【CN109825636A】一种用于鉴定苹果新品种“赤霞”指纹图谱的SSR分子标记及其应用【专利】
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910270157.9
(22)申请日 2019.04.04
(71)申请人 山西省农业科学院生物技术研究中
心
地址 030031 山西省太原市小店区龙城大
街81号
申请人 山西省农业科学院果树研究所
(72)发明人 侯丽媛 邓舒 张春芬 肖蓉
曹秋芬 赵菁
(74)专利代理机构 太原晋科知识产权代理事务
所(特殊普通合伙) 14110
代理人 王瑞玲
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6895(2018.01)
C12N 15/11(2006.01)
(54)发明名称
一种用于鉴定苹果新品种“赤霞”指纹图谱
的SSR分子标记及其应用
(57)摘要
本发明属植物分子遗传学和苹果种质创新
技术领域，提供一种用于鉴定苹果新品种‘赤霞’
指纹图谱的SSR分子标记及其应用。所述分子标
记为14对SSR 共显性标记，分别为：SSR 标记
CH01d08，SSR标记CH01f02，SSR标记CH01f07a，
SSR标记CH02b10，SSR标记CH02d08，SSR标记
CH02c02a，SSR标记CH05e03，SSR标记Hi03a10，
SSR标记Hi04a05，SSR标记Hi23d06，SSR标记GD
12，SSR标记GD 142，SSR标记GD 147，SSR标记
NH009b；对苹果新品种‘赤霞’进行快速、准确的
鉴定。
对新品种保护与种质资源收集提供依据。
权利要求书1页 说明书5页序列表5页 附图5页CN 109825636 A 2019.05.31
C N 109825636
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109825636 A
1.一种鉴定苹果新品种‘赤霞’的SSR分子标记，其特征在于：所述分子标记为如下所示的14对SSR标记，分别为：SSR标记CH01d08，SSR标记CH01f02，SSR标记CH01f07a，SSR标记CH02b10，SSR标记CH02d08，SSR标记CH02c02a，SSR标记CH05e03，SSR标记Hi03a10，SSR标记Hi04a05，SSR标记Hi23d06，SSR标记GD 12，SSR标记GD 142，SSR标记GD 147，SSR标记NH009b；用于扩增上述标记的引物分别为：
SSR标记CH01d08核苷酸序列如SEQ ID No.1、2所示；
SSR标记CH01f02核苷酸序列如SEQ ID No.3、4所示；
SSR标记CH01f07a核苷酸序列如SEQ ID No.5、6所示；
SSR标记CH02b10核苷酸序列如SEQ ID No.7、8所示；
SSR标记CH02d08核苷酸序列如SEQ ID No.9、10所示；
SSR标记CH02c02a核苷酸序列如SEQ ID No.11、12所示；
SSR标记CH05e03核苷酸序列如SEQ ID No.13、14所示；
SSR标记Hi03a10核苷酸序列如SEQ ID No.15、16所示；
SSR标记Hi04a05核苷酸序列如SEQ ID No.17、18所示；
SSR标记Hi23d06核苷酸序列如SEQ ID No.19、20所示；
SSR标记GD 12核苷酸序列如SEQ ID No.21、22所示；
SSR标记GD 142核苷酸序列如SEQ ID No.23、24所示；
SSR标记GD 147核苷酸序列如SEQ ID No.25、26所示；
SSR标记NH009b核苷酸序列如SEQ ID No.27、28所示。
2.利用权利要求1所述的鉴定苹果新品种‘赤霞’的SSR分子标记构建指纹图谱，其特征在于：具体方法为：以苹果新品种‘赤霞’基因组DNA为PCR扩增模板，分别以所述SSR分子标记为引物对，进行PCR扩增，用2%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，在紫外观测仪上观察电泳结果；用QIAxcel Advanced全自动实时毛细管电泳系统进行分析检测，并读取相应数据，获得指纹图谱。
3.根据权利要求2所述的利用鉴定苹果新品种‘赤霞’的SSR分子标记构建指纹图谱，其特征在于：PCR扩增反应体系为20 μL，其中含10 × PCR Buffer 2.0 μL、2.5 mM 的dNTPs mixture 1.6 μL、10 ng/μL 的Primers F 0.15 μL、10 ng/μL 的Primers R 0.15 μL、5U/μL 的Taq 聚合酶0.2 μL、100ng/μL 的DNA模板2.0 μL，去离子水补足至13.9 μL；
PCR扩增程序为：94℃预变性2 min 30 s，94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸40 s，35个循环，72℃ 10 min，4℃保存备用。
4.根据权利要求2所述的利用鉴定苹果新品种‘赤霞’的SSR分子标记构建指纹图谱，其特征在于： 琼脂糖凝胶电泳缓冲液为1×TBE缓冲液，恒定电压150 V条件下电泳约0.5 h，关闭电源，停止电泳，取出凝胶，在紫外观测仪上观察电泳结果。
2