【CN109825636A】一种用于鉴定苹果新品种“赤霞”指纹图谱的SSR分子标记及其应用【专利】
SSR分子标记在苹果品质性状分析中的应用
２１ ０ ２年 ７月
农产品加工 ・ 学刊
Ａ ａ ｅ ｃＰ ｒ ｄｃｌ ｆ ａｍ Ｐｏ ｕｔ Ｐｏｅｓ ｇ ｃｄｍｉ ｅｉ ｉａｏ ｒ ｒｄ ｃ ｒｃｓｉ ｏ Ｆ ｓ ｎ
Ｎｏ７ ．
Ｊ１ ｕ．
文 章 编 号 ：１ ７— ６ ６ （０ ２ ０ — ０ ５ ０ ６ １９ ４ ２ １） ７ ０ ５ — ４
Ｌ ｈ ｍ Ｕ ｎ －ｉｇ Ｚ Ａ ＧＪ ａ， Ｇ ＯＹ － ｎ ， Ｉ ｏ ｇｆｎ Ｉ ｕ ， Ｊ ｇｊ ， Ｈ Ｎ ｎ ‘ Ｕ ｕ ｍ ｇ ＬＵＹ ｎ －ｅｇ Ｓ ｉ ｎ ｕ
（ ｌ ｇ ｆ ｏ ｄＳ ｉｎ ｅ＆ Ｎｕｒｉｎ ｌ ｇｎ ｅ ｎ ，Ｓ ａ ｎ ｉ ｒ ｌ ｉｅｓ ｙ Ｃｏｌ ｅｏ ｏ ｃｅ ｃ ｅ Ｆ ｔｉｏ ａ ｉｅｒ ｇ ｈ ａｘ ｍａ ｖ ｒｉ ，Ｘｉ ｎ，Ｓ ａ ｎ ｉ ０ ２，Ｃ ｉａ ｔ Ｅｎ ｉ Ｎｏ Ｕｎ ｔ ’ ａ ｈ ａ ｘ ７ ０ ６ １ ｈｎ ）
Ａ ｓｒ ｃ ： Ｔ ｅ ｐ ｉ ｃｐ ，ｃ ａａ ｔｒｓ ｃｏ Ｓ ｒ ｓａ ｅ ａｌ ｅ ｉｗ ｄ ｉ ｈ ｓａ ｔ ｌ ． ｈ ｓｐ ｐ ｒａｓ ｅ ｃ ｂ ｓ ｔ ｅ ｃ ｒｅ ｔａ — ｂ ｔ ｔ ｈ ｒ ｉａ ａ ｎ ｌ ｈ ｒｃｅ ｔ ｆＳ Ｒ ｍａ ｋ ｌ ｒ ｖｅ ｅ ｎ ｔ ｉ ｒ ｃ ｅ Ｔ ｉ ａ ｅ ｌ ｄ ｓ ｒ ｅ ｈ ｕ ｒ ｎ Ｄ ｉ ｉ ｒ ｉ ｏ ｉ ｐ ｉａｉｎ ａ ｄ ｒ ｓ ａ ｃ ｒ ｇｅ ｓｉ ｘｅ ａ ｒ ｉ ｃ ｌｒ ｅ ｉ ａ ｃ ， ａ ｉ ｒ ， ｇ ｒ ｐ ａ ｍ ｏ ｓ ｒ ａｉｎ， ｃ ｈ ｖ ｒｉ ｅ ｔ ｉａ ｉｎ ｌ ｔ ｎ ｅ ｅ ｒ ｈ ｐ ｏ ｒ ｓ ｎ ｅ ｔｒ ｌ ｆ ｔ ｏ ｏ ，ｒ ｓｓ ｎ ｅ ｃ ｏ ｎ ｕ ｔ ｃｄ ｔ ｍｔ ｅ ｍ ｌｓ ｃｎ ｅｖ ｔ ｏ ｕ ｉａ ｄ ｎ ｉ ｃ ｔ ， ｆ ｏ
苹果品种鉴定技术规程 ssr分子标记法全文
苹果品种鉴定技术规程 ssr分子标记法全文苹果品种鉴定技术规程一、引言：苹果（Malus domestica Borkh）是世界上种植面积最广泛、产量最大的水果之一，所以苹果品种的鉴定十分重要。
随着分子生物学和遗传学的发展，利用分子标记法进行苹果品种鉴定成为一种快速、可靠的方法。
二、SSR分子标记法概述：SSR（Simple Sequence Repeats）分子标记法是利用高度保守的微卫星序列进行分子标记的方法。
微卫星序列是基因组中重复出现的短串联重复序列，由重复单元和不同重复单元之间的连续序列组成。
SSR标记法基于PCR扩增微卫星序列，通过测定微卫星序列长度的差异来进行苹果品种的鉴定。
三、实验步骤：1. DNA提取：从苹果叶片或果实中提取总DNA。
采用常规的CTAB法或商用DNA提取试剂盒进行提取。
2. SSR引物设计：选择合适的SSR引物进行扩增。
根据已知的苹果品种的基因组序列，设计特异性的引物。
选择的引物应具有多态性和重复性。
3. PCR扩增：设置PCR反应体系，包括模板DNA、引物、dNTPs和酶。
进行PCR扩增，得到PCR产物。
4. PCR产物分离：将PCR产物经过电泳分离，根据产物的大小来进行分离。
通常采用琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。
5. DNA可视化和分析：通过染色剂染色或直接使用荧光标记的引物进行染色。
分析PCR产物的大小和条带图案，根据特定的品种特征进行品种鉴定。
四、结果解释：根据PCR产物的大小和条带图案，可以进行品种鉴定。
如果PCR产物的大小和已知品种相符，则可以判定为该品种。
如果PCR产物的大小和已知品种不符，则可以判定为新品种或可能存在突变。
五、优点和应用：1.快速：SSR分子标记法可以在短时间内得到结果，相对于传统的品种鉴定方法更快捷。
2.可靠：SSR分子标记法具有高度的可重复性和稳定性，结果准确可靠。
3.特异性：SSR引物的设计可以根据不同品种的基因组序列进行选择，具有品种特异性。
苹果品种鉴定技术规程 ssr分子标记法全文
苹果品种鉴定技术规程 ssr分子标记法全文苹果品种鉴定技术规程序号一：引言苹果品种鉴定是农业领域中的一个重要课题，对于苹果种植者和消费者来说具有重大意义。
很多时候，我们在购买苹果时往往无法准确地辨别不同品种之间的差异，这导致了市场上出现了一些品质不佳、假冒伪劣的苹果。
苹果品种鉴定技术规程的制定和实施对于保障苹果产业的健康发展以及消费者的权益至关重要。
序号二：苹果品种鉴定技术概述苹果品种鉴定技术经过多年的发展和实践，目前已经有了多种方法和技术供我们选择。
其中，ssr分子标记法是一种被广泛接受和应用的分子遗传学技术。
相比传统的鉴定方法，ssr分子标记法具有高效性、准确性和可重复性的优势。
序号三：ssr分子标记法原理ssr分子标记法是通过特定的引物与DNA序列中的简单序列重复（simple sequence repeat, SSR）区域发生特异性扩增，从而形成特定的标记。
这种标记具有多态性，不同苹果品种的SSR标记图谱也会有所差异，因此可以通过分析苹果品种样品的SSR标记图谱来进行鉴定和识别。
序号四：ssr分子标记法的实施步骤1. 提取DNA样品：从苹果树的叶片或果实中提取DNA样品，以获取作为鉴定和分析的基础材料。
2. 扩增SSR标记：使用特定的引物和PCR反应体系，对提取得到的DNA进行PCR扩增，以获得苹果品种的SSR标记图谱。
3. 电泳分析：将PCR扩增后的产物进行电泳分析，在聚丙烯酰胺凝胶上进行分离和检测。
根据不同品种之间的SSR标记差异，可以进行苹果品种的鉴定和识别。
4. 数据处理和结果分析：对电泳结果进行图谱绘制和数据分析，根据不同苹果品种的SSR标记图谱特征，可以确定苹果品种的身份。
序号五：ssr分子标记法的应用价值ssr分子标记法作为一种先进的苹果品种鉴定技术，具有多种应用价值。
它可以帮助种植者确认自己所种植的苹果品种，避免因品种不符导致的收益损失。
它可以帮助监管部门加强市场监管，检测和防止假冒伪劣苹果的流入市场。
苹果基因组SSR位点分析与应用
苹果基因组SSR位点分析与应用关玲;章镇;王新卫;薛华柏;刘艳红;王三红;乔玉山【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2011(044)021【摘要】[目的]通过对‘金冠’苹果基因组SSR位点的统计分析,为蔷薇科果树应用SSR分子标记进行高通量的遗传分析提供理论与实践基础.[方法]运用NCBI数据库中‘金冠’苹果基因组数据,分析其SSR位点分布情况,并根据SSR位点的搜索结果,设计68对引物(每条染色体设计4对),利用苹果品种对所设计引物进行应用性验证并利用梨杂交群体进行通用性检测.[结果]苹果基因组中SSR序列主要是完全重复型,17条染色体共存在1 63 426个SSR位点,平均每隔3.22 kb存在1个.单核苷酸至三核苷酸重复基序在染色体水平上分布较均匀,而四核苷酸至六核苷酸重复基序的分布差异较大.单核苷酸与二核苷酸重复基序所占比例最大,两者占基因组内SSR位点总数的91.67％,单核苷酸重复基序主要以A/T重复为主,二核苷酸的重复基序主要以AT/TA重复为主.在苹果品种中验证所设计的68对引物,有62对可以扩增出预期目的片段,37对存在扩增多态性.在梨杂交群体上应用所设计的68对引物,有40对具扩增目的片段,其中16对具扩增多态性.[结论]苹果基因组内SSR 分布呈现一定的规律性,初步验证SSR位点在亲缘关系较近的物种间高度保守并可以通用,基于基因组数据发掘SSR位点用于后续的相关遗传研究具有可行性.【总页数】14页(P4415-4428)【作者】关玲;章镇;王新卫;薛华柏;刘艳红;王三红;乔玉山【作者单位】南京农业大学园艺学院,南京210095;南京农业大学园艺学院,南京210095;教育部园艺作物种质创新与利用工程研究中心,南京210095;南京农业大学园艺学院,南京210095;南京农业大学园艺学院,南京210095;南京农业大学园艺学院,南京210095;教育部园艺作物种质创新与利用工程研究中心,南京210095;南京农业大学园艺学院,南京210095;教育部园艺作物种质创新与利用工程研究中心,南京210095;南京农业大学园艺学院,南京210095;教育部园艺作物种质创新与利用工程研究中心,南京210095【正文语种】中文【相关文献】1.烟草叶绿体基因组和线粒体基因组SSR位点分析 [J], 李绪英;肖炳光;高玉龙;姬广海2.甘蔗栽培种单倍体基因组SSR位点的发掘与应用 [J], 王恒波; 祁舒婷; 陈姝琦; 郭晋隆; 阙友雄3.赤芝全基因组SSR位点的筛选及种质资源遗传多样性分析 [J], 徐晓兰; 陈体强; 兰进; 陈向东; 朱风丽; 陈虎; 石林春; 陈士林4.基于甘蔗AP85-441和R570基因组参考序列的微卫星位点鉴定和SSR标记开发 [J], 徐志军; 赵胜; 胡小文; 孔冉; 苏俊波; 刘洋5.小麦全基因组抗赤霉病QTL关联位点特异性SSR标记的筛选、等位变异及效应解析 [J], 吴迪;郑彤;李磊;李韬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
苹果品种鉴定技术规程 ssr分子标记法全文
苹果品种鉴定技术规程 ssr分子标记法全文苹果品种鉴定技术规程—— SSR分子标记法一、技术原理SSR（Simple Sequence Repeats）分子标记法是一种常用的遗传标记技术，也称为微卫星标记法。
该技术基于植物DNA中包含的重复序列，通过PCR扩增特定的SSR位点，进而对DNA序列进行分析，从而实现对苹果品种的鉴定。
二、实验步骤1. DNA提取：从苹果叶片或幼芽中提取基因组DNA。
2. SSR扩增反应：选择特定的SSR引物对DNA进行PCR扩增反应，得到扩增产物。
3. PCR产物分析：将PCR产品通过电泳方法分离在聚丙烯酰胺凝胶上，通过比较DNA片段迁移距离，鉴定不同苹果品种之间的差异。
三、实验材料1.离心管和PCR试管：用于提取DNA和进行PCR反应。
2. DNA提取试剂盒：用于提取DNA样品。
3. SSR引物组合：根据需要选择适宜的SSR引物。
4. PCR试剂盒：用于PCR反应。
5. DNA电泳试剂盒：用于DNA样品分离。
四、实验操作细节1. DNA提取：按照DNA提取试剂盒的说明进行操作，提取苹果叶片或幼芽中的基因组DNA。
2. SSR扩增反应：准备PCR反应体系，包括DNA模板、引物、酶和缓冲液等。
根据引物选择，设置合适数量的PCR反应管。
3. PCR条件设置：根据引物的特性，设置适当的扩增温度和周期。
4. PCR产物分析：将PCR反应产物通过电泳方法分离在聚丙烯酰胺凝胶上，根据DNA片段大小进行鉴定。
5.结果解读：根据电泳图像，比较不同苹果品种之间的DNA条带差异，判断品种间的差异和相似性。
五、结果分析1. SSR分离电泳图像：根据电泳分离的结果，分析苹果品种之间的遗传关系和差异。
2. SSR结构鉴定：通过比对已知品种的SSR位点，来反推未知品种的SSR结构和遗传关系。
3. SSR图谱构建：通过整理分析的SSR位点数据，构建苹果品种的SSR图谱，进一步研究苹果品种的遗传表达规律。
【CN109868328A】鉴定紫斑牡丹品种的SSR分子标记及应用【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910270061.2(22)申请日 2019.04.04(71)申请人 北京林业大学地址 100083 北京市海淀区清华东路35号北京林业大学(72)发明人 成仿云 郭鑫 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限公司 11002代理人 王文君 陈征(51)Int.Cl.C12Q 1/6895(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称鉴定紫斑牡丹品种的SSR分子标记及应用(57)摘要本发明涉及植物分子标记辅助育种技术领域，具体涉及鉴定紫斑牡丹品种的SSR分子标记及应用。
本发明提供用于鉴定紫斑牡丹品种的包括12个EST -SSR分子标记的SSR分子标记组合以及如SEQ ID NO.1～24所示的对应的引物组合。
在此基础上，本发明建立了264个紫斑牡丹品种的分子身份证和鉴定牡丹品种的方法，该方法具有分辨力高、灵敏度好、结果可靠准确、高效快速等优点，能够准确快速地将264个不同的紫斑牡丹品种进行区分，确定待测紫斑牡丹的品种，实现了高效、低成本、操作方便的紫斑牡丹品种鉴定，可用于紫斑牡丹品种分子身份证构建、品种鉴定及遗传多样性分析等，应用前景十分广阔。
权利要求书6页 说明书19页序列表11页 附图1页CN 109868328 A 2019.06.11C N 109868328A1.鉴定紫斑牡丹品种的SSR分子标记组合，其特征在于，包括如下EST -SSR分子标记：GBGY01000096、GBGY01000354、GBGY01000168、GBGY01000120、GBGY01000272、GBGY01000068、GBGY01000365、GBGY01000074、GBGY01000160、GBGY01000223、GBGY01000161、GBGY01000189。
苹果果皮颜色性状的SSR标记
苹果果皮颜色性状的SSR标记
何晓薇;王彩虹;田义轲;王辉
【期刊名称】《果树学报》
【年(卷),期】2009(26)3
【摘要】以24个苹果品种以及来自3个不同杂交组合的60个F1代结果单株为试材,对与苹果果皮颜色性状相关的DNA分子标记进行了研究。
通过采用集群分类法(Bulked Segregant Analysis,BSA)对当前定位于苹果基因组图谱LG9上的所有SSR引物的分析,筛选到了一个与苹果果皮红色/非红色性状相关的SSR标记CN444542-156,该标记在红色表型上表现为隐性,在非红色表型上表现为显性。
进一步分析表明,该标记对F1代单株性状预测的正确率为93.3%。
【总页数】3页(P379-381)
【关键词】苹果;果皮颜色;SSR标记
【作者】何晓薇;王彩虹;田义轲;王辉
【作者单位】青岛农业大学园艺学院
【正文语种】中文
【中图分类】S661.1
【相关文献】
1.桃果肉颜色、离粘核性状的SSR标记 [J], 宋健;高妍;韩明玉;赵彩平
2.桃肉色、果皮茸毛性状的SSR标记筛选 [J], 张妤艳;马瑞娟;俞明亮;宋宏峰;
3.桃肉色、果皮茸毛性状的SSR标记筛选 [J], 张妤艳;马瑞娟;俞明亮;宋宏峰
4.桃果肉颜色、果皮茸毛和花粉育性性状的分子标记 [J],
5.桃果肉颜色性状的SSR标记及其在品种中的验证 [J], 曹珂;王力荣;朱更瑞;方伟超;陈昌文;赵佩
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
苹果品种ISSR指纹图谱构建
苹果品种ISSR指纹图谱构建
宣继萍;章镇;房经贵;高志红;车胜利
【期刊名称】《果树学报》
【年(卷),期】2002(19)6
【摘要】以富士、长富2、长富6、红星、新世纪、美国8号及凉香等7个品种为试材,进行了ISSR(inter-simplesequencerepeats)分析,构建了这几个苹果品种的ISSR指纹图谱。
发现引物IS061可将富士、长富2与长富6三个品种一一区分开;而IS026则能将富士、红星、新世纪及美国8号4个品种相互区别开。
初步证明利用ISSR标记技术能很好地将不同苹果品种鉴别出来。
【总页数】3页(P421-423)
【关键词】苹果;品种;ISSR;指纹图谱构建
【作者】宣继萍;章镇;房经贵;高志红;车胜利
【作者单位】南京农业大学园艺学院
【正文语种】中文
【中图分类】S661.1
【相关文献】
1.绣球花品种遗传多样性的ISSR分析及指纹图谱构建 [J], 彭继庆;曹福祥;曹基武;董旭杰;刘志明;任锐;熊亚丽;张鹏鸿
2.基于ISSR标记的猕猴桃品种r遗传多样性分析及指纹图谱构建 [J], 张安世;韩臣鹏;齐秀娟;张中海
3.基于ISSR标记的铁线莲园艺品种遗传多样性分析和指纹图谱构建 [J],
4.利用ISSR构建甜菜品种指纹图谱 [J], 齐少玮;闫彩燕;郭佳;吴则东;兴旺
5.28份余甘子品种遗传多样性的ISSR分析及指纹图谱构建 [J], 邵雪花;刘牛;赖多;肖维强;匡石滋
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910270157.9
(22)申请日 2019.04.04
(71)申请人 山西省农业科学院生物技术研究中
心
地址 030031 山西省太原市小店区龙城大
街81号
申请人 山西省农业科学院果树研究所
(72)发明人 侯丽媛 邓舒 张春芬 肖蓉
曹秋芬 赵菁
(74)专利代理机构 太原晋科知识产权代理事务
所(特殊普通合伙) 14110
代理人 王瑞玲
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6895(2018.01)
C12N 15/11(2006.01)
(54)发明名称
一种用于鉴定苹果新品种“赤霞”指纹图谱
的SSR分子标记及其应用
(57)摘要
本发明属植物分子遗传学和苹果种质创新
技术领域，提供一种用于鉴定苹果新品种‘赤霞’
指纹图谱的SSR分子标记及其应用。
所述分子标
记为14对SSR 共显性标记，分别为：SSR 标记
CH01d08，SSR标记CH01f02，SSR标记CH01f07a，
SSR标记CH02b10，SSR标记CH02d08，SSR标记
CH02c02a，SSR标记CH05e03，SSR标记Hi03a10，
SSR标记Hi04a05，SSR标记Hi23d06，SSR标记GD
12，SSR标记GD 142，SSR标记GD 147，SSR标记
NH009b；对苹果新品种‘赤霞’进行快速、准确的
鉴定。
对新品种保护与种质资源收集提供依据。
权利要求书1页 说明书5页序列表5页 附图5页CN 109825636 A 2019.05.31
C N 109825636
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109825636 A
1.一种鉴定苹果新品种‘赤霞’的SSR分子标记，其特征在于：所述分子标记为如下所示的14对SSR标记，分别为：SSR标记CH01d08，SSR标记CH01f02，SSR标记CH01f07a，SSR标记CH02b10，SSR标记CH02d08，SSR标记CH02c02a，SSR标记CH05e03，SSR标记Hi03a10，SSR标记Hi04a05，SSR标记Hi23d06，SSR标记GD 12，SSR标记GD 142，SSR标记GD 147，SSR标记NH009b；用于扩增上述标记的引物分别为：
SSR标记CH01d08核苷酸序列如SEQ ID No.1、2所示；
SSR标记CH01f02核苷酸序列如SEQ ID No.3、4所示；
SSR标记CH01f07a核苷酸序列如SEQ ID No.5、6所示；
SSR标记CH02b10核苷酸序列如SEQ ID No.7、8所示；
SSR标记CH02d08核苷酸序列如SEQ ID No.9、10所示；
SSR标记CH02c02a核苷酸序列如SEQ ID No.11、12所示；
SSR标记CH05e03核苷酸序列如SEQ ID No.13、14所示；
SSR标记Hi03a10核苷酸序列如SEQ ID No.15、16所示；
SSR标记Hi04a05核苷酸序列如SEQ ID No.17、18所示；
SSR标记Hi23d06核苷酸序列如SEQ ID No.19、20所示；
SSR标记GD 12核苷酸序列如SEQ ID No.21、22所示；
SSR标记GD 142核苷酸序列如SEQ ID No.23、24所示；
SSR标记GD 147核苷酸序列如SEQ ID No.25、26所示；
SSR标记NH009b核苷酸序列如SEQ ID No.27、28所示。
2.利用权利要求1所述的鉴定苹果新品种‘赤霞’的SSR分子标记构建指纹图谱，其特征在于：具体方法为：以苹果新品种‘赤霞’基因组DNA为PCR扩增模板，分别以所述SSR分子标记为引物对，进行PCR扩增，用2%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，在紫外观测仪上观察电泳结果；用QIAxcel Advanced全自动实时毛细管电泳系统进行分析检测，并读取相应数据，获得指纹图谱。
3.根据权利要求2所述的利用鉴定苹果新品种‘赤霞’的SSR分子标记构建指纹图谱，其特征在于：PCR扩增反应体系为20 μL，其中含10 × PCR Buffer 2.0 μL、2.5 mM 的dNTPs mixture 1.6 μL、10 ng/μL 的Primers F 0.15 μL、10 ng/μL 的Primers R 0.15 μL、5U/μL 的Taq 聚合酶0.2 μL、100ng/μL 的DNA模板2.0 μL，去离子水补足至13.9 μL；
PCR扩增程序为：94℃预变性2 min 30 s，94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸40 s，35个循环，72℃ 10 min，4℃保存备用。
4.根据权利要求2所述的利用鉴定苹果新品种‘赤霞’的SSR分子标记构建指纹图谱，其特征在于： 琼脂糖凝胶电泳缓冲液为1×TBE缓冲液，恒定电压150 V条件下电泳约0.5 h，关闭电源，停止电泳，取出凝胶，在紫外观测仪上观察电泳结果。
2。