流式多因子检测技术 ppt课件

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4
6
微球
PE 荧光强度 即为靶蛋白量 5 4
FL4 (Differentiator Parameter)
不同大小种类微球分布
FL2 (Reporter Parameter)
AimPlex检测过程
60分钟的抗原 抗体孵育
30分钟生物素 化检测抗体孵
育
20分钟链霉素 亲和素-PE孵育
AimPlex and Luminex产品对比
AimPlex (pg/mL)
AimPlex (pg/mL)
800
IFNγ
y = 0.5948x + 8.0123
600
R²= 0.9716
400
200
0
0
500 1000 1500
Luminex (pg/mL)
TNFα
4000
y = 1.0737x + 10.264
10000.00
1000.00
10Biblioteka Baidu.00
10.00
1.00 1.00 10.00 100.00 1000.0010000.01000000.00 pg/mL
Lower concentration range standard curve for better calculation of samples with very low AFP concentration
选择灵活
– 研究人员可以根据实验需要，自由组合检测指标
耗时短
– 整个过程只需3个多小时
要求低
- 适用于所有含488激发光的流式细胞仪
宽范围，高灵敏
-更宽检测范围，高灵敏度，高特异性，高重复性
MFI
更宽的检测范围
药明康德客户需求：检测小鼠肝癌模型的AFP浓度
Full Range Std Curve
10000
1000
MFI
100
10
1
1
10
100 1000 10000
pg/mL
曲线自动生成 线性或对数形式显示 IL-4 回归曲线拟合
IFNg IL-2 TNFa IL-6 IL-8
样本检测举例
Human Th1/Th2 Standard: Blank
Human Th1/Th2 Standard: 14 pg/ml
• 肿瘤 (如肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫颈癌等) • 心血管疾病 (如高血压、动脉粥样硬化) • 糖尿病、肥胖症 • 自闭症、老年痴呆症 • 自身免疫性疾病 (系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、哮喘、
过敏反应等) • 炎症感染 (如结肠炎、克罗恩氏病、败血症等) • 传染性疾病 (如艾滋病、肝炎等) • 其它 (如多发性硬化症、营养不良、青光眼、阻塞性肺病、银
3000
R²= 0.9292
2000
1000
0
0
1000 2000 3000
Luminex (pg/mL)
AimPlex (pg/mL)
AimPlex(pg/mL)
IL-10
800
y = 0.6238x - 3.149
600
R²= 0.9699
400
200
0
0
500 1000 1500
Luminex (pg/mL)
流式高通量多因子检测技术及应用
细胞因子与疾病
免疫调节作用：
➢ 调节着每个细胞乃至组织活动；
➢ 直接参与了细胞间相互作用以及细胞 外微环境的变化
参与疾病发生：
类风湿性关节炎； 强直性脊柱炎 SLE； 银屑病； 细胞因子风暴
以Th淋巴细胞为枢纽的细胞因子调节网
细胞因子与疾病治疗
多因子检测技术
流式多重定量技术
----检测细胞表面蛋白或胞内蛋白
R&D
xMap
Bioplex
Millplex
CBA
流式
Flowcytomix
基础
上
AimPlex
Luminex平台
多因子检测与疾病研究
更少样本
肿瘤生物学 免疫相关
代谢 心血管疾病
更短时间
干细胞研究 神经生物学
肿瘤移植 细胞凋亡
高通量
多因子检测涵盖了很多研究领域
多因子检测产品广泛应用于疾病的研究
AimPlex结果的提取和分析
流式细胞仪：
几乎所有流式细胞仪都可以使用，只要 • 具有488nm激发光源 • FCAP Array 3.0 软件可计算 被测样本中待检物的浓度
标准曲线分析
FCAP array 3.0 Software
Standard Curves - Human 7-Plex
100000
Bead
Antibody 1 Cytokine
Antibody 2 (Biotin + Streptavidin PE)
➢ 流式细胞仪检测荧光，从而实现对蛋白抗原的检测；
➢ 结合抗原标准品的标准曲线，可实现对蛋白抗原的定量检测。
不同大小，不同 荧光强度的捕获 微球，在FCM FL4检测
5
不同的目标蛋白
什么是AimPlex多因子检测技术？
AimPlex多因子检测技术： 利用不同尺寸、不同荧光强度的多个 微球群实现多因子的检测 利用该技术，配合任何一台配备 488nm激发光的流式细胞仪，即可实现 24个指标的同步检测。
AimPlex技术原理
一系列荧光强度不同的微球包被有特异性捕获抗体，与待 测样本孵育后，加入检测抗体，形成“三明治”复合物
Human Th1/Th2 Standard: 42 pg/ml
Human Th1/Th2 Standard: 123 pg/ml
Human Th1/Th2 Standard: 370 pg/ml
Human Th1/Th2 Standard: 1,111 pg/ml
Human Th1/Th2 Standard: 3,333 pg/ml
屑病等)
开发研究 大学 政府专业管理机构 医学中心
药物研发 生物技术企业 药物公司
临床研究 医院 医学中心
早期诊断 临床实验室 大学检测测试中心
实验室诊断 医院 专业检测机构 所有流式细胞仪客户
多因子检测应用领域
• 基础医学、生物学研究
• 基础免疫学研究 • 细胞生物学如信号传导、凋亡 • 癌症研究、传染病等 •药物开发和疗效研究
Human Th1/Th2 Standard: 10,000 pg/ml
Human Th1/Th2 unknown 1
Human Th1/Th2 unknown 2
AimPlex优势
高通量，多指标
– 同时检测一个标本多达24个指标
需要标本量少
– 节省样品（25 µL）、试剂、实验空间、仪器设备
IL-17A
400
y = 0.8712x + 13.712
300
R²= 0.9391
200
100
0 0 100 200 300 400