杂质中分离出来。
这种方法常用于核酸的富集和寡核苷酸修饰位点的分析。
二、核酸的鉴定技术1. 紫外-可见分光光度法（UV-Vis）紫外-可见分光光度法是通过核酸分子在紫外光或可见光波长范围内的吸收特性来确定其存在和浓度的方法。
根据核酸中含有的吸收波长为260 nm处的碱基特征吸光峰，可以判断核酸的纯度和浓度。
2.电泳分析法电泳分析法是通过核酸分子在电场中的迁移速率和特定条件下的尺寸分离效应来分析核酸的方法。
主要包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种方法。
核酸经电泳后可以观察到DNA或RNA在凝胶中的特征性带状图案，确定其分子大小、纯度和带电性。
3.PCR（聚合酶链式反应）PCR是一种常用的核酸鉴定技术，通过特定引物和聚合酶的作用，在体外进行核酸的扩增以达到检测目的。
PCR可用于快速检测目标DNA的存在与否，以及定性和定量分析。
4.基因测序技术基因测序技术是指利用测序反应将核酸序列信息转化为比特（通常指二进制），然后通过计算机软件分析的方法对核酸序列进行鉴定。
常用的基因测序技术有dideoxy测序和串联反应测序。
三、应用核酸的分离纯化及鉴定技术广泛应用于生物医学研究、遗传学、分子生物学、基因工程和疾病诊断等领域。
核酸的纯化主要方法
分离纯化核酸时的注意事项：防止物理因素的降解：1.尽量简化操作步骤，缩短提取时间，以减少变性机会。
2.防止热变性，避免高温。
一般0-4℃。
3.防止机械剪切作用动作轻缓；搅拌温和；加山梨醇等增加渗透压。
防止化学因素的降解：1.避免强酸强碱作用，抽提液pH要保持在4-10之间。
2.保持提取液一定的离子强度，以调节核酸的溶解度和保持二级结构的稳定性。
防止核酸酶的降解防止DNA酶的降解：通常加入酶的抑制剂、蛋白质的变性剂和去垢剂来实现。
1.加入金属离子螯合剂抑制DNA酶2.去垢剂及某些RNase抑制剂，对DNA酶也有一定抑制作用。
防止RNA酶的降解：RNase很难抑制，且无处不在，汗液、唾液中均有。
很耐热，80℃处理15分钟不能灭活。
操作注意事项：1.带一次性手套、口罩；2.器皿试剂高压灭菌或用DEPC（乙二基焦炭酸）处理。
但含有Tris的试剂不宜用，因DEPC可与胺类迅速发生化学反应。
3.尽早除去蛋白质（含RNase）,并加抑制剂。
常用的抑制RNase活性的方法有：1.核糖核酸酶阻抑蛋白（RNasin,人胎盘中分离的一种蛋白）优点：效果好，不干扰反转录或mRNA在无细胞体系中的翻译。
使用注意事项：（1）置于含5mmol/L二硫苏糖醇（DDT）的50%甘油中，-20℃储存。
（2）最大活性的发挥要求有巯基试剂。
（3）冻融数次后应弃之不用。
（4）在变性裂解哺乳动物细胞提取RNA的初始步骤中不宜使用，在其后RNA纯化步骤中应用。
用酚抽提可除去蛋白质抑制剂，故纯化过程中应补加。
2．糖核苷复合物（vanadyl-ribinucleaside complex）由氧钒（IV）离子和4种核糖中的任意一种形成的复合物，是一种过渡态类似物，它能与多种RNase结合并几乎能百分百地抑制RNA酶的活性。
缺点：强烈抑制mRNA在无细胞体系中的翻译。
可用0.1%羟基喹啉的苯酚（用0.01mol/L E(pH>7.8)平衡）多次抽提除去。
核酸的纯化主要方法
分离纯化核酸时的注意事项：防止物理因素的降解：1.尽量简化操作步骤，缩短提取时间，以减少变性机会。
2.防止热变性，避免高温。
一般0-4℃。
3.防止机械剪切作用动作轻缓；搅拌温和；加山梨醇等增加渗透压。
防止化学因素的降解：1.避免强酸强碱作用，抽提液pH要保持在4-10之间。
2.保持提取液一定的离子强度，以调节核酸的溶解度和保持二级结构的稳定性。
防止核酸酶的降解防止DNA酶的降解：通常加入酶的抑制剂、蛋白质的变性剂和去垢剂来实现。
1.加入金属离子螯合剂抑制DNA酶2.去垢剂及某些RNase抑制剂，对DNA酶也有一定抑制作用。
防止RNA酶的降解：RNase很难抑制，且无处不在，汗液、唾液中均有。
很耐热，80℃处理15分钟不能灭活。
操作注意事项：1.带一次性手套、口罩；2.器皿试剂高压灭菌或用DEPC（乙二基焦炭酸）处理。
但含有Tris的试剂不宜用，因DEPC可与胺类迅速发生化学反应。
3.尽早除去蛋白质（含RNase）,并加抑制剂。
常用的抑制RNase活性的方法有：1.核糖核酸酶阻抑蛋白（RNasin,人胎盘中分离的一种蛋白）优点：效果好，不干扰反转录或mRNA在无细胞体系中的翻译。
使用注意事项：（1）置于含5mmol/L二硫苏糖醇（DDT）的50%甘油中，-20℃储存。
（2）最大活性的发挥要求有巯基试剂。
（3）冻融数次后应弃之不用。
（4）在变性裂解哺乳动物细胞提取RNA的初始步骤中不宜使用，在其后RNA纯化步骤中应用。
用酚抽提可除去蛋白质抑制剂，故纯化过程中应补加。
2．糖核苷复合物（vanadyl-ribinucleaside complex）由氧钒（IV）离子和4种核糖中的任意一种形成的复合物，是一种过渡态类似物，它能与多种RNase结合并几乎能百分百地抑制RNA酶的活性。
缺点：强烈抑制mRNA在无细胞体系中的翻译。
可用0.1%羟基喹啉的苯酚（用0.01mol/L E(pH>7.8)平衡）多次抽提除去。
简述核酸分离纯化的主要步骤
简述核酸分离纯化的主要步骤核酸分离纯化的主要步骤其实就是一场与基因的“亲密接触”。
我们就像是在进行一场精密的科学“约会”，只不过对象是DNA或RNA，而不是人。
好啦，咱们来看看这个过程如何进行的吧。
1. 材料准备
1.1 样品收集
首先，你得找点样品，可能是植物、动物，甚至是细菌。
想象一下，就像挑选食材一样，你需要挑选新鲜的“原料”。
1.2 细胞裂解
接下来，咱们要“破壳”了！通过加入一些裂解缓冲液，把细胞膜弄开，释放出里面的核酸。
这个过程就像是打开一个“宝箱”，哇，里面可真丰富！
2. 去除杂质
2.1 去除蛋白质
这一步，你得用一些蛋白酶，把细胞里的蛋白质都搞定。
想象一下，就像是把不需要的东西清理出去，只留下最闪亮的宝物。
2.2 沉淀核酸
然后，咱们需要加入酒精，通常是乙醇。
核酸会跟酒精“亲密接触”，沉淀下来。
这个时候你会发现，核酸就像是被请出舞池的主角，闪闪发光！
3. 洗涤与重溶
3.1 洗涤
在沉淀后的核酸上，加点洗涤液，就像给它洗个澡，把残留的杂质都冲走。
你得小心翼翼，别让它“滑了”！。
3.2 重溶
最后一步，是把洗净的核酸重新溶解在缓冲液中。
这个过程就像是给核酸穿上新衣服，焕然一新，准备出门见客！
完成这些步骤后，你的核酸就“出炉”啦！感觉就像是一场成功的约会，满载而归。
希望这个过程能让你对核酸分离纯化有个更轻松的了解。
就这样，你成功地和基因建立了“深厚的友谊”，为后续的实验打下了良好的基础！。
核酸分离与纯化的技术路线与原则
核酸分离与纯化的技术路线与原则核酸包括DNA 、RNA两类分子，在细胞内均与蛋白质结合成核蛋白。
真核生物基因组中，95%DNA 为双链线性分子，存在于细胞核中，5%为双链环状分子，存在于细胞器中；原核生物DNA 及质粒DNA 为双链或单链环状分子；RNA 为单链线性分子，主要存在于细胞质中。
DNA 与RNA 性质的不同导致对其分离与纯化的条件也不相同。
一、核酸分离与纯化的原则(1)保证核酸一级结构的完整性。
生物的遗传信息全部贮存在核酸一级结构中，而且核酸的一级结构还决定其高级结构的形式及和其他大分子结合的方式。
所以，所提取的核酸一级结构的完整性直接影响着后续实验中对其结构与功能研究的质量。
因此，在制备核酸的过程中，要做到：尽量简化操作程序，缩短提取过程；避免过酸、过碱等化学因素对核酸链中磷酸二酯键的破坏，在pH 值4～10条件下进行操作；操作时动作要轻缓，提取的样品小包装保存，以免诸多的物理因素对核酸的降解；避免细胞内及环境中核酶对核酸的生物性降解。
(2)排除其他生物大分子的污染，如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应尽可能降低到最低程度，特别是提取DNA 分子时应除去RNA 分子，反之亦然。
(3)排除核酸样品中有机溶剂和过高浓度的金属离子。
二、分离与纯化的技术路线(一)核酸的释放通常情况下DNA 及RNA 均位于细胞内，因此核酸分离与纯化的第一步就是制备单个细胞，再破碎细胞，从而释放核酸。
破碎细胞的方法包括机械法与非机械法两大类。
机械法又可分为液体剪切法与固体剪切法；非机械法可分为干燥法与溶胞法。
由于溶胞法采用适宜的化学试剂与酶，能有效地裂解细胞，方法温和，能保证较高的核酸获得率，并能较好地保持核酸的完整性，从而得到广泛的应用。
(二)核酸的分离与纯化利用核酸与其他物质性质上的差异，可以分离与纯化核酸。
这种差异包括细胞定位与组织分布上的差异，物理、化学性质上的不同，以及各自独特的生物学特性。
操作过程中，既可以从复杂样品中抽提出核酸分子，也可以将样品中的非核酸成分(非核酸的生物大分子、非需要的核酸分子及在操作过程中加入的溶液与试剂)逐步清除。
简述核酸分离纯化的主要步骤。
简述核酸分离纯化的主要步骤。
在生物实验中，核酸分离纯化可谓是一个神奇的过程，像是把“混乱的书房”整理成一间“整洁的书房”，让我们能从一堆杂乱的物质中找出我们需要的那一部分。
要想搞清楚这个过程，我们得从头说起。
先别急，跟我来，我们一块儿来聊聊这些神奇的步骤。
1. 核酸提取的开篇首先，我们得“扒拉扒拉”样品。
也就是说，要从样本里提取出核酸。
这一步就像是把原料放到面粉筛里筛选一样，我们得把细胞破坏开，释放里面的核酸。
这里用的工具有点像“万用刀”，既可以是研磨机，也可以是液氮冷冻破碎机，总之就是要让细胞壁的“防线”彻底崩溃。
像打破冰层一样，把里面的核酸暴露出来。
1.1 细胞破碎：好比“猛兽入笼”细胞破碎的过程，听起来就像是猛兽入笼，猛烈而直接。
为了完成这个步骤，我们可以使用各种各样的试剂，比如说细胞裂解液。
这个液体就像是一把万能钥匙，能把细胞膜一举撬开，释放里面的核酸。
当然，有时候我们也可以用物理手段，比如说搅拌、超声波破碎等，像摇晃沙袋一样，把核酸搞出来。
1.2 去除杂质：清除“杂草”一旦细胞壁被破坏，里面的核酸和其他成分混杂在一起。
接下来，我们要做的就是清除那些“杂草”。
这时候我们会用到一些化学试剂，比如说酚/氯仿混合液。
这些试剂像是高效的“除草剂”，能够把蛋白质和其他杂质从核酸中分离出来。
我们会把样品离心分层，这样就能把核酸分离出来。
记得，离心就像洗衣机的脱水功能，快速旋转让东西分开。
2. 核酸纯化的妙招接下来是核酸纯化的部分了。
这个过程可以说是给核酸做一个“美容”，让它看起来干净又光鲜。
纯化的方式有很多，其中最常用的是柱子纯化。
我们把样品经过特制的柱子，就像是把泥土过滤掉，把精华留下来一样。
柱子的材料有一种特殊的性质，能吸附核酸，而把其他杂质排除在外。
2.1 柱子纯化：像“过滤咖啡”柱子纯化的过程其实就像是过滤咖啡。
你把咖啡粉放到过滤纸里，然后慢慢滴下清水，最终只剩下干净的咖啡液。
类似地，我们把核酸溶液通过柱子，里面的核酸会被柱子吸附，而其他的杂质会被洗掉。
核酸的分离与纯化讲解
• 二.质粒和噬菌体DNA的提取和纯化
• （一）质粒DNA的提取 • 基本步骤 • 1.细菌的培养 • 2.细菌的收集与裂解 • 3.质粒DNA的纯化 • 提取方法
• 煮沸法： • 碱法：最常用的质粒DNA提取方法。 • SDS法：
• （二）噬菌体DNA的提取
• 1.细菌培养 • 2.细菌的感染及裂解 • 3.噬菌体的沉淀及纯化 • 4.噬菌体DNA的提取
• 图1 玻璃砂研磨提取总DNA的电泳结果
• 1-4孔为低pH值法，5-8孔为CTAB法，9-12孔为苯酚法 • 1,2为西洋参；3.鲜品布渣叶；4.干品布渣叶
• 图2 氧化铝研磨提取总DNA的电泳结果
• 1-4孔为低pH值法，5-8孔为CTAB法，9-12孔为苯酚法 • 1,2为西洋参；3.鲜品布渣叶；4.干品布渣叶
一、概述
• 核酸分离提取的原则 • 常用方法及基本原理 • DNA的分离纯化 • RNA的分离纯化
第一节 核酸分离提取的原则
• 一、基本原则
• 1.保证核酸一级结构的完整性。 • 2.排除其它分子的污染。
• 二、注意事项
• 1.简化操作步骤，减少对核酸的破坏。 • 2.避免过酸（碱）等化学因素的影响（pH4～10）。 • 3.减少物理因素对核酸的降解。 • 4.防止核酸的生物降解。
• ③分离浮力密度不同的DNA分子或其他分子颗粒， 如图1。
图1 氯化铯梯度纯化λ噬菌体
噬菌体在1.45g/ml与1.50g/ml氯化铯界面之间形成一肉眼可 见的带。在1.45g/ml与1.50g/ml氯化铯界面之间可看到一个 由噬菌体颗粒形成的浅蓝色带。
• ④纯化DNA分子。在中性CsCl溶液中，DNA的 浮力密度为1.7g/ml，RNA为2.0g/ml，蛋白 质的浮力密度为1.3～1.4g/ml。在起始密度 为1.7g/ml的CsCl溶液中进行超速离心，可 以很好地将三者区分开。蛋白质浮在上层液 面，DNA分子在离心管中间形成区带，RNA沉 于管底，从而达到从DNA样品中去除微量RNA 和蛋白质的目的。
核酸分离纯化的技术原理
核酸分离纯化的技术原理核酸提取是核酸检测实验的第一步，也是最关键的一步。
核酸提取的纯度、产量和质量是影响下游实验的关键。
核酸提取主要有两个步骤，分别是裂解和纯化，其中，裂解的目的是通过各种方法裂解细胞，将核酸释放到溶液中，纯化的目的则是将核酸分子从裂解液中特异性地分离出，从而避免裂解液中原有的蛋白分子、脂类、糖类、多肽、其他有机或无机分子对后续核酸检测实验的干扰。
在核酸提取过程中还应遵循以下原则：保证核酸分子一级结构的完整性；去除其他污染分子。
一、液相核酸分离纯化技术（一）胍硫氰酸酚-氯仿提取法盐类通常是核酸样本中最常见的杂质成分，因此，在将核酸样本进行下游处理和分析前，通常需要去除盐类成分。
因此，通常需一或多个分离和（或）纯化步骤来使样本脱盐。
核酸纯化的常规步骤包括细胞裂解，该步骤通过破坏细胞结构而形成细胞裂解液，同时灭活包括DNA酶和RNA酶在内的细胞内源性核酶，并最终从细胞碎片中获得纯净的核酸样本。
有机溶剂-苯酚-氯仿提取法正是基于上述原理最常见的核酸经典提取方法之一。
苯酚-氯仿-异丙醇按照一定比例混合后（即：25∶24∶1）可抵制RNA酶活性，从而克服单用苯酚无法抑制RNA酶活性的不足。
蛋白、脂质、碳水化合物和细胞碎片可通过提取苯酚和氯仿有机试剂混合物的水相而去除。
含有DNA样本的水相可通过加入2∶1或1∶1比例的乙醇或异丙醇沉淀，最后，沉淀下来的DNA用70%乙醇洗涤并最后溶解于TE缓冲液或无菌去离子水中。
异硫氰酸胍（guanidinium isothiocyanate）用于RNA提取的方法最早见于1977年，但是，由于该方法比较繁琐，后来逐步被称之为胍硫氰酸酚-氯仿提取法（guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction）代替，该方法可一步完成RNA提取。
其基本原理是：硫氰酸胍是蛋白质强变性剂，能裂解组织细胞，释放RNA，抑制RNA酶的活性，同时与RNA形成可溶性复合物，经过酚-氯仿抽提，使RNA 与组织中的DNA和蛋白质分离开，达到分离提取总RNA的目的。
简述核酸分离纯化的主要步骤。
简述核酸分离纯化的主要步骤。
大家好，今天我们来聊聊核酸分离纯化这件事。
说到这个话题，很多人可能会觉得这就像是从泥巴里找金子，难得不得了，但其实只要掌握了步骤，简直就像是在玩一场化学版的捉迷藏。
核酸分离纯化是为了从各种样本中提取出我们的DNA或RNA，并且把它们从其他杂质中清理出来。
要做到这一点，我们得一步步来，每一步都不容马虎。
接下来，就让我带大家一起走进这个过程，看看如何让这些细小的分子从一堆混乱中脱颖而出。
2. 主要步骤详解2.1 样本准备首先，咱们得从头开始，准备好样本。
想象一下，我们要从一杯混合果汁中找出果肉，首先就得把这杯果汁倒进一个干净的容器里。
具体来说，我们通常会从细胞中提取核酸，所以需要将细胞破碎以释放出核酸。
这个过程就像是在打开一罐罐头，一切都要小心翼翼。
为了让细胞破裂，我们会用到一些化学试剂或者物理方法，比如用研磨机或者超声波处理。
就像是把一个充满秘密的小盒子打开，里面的核酸就这样被释放了出来。
2.2 核酸提取一旦细胞被破坏，释放出的核酸就是我们接下来要处理的对象。
这时候我们需要把这些核酸从其他杂质中分离出来。
这个步骤就像是在海滩上捡贝壳，我们需要把那些不起眼的沙子和海藻去掉，剩下的才是我们真正想要的。
核酸提取的方法有很多，比如利用试剂盒或者化学溶液。
常见的有酚氯仿提取法和柱纯化法。
酚氯仿法就像是用一招老派的武功，把核酸和蛋白质分开，而柱纯化法则像是用现代化的设备，让核酸在特定的柱子上游刃有余地被吸附下来。
2.3 核酸纯化好啦，提取出核酸之后，接下来就是纯化了。
纯化这一步，就像是用细网筛选掉杂质，只留下最珍贵的部分。
我们通常会使用一些化学试剂来清洗掉剩余的杂质，比如盐、酒精等。
这个过程有点像给你的衣服做干洗，把那些不干净的部分都清理干净。
纯化的目的是为了确保你得到的核酸足够干净，以便后续的实验能顺利进行。
3. 检测与保存3.1 检测最后一步，我们得检测一下核酸的质量，看看它是不是达到了要求。
《核酸的分离与纯化》课件
凝胶层析
柱体上填充的凝胶为物质提供 分子筛作用，不同大小的分子 在凝胶中被阻碍的程度不同。
结论与要点
1 核酸是由核苷酸组成的生物高分子。 2 常见的核酸类型有DNA和RNA。
3 分离技术包括盐析、凝胶电泳、超
速离心和柱层析等。
5 超速离心技术包括差速离心和密度
梯度离心。
4 凝胶电泳可分为琼脂糖凝胶、聚丙
差速离心
通过旋转离心管，根据密度差异使分子分层。
密度梯度离心
将不同密度的离子或分子加入离心管，创建密 度梯度，然后离心管使分子按照密度梯度分 层。
柱层析
吸附层析
利用柱体上填充的化学吸附剂 与物质的亲和性差异使其分离。
离子交换层析
利用电荷性质进行分离，负载 离子的功能团能够与物质中带 正电荷的离子相互作用。
《核酸的分离与纯化》 PPT课件
此课件旨在介绍核酸的分离与纯化方法，从而为纯核酸的获得提供帮助。
核酸是什么
1 分子组成
核酸是由核苷酸组成的生物高分子。每个核苷酸由糖、碱基和磷酸基团三部分组成。
2 功能与作用
核酸参与了生命活动的多个方面，包括传递遗传信息、调控基因表达等。
3 常见类型
常见的核酸有DNA、RNA等多种类型，它们在分子组成和生物功能上存在差异。
核酸的分离方法
1
盐析
通过调节溶液的离子强度，使核酸与溶
凝胶电泳
2
液中的其他物质分离。
利用电场作用使核酸在凝胶中移动，根
据大小和电荷差异分离不同的核酸。
3
超速离心
通过调节离心力和离心时间，使不同重
柱层析
4
量的分子沉淀到不同位置。
利用柱体中填充的吸附剂、离子交换剂、 凝胶等材料，按照不同的物性实现分离。
核酸的分离与纯化ppt课件
——盐析法
产量较低，但方法简单，比较酚氯仿方法无化学危害；
同样不适合大规模自动化提取。
提取好的DNA用蛋白酶处理纯度会提高。
为深入学习习近平新时代中国特色社 会主义 思想和 党的十 九大精 神,贯彻 全国教 育大会 精神,充 分发挥 中小学 图书室 育人功 能
核酸提取方法——分离与纯化
每一步骤又可由多种不同的方法单独或 联合实现。
为深入学习习近平新时代中国特色社 会主义 思想和 党的十 九大精 神,贯彻 全国教 育大会 精神,充 分发挥 中小学 图书室 育人功 能
核酸提取方法——细胞裂解
细胞裂解可通过以下几种方法实现：
物理作用 化学作用 酶作用 （生物作用）
为深入学习习近平新时代中国特色社 会主义 思想和 党的十 九大精 神,贯彻 全国教 育大会 精神,充 分发挥 中小学 图书室 育人功 能
碱性pH环境：强碱(NaOH) 或碱性缓冲液 ( TE、
STE 等)
在一定的p H 环境下,表面活性剂或强离子剂可使细胞裂解、蛋 白质和多糖沉淀,核酸释放到水相；某些缓冲液中的一些金属离 子螯合剂( EDTA 等) 可螯合对核酸酶活性所必须的金属离子 Mg2+ 、Ca2+ ,从而抑制核酸酶的活性,保护核酸不被降解。
核酸提取方法——分离与纯化
——硅胶吸附法
产量较低，纯度很好； 也能造成大片段核酸的损伤； 对极小片段核酸提取不够好； 简单方便，可进行自动化处理。
为深入学习习近平新时代中国特色社 会主义 思想和 党的十 九大精 神,贯彻 全国教 育大会 精神,充 分发挥 中小学 图书室 育人功 能
核酸提取方法——分离与纯化
——硅胶吸附法
1、细胞裂解和酶处理同前述；
核酸提取与纯化
核酸提取与纯化1. 引言核酸提取与纯化技术是分子生物学研究中的一项基本操作。
随着分子生物学研究的深入，核酸提取与纯化技术变得越来越重要。
通过提取和纯化核酸，可以从生物样本中分离出DNA和RNA，并用于后续的实验分析，如PCR、测序、基因克隆等。
本文将介绍核酸提取与纯化的基本原理、常用方法以及注意事项，以帮助读者更好地理解和应用这一技术。
2. 核酸提取与纯化的基本原理核酸提取与纯化的基本原理是利用不同物质间的化学和物理性质的差异实现核酸的分离和纯化。
一般情况下，核酸提取与纯化的基本步骤包括细胞破碎、核酸溶解、核酸分离、纯化和沉淀。
下面将逐步介绍每个步骤的原理。
2.1 细胞破碎细胞破碎是核酸提取与纯化的第一步，目的是将细胞破坏，释放出细胞内的核酸。
常见的细胞破碎方法包括机械破碎、化学破碎和酶解。
机械破碎是通过物理力量（如搅拌、振荡、高压等）破坏细胞结构，使细胞内的核酸释放。
化学破碎则是利用化学物质（如酸、碱、溶剂等）破坏细胞膜和核酸结构，使核酸溶解。
酶解则是利用特定酶（如蛋白酶、核酸酶等）降解细胞内的蛋白质和核酸，使核酸得以释放。
2.2 核酸溶解核酸溶解是在细胞破碎后，将核酸从其他组分中溶解出来。
核酸的溶解需要满足一定的条件，如适当的温度、pH值和离子浓度等。
常见的核酸溶解缓冲液包括Tris-HCl缓冲液、EDTA缓冲液和含有盐的缓冲液等。
这些缓冲液能够提供适当的pH值和离子浓度，有利于核酸的稳定和溶解。
2.3 核酸分离核酸分离是将溶解的核酸与其他杂质分离的过程。
核酸的分离可通过差速离心、柱层析和电泳等方法实现。
差速离心是利用离心力将核酸与其他物质分离的方法。
由于核酸的分子量较大，其在离心过程中沉降速度较慢，从而与其他物质分离。
柱层析则是利用柱状填料的吸附、分配和排除等原理，通过溶液在柱中的流动进行分离，将核酸与其他组分分离。
电泳是利用核酸在电场中的迁移速度的差异进行分离的方法。
2.4 核酸纯化核酸纯化是将分离的核酸进一步纯化，去除可能存在的杂质。
核酸分离纯化的主要步骤
核酸分离纯化的主要步骤1. 什么是核酸分离纯化？嘿，大家好！今天我们来聊聊核酸分离纯化这回事。
说白了，它就是从细胞里提取出DNA或RNA的过程。
就像是把美味的汤从锅里倒到碗里，确保里面没有杂质。
咱们的细胞里有很多东西，像是蛋白质、脂类和水分，真是五花八门。
但我们只想要那个最重要的核酸，嘿，这可是一项技术活哦！2. 核酸分离纯化的主要步骤2.1 细胞裂解第一步，就是把细胞搞破。
这听起来有点狠，但其实这是必须的，像个忍者一样，咱们得悄悄潜入细胞的世界。
我们用一种叫做裂解缓冲液的东西，里面有各种化学物质，可以把细胞膜弄得稀巴烂。
想象一下，把一个坚硬的蛋壳敲开，里面的蛋黄蛋白就可以流出来啦！这时候，细胞里的东西就会全部跑出来，嘿嘿，包括咱们要找的核酸。
2.2 细胞碎片去除接下来，咱们要把那些不需要的“杂物”清理掉。
细胞里面可不是清汤挂面，咱们得把破碎的细胞膜和其它大块的东西滤掉。
这个过程可以用离心来搞定，像旋转木马一样，把重的东西甩到边上，让核酸跟着跑到上面。
然后小心翼翼地把上面的液体吸出来，这可得细心，别把宝贝也给弄丢了！2.3 核酸沉淀好啦，经过一番折腾，咱们终于把核酸从那些杂七杂八的东西里解救出来了。
可是，这时候核酸还没完美地展现出来，咱们还需要进一步把它沉淀下来。
这里就要用到乙醇或异丙醇，咱们把它们加入到提取液中，就像给核酸穿上一件漂亮的外衣。
等一会儿，核酸就会像小颗粒一样沉到瓶底，真是美得不要不要的！3. 清洗和重悬核酸3.1 清洗核酸在沉淀出核酸后，我们还得给它洗个澡，别让它沾上那些脏东西。
再加点冷的乙醇，把沉淀的核酸轻轻洗一遍，像给小狗洗澡一样，既要温柔又要彻底。
洗完后，再把它离心一遍，剩下的就会是干净的核酸，闪闪发光，简直美丽动人！3.2 重悬核酸最后一步，就是把干净的核酸放到一个适合它的环境中，让它重新“生活”起来。
咱们用合适的缓冲液把它溶解开，确保它能够活跃地工作。
就像小鸟飞回温暖的家，核酸终于回到了它该待的地方。
核酸提取与纯化
核酸提取与纯化引言核酸提取与纯化是生物学研究中常用的操作步骤之一。
核酸提取是指从生物样本中分离出DNA或RNA分子，纯化则是指将提取得到的核酸分子除去杂质，获得纯净的核酸样品。
本文将介绍核酸提取与纯化的基本原理、常用方法以及注意事项。
核酸提取原理核酸提取的基本原理是利用生物样本中DNA和RNA分子与其他组分（如蛋白质、细胞壁等）之间的化学或物理性质的差异，将核酸分子从样本中分离出来。
常见的提取方法有有机溶剂法、盐析法和离心法等。
有机溶剂法有机溶剂法是一种常用的核酸提取方法。
其原理是利用有机溶剂（如酚-氯仿混合液）与生物样本中的其他组分之间的亲和性差异，将核酸分子从样本中提取出来。
这种方法操作简单，适用于提取DNA和RNA。
具体操作步骤如下：1.准备生物样本，如细胞培养物或组织样本。
2.加入细胞裂解缓冲液，破坏细胞膜、核膜等结构，释放核酸分子。
3.加入酚-氯仿混合液，与细胞裂解液混合，形成两相体系。
4.离心分离两相，核酸分子会在有机相中分配到有机相中，而其他杂质会在水相中。
5.取出有机相，加入异丙醇或乙醇等沉淀剂，沉淀核酸分子。
6.离心沉淀，弃去上清液。
7.用乙醇洗涤沉淀，去除残留的盐和有机溶剂。
8.干燥沉淀，加入适量的去离子水溶解核酸。
盐析法盐析法是利用核酸分子与盐溶液中的离子交互作用的原理进行分离。
该方法适用于高含量的核酸样本（如DNA或RNA）。
其操作步骤如下：1.准备生物样本，如细胞裂解液。
2.加入适量的盐溶液，使盐浓度达到一定程度。
3.离心分离沉淀，核酸分子会与高浓度盐溶液结合形成沉淀，而其他杂质会在上清液中。
4.取出沉淀，用盐溶液洗涤核酸，去除杂质。
5.干燥沉淀，加入适量的去离子水溶解核酸。
离心法离心法是一种快速分离核酸的方法。
其原理是利用离心力将核酸分子从样本中沉淀下来。
离心法适用于小样本量和快速提取的情况。
具体步骤如下：1.准备生物样本，如细胞裂解液。
2.加入高盐缓冲液，增加核酸与其他组分之间的亲和性差异。
最新核酸分离纯化技术
基因诊断(gene diagnosis)是利用分子生物学及 分子遗传的技术和原理，在DNA水平分析基因的存 在、鉴定疾病所涉及基因的置换、缺失或插入等突 变，以诊断各种感染性疾病和遗传性疾病，进行肿 瘤分子水平的研究。
主要技术及过程 分离、扩增待测的DNA片断
基因探针的制备和标记
区分或鉴定DNA的异常
对于RNA酶： 其具有高稳定性，抗酸抗碱，具很广的pH作用范围，
抗高温严寒（0~65℃均具有活性）。而该酶作用时不需 要二价金属离子，故用螯合剂无法抑制其活力。
无所不在的RNA酶： 外源性RNA酶：RNA制备过程中用到的玻璃和塑料制
品、研究人员本身尤其是研究人员的手，以及分离过程中 用到的试剂和溶液。 内源性RNA酶：组织本身所固有的，在某些组织中（如胰 腺），或者在其特定的生理状态（如快速发育期间）下的 含量很高。而且一当细胞破碎后即释放出来。
有机溶剂处理以去除蛋白质的次数视蛋白质的含量和制剂纯 度要求而定，一般要处理到中间变性蛋白质层消失为止。
2．表面活性剂法 破细胞时所用的SDS等阴离子去污剂除了可
以溶解膜蛋白和脂肪外，还可解聚核蛋白。 3．蛋白酶水解法
用蛋白酶水解去除蛋白质的方法比较温和， 可避免剪 切力的破坏。
（三）核酸的沉淀
沉淀核酸时，一般还要加入一定浓度的盐溶液，如 NaAc或NaCl。这是因为在pH为8左右的溶液中，核 酸分子是带有负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl， 使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间 的同性电荷斥力，易于互相聚合而形成核酸的盐沉淀。
加入的盐溶液浓度太低：只有部分核酸形成钠盐而 聚合，这样就造成核酸的沉淀不完全。
二．分离纯化核酸时的注意事项
核酸分离纯化的基本方法和原理
核酸分离纯化的基本方法和原理嘿，朋友们！今天咱就来聊聊核酸分离纯化这档子事儿。
你说这核酸啊，就像是一个神秘的小宝贝，藏在各种细胞啊、组织啊里面，咱们得想办法把它给找出来，还得弄得干干净净的。
那怎么弄呢？这就好比你要从一堆乱七八糟的杂物里找出你最喜欢的那个小玩具。
首先呢，得把细胞啥的给弄破，让核酸能跑出来。
这就像是打开一个装满宝贝的盒子，得有个办法把盒子弄开才行。
然后啊，就有各种方法来把核酸和其他那些杂七杂八的东西分开。
比如说，有的方法就像一个超级厉害的筛子，能把核酸给筛出来，把其他的都挡在外面。
你想想看，是不是很神奇？这里面还有些窍门呢！就像你挑苹果，得挑又大又红的。
咱们分离核酸也得选对方法，不然可就弄不好啦。
而且啊，不同的样本，就像是不同口味的糖果，处理起来还不太一样呢。
比如说，从血液里分离核酸和从植物里分离就差别挺大。
这就好像你要从一碗汤里捞东西和从一堆沙子里找东西，能一样吗？当然不一样啦！在这个过程中，可不能马虎。
就像你搭积木，一块没放好，整个就可能垮掉。
每一步都得小心翼翼的，不然得到的核酸就不纯净啦，那可就白忙乎了。
而且啊，这技术就像我们的生活一样，在不断进步呢！以前可能得费好大的劲才能做到的事儿，现在有了新的方法、新的工具，变得容易多啦。
咱再想想，要是没有这些厉害的核酸分离纯化技术，那好多研究啊、诊断啊不都没法进行啦？就好像你没有了眼睛，还怎么看清楚这个世界呀。
所以说呀，核酸分离纯化可真是个了不起的事儿呢！它让我们能更好地了解生命的奥秘，能帮助医生更快地诊断疾病，能让科学家们做出更多的发现。
这难道不是很神奇、很厉害吗？咱可得好好感谢那些研究这些技术的人，是他们让我们的生活变得更美好呀！总之，核酸分离纯化就是这样一个充满挑战又超级有趣的领域，等着我们去探索、去发现呢！。
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植物材料
植物CTAB法流程图
裂解液
酒精沉淀
液氮研磨
抽提
离心洗涤
DNA溶液
细胞裂解
上层溶液
干燥溶解
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基因组DNA—SDS 法提取缓冲液配方
Tris-HCl
迈好成功第一步
—核酸分离提取新思维
福际生物技术有限公司专场技术讲座系列
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1
主要内容
❖公司概况 ❖核酸分离提取技术交流
中 国 福 际 World’s Foregene
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➢ 线粒体、叶绿体DNA的提取 • 差速离心结合SDS裂解法
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基因组DNA—CTAB 法提取缓冲液经典配方
组份
Tris-HCl EDTA （pH8.0） NaCl
（pH8.0）
终浓度
100 mM
20 mM
1.4M
CTAB
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DNA提取方法简介
基因组DNA的提取 ➢ CTAB法
➢ SDS法 ➢ 其他方法
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非基因组DNA的提取
➢ 质粒DNA的提取 • 碱裂解法 • 煮沸法
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CTAB 法提取缓冲液改进配方
组
Tris-HCl
份 （pH8.0）
终
浓
100 mM
度
EDTA （pH8.0）
20 mM
NaCl
CTAB
1.4M 3%(W/V)
PVP40 β-巯基乙醇
5%(W/V)
2%（V/V） 使用前加
入
➢PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种 不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同 时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
reversible gene regulation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 102(34):
12189-93. (封面文章)
Xu Song, et al. (2004) Binding of mouse VL30 retrotransposon
宋旭
RNA to PSF protein induces genes repressed by PSF: Effects on
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8
前言
核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信 息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核 酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基 本的操作 。
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9
内容
DNA提取方法简介 DNA提取常见问题、原因分析及其对策 RNA提取方法简介 RNA提取及其RT-PCR常见问题、原因分析及其 对策 Foregene基因组DNA纯化方案 Foregene基因组DNA纯化实例 Foregene产品简介
β-巯基乙醇
2%(W/V)
0.1%（V/V） 使用前加入
➢ CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； ➢ β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐 变，使酚容易去除，当酚类物质被氧化后就会和核酸不可逆 的结合。
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组份
EDTA （pH 8.0 ） NaCl
SDS
（pH8.0）
终浓度
10 mM
20 mM
0.4M
2%
•SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能 裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸； •提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白质 及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀；
CONTACT US 规模，预计到2014年将达到100人以上，其中85%以上具有硕士或博士学位。
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4
公司首席技术官。四川大学博导，A级岗位二级教授，
国家自然科学基金生命科学部基因表达调控与表观遗传学
评审专家。主要从事长非编码RNA及抗肿瘤药物研究。
发表文章：
Xu Song, et al. (2005) Roles of PSF protein and VL30 RNA in
世界一流的集研发、生产、销售、技 术支持、技术服务为一体的生物技术
服务中心
公司。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ研发中心（基础）
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人才优势
❖公司拥有一支实力雄厚的研发队伍，主要研发人员均具有多年海外名校工作经 验，在Science、Nature、Lancet、Molecular Cell、N.Engl J Med、PNAS等杂志发表 过数十篇论文，具有广阔的国际视野和较强的产品设计开发能力。 ❖技术顾问有来自哈佛、耶鲁等名校的美国国家科学院院士、教授等知名学者。 ❖现有研究人员30人，90%具有硕士及以上学历。未来公司将继续扩大研发团队
steroidogenesis and oncogenesis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.
101(2): 621-6
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Alan Garen
公司高级顾问。耶鲁大学终身 教授、美国国家科学院院士、美国 国家艺术与科学院院士、四川大学 特聘教授。
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公司简介
成都福际生物技术有限公司坐落于成都高新孵化园内，由耶鲁大学留学
回国的知名学者创办, 主营方向为研发、生产和销售生命科学科研及临床所用
的试剂及试剂盒。现已推出各种DNA 纯化试剂盒及直接PCR系列产品。
未来，福际将进一步加大研发投
管理 行政中心
入，丰富产品种类，致力于发展成为
销售中心
率先发现蛋白质编码的三个终 止密码子，为现代分子生物学研究 的主要开拓人之一。现主要从事配 体靶向抗肿瘤药物研究及原癌基因 的发现与鉴定工作。
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生物学、医学实验室
服务对象
生物技术公司、科研机构
海关、质检部门
医院、疾控中心、血站
法医、刑侦
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更多行业
……
7
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