微生物检验 第十二章 真菌

着色真菌
分生孢子：①树枝型、②剑顶型、③花瓶型：
多发生四肢暴露部位，开始为小丘疹，表面干 燥或湿润，有鳞屑或鳞痂，逐渐形成斑块结节， 呈疣状增殖。
直接显微镜检查：单个或成群厚壁孢子，有横隔 或中间十字分隔。
培养：沙氏培养基，生长缓慢，菌落从灰黑色至 黑色，有气生菌丝。菌落涂片镜检可见三种类型 的分生孢子，有鉴定价值。 生化反应：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同 化硝酸盐，需维生素B1。 对5-FC、伊曲康唑、氟康唑敏感，易产生耐药性
表皮癣菌：菌落初为 白色鹅毛状,以后变 为黄绿色粉末状。粗 棒状薄壁大分生孢子。 菌丝球拍状
小孢子菌属
• 我国常见的有铁锈色小孢子菌、石膏 样小孢子菌和狗小孢子菌等。 • 小孢子菌属感染皮肤和毛发，很少感 染甲。
小孢子菌生物学特性
• 皮屑和毛发+10%KOH处理 镜检，皮屑中 有分枝断裂菌丝，在毛发中呈现小孢子镶嵌 的鞘包裹着发干。 • 在沙氏培养基中可见白色、棕黄色或黄褐 色、粉末或绒毛状菌落。镜下可见梳状、球 拍状或结节状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚 壁梭形（纺锤形）大分生孢子。
第一节 假丝酵母菌属
• 假丝酵母菌（Candida），俗称念珠菌，生 物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、隐球 菌目、假丝酵母菌属。 • 本属菌有81个种，其中有11种对人有致病 性，其中白假丝酵母菌最为常见。
(一)白假丝酵母菌
条件致病：
皮肤粘膜感染鹅口疮，阴道炎
内脏感染：肺炎、关节炎、膀胱炎，肾盂肾炎 中枢神经感染：脑膜（脑）炎、脑脓肿
沙氏培养基
固定标 本染色
墨汁负 染色法
KOH 法
25℃
37℃
脑 脊 液
毛发
观察菌落
指甲
皮屑 镜检、生化反应
小结
真菌的致病性 真菌的基本特性：菌丝、孢子、培养特性 标本采集注意事项 常用的检查方法：显微镜检查、分离培养、 生化实验
思考题：
1.简述真菌的致病性特点。
2.真菌标本采集是有哪些注意事项？
微生物检验
1．直接显微镜检查可采用透明胶带粘贴 取材法，将透明胶带直接贴于皮肤表面， 数分钟后揭下，直接贴于载玻片上镜检 或经棉蓝染色或革兰染色后镜检。可见 孢子和菌丝。孢子为圆形或卵形，厚壁， 芽颈较宽，常成簇分布；菌丝粗短，呈 腊肠样。
2．分离培养与鉴定
毛癣菌属
• 毛癣菌属（Trichophyton）属半知菌亚门－丝孢菌目 －丛梗孢菌科，有20余种，其中14种能引起人和动 物的感染。 • 临床上常见的有 红色毛癣菌(trichophyton rubrum) 须癣毛癣菌(T.mentagrophytes,又称石膏样毛癣菌) 许兰毛癣菌(T.schoenleinii,又称黄癣菌) 紫色毛癣菌（T.violaceum） 断发毛癣菌（T.tonsurans）
预防
• 1．要保持脚的清洁干燥，勤换鞋袜，鞋子 要通气良好。 • 2．不要用别人的拖鞋、浴巾、擦布等，不 要在澡堂、游泳池旁的污水中行走。 • 3．公用澡堂、游泳池要做到污水经常处理， 以防相互传染。
治疗
• 灰黄霉素、伊曲康唑
• 派瑞松:曲安奈德益康唑乳膏 达克宁:硝酸咪康唑软膏
目的要求
（一）掌握深部感染真菌概念、分类、检验程序； 掌握假丝酵母、隐球菌、卡氏肺孢菌微生物学特 性、检验方法及鉴定要点。
无 无 主要以二分裂 常缺乏固醇 较简单，有中介体 70S 质膜或中介体
• Dimorphism （二相性真菌）
Unicellular
机体内寄生37℃ 含动物蛋白培养基
yeast
Multicellular
普通培养基25℃
沙保氏培养基25℃
mold
Morphology of Spore
真菌繁殖结构，一条菌丝可生成 多个孢子
孢子囊孢子
芽生孢子
厚膜孢子
关节孢子
孢子囊孢子
标本 （1）皮肤的角质性物质
（2）各种分泌物和排泄物 （3）血液和体液 （4）脓汁及渗出物
注意 （1）采集的标本要适宜
（2）在用药前采集标本 （3）采集的标本量要足 （4）严格无菌操作 （5）采集的标本立即送检
实验室检验
1. 2. 3. 4. 5. 镜检真菌形态 真菌抗原检测 真菌分离培养与鉴定 真菌核酸检测 真菌毒素检测
①菌落性质：酵母菌还是霉菌 ②菌落大小：病原性真菌菌落小，而条件致 病性真菌菌落大 ③菌落颜色 病原性真菌颜色淡， 污染真菌 颜色深；
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④致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开 裂；污染性真菌菌落不下沉,很少引起开裂。
真菌鉴定
菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远 不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴定，必要 时将菌种送有关单位鉴定。 1.糖(醇)类发酵试验
（二）熟悉荚膜组织胞浆菌孢子鉴别要点。
（三）了解抗真菌药物分类及临床应用。
教学内容
（一）假丝酵母菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。 （二）隐球菌属；分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。 （三）曲霉菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。 （四）组织胞浆菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。
孢 子
作用 真菌繁殖结构
芽 胞
细菌休眠结构， 抵御不良环境 低抗力 不强，加热60~70℃ 强 ， 有 的 可 耐 短时间即可死亡 100℃数小时
Categories of spore
sexual spore: 大分生孢子
分生孢子
小分生孢子 芽生孢子 厚膜孢子 关节孢子
asexual spore
叶状孢子
（二）、真菌抗原检测
• 白假丝酵母菌甘露聚糖抗原、隐球菌多糖 荚膜抗原、组织胞浆菌循环多糖抗原 • 常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半 定量放射免疫法
（三）、真菌的分离培养
真菌培养是目前准确鉴定真菌的可靠方法 真菌的培养特点：三低两高 平皿培养 大试管培养 玻片培养
菌落的性状是鉴别真菌的重要特征
2.同化碳源试验
3.同化氮源试验
核酸检测 毒素的检测 动物试验
抗真菌药物分类--化学结构分类
1.多烯类抗生素，如两性霉素B、制霉菌素、 曲古霉素等。 2.吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、 伏立康唑、克霉唑、益康唑等。 3.其他类如氟胞嘧啶。
临床标本
直接检查
分离培养 检测抗原 直接镜检 分 子 生 物 学 检 测 动 物 实 验 病 理 检 查 检 测 抗 体
皮肤癣菌感染的毛发
三.分离培养 标本 70%乙醇或在青、链霉素混合液 内处理5min 生理盐水洗3次 接种沙 氏琼脂斜面25℃培养观察菌落特征。 四.其他鉴定试验 毛发穿孔试验 脲酶试验 特殊营养需要试验
毛发穿孔试验
• 将头发发剪成lcm长，置于已加入25ml蒸馏 水和2—3滴10％酵母浸膏液的平皿内，高 压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内， 置25℃孵育四周，每周检查一次，每次取 数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后， 置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者 为阳性，否则为阴性。
孢子丝菌
申克孢子丝菌
传染源：人和动物 传播途径：经破损 皮肤接触感染。
二相性真菌。
微生物检验：
(1)直接显微镜检查：卵圆形的孢子。
(2)、分离培养与鉴定：将标本接种于沙 氏培养基上25℃培养，2-3d开始生长， 初为白色湿润的酵母型菌落，以后变为 淡咖啡色至深褐色。37℃培养2-3d，可 形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。 （3）、对碘化钾、伊曲康唑、特比萘芬 等药物敏感。
• 癣病标本多用KOH湿片检查法
意义
直接镜检阳性表示：
①有诊断意义。 ②看到的就是真菌的形态，可确定某些致病性真菌 的属或种。 ③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。
局限性：
①阴性结果不能排除真菌感染； ②有假阳性结果。
常用的染色方法
• 常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色， 乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。 • 对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞 氏染色或姬氏染色后镜检。 • 检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染 色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色
Microbiology Characteristics
圆形或卵圆形，直径3-6μ m。革兰阳性，着
色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽
生孢子、假菌丝，在玉米粉培养基中可产生
假菌丝和厚膜孢子。
将标本接种在沙氏培养基上，25℃或37℃
培养1～４d后，可出现奶油色类酵母型菌 落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。
脚气
• 脚气是一种常见的真菌感染性皮肤病。 • 多见于趾间,足底及足缘,有深在性水疱,糜烂 及鳞屑,伴有瘙痒等症状.多见于成人,夏秋重, 冬春轻,足多汗及常穿胶鞋者易患本病 • 主要致病菌为红色毛癣菌、石膏样毛癣菌 和絮状表皮癣菌。
• 医学上通常将脚气分三型：糜烂型、水疱型、角 化型 • 本病是由皮肤癣菌所引起的。足部多汗潮湿或鞋 袜不通气等都可诱发本病。皮肤癣菌常通过污染 的澡堂、游泳池边的地板、浴巾、公用拖鞋、洗 脚盆而传染。
毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色,
表面呈绒毛状、粉粒状或蜡样。 大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有
螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状
微生物检验
1 ．标本采集采集新发生的皮肤损害边缘皮屑；指甲 近尖端下面甲屑；拔取无光泽病发。 2．直接显微镜检查
皮屑10%KOH液；指甲25%KOH/25%NaOH处理 镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子
真菌
有细胞壁、典型细胞核，不含叶绿素，不分根、茎、叶 的真核细胞型微生物。细胞质内有完整的细胞器。
原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较
原核细胞型微生物
细胞核结构 核膜 核仁 分裂方式 细胞质结构 质膜 内膜 核糖体 呼吸系统
真核细胞型微生物
有 有 有丝分裂，减数分裂 常有固醇 复杂，有内质网和高尔基体 80S 线粒体
（五）卡氏肺孢菌：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。
DEFINITION
• 是指能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌， 主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉、毛霉、 组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等。 • 组织胞浆菌为二相性真菌，假丝酵母菌、曲 霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等为条件致病性 真菌，只有在一定条件下才引起机体致病。
药物敏感试验
对灰黄霉素、伊曲康唑等药物敏感。
表皮癣菌属
• 表皮癣菌属（Epidermophyton）目前 只有一个种，即絮状表皮癣菌 （E.floccosum）, 能引起人类感染。 • 絮状表皮癣菌是一种常见的皮肤癣菌， 可引起皮肤感染如股癣、足癣、体癣、 手癣和甲癣。
絮状表皮癣菌生物学性状
• 皮屑和甲屑经+10%KOH液消化 镜检 可见分枝断裂的有隔菌丝，少见孢子 • 培养后，菌落初为白色鹅毛状，以后 转变为黄色粉末状。镜下可见球拍状 菌丝、卵圆形或巨大棒状薄壁大分生 孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物 中可见厚膜孢子。
将标本接种在沙氏培养基上，25℃或37℃ 培养1～４d后，可出现奶油色类酵母型菌 落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。
小孢子癣菌：菌落为 灰色、橘红色或棕黄 色，厚壁大分生孢子， 菌丝有结节状、梳状 和球拍状
毛癣菌属
表皮癣菌属
小孢子癣菌属
皮下组织真菌感染
• 主要有着色真菌和孢子丝菌 • 着色真菌感染发生在暴露部位，称着色真菌病。 卡氏枝孢霉和裴氏着色芽生菌。 • 申克孢子丝菌，属腐生性真菌，常因外伤接触 带菌的花草等引起感染。此菌可引起孢子丝菌 下疳。此菌也可引起深部感染。是一种二相性 真菌。
Microbiology Examination
1)直接显微镜检查：取脓汁、痰和局部炎症性分泌 物直接涂片，革兰染色后镜检，显微镜见到革兰 阳性 ( 着色不均匀 ) 、圆形或卵圆形菌体或孢子及 假菌丝，可确认为假丝酵母菌感染。 2)抗原检测：取病人血清作 ELISA 、免疫印迹法等 检测白假丝酵母菌抗原。 3)核酸检测：用PCR法将白假丝酵母菌DNA分子扩 增后以分子探针检测，具有较好的敏性和特异性。
3.形态学检查和培养在真菌检查中的意义。
目的要求
（一）掌握毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子丝 菌生物学特性、微生物学检验方法及鉴定。 （二）熟悉浅部真菌感染的种类
表面感染真菌
糠秕马拉色菌 毛癣菌属
皮肤癣真菌
表皮癣菌属 小孢子菌属
着色真菌 孢子丝菌
皮下组织感染真菌
• 位置：寄居于人体皮肤和毛干的最表层。 因不接触组织细胞，很少引起宿主细胞反 应。 • 嗜脂性酵母样菌 • 代表：秕糠马拉色菌(Malasseziafurfur) • 症状：皮肤表面出现花斑癣（汗斑）