色谱柱的充填和安装
柱色谱的组装及使用步骤
柱色谱的组装及使用步骤
柱色谱是一种常用的分离与纯化技术，其组装与使用步骤如下：
组装步骤：
1. 准备柱：将柱底塞子放置在柱底上，然后把柱管放入柱底，确保柱底与柱管之间无漏气。
2. 注入填料：将柱管倾斜，从顶端注入填料，用手轻轻敲击柱管帮助填料均匀分布，直到填料填满柱管。
3. 压实填料：用柱底塞子或适当大小的塞子在填料顶部轻轻压实填料，使填料紧密结合，防止颗粒流失。
使用步骤：
1. 平衡柱：将柱管与流动相连接，调整流速，通过柱底逐渐注入流动相，直到填料被完全浸泡。
这一步称为平衡柱，旨在保证填料表面与流动相充分接触并达到稳定状态。
2. 样品加载：将待分离的混合物样品通过进样口注入柱管顶端，允许样品进入填料中。
注意，样品浓度应适中，以避免柱塞或样品堵塞柱管。
3. 洗脱操作：控制流动相的流速和组成，通过改变流动相的性质或者使用梯度洗脱方法，逐渐洗脱样品中的目标化合物，使其在填料中有选择性地分离出来。
4. 收集分离物：根据洗脱出的目标化合物的时间窗口进行分馏收集，以得到纯净的目标化合物。
5. 柱后处理：将柱管内的填料用适当的溶剂进行再洗，并对填料重复压实，以备下次使用。
需要注意的是，每次使用前都需要检查柱管是否漏气和填料是
否存在杂质，以确保柱色谱系统的正常运行。
同时，观察流出液的吸光度或检测结果，判断柱色谱的分离效果，并根据需要调整柱床、填料和流动相的选择。
(完整版)色谱柱的安装
色谱柱的安装色谱柱的正确安装才能保证发挥其最佳的性能和延长使用寿命。
正确的安装请参考以下步骤。
步骤1. 检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等检查气体过滤器和进样垫，保证辅助气和检测器的用气畅通有效。
如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物，需要将进样口的衬管清洗或更换。
步骤2. 将螺母和密封垫装在色谱柱上，并将色谱柱两端要小心切平步骤3. 将色谱柱连接于进样口上色谱柱在进样口中插入深度根据所使用的GC仪器不同而定。
正确合适的插入能最大可能地保证试验结果的重现性。
通常来说，色谱柱的入口应保持在进样口的中下部，当进样针穿过隔垫完全插入进样口后如果针尖与色谱柱入口相差1-2cm，这就是较为理想的状态。
（具体的插入程度和方法参见所使用GC的随机手册）避免用力弯曲挤压毛细管柱，并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与毛细柱接触摩擦，以防柱身断裂受损。
将色谱柱正确插入进样口后，用手把连接螺母拧上，拧紧后（用手拧不动了）用扳手再多拧1/4-1/2圈，保证安装的密封程度。
因为不紧密的安装，不仅会引起装置的泄漏，而且有可能对色谱柱造成永久损坏。
步骤4. 接通载气当色谱柱与进样口接好后，通载气, 调节柱前压以得到合适的载气流速（见下表）。
柱前压设置为Psi15m 25m 30m 50m 100m0.20mm 10-15 20-30 18-30 40-60 80-1200.25mm 8-12 13-22 15-25 28-45 55-900.32mm 5-10 8-15 10-20 16-30 32-600.53mm 1-2 2-3 2-4 4-8 6-14(以上仅为建议的起始设置，具体数值要依据实际的载气流速。
)将色谱柱的出口端插入装有己烷的样品瓶中，正常情况下，我们可以看见瓶中稳定持续的气泡。
如果没有气泡，就要重新检查一下载气装置和流量控制器等是否正确设置，并检查一下整个气路有无泄漏。
等所有问题解决后，将色谱柱出口从瓶中取出，保证柱端口无溶剂残留，再进行下一步的安装。
新色谱柱开启和安装的推荐步骤
何谓常规反相色谱柱？在硅胶或杂化基质颗粒上键合了如C18、C8、C4或苯基等键合相的色谱填料所装填的色谱柱，按反相色谱条件进行操作和分离。
反相是液相色谱中最常使用的分离模式，而C18柱是最常使用的反相色谱柱之一。
新色谱柱开启和安装的推荐步骤：1.使用新鲜洁净的水与乙腈。
冲洗系统，确保系统干净，不含任何缓冲盐和污染物。
2.取用色谱柱时避免磕碰掉落。
3.将色谱柱入口端连接到系统上，柱出口端先不要连接，色谱柱身上有箭头标明正确流向。
4.在0.1 mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱，然后在2分钟内将流速升至0.5 mL/min。
5.当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上（这样可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡）。
6.重启流速，按照步骤4的方法逐渐提高流速，至常规分析时所使用的流速。
7.参考柱效测试报告中的方法，使用该流动相条件平衡色谱柱，通常需要使用5-10倍柱体积的流动相，直至压力与基线稳定。
8.测试柱效。
如果没有柱效测试报告中的分析物，请联系沃特世化学消耗品部门寻求支持，使用合适的浓度与进样量。
柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。
如结果明显偏低、峰形拖尾，提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态，需要进行故障排查。
当使用2.1 mm内径色谱柱时，建议优化系统以减少谱带展宽，包括：使用检测器微量流通池，减少进样器loop环体积，使用较小内径（如0.005''或0.12 mm）的系统管路。
并确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积。
当使用小颗粒填料（如2.5 μm）短柱进行高效快速分离时，需要考虑以下因素：▪确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积，尽量优化系统减少谱带展宽；▪提高采样频率至10点/秒以上；▪较小粒径的色谱柱产生的柱压较高，而较小粒径要达到最优色谱效率所需的线速度较高，请根据所用LC系统的实际情况调节流速；▪可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高，例如40˚C。
色谱柱操作基本流程
色谱柱操作基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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色谱柱的填装------匀浆法
液相色谱柱的填装------匀浆法高压匀浆法：将填料悬浮在适宜的匀浆液中制成匀浆，在其尚未沉降之前，很快地以高压泵将其以很高的流速压进柱中，便可制备出填充均匀的柱子。
高压匀浆法的设备，如图所示。
在装柱之前，先确定所用的柱型，以确定选用多大的匀浆罐体积。
例如，常用的“标准”HPLC柱为φ4.6mm×250mm，其内腔体积约为4.2mL，约需3.5g填料。
一般情况下，为保证填充的成功，需适当过量15%-20%为宜。
如使用4g填料充填它，选择固 - 液比约为1:10，则匀浆罐体积以4mL为宜。
若罐过大，则可在匀浆罐内装入一个以惰性材料（如聚四氟乙烯或不锈钢）制的衬套将其调整至所需体积。
将选用的柱子仔细以乙醇或丙酮清洗干净，并以干净的热风吹干。
如柱管内壁污染较重，也可以用表面活性剂及去离子水依次清洗，并以长竹签或塑料棒扎上棉纱或纱布往复抽擦，以除去污垢。
但应注意不要伤及内壁表面的光洁度，尤其不能造成轴向的划痕。
将清洁的柱管的一端装配上带滤板的柱头，另一端则连接至匀浆罐上。
将涂覆或键合好的硅胶均匀分布在22mL正己烷/异丙醇(90/10，v/v)配比液中，加入约3mL液体石蜡，使其变粘稠，然后超声振荡混合液使硅胶分布均匀，之后迅速把制备的匀浆液倒在匀浆罐内，正己烷/异丙醇(90/10，v/v)为流动相，调整装柱机以400kg t/cm2公斤力，维持约20min装填色谱柱，之后缓慢减小装柱机压力，使压力自动减为零，卸下色谱柱，将柱头安装好即得到手性色谱柱。
称取所需重量的填料，将其置小烧杯中，按其重量的10 倍量（一般也可以按体积计，即10mL 的匀浆液中加入1g 重的填料）加入匀浆液。
摇动或搅拌均匀后，将其移至超声波浴中，以中强的超声波令填料粒子均匀而稳定地悬浮起来。
最后，再以强超声短时间强化一下。
超声处理的时间不宜过长，一般应不超过2-3min，过长则可能造成颗粒的破碎。
将准备好的勾浆液立即倒入匀浆罐中，装满后，将匀浆罐盖好、旋紧，再以针筒抽取一定量的匀浆液，从盖子上的连接孔中插入匀浆罐内部并加注匀浆液至从连接孔中溢出为止。
色谱柱 操作规程
色谱柱操作规程
《色谱柱操作规程》
一、使用前准备
1.1 检查色谱柱是否有损坏或污染
1.2 准备好色谱柱需要用到的溶剂和试剂
1.3 准备好色谱仪器和相关设备
二、装柱操作
2.1 检查柱子的填料是否均匀，如有不均匀情况需重新填料2.2 使用正确的柱子连接件连接色谱柱和色谱仪
2.3 用适当的方法装载样品进入色谱柱
2.4 在装载样品之前，进行柱子的平衡操作，以确保实验的准确性
三、流动相操作
3.1 准备好流动相，确保流动相的纯度和稳定性
3.2 用注射器将流动相缓慢地注入色谱柱中，直到柱子完全充满
3.3 确保流动相的压力和流速在正常范围内
四、运行及维护
4.1 启动色谱仪器，设置好运行参数
4.2 监控运行过程中的色谱柱压力和流速
4.3 如果发现异常情况，立即停止运行并检查色谱柱及相关设备
4.4 实验结束后，用适当的方法对色谱柱进行保养和清洗，以
确保下次使用时的准确性和稳定性
五、安全注意事项
5.1 操作过程中要严格遵守化学品的安全操作规程
5.2 避免色谱柱受到外部物质的污染和损坏
5.3 注意色谱柱及相关设备的维护和保养，确保使用安全和稳定性
六、记录和报告
6.1 在操作过程中要及时记录实验数据和观测结果
6.2 对实验结果进行分析和总结，撰写实验报告
6.3 如有必要，将实验结果提交并交流给相关部门或同行
以上即是《色谱柱操作规程》，希望能够对使用色谱柱的实验人员有所帮助。
色谱柱的充填和安装
将色谱柱连接于色谱仪器上 后，应先试压，试漏，而后在比 正常分析温度高50℃左右，比固 定相最高使用温度低，而且温度 恒定的情况下用载气吹洗数小时 后可承受分析，一般称此为色谱
柱子的老化过程。
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1 不锈钢（SUS）填充柱的安装方法
二、岛津GC-2014填充柱 的安装方法 2 玻璃填充柱的安装方法
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安装前的准备工作
1、准备工作：手套、转换头、隔垫、螺 母、玻璃衬管、柱子、扳手等工具。
2、关闭色谱电源。
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1、不锈钢填充柱的安装
1、在INJ边的不锈钢柱适配器插上玻 璃衬管
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2、安装INJ边的不锈钢柱 至连接口
(1) 将INJ边带有玻璃衬管的不 锈钢柱插入样品入口（从柱箱 一边）。
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3、色谱柱的老化及目的
主要讲 填充柱 的老化
老化目的
是把固定相的残存溶剂， 低沸点杂质，低分子量固定液 等赶走，使记录器基线平直， 并在老化温度下使固定液在担 体表面有一个再分布过程，从 而涂得更加均匀牢固。
特别强调：装填好的色 谱柱，经过老化一段时 间后，柱效及性能均稳 定了，这样才可使用。
端。
（1）将较长的玻璃柱的末端插入安装口（样品入口）
B
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（3）用扳手固定入口 /检测器口的盖螺母。
注意：如果放置了硅O型环， 较松的固定盖螺母；如果放 置了石墨压环，拧紧一半又
1/3圈。
当使用TCD检测器时， 柱安装位置与使用其
它检测器的位置不同。
B
24
柱安装位置
B25ຫໍສະໝຸດ 3、毛细管柱的安装1 岛津毛细管柱的安装
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色谱柱安装及进样方法
色谱柱安装及进样方法气相色谱仪中色谱柱的安装方法及进样手法，大家都知道，气相色谱仪中色谱柱的安装好坏直接影响分析的效果。
一个小小的密封垫也起到了至关重要的作用。
很多气相色谱仪生产厂家以次充好，使用价格极其便宜的密封垫。
这种密封垫不但不会起到效果。
反而在高温下参与化学分析。
严重影响了分析的效果。
在做进样时很多做色谱分析工作的新手常常会把注射器的针头和注射器杆弄弯一、气相色谱仪中色谱柱的安装。
1.安装拆卸色谱柱必须在常温下。
2.填充柱有卡套密封和垫片密封，卡套分三种，金属卡套，塑料卡套，石墨卡套，安装时不易拧的太紧。
垫片式密封每次按装色谱柱都要换新的垫片。
3.色谱柱两头是否用玻璃棉塞好。
防止玻璃棉和填料被载气吹到检测器中。
4.毛细管色谱柱安装插入的长度要根据仪器的说明书而定，不同的色谱汽化室结构不同，所以插进的长度也不同。
需要说明的如果你用毛细管色谱柱采用不分流，汽化室采用填充柱接口这时与汽化室连接毛细管柱不能探进太多，略超出卡套即可。
如何判断进样口密封垫是否该换进样时感觉特别容易，用TCD检测器不进样时记录仪上有规则小峰出现，说明密封垫漏气该更换。
更换密封垫不要拧的太紧，一般更换时都是在常温，温度升高后会更紧，密封垫拧的太紧会造成进样困难，常常会把注射器针头弄弯。
如何选择合适的密封垫密封垫分一般密封垫和耐高温密封垫，汽化室温度超过300℃时用耐高温密封垫，耐高温密封垫的一面有一层膜，使用时带膜的面朝下。
进样应注意问题手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡(吸样时要慢、快速排出再慢吸，反复几次，10ul注射器金属针头部分体积0.6ul，有气泡也看不到，多吸1-2ul把注射器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡，(指10ul注射器，带芯子注射器平感觉)进样速度要快(但不易特快)，每次进样保持相同速度，针尖到汽化室中部开始注射样品。
二、气相色谱仪做进样分析时怎样防止进样针不弯：1.进样口拧的太紧，室温下拧的太紧当汽化室温度升高时硅胶密封垫膨胀后会更紧，这时注射器很难扎进去。
柱色谱的使用方法
柱色谱的使用方法如下：
装柱。
干装法是在柱内装入2/3溶剂，在管口上放一漏斗，打开活塞，让溶剂慢慢地滴入锥形瓶中，接着把干吸附剂经漏斗以细流状倾泻到管柱内，同时用套在玻璃棒（或铅笔等）上的橡皮塞轻轻敲击管柱，使吸附剂均匀地向下沉降到底部。
填充完毕后，用滴管吸取少量溶剂把粘附在管壁上的吸附剂颗粒冲入柱内，继续敲击管子直到柱体不再下沉为止。
湿装法与干装法类似，所不同的是，装柱前吸附剂需要预先用溶剂调成淤浆状。
加样。
将柱内液面降到与柱面相齐时，关闭柱子。
用滴管小心沿色谱柱管壁均匀地加到柱顶上。
加完后，用少量溶剂把容器和滴管冲洗净并全部加到柱内，再用溶剂把粘附在管壁上的样品溶液淋洗下去。
色谱柱的充填和安装(课堂PPT)
主讲：
1
总目录
1 填充柱的充填方法 2 岛津GC-2014填充柱的安装方法
3 岛津GC毛细管柱的安装方法
2
复习：色谱柱
不锈钢填充色谱柱
玻璃填充色谱柱
3
气固色谱填充柱固定相的种类
想一想：固定相的作用 是什么？技术要求是什 么？颗粒大小有什么要
求？
1、增加与样品接触的表面积； 2、细小、均匀、多孔； 3、标准大小颗粒，60-140目。常 用的是60-80目和80-100目。
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（3）用扳手固定入口 /检测器口的盖螺母。
注意：如果放置了硅O型环， 较松的固定盖螺母；如果放 置了石墨压环，拧紧一半又
1/3圈。
当使用TCD检测器时， 柱安装位置与使用其 它检测器的位置不同。
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柱安装位置
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3、毛细管柱的安装
1 岛津毛细管柱的安装
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安装毛细管柱所需工具
进样口/检测器量具（压环夹具）
一半又1/3圈。
（4）用扳手在入口/检测器 口固定盖螺母。
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（2）将玻璃柱每一端插入各自的 安装口（入口/检测器口），用手拧 紧螺母。
通过【柱方法】法连接 ＊在此方法中，不插入玻璃衬管； ＊此方法中，直接将样品注射入柱会污染柱，因此， 此方法只适用于不易污染柱的气体分析； ＊当使用TCD时将TCD柱连接部件放在较短的柱末 端。 （1）将较长的玻璃柱的末端插入安装口（样品入口）
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2、填充色谱柱的主要填充方法
固定相填充的好坏，将直接 影响柱效率。
方法与步骤
主要填充方法：
1
泵抽填充法
特别强调：装柱要求 要填充得均匀，紧密，
切忌有空隙。
安装色谱柱时你应当知道什么 色谱柱如何操作
安装色谱柱时你应当知道什么色谱柱如何操作液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分构成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工获得正确牢靠的试验数据的必经之路。
色谱柱的安装：1.将液相色谱装置中的流动相完全置换后再连接色谱柱，并完全排出流路内的空气。
装置内的液体和所使用的流动相不能相溶的情况下，使用双方都能相溶的液体做过渡。
将盐溶液置换成有机溶剂的时候，需要通过纯水、丙酮的次序来进行置换。
相反，从有机溶剂转换成盐溶液的情况下，需要通过丙酮、纯水的次序置换。
2.色谱柱保存方法不对或者长期不使用的情况下，色谱柱的出入口可能会有空气残留。
这种情况下，必需先把空气完全排出后才连接到装置中。
避开快速加热，加热温度不要超过色谱柱的Z高负荷温度。
把柱子入口侧的螺栓打开，然后加温（一般加温到手心感到暖和的程度就充分了），等液体满出来以后接到装置上。
然后，打开出口处的螺栓，用泵送液，等确认出口处有液体流出后，连接到装置中。
这样操作，就算后面再连接一根色谱柱也能完全除去空气。
3.在泵运作的时候连接色谱柱。
确保能让流动相依照色谱柱上箭头的方向流动的状态连接色谱柱。
4.色谱柱加温使用的时候，先用0.2～0.3mL/min的低流量一边送液一边升温。
达到所定温度后，再渐渐的加添流量至测定流量。
色谱柱安装时需要注意的事项色谱是一种分别分析手段，分别是核心，因此担负分别作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。
多为金属或玻璃制作。
有直管形、盘管形、U形管等形状。
液相色谱通常均接受填充柱。
色谱柱的分别效果取决于所选择的固定相，以及色谱柱的制备和操作条件。
下面介绍色谱柱安装时需要注意的事项。
色谱柱的安装：1）将液相色谱装置中的流动相完全置换后再连接色谱柱，并完全排出流路内的空气。
装置内的液体和所使用的流动相不能相溶的情况下，使用双方都能相溶的液体做过渡。
气相色谱柱-毛细管色谱柱的安装
气相色谱柱-毛细管色谱柱的安装气相色谱柱分填充柱和毛细管柱。
填充柱的填料可以是多孔性粒状系缚剂或在惰性载体颗粒表面均匀的涂敷一层很薄的固定液膜。
填充柱常用内径2-5mm，长0.5-10m的金属管或玻璃管。
填充柱制备简单，可供选用的载体、固定液、吸附集种类很多，因而具有广泛的选择性，有利于解决各种各样组分的分离分析问题，应用比较普遍。
此外，填充柱的样品负荷量大，可用于制备色谱其缺点是柱渗透性较小，传质阻力较大，柱子不能过长，因而分离效率较低。
柱效的选择问题，视试样组分而定，许多分析并不需要很高的分离效率，因此填充柱仍有其广泛的应用前景。
如工业废水中硝基苯的分析、苯系物的分析等用填充柱气象色谱法足以满足分析要求。
现在的填充柱一般只分析气体用。
毛细管柱则又可分为空心毛细管柱和填充毛细管柱两种。
空心毛细管柱是将固定液直接涂在内径只有0.1～0.5mm的玻璃或金属毛细管的内壁上，填充毛细管柱是近几年才发展起来的，它是将某些多孔性固体颗粒装入厚壁玻管中，然后加热拉制成毛细管，一般内径为0.25～0.5mm。
毛细管色谱柱的正确安装才能保证发挥其最佳的性能和延长使用寿命。
正确的安装请参考以下步骤：步骤1.检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等检查气体过滤器和进样垫，保证辅助气和检测器的用气畅通有效。
如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物，需要将进样口的衬管清洗或更换。
步骤2. 将螺母和密封垫装在色谱柱上，并将色谱柱两端要小心切平步骤3. 将毛细管色谱柱连接于进样口上色谱柱在进样口中插入深度根据所使用的GC仪器不同而定。
正确合适的插入能最大可能地保证试验结果的重现性。
通常来说，色谱柱的入口应保持在进样口的中下部，当进样针穿过隔垫完全插入进样口后如果针尖与色谱柱入口相差1-2cm，这就是较为理想的状态。
（具体的插入程度和方法参见所使用GC的随机手册）避免用力弯曲挤压毛细管柱，并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与毛细柱接触摩擦，以防柱身断裂受损。
色谱柱填装操作规程
色谱柱填装操作规程色谱柱填装操作规程一、填装准备工作1. 准备所需填充料和色谱柱，确保填充料的纯度和质量。
2. 清洗色谱柱，确保表面光滑干净，无杂质。
3. 准备填充料溶液，确保溶解彻底，无明显悬浮物或沉淀。
4. 检查仪器设备是否完好，如压力计、进样器、检测器等。
二、填充操作步骤1. 将已清洗的色谱柱安装在色谱仪上，并将柱头封口。
2. 使用适当的装置将填充料溶液缓慢注入色谱柱，注入速度应适中，避免过快或过慢。
3. 注入填充料后，密封柱头并将其与仪器连接，确保连接紧密，并排除气泡。
4. 开启色谱仪，进行等温填充，温度应根据填充料的要求进行调整。
填充过程中，可以根据需要调整压力和流速调整。
5. 填充完毕后，关闭色谱仪，断开连接，将色谱柱取下。
三、填充后处理1. 对已填充的色谱柱进行压力测试和漏液测试，确保柱头密封良好，无渗漏。
2. 如果发现柱头有渗漏现象，应及时更换柱头或重新填充。
3. 将填充后的色谱柱存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射和高温。
4. 定期检查填充的色谱柱，确保其性能稳定，如有发现异常应及时处理。
四、注意事项1. 在填充过程中，应避免杂质进入色谱柱，保持填充料的纯净度。
2. 填充时应避免过分挤压填充料，以免影响填充效果。
3. 填充料选择应根据分析对象和分析条件来确定，确保选择的填充料适用于所需分离。
4. 在填充过程中，应注意安全操作，避免对身体和仪器设备造成伤害。
五、填充效果验证1. 使用适当的样品进行填充效果验证，确保填充后的色谱柱能够达到预期的分离效果。
2. 在填充效果验证中，应注意样品的适用范围、浓度范围和检测方法等因素。
六、填充记录与报告1. 按操作规程进行详细记录，包括填充料的批号、填充参数、填充效果等。
2. 填充记录和填充效果报告应保存至相关部门或质量管理体系中。
通过以上填充操作规程的严格执行，可以确保色谱柱填装操作的安全和可靠，提高填充效果和分析结果的准确性，同时也能有效延长色谱柱的使用寿命。
色谱柱的填装：
填充色谱柱的制备实验柱的填装：1、泵抽装填法：柱的一端塞上玻璃棉接上机械真空泵进行抽气，另一端装上漏斗（接进样器的一端），把干燥固定相慢慢填入其中，并轻轻敲击管壁，直至装满，柱端头稍留一点空间塞上玻璃棉即成。
震荡法：把选好的柱管下端塞上玻璃棉立于已开动的震荡器上，柱上端接上漏斗慢慢将固定相填于柱中，填满后，再用玻璃棉堵上柱管上部端口即可（适用于大批量装柱，不用敲打）。
手工装填法：低沸点固定相不可用泵抽法，可用手工填装，方法同上。
填装原则：装入柱中的固定相均匀且结实，没有空隙和死体积。
装填过程中不可猛烈震荡和敲打，以免固定相破碎，影响柱效。
1、担体的预处理称取100g 60~80目的6201红色硅藻土担体，置于400mL烧杯中，加入6mol/L 盐酸溶液，浸泡20~30 min,然后用水清洗至中性，抽滤后转移至蒸发皿中，于105。
C烘箱内备用。
若为已经预处理的市售商品担体，则本步骤可省略，过筛后便呆使用，但是涂渍肖，为除去担体吸附的水份，需要在105。
C烘箱内烘干4~6h.2、固定液的涂渍称取固定液邻苯二甲酸二壬酯7.5g于150mL 蒸发皿中，加入适量乙醚溶解，乙醚的加入量应能浸没担体，并保持有3~5mm的液层。
然后加入50g6201担体，置于通风橱内使乙醚自然挥发，而且不时加以轻缓搅拌，待乙醚挥发完毕后，移至红外线干燥箱内，烘干20~30min即可准备填充。
本实验选用的固定液与担体的配比为15：100。
涂渍时应注意：（1）若使用溶剂不是低沸点、易挥发的，则应在低于溶剂沸点约为20。
C 的水浴上徐徐蒸去溶剂。
（2）在溶剂蒸发过程中，搅动应轻而缓慢，不可剧烈搅拌和摩擦蒸发皿以免把担体搅碎。
（3）开始时不能使用红外线干燥箱来蒸发溶剂，否则溶剂蒸发太快，使固定液渍不均匀。
（4）选用的溶液剂应能完全溶解固定液，不可出现悬浮或分层现象同时溶剂应能完全浸润担体。
装填固定相填料应注意：（1）在色谱柱管与玻璃三通活塞之间，南非用2~3层纱布隔开，以避免固定相填料被抽入干燥塔内。
HPLC 色谱柱安装与使用说明
液相色谱柱安装与使用说明液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。
一、液相色谱柱的安装：1、液相色谱柱的结构：a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。
柱接头采用低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3／16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。
7／16英寸外螺纹与1／4英寸柱管(Φ6.35mm)连接，中间放置压坏用于密封。
3／16英寸的内螺纹与1／16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接，中间也放置压环用于柱接头的密封。
为了尽量减少柱外死体积，在安装色谱柱时，用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底，然后再拧紧空心螺钉。
压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2．5mm长或其他固定尺寸)。
在两端柱接头内，柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网)，用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。
空柱各组件均为316#不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。
但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。
b、柱填料：液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱：多以硅胶为柱填料。
根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10 µm的范围内。
另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。
也有无定型和球型之分。
常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 µm之间。
2，色谱柱的安装：a、拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。
b、拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。
2液相色谱柱的正确安装和使用说明
b、柱填料：
• 液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相 之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。 • 正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可 分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3— 10µ m的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键 合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。 •
• 反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表 面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填 料。也有无定型和球型之分。 • 常用的其他的反相填料还有键合C8、 C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3— 10µ m之间。
• e、流动相沸点不要太低，否则容易产生 气泡，导致实验无法进行。 • f、在流动相配制好后，一定要进行 脱气。除去溶解在流动相中的微量气体 既有利于检测，还可以防止流动相中的 微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择：
• 因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不 同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的 色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。 对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择 1ml/min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min 为佳。 • 当选用最佳流速时，分析时间可能延长。 可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分 析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙 腈的含量)。
2，色谱柱的安装：
• a、拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、 尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。 • b、拧下柱两端接头的密封堵头放回 包装盒供备用。 • c、按柱管上标示的流动相流向，将 色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出 口相连接(如条件允许，建议在柱前使用 保护柱)；柱的出口与检测器连接。
• 连接管是外径为1.57mm、内径为0.1-0.3mm的 不锈钢管。连接管的两端均有空心螺钉及密封 用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。 连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底， 然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止， 再用扳手继续顺时针拧1/4-1/2圈，切记不要用 力过大。如色谱柱通过流动相加压后有漏液现 象，请用扳手继续顺时针拧1/4圈，直至不漏液 为止。
色谱柱装柱工艺
色谱柱是色谱分析中的核心部件，其装柱工艺对色谱分离效果和分析结果具有重要影响。
以下是一般色谱柱的装柱工艺：
1. 准备工作：首先要确保色谱柱、连接件等设备干净无尘，准备好所需的色谱柱、柱接头、垫圈等。
2. 饱和与平衡：使用适当的溶剂饱和和平衡色谱柱，通常使用合适的流动相在低流速下进行。
这有助于去除色谱柱内的空气，并确保色谱柱内填料达到平衡状态。
3. 样品处理：将待分析样品按照分析要求进行预处理，例如溶解、过滤等步骤，以保证样品的纯净度和稳定性。
4. 连接色谱柱：将色谱柱端口用柱接头连接到色谱仪的柱箱中，注意连接时要做到密封牢固，避免泄漏。
5. 调整操作参数：根据具体的色谱条件，如流速、温度等，调整色谱仪的操作参数，确保色谱分离条件的准确性。
6. 样品进样：根据分析需要，将样品通过进样器引入色谱柱，开始进行色谱分离。
以上是一般色谱柱的装柱工艺，不同类型的色谱柱（如液相色谱柱、气相色谱柱）在装柱工艺上可能会有些许差异，具体操作时应参考色谱仪器的操作手册以及色谱柱的厂家说明书，以确保装柱工艺的准确性和可靠性。
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柱子的老化过程。
1 不锈钢（SUS）填充柱的安装方法 2 玻璃填充柱的安装方法
安装前的准备工作
1、准备工作：手套、转换头、隔垫、螺 母、玻璃衬管、柱子、扳手等工具。
2、关闭色谱电源。
1、不锈钢填充柱的安装
1、在INJ边的不锈钢柱适配器插上玻 璃衬管
2、安装INJ边的不锈钢柱 至连接口
(1) 将INJ边带有玻璃衬管的不 锈钢柱插入样品入口（从柱箱 一边）。
（2）用手拧紧柱适配器螺母。
（3）转动玻璃衬管扳手，拧 紧至一半，固定螺母
3、安装DET边柱适配器 至检测器。
长度一般是多少？
问题
Why？
1 色谱柱失效后的主要表现及失效原因？
2 填充色谱柱的主要填充方法是什么？
3 新装填的色谱柱的老化方法及老化目的？
1、色谱柱失效后的主要表现和失效原因
失效后的主要表现：色谱峰 分离不好和组分保留时间显著变短。
失效的主要原因： 1、对气固色谱来说是 固定相的活性或吸附性能降低了； 2、对气液色谱来说，是使用过程中 固定液逐渐流失所致。
注意3：如果TCD检测器，放置 TCD石墨压环，在检测器末端放 置套管，因为套管可以起到后部 环的作用，所以不需要配制此环。
2、在柱箱中安装玻璃柱
（2）在柱入口末端插入玻璃衬管 （较短的一端）
通过【玻璃衬管】法连接 在玻璃衬管法中，在样品入口插入玻璃衬管 （1）从柱箱边将玻璃衬管一半插入样品入 口。
5
手套 1
6 色谱柱切割工具
特别强调：对于不同的进 样口和不同的检测器，毛 细管柱的插入长度是不同 的，而且，要求插入的深 度要准确，因此应配备不 同类型的量具（夹具）， 以保证色谱柱插入深度准
确无误。如：S型用于 SPL进样口，F型用于 FID/FTD检测器，T型用
于TCD检测器。
注意：有尾吹气和无尾 吹气的气体管路连接方
注意1：如果分析小于 250℃，使用硅橡胶O型环。
在柱末端放上连接部件：顺序为：盖螺母、垫圈、 在柱末端放上连接部件：顺序为：盖螺母、垫圈、套管和
后部的环和石墨压环。放置后部环边缘朝向石墨 用于TCD的石墨压环。末端可以选择两种（硅O型环和石
压环。
墨压件）部件，根据分析温度而定。
注意2：如果分析超过 250℃，使用石墨压环。
（3）用扳手固定入口 /检测器口的盖螺母。
注意：如果放置了硅O型环， 较松的固定盖螺母；如果放 置了石墨压环，拧紧一半又
1/3圈。
当使用TCD检测器时， 柱安装位置与使用其 它检测器的位置不同。
柱安装位置
1 岛津毛细管柱的安装
进样口/检测器量具（压环夹具）
3
石墨压环
4
扳手 2
安装前准备
柱螺母
色谱柱的充填和安装
主讲：
总目录
1 填充柱的充填方法 2 岛津GC-2014填充柱的安装方法
3 岛津GC毛细管柱的安装方法
复习：色谱柱
不锈钢填充色谱柱
玻璃填充色谱柱
气固色谱填充柱固定相的种类
想一想：固定相的作用 是什么？技术要求是什 么？颗粒大小有什么要
求？
1、增加与样品接触的表面积； 2、细小、均匀、多孔； 3、标准大小颗粒，60-140目。 常用的是60-80目和80-100目。
2、填充色谱柱的主要填充方法
固定相填充的好坏，将直接 影响柱效率。
主要填充方法：
1
泵抽填充法
特别强调：装柱要求 要填充得均匀，紧密，
切忌有空隙。
2 操作步骤
1、把色谱柱的一端塞上玻璃棉，接真空泵； 2、另一端接一漏斗； 3、在抽吸下加入固定相，边装边敲打色谱柱， 至固定相不再进入为止装好后，塞上玻璃棉。
部的GM型螺母。
注意2：当使用铝制柱垫圈 时，放上2至3片后手动上 紧垫圈顶部的GM型螺母。
6、固定不锈钢柱
使用扳手拧紧后固定不锈钢柱和 适配器之间的连接口（共2个连 接口）
2、在柱箱中安装玻璃填充柱
1、在玻璃柱上套上盖螺母 在柱末端放上连接部件：顺序为：盖螺母、 垫圈、后部的环和硅O型圈。放置后部环边 缘朝向硅O型圈。
化学键合固定相 不常用
无机吸附剂
高分子多孔小球
1、活性炭、
2、石墨化炭黑、 1、国产型号：GDX系列。 3、碳素：TDX-0X系列
2、美国：Parapak Q， 4、硅胶、
Parapak N，Parapak T； 5、氧化铝、
chromosorb等。
6、分子筛：4A、5A、13X
复习：色谱柱
填充柱：长度：2——3米，内经：2— —4mm。毛细管柱：长度：10—— 100米，内经：0.1——0.8mm，常见 的商品柱是0.18、0.25、0.32、 0.53mm，常用的是后两种。
注意1：有两种可以安 装在检测器上的不锈钢 柱适配器，用于TCD和
其它检测器。
4、固定检测器边的适配器
用手拧紧柱适配器螺母，用扳 手拧紧一半。
小心：检查螺母类型！如果适 配器用仅用于玻璃柱的螺母固
定时螺母会失灵。
5、安装不锈钢柱至适配 器
在不锈钢柱和适配器间加上垫圈 （共2个接口）。
注意1：当使用橡皮垫圈时， 放上一片后手动上紧垫圈顶
3、色谱柱的老化及目的
主要讲 填充柱 的老化
老化目的
是把固定相的残存溶剂，低 沸点杂质，低分子量固定液等赶 走，使记录器基线平直，并在老 化温度下使固定液在担体表面有 一个再分布过程，从而涂得更加
均匀牢固。
特别强调：装填好的色 谱柱，经过老化一段时 间后，柱效及性能均稳 定了，这样才可使用。
老化步骤
（3）、将玻璃柱两端插入安 装口（样品入口/检测器口），用 手拧紧盖螺母
注意：如果放置了硅橡胶O 型环，较松的固定盖螺母； 如果放置了石墨压环，拧紧
一半又1/3圈。
（4）用扳手在入口/检测器 口固定盖螺母。
（2）将玻璃柱每一端插入各自的 安装口（入口/检测器口），用手拧 紧螺母。
通过【柱方法】法连接 ＊在此方法中，不插入玻璃衬管； ＊此方法中，直接将样品注射入柱会污染柱，因此， 此方法只适用于不易污染柱的气体分析； ＊当使用TCD时将TCD柱连接部件放在较短的柱末 端。 （1）将较长的玻璃柱的末端插入安装口（样品入口）