真菌检验

蒸馏水100 ml配制：用蒸馏水将氯化钠溶解即可。 25、观察菌落形态时应注意什么？ 观察菌落形态时应注意：（1）菌落性质，是酵母菌还是霉菌；（2） 菌落大小，一般病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大；（3） 菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深。（4）致病性 真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉；致病性真菌有时使培养基 开列，但污染霉菌很少引起培养基开列。 26、分离皮肤真菌的皮肤真菌实验培养基是什么？ 培养基是：（DTM）含蛋白胨、葡萄糖、酚红、放线菌酮、庆大霉素、 四环素等成分。由于皮肤真菌的代谢产物呈碱性，以致其生长周围 的培养基呈红色。 27、分离新生隐球菌的选择培养基是什么？ 分离新生隐球菌的选择培养基是左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养 基，因新生隐球菌有酚氧化霉（Plrno oxidase）活性，此霉与左旋 多巴和枸橼算铁反映时，能氧化O-联苯酚形成黑素而呈褐色至黑色， 或酚氧化霉和咖啡酸作用而显棕色菌落。 28、真菌培养的方法有几种？各自优缺点是什么？ 培养方法有平皿培养、大试管培养和玻片培养等。平皿培养的优点 是表面较大可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只 能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。大试管培养 的优点是水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保 存。玻片培养（为量培养、小培养）是将培养皿的真菌培养切成一 个1cm*1cm的小方块在无菌载玻片中央，然后将真菌点种于小方块培 养基的一侧，再盖上无菌盖玻片后培养，培养后将其盖玻片放入另 一载玻片上于显微镜下观察菌丝和孢子，可用于真菌菌种的鉴定。 29、真菌的生化反映有哪些？ 检验真菌常用的生化反映有糖（酵）类发酵试验、同化碳源试验、 同化氮源试验或利用硝酸钾试验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、 明胶液化试验和脲酶试验等。主要用于检验深部感染的真菌。 30、配置培养基的一般步骤是什么？ （1）按要求称取脱水培养基，倒入所要求量的蒸馏水中，反复搅拌 使各成分混合成均匀混悬液。（2）各成分混合均匀后以文火缓慢加 热并不断搅拌，煮沸1 min，不能过热，以免破坏有效成分。（3） 分装试管应在高压灭菌前，而分装平皿应在高压灭菌后，均待培养 基冷却至45-50度时分装。（4）高压灭菌一般为118-121度，6.81kg
1、什么是真菌？ 真菌为真核细胞型微生物，属于真菌界。具有典型的细胞核，不具有叶 绿素，以腐生和寄生方式摄取营养，细胞壁含几丁质和纤维素，有完善 的细胞器，能进行有性生殖和（ 或）无性繁殖。真菌在自然界分布极为广泛，约有20余万种，大多对人 无害，仅有约150种对人和动物致病。 2、 真菌的基本结构是什么？ 真菌的基本结构为菌丝和孢子，菌丝为微细的管状结构，具有细胞壁， 细胞膜，细胞浆和细胞核，分枝或不分枝，分隔或不分隔，有粗有细， 着色或不着色。一般致病真菌的菌丝较细而且分隔。孢子是真菌的繁殖 器官，也是抵抗不良环境的结构，类似于高等植物的种子，是真菌分类 坚定的最主要依据。 3、 引起人和动物感染的真菌分为哪两类？ 引起人和动物感染的真菌分为病原性真菌和条件致病菌两大类。病原性 真菌本身具致病性，而条件致病菌一般不具致病性，只有在一定条件下， 即机体免疫力降低时才致病。 4、 引起真菌病的常见诱因有哪些？ 长期使用广谱抗生素，皮质激素和免疫抑制剂，代谢障碍，血液病，尿 毒症，慢性消耗性疾病，外伤，大手术，器官移植，静脉高营养，导插 管，放化疗及爱滋病等都是重要的诱因。 5、 真菌生长的特点？ 真菌在生长过程中有从中心向四周等距离生长形成圆形菌落的倾向。也 正因为这一特点使体股癣的皮肤损害表现为环行或多环行。 6、 实验室检查真菌包括什么？ 实验室检查主要包括真菌直接检查和真菌培养。 7 、真菌直接检查的意义？ （1）直接检查阳性有诊断意义，一般可确定有真菌感染，阴性不能 排除诊断。 （2）根据直接检查所见的真菌镜下形态可确定少数病原菌的种，如新 型隐球菌，花斑癣菌等。有些可确定属，如念珠菌属等。 （3）直接检查所见的真菌形态，代表该菌在组织内的形态即组织象。 （4）真菌镜下形态有时可提示该菌的活动性，如念珠菌出现真菌丝和 假菌丝，皮肤癣菌的菌丝肥大粗长多分枝，胞浆浓都表示该菌处于活跃 状态。 8 、真菌培养的目的是什么？
整齐，如新生隐球菌。（2）霉毒型菌落，是多细胞真菌菌落。菌落呈 棉絮状、绒毛状、粉末状，并产生不同的色素，如皮肤癣菌。 24、直接镜检常用的载液有几种？ 1．氢氧化钾溶液 成分： K O H 10 ～40g 蒸馏水100 ml 配制：用蒸馏水将氢氧化钾溶解即可。 2．乳酸－石炭酸－甘油液 成分： 纯结晶石炭酸10g 甘油20 ml 纯乳酸10 ml 蒸馏水10 ml 配制：上述各成分混合溶解即可。 3．墨汁 成分： 优质无颗粒墨汁。 配制：与标本混合后即可观察。 4．甘油氨水液 成分： 甘油20 ml 酒精20 ml 氨水10 ml 配制：上述各成分混合后即可。 5．水杨酸－石炭酸－水合氯醛液 成分： 水合氯醛液40g 纯乳酸20 ml 纯石炭酸40g 水杨酸钠10g 配制：上述各成分混合后加温溶解即可。 6．生理盐水液 成分： NaCl 0．9g
（15磅），15min.时间过长会影响培养基的质量。（5）培养基中需 加血或其他不能高压灭菌的成分如抗生素等，应在培养基冷却至 45-50度时以无菌方法加入并搅拌均匀。（6）试管一般每分管分装 培养基7-8ml ,平皿约15ml。若需培养4-6周，平皿内应有35-40ml的 量以保证培养期间培养基不会干掉。（7）分装后的平皿和斜面应置 温室中24h，再贴上标签，放入冰箱中4度保存。（8）冰箱中贮藏时， 试管应棉塞向上，平皿应顶盖朝下。（9）每批培养基制备完毕后随 机抽取若干干管，接种上已知菌种，做质量检查，不合格者应全部 放弃。（10）脱水培养基配制后一般不需要测PH值。按配方基本成 分配制的培养基除非另有说明，否则在加入琼脂或高压灭菌前必须 测定PH值。（11）配制液体培养基方法与半周体培养要求相同。（12） 已配制的培养基棉塞试管的有效期一般为14d，平皿为30 d。时间过 长应于放弃，以免其内部成分发生变化，影响真菌的生长。 31、体癣和股癣主要由哪些病原菌引起的？ 毛癣菌、小孢子菌属和表皮癣菌属中的所有真菌都可以引起人类体 癣和股癣。在我国，体癣的主要致病菌种是红色毛癣菌、须癣毛菌、 犬小孢子菌、猪小孢子菌、铁锈色小孢子菌等。股癣的致病菌种与 体癣大致相同，但也有差异。股癣较少有小孢子菌感染，而以红色 毛癣菌、须癣毛菌等为主，白念珠菌股癣也较常见。 32、手癣和足癣主要由哪些病原菌引起的？ 手癣和足癣的病原菌相似，在世界各地亦基本相同，主要是红色毛 癣菌、须癣毛菌、玫瑰色毛菌、絮状表皮癣菌，烧碱的有断发毛菌、 犬小孢子菌、石膏样小孢子菌等。 33、为什么AIDS患者易感染真菌？ 近年来，随着AIDS发病率的不断增加，真菌病在AIDS患者中的感染 率也成倍增加。其原因主要与下列几方面有关：（1）AIDS患者免疫 力、尤其是细胞免疫力低下，CD4计数明显减少，这种病人特别容易 感染致病真菌，因为机体抵抗真菌感染的主要机制依赖于细胞免疫。 （2）由于对AIDS患者诊断和治疗的手段改善，早期发现、早期合理 治疗AIDS愈加成为可能，AIDS患者生存期延长，但免疫力低下的情 形难以改变，易患真菌病的诱因未能祛除。（3）新的、有效的抗细 菌药物的出现和应用，治疗了不少AIDS患者并发的细菌感染，从而 使真菌感染更明显化；同时由于大剂量广谱抗生素的使用，使条件 致病性真菌的继发感染率上升，真菌病的发病率也由此增加。（4） 深部真菌病起病隐匿，易被忽视，病人常见预防性用药中往往不含
15、真菌直接检查的方法？ 标本置与玻载片上，加上一滴载液，盖上盖玻片，放置片刻或微加热， 即在火焰上快速通过2-3次，不可煮沸，以免结晶。然后轻压盖玻片， 驱逐气泡并将标本压薄，用吸纸吸去周围溢液，置显微镜下检查。要注 意避免载液溢上盖玻片。标本宜薄而均匀。检查时应遮去强光，先在低 倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察菌丝和孢子的形态、特 征、位置、大小和排列等。 16、直接镜检阳性表示什么？ 直接镜检阳性表示：（1）有诊断意义（2）代表组织相。直接镜检看到 的真菌形态就是该真菌的组织形态。（3）判断某些真菌种的致病性等。 17、直接镜检的局限性是什么？ （1）阴性结果不能排除真菌感染，直接镜检不如培养敏感，其敏感性 随标本类型、数量、采集时间和质量等而有所不同；（2）有假阳性结 果，因此对直接镜检可疑结果应作复查，或用其他检验方法鉴定。 18、真菌直接检查的注意事项及鉴别要点？ 直接检查时，标本中的菌丝必须和上皮细胞的边缘，弹力纤维、植物纤 维及其他人工和天然的纤维鉴别。鉴别要点在于真菌菌丝的两侧边缘平 行，粗细均匀，弯曲舒展自然，内有胞浆和颗粒，折光性强等。酵母应 与脂肪球、气泡、花粉等鉴别，必要时可做染色检查。 19、临床真菌标本的采集类别有哪些？ （1）皮肤的角质性物质：毛发、指（趾）甲、皮屑等。 （2）各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。 （3）血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。 20、真菌检验的方法包括什么？ 真菌检验的方法包括直接镜检真菌形态、真菌抗原检测、真菌分离培养 与坚定、真菌核酸检测及真菌毒素检测等。 21、检测真菌抗原常用的方法是什么？ 采用免疫学方法检测真菌抗原，常用的方法有胶乳凝集实验、ELISA、 半定量放射免疫测定法。 22、真菌培养的影响因素是什么？ 真菌培养是目前鉴定真菌的惟一方法。培养成功与否与采集的标本是否 适当、是否新鲜、培养基的选择、培养温度与时间等有关。 23、真菌培养的菌落特征是什么？ 真菌培养后可形成两种菌落：（1）酵母型菌落，是单细胞真菌的菌落， 形态与细菌菌落相似，但较大一些，菌落表现光华、湿润、柔软、边缘
真菌培养的目的在于从临床标本中分离病原菌，确定是否有真菌感染及 感染真菌的种类，以弥补直接检查的不足，同时在培养鉴定的过程中对 其形态，镜下结构，生理特点和生化特征等进行充分的研究，以了解全 部生活史并据以推断其应归隶的属和种，指导临床治疗。同时，分离的 菌种可保存以便交流和继续研究。 9、真菌实验室怎样消毒？ 工作台每日用消毒灵、5%石碳酸液或0.5%过氧乙酸消毒2次。每周实验 室空气消毒1次（每4立方米空间用35ml 40%甲醇加入18g高锰酸钾，门 窗紧闭熏蒸24h）。 10、万一发生真菌标本污染工作台面，该怎样做？ 万一发生真菌标本污染工作台面不要立刻用水冲洗，而应先用纸巾覆 盖，倒上5%的石碳酸液，20min后清除。 11、临床采集真菌标本注意事项？ （1）采集的标本要适宜，不同真菌感染应采取不同的临床标本。怀疑 为浅部真菌感染如体癣，应刮取病变边缘的痂，皮屑，发癣应取折断了 的病发。怀疑为深部真菌感染应取血液，脑脊液、痰、脓汁等。 （2）在用药前采集标本，一般真菌标本须在用药前采集，对已用药者 则需停药一段时间后再采集标本。 （3）采集标本要足量要求，血液很脑脊液标本5ml，胸腔液20ml，皮屑 标本两块，活体组织两份（一份送病理科检查，一份作镜检和培养）。 （4）严格无菌操作，在采集标本时严格无菌操作，并进行消毒处理， 尤其是在采集血液和脑脊液标本时，要避免污染杂菌。 （5）采集的标本要送检，对采集的标本应立即送检，特别是深部真菌 标本采集后最长不得超过2h。 12、致病真菌可分哪两类？ 临床上常将致病真菌分为浅部真菌和深部真菌两类。浅部真菌主要侵犯 皮肤角蛋白组织。包括角质层、甲板、毛发和羽毛等；深部真菌可累及 皮肤、皮下组织，甚至全身的组织和器官。 13、紫外线能否杀灭真菌？ 大剂量的紫外线或X线对真菌有抑制作用，但无杀菌作用。 14、真菌病分为几类？ 传统上将真菌病分为四大类，即浅表真菌病、皮肤真菌病、皮下组织真 菌病和系统性真菌病。浅表真菌病和皮肤真菌病又称为浅部真菌病，而 深部真菌病则包括皮下组织真菌病和系统性真菌病。有些真菌如念珠 菌，既能侵犯浅部又能累及深部。