常用标本制备技术
如何制作昆虫标本
对于昆虫标本的制作方法，有很多种，我们将分八种情况对大家进行介绍。
其中，最常见的是针插标本制作法，大部分的标本一用此方法。
掌握好标本的制作方法，可以有效的保存标本的完整性，对研究昆虫学打好物质的基础。
针插标本制作法干制后的成虫标本除垫棉装盒保存外，一般都是插针存放。
（一）昆虫针主要是对虫体和标签起支持和固定作用。
目前市售的昆虫针是用优质不锈钢丝制成。
针的顶端以铜丝制成的小针帽，便于手摇移动标本。
按针的长短、粗细，昆虫针有数种型号，可根据虫体大小分别选用。
通用的昆虫针有七种，即00、0、1、2、3、4、5号。
0至5号针的长度为39毫米，0号针最细，直径0.3毫米，每增加一号其直径增粗0.1毫米。
另外还有一种没有针帽很细的短针为00号针，是把0号针自尖端向上1/3处剪断即成00号短针，可用来制作微小型昆虫标本，把它插在小木块或小纸卡片上，故又名二重针。
（二）插针后的效果昆虫种类不一，插针位置也有所不同，主要是避免针孔位置不当而损伤了虫体中间部分的特征而影响分类鉴定。
插针时，务使昆虫针与虫体成90°角，避免插斜而造成标本前后、左右倾斜，定要垂直插下。
已插针的标本，要进一步调理虫体在针上的位置，并使附插标签各就各位，做到层次分明，规格一致，便于移动，利于观察。
插针时如虫位过高，即针帽至虫体距离过短，手指移动标本时极易触伤虫体；虫位过低又影响下面所附插的小标签。
所以，必须使虫体与针帽距离适当，又和下面附插的小标签保持适当距离，如图1、图2中的距离较合适。
图1：蝴蝶标本针插后效果图2：甲虫标本针插后效果∙蝶蛾类昆虫展翅法鳞翅目成虫通常是用插针展翅法制成标本。
主要工具是展翅板。
展翅板是选用质量轻软的木板制作，尺寸可按图式比例制作。
也可把展翅板做成固定式，需多做几种沟槽宽窄不一的，以便根据虫体大小分别选用。
展翅的操作步骤：调整工具使用移动式展翅板展翅时，需先根据虫体（头、胸、腹）的粗细移动板面，使虫体正好纳入槽内，以左右两侧不触及板体为准，然后拧紧旋钮。
标本制作方法范文
标本制作方法范文标本制作是指将动、植物等生物进行处理、保存和修饰，使其能够长期保存，并用于教学、研究等目的的过程。
下面将介绍几种常用的标本制作方法。
一、干燥法干燥法是最常见也是最简单的一种标本制作方法。
它适用于干性植物、无脊椎动物和硬质脊椎动物的制作。
1.植物干燥法：首先，将植物拍平摆放在吸水纸上，然后用纸把植物包起来，并加上一些重物，以便植物的形态能够自然展开，并且保持干燥的状态。
通常需要定期更换吸水纸和重物，直到植物完全干燥。
最后，将干燥的植物贴在纸板上，并用透明塑料薄膜封装。
2.无脊椎动物干燥法：无脊椎动物干燥法与植物干燥法类似。
首先，将无脊椎动物放在吸水纸上，并用纸包裹起来。
接下来，用针将其形态展开并固定在吸水纸上，然后进行干燥处理。
最后，将干燥的无脊椎动物贴在纸板上，并用透明塑料薄膜封装。
3.脊椎动物干燥法：对于硬质脊椎动物，如鱼类、爬行类和鸟类等，可以通过注射硬化剂和干燥处理来制作标本。
首先，将动物进行解剖，去除内脏和软组织，然后用硬化剂进行注射以固定其形态。
接下来，将动物放置在吸水纸上进行干燥处理，过程中需定期更换吸水纸，直到完全干燥。
最后，将干燥的动物贴在纸板上，并用透明塑料薄膜封装。
二、液体浸泡法液体浸泡法主要适用于保存软脊椎动物的标本，如鱼类、两栖类和软体动物等。
1.泡制剂：首先，制备适合动物保存的泡制剂。
泡制剂包括醇、甘油、福尔马林等，具体选择根据保存目的和动物的特性来决定。
将动物完整地放入泡制剂中，浸泡一段时间。
时间的长短根据动物的具体情况来定。
浸泡结束后，将动物取出，适当清洗，并进行修饰。
最后，将修饰好的动物贴在纸板上，并用透明塑料薄膜封装。
三、冷冻法冷冻法主要适用于保存柔软而易腐烂的动物或组织样本，如软体动物和细胞等。
1.冷冻：将动物或组织样本迅速放入低温环境中，通常是零下80度或更低的温度，以冷冻样本并防止其腐败。
在冷冻过程中，要注意避免冻结和脱水引起的细胞破坏。
冷冻结束后，将样本贴在纸板上，并用透明塑料薄膜封装。
流式细胞术样品制备技术(完整)
流式细胞术样品制备技术流式细胞术对细胞的分析检测必须基于单细胞的基础上，这是流式细胞术的基本要求。
因此就必须把实体组织制备成单细胞悬液。
在应用FCM 技术中，制备出合格的单分散细胞是流式细胞术样本制备技术中重要的一环。
它要求这种分散细胞方法既要使细胞成为单个细胞，又能保持细胞的固有生物化学成分及生物学特性。
流式细胞术样品制备大致可分为下面五个步骤：① 取材：取手术或活检组织必须具有代表性，如取手术肿瘤组织，必须取瘤细胞生长旺盛部位；组织等标本必须在取材后保持样本的新鲜；一般在室温1 个小时之内处理好样本或及时用固定剂或低温对组织进行保存；② 对细胞的待测生物化学成分进行荧光染色；③ 按照厂家提供的软件程序对样本进行获取、检测和存储；④ 再依照软件提供的程序对检测结果进行定量分析；⑤ 检测分析结果在生物、医学上的意义进行分析和评价。
第1 节样本单细胞悬液的制备方法一新鲜实体组织样本的制备FCM 对单细胞快速进行各种参数分析必须基于单细胞基础上，根据各种组织成分的特点，可选择不同的分散细胞方法，以期达到单细胞产额高、损伤少的目的。
尽管标本制备已形成了标准化的程序，但实际操作中总会出现这样或那样的问题。
在实体组织分散为单个细胞过程中，解离的方法可能瞬间地或持久地影响细胞的性质、形态、结构、功能等。
所以，在对各种不同组织进行分散选择方法时，应尽量减少对细胞的这种影响。
目前常用的分散组织细胞的方法有如下3 种。
（一）酶消化法1作用原理：对实体组织分散的作用原理主要有3 方面：① 可以破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等；② 可以水解组织间的粘多糖等物质；③可以水解组织细胞间的紧密联结装置的蛋白质物质。
酶消化法是实体瘤、培养细胞分散为单细胞的主要方法之一。
常用的酶类试剂有：蛋白酶类——胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、链酶蛋白酶和中性蛋白酶等，都能解离组织中的细胞。
胰蛋白酶能水解脂键和肽键；胶原酶能降解几种分子类型的胶原；溶菌酶能水解糖蛋白和肽的糖苷键；弹性蛋白酶能消化连接组织的糖蛋白和弹性蛋白的纤维。
组织学的主要研究方法有哪些
一、组织学的主要研究方法有哪些？答题要点：1．常用光镜标本制备技术切片标本的制备。
这是最常用的方法。
应用光学显微镜观察机体各部的微细结构时，首先应把所有要观察的材料制成薄片，最基本的就是切片方法，其中石蜡切片更为常用。
其制备程序大致如下：（1）取材与固定。
将所要观察的人体或动物的新鲜材料切成适当的小块，立即浸入固定液（如甲醛溶液等）中进行固定，防止离体后结构发生变化，使其尽可能保持活体时的结构状态。
（2）脱水与包埋。
为了使石蜡能浸入组织内，把固定好的材料用乙醇等脱水，经二甲苯透明后，再浸入加温溶化的石蜡中浸透包埋使组织块变硬。
（3）切片与染色。
将包埋的组织蜡块，用切片机切成5-10μm左右的薄片，贴在载玻片上，脱蜡后进行染色。
最常用的染色法是苏木精和伊红染色，简称HE染色。
（4）封固。
在切片上滴加中性树胶，用盖玻片进行封固，保存备用。
在制作较硬组织（如骨组织等）或较大组织器官（如眼球）等切片，可用火棉胶代替石蜡进行浸透包埋，再进行染色。
为了较好地保存细胞内酶的活性，可选用冰冻切片，将组织在低温条件下快速冻结，直接切片，进行染色。
2．涂片、铺片、磨片标本的制备血液等液体材料，可直接在玻片上涂片，干燥后再进行固定和染色。
疏松结缔组织和肠系膜等薄层组织，可在玻片撕开展平，制成铺片，待干燥后进行固定和染色。
骨和牙等坚硬组织除用酸（稀硝酸等）脱钙后再按常规制成切片外，还可直接研磨成薄的磨片进行染色观察。
3．组织化学和免疫组织化学方法组织化学与细胞化学是应用物理、化学和免疫学方法，对组织、细胞内某些化学成分的定性、定位和定量进行研究，从而探讨与其相关的机能活动。
（1）组织化学。
其原理是在组织切片上或被取材料上，加某种试剂，使它与组织或细胞内某些物质起化学反应，形成最终反应产物。
光镜组织化学要求其最终产物是有色的沉着物；电镜细胞化学要求其最终产物是重金属沉着物。
观察其沉着物的颜色、深浅或电子密度，可对某种物质进行定性、定位和定量。
显微镜标本切片的制作方法
1.涂片、铺片、磨片标本的制备涂片标本的制备;涂片（smear）法是常用的一种方法，如血液等可直接涂于载玻片上制成涂片标本，干燥后进行固定、染色及封固。
铺片标本的制备;（stretched preparation）法用于疏松结缔组织、神经等柔软组织或肠系膜等薄层组织，可将其铺于载玻片上，撕开、展平制成铺片标本，待干燥后进行固定染色。
磨片标本的制备;（ground section）法是用于坚硬组织的标本制作，如骨和牙等坚硬组织除用酸（如稀硝酸）脱钙后再按常规制成切片标本外，也可直接将其磨成薄的磨片标本进行观察。
2.切片标本的制备观察机体各部的微细结构时，首先要制成薄片，就是切片法，其中以石蜡切片（Paraffin section）最为常见。
其制备程序大致如下：①取材与固定：取材要尽量以人体材料为主，辅以动物材料。
取得新鲜材料后，切成适当的小块1.0立方厘米大小）立即投入固定剂（fixative）中进行固定，使组织中蛋白质迅速凝固，防止组织自溶或腐败，以保持生活状态下的结构。
常用的固定剂有甲醛、酒精、醋酸、苦味酸、饿酸等。
②脱水（dehydtation）、透明（clearing）与包埋（embedding）:把固定好的材料用乙醇将组织内的水分脱掉，经二甲苯透明后，再浸入已融化的石蜡中进行浸透、包埋。
③切片（section）与染色（staining）：用切片机（microtome）切成5～10μm的薄片，贴于载玻片上，脱蜡后进行染色，最常用的染色法是苏木精（hematoxylin,haematoxylin)和伊红（eosin）染色简称HE染色。
配制后的苏木精染波呈碱性，可使细胞核内的染色质及细胞质内的核糖体等染成蓝紫色，称嗜碱性（basophilia)；伊红是酸性染料，可使多数细胞的细胞质染成粉红色，称嗜酸性（acidophilia）；耐碱性和酸性染液亲合力都不强的，称为中性（neutroPhilia）；④封固（mounting）：切片经脱水、透明后，于切片上滴加中性树胶和盖片进行封固后，贴标签备用。
做标本的方法
做标本的方法
做标本的方法有很多，但最常用的方法是采用切片技术。
切片技术指的是将样本裁剪成薄片，以便在显微镜下进行检验。
此外，也可以采用悬浮法、精细剪刀法、腐蚀法等多种制备样本的方法。
1、切片法：将样本裁剪成薄片，以便在显微镜下进行检验；
2、悬浮法：将样本中的细胞悬浮在液体中，然后用真空过滤装置进行离心分离；
3、精细剪刀法：使用仪器将样本切割成细小的部分，以探测其内部结构；
4、腐蚀法：使用腐蚀剂腐蚀样本表面，以检查内部结构。
- 1 -。
中药标本的制备说明
药用植物标本制作
1、标本修剪
在保持完整形态的前提下，齐小枝基部和叶柄处把重叠的枝叶减掉，，去净根部泥土，去除枯叶。
2，压制标本，原则保持植物形态不变，保持原色不变。
大部分页面向上，少数叶背向上，平展的铺放在吸水纸上，一层层放好后，捆好标本夹，勤换吸水纸，一周左右，标本呀干。
3，标本的消毒
标本压制全干后，喷洒适量的杀虫溶液，以防虫蛀。
4，标本的装订、
将消过毒的标本，粘到台纸上，用细白线固定，叠好标签。
这样既美观有实用的药用植物标本就做好了。
1。
浸渍标本制作
白萝卜等，先浸泡在质量浓度为0.05 g/mL 的硫酸铜溶液里1～
3d，漂洗后移到盛有质量浓度为0.01～0.04 g/mL 的亚硫酸溶
液的标本瓶里保存。
黄色、黄绿色标本的浸制
方法一：0.3％～0.5％的亚硫酸溶液1000ml，95％的酒精
10ml，40％的甲醛5～10ml混合液直接保存黄色或红色材料。
方法二：植物的黄色或黄绿色部分，如甘薯、马铃薯、姜、梨、
苹果、金橘、黄金瓜、黄番茄等，把标本浸入质量分数为5％的硫酸
铜溶液里1～2d取出后用水漂洗干净，再放入由30mL体积分数为6％
红色标本的浸制
方法三：红绿交错的果实，如剖开的红瓤西瓜、红辣椒，或
是植物的红色根、茎，如红萝卜、红皮甘蔗等，可以浸泡在质量
浓度为0.05 g/mL 的硫酸铜溶液里约10d，当标本由红变褐时取 出，漂洗后移到盛有质量浓度为0.01～0.02 g/mL 的亚硫酸溶液
的标本瓶里保存。
方法四：硼酸45g，95％酒精28ml，蒸馏水204ml混合液
方法三：紫葡萄必须浸泡在福尔马林饱和食盐溶液里。在
100mL清水里加入16g食盐，充分搅拌，不久食盐完全溶解，倒出
上面澄清的饱和食盐溶液。取10mL体积分数为40％的福尔马林，
加15mL饱和食盐溶液，再加水到100mL，配制成福尔马林饱和食 盐溶液。选择七八成熟的、果皮完整的紫葡萄，用清水洗净，浸泡 在上述溶液中二三个月，然后保存在盛有体积分数为1％～2％的福 尔马林的标本瓶里。果实经过这样处理以后，原有色泽可以保持较 长的时间。
生物玻片标本制作工艺
生物玻片标本制作工艺生物玻片标本制作工艺简介•生物玻片标本制作是生物学研究中常用的手段之一，可以将生物样本制作成玻片，用于观察和研究。
•本文将介绍生物玻片标本制作的工艺和步骤，帮助读者了解该过程。
材料准备•活体生物样本•玻片•各种染色剂和溶液•显微镜和显微镜载物制作步骤1.样本采集–选择适当的生物样本，如细胞、组织等，确保其代表性和纯度。
–采集样本时注意卫生和安全，避免污染和伤害。
2.样本固定–使用适当的固定剂，如福尔马林、乙醛等，固定样本结构，防止其变性和降解。
–固定时间根据样本种类和目的而定，通常为几分钟到几个小时。
3.样本清洗–使用适当的缓冲液或盐水等，将样本从固定剂中清洗出来。
–清洗时间和次数根据样本的固定情况而定。
4.样本脱水–将清洗后的样本逐渐浸入浓度递增的乙醇溶液中，使其逐渐脱水。
–脱水时间和乙醇浓度根据样本的种类和大小而定。
5.样本透明化–使用透明剂（如苯胺、氯化苯和二甲苯等）处理脱水后的样本，使其透明。
–透明化时间根据样本的厚度和种类而定。
6.样本浸渍–将透明化的样本浸入合适的浸渍介质中，如石蜡、树脂等。
–浸渍时间和温度根据浸渍介质和样本需求而定。
7.样本切片–使用显微切片机或显微镜载物将浸渍后的样本切割成薄片。
–切割时需根据样本硬度和形状进行调整。
8.样本染色–使用合适的染色剂染色切片，增强结构的对比度。
–染色时间和染色剂种类根据样本和研究目的而定。
9.样本封片–将染色后的切片放置在玻片上，再覆盖一层透明覆盖物，如封片胶水或封片胶片。
–封片时需注意避免气泡和封片材料过多。
10.样本观察–将制作完毕的生物玻片标本放置在显微镜下观察。
–观察时需调节显微镜的倍率和焦距，以获得最佳观察效果。
结论•生物玻片标本制作工艺复杂而耗时，但是对于生物学研究至关重要。
•合理选择材料、严格控制步骤，可以制作出高质量的生物玻片标本，为研究和教学提供有力支持。
注意事项在进行生物玻片标本制作时，需注意以下几个方面：1.选择合适的固定剂：不同的生物样本需要使用不同的固定剂，选择合适的固定剂能够保持样本的形态和结构。
样品制备方案
样品制备方案
标题：样品制备方案
一、引言
样品制备是科学研究和实验分析中的重要步骤，其质量直接影响到实验结果的准确性。
因此，制定一个合理的样品制备方案至关重要。
本方案将详细介绍样品制备的全过程，包括样品的选择、采集、预处理、储存以及使用等环节。
二、样品选择与采集
1. 样品选择：根据研究目标和实验设计，选择具有代表性的样品。
例如，在环境科学中，可能需要在不同的地点和时间点收集样品，以反映环境的变化。
2. 样品采集：采用适当的方法采集样品，确保样品的完整性。
同时，记录样品的相关信息，如采集时间、地点、条件等。
三、样品预处理
1. 清洗：对采集的样品进行清洗，去除表面的杂质和污染物。
2. 研磨：对于固体样品，可能需要通过研磨将其破碎成小颗粒，以便后续的分析。
3. 提取：使用适当的溶剂或方法提取样品中的待测物质。
四、样品储存
1. 标记：对每个样品进行清晰的标记，包括样品编号、采集时间、地点等信息。
2. 储存条件：根据样品的性质，选择合适的储存条件，如温度、湿度等。
3. 储存期限：设定样品的储存期限，并定期检查样品的状态。
五、样品使用
在实验过程中，按照预先设定的程序使用样品。
注意保持实验条件的一致性，避免引入额外的误差。
六、总结
样品制备是一个系统的过程，需要严格的操作规程和细致的工作态度。
只有这样，才能保证样品的质量，从而得到准确的实验结果。
以上就是本次样品制备方案的全部内容，希望对大家有所帮助。
细菌标本片的制备及染色方法
细菌标本片的制备及染色方法1.材料准备-细菌培养物：选择代表性的细菌培养物，如液体培养物、固体培养物、接种物等。
-玻片：选择无痕的玻片，经高温消毒或与有机溶剂清洗后晾干备用。
-液体固定剂：如95%乙醇、甲醛等。
-染色剂：如碘酒、靛蓝溶液、絮状靛蓝等。
-水：经蒸馏水或高纯水处理。
2.细菌标本片制备(1)涂薄法：采取适量的培养物，滴于玻片上，使用无菌铁环将培养物涂匀于玻片表面，待溶液蒸发，自然晾干。
(2)刮刀法：将细菌培养物取下适量，用棉签或刮刀将菌落刮到玻片上，制成薄层。
(3)叠片法：将细菌培养物滴于玻片上，然后使用另一片玻片压在上面，使培养物均匀分布在两片玻片之间。
然后慢慢滑动两片玻片，使液体薄层均匀分布。
3.细菌标本片固定(1)液体固定法：加入同等体积的液体固定剂于细菌标本片上，浸泡5-10分钟。
固定剂能使细菌细胞变硬，保持细胞原态形态。
(2)干燥法：将细菌标本片放置在室温下，自然晾干，使细菌固定在玻片上。
此方法适用于脆性细菌。
4.细菌标本片染色(1)碘酒染色：取适量碘酒滴于细菌标本片上，置于室温下静置10-20秒。
然后用水冲洗，使过多的碘酒洗掉。
(2)靛蓝溶液染色：取适量靛蓝溶液滴于细菌标本片上，置于室温下静置10-20秒。
然后用水冲洗，使过多的靛蓝洗掉。
5.透明化处理(1)絮状靛蓝法：将细菌标本片在300倍以下的低倍率镜下观察，确定细菌形态无误后，将玻片倾斜，滴入絮状靛蓝液。
待颜色由淡到重，停在合适的颜色时，用水冲洗玻片上多余的靛蓝。
(2)水透明化法：可使用蒸馏水或高纯水将细菌标本片浸泡5-10分钟，然后取出晾干。
透明化后，细菌会变得透明，观察细胞内部结构会更清晰。
6.滴水封片在制备完成的细菌标本片上滴一滴蒸馏水或高纯水，将盖片平放在上面。
用纸巾或吸水纸轻轻按压玻片两侧，使水均匀分布。
然后将封片剂滴于玻片四周，使玻片与盖片紧密结合，定期晾干即可。
生物标本的制备与储存
生物标本的制备与储存随着科技进步和环境变化，人们对生物学的研究日益深入和广泛，生物标本作为生物学研究的基础工具，更是被广泛应用于动植物分类、生物进化、生态环境等领域。
生物标本不仅可以保存物种信息、构建分类体系，还可以作为研究生物多样性和生态系统的重要依据。
然而，生物标本的制备和储存也是研究人员必须面对的问题，下面就让我们来探究一下这个话题。
一、生物标本制备生物标本制备是指对生物个体进行采集、加工、制备、鉴定和固定，使其永久性保存，便于后续研究。
制备生物标本需要注意以下几点：1.采集标本生物标本的采集必须遵循科学方法，尽量保持生物体的完整性。
对于昆虫类或小型动物，采样时要尽量避免捏压或断裂；对于鱼类或青蛙类，要采用麻醉或者人工呼吸等方式进行，以保证采集过程不会引起损伤或死亡。
2.加工处理将采集的生物标本进行清洗、拍照、测量和标注，然后按照标本制备流程进行处理。
标本制备流程通常包括去毛、鱼鳞、拍照、制片、涂色、固定等步骤。
制备好的生物标本应符合国际标准，包括形态、尺寸、配色、标识等方面。
3.固定保存生物标本的固定保存是将制备好的标本进行固定，以永久性保存的过程。
标本保存要避免暴晒、高温、潮湿、虫害等情况，采取合适的存储方法进行保存。
固定保存的标本不仅可以作为科学研究的重要资料，还可以作为展览馆、博物馆的收藏品。
二、生物标本储存生物标本的储存是采用一定的方法将制备好的标本长期保存，以便于后续的科学研究和展示活动。
生物标本储存需要遵循以下原则：1.避免有害条件储存生物标本时，需要避免有害条件的影响，避免光强过强、湿度过大、温度过低或过高的情况产生。
一些生物标本特别是昆虫、小型动物等，容易受到霉菌的侵蚀，因此需防止虫害、霉菌、飞蛾等危害。
2.分类储存生物标本分类储存、标识的目的是方便研究和查找，有助于防止混淆，还有利于生物标本的保护和保存。
储存前要对标本进行分类，大部分情况下可根据生物学分类系统进行分类。
细菌标本片的制备及染色
细菌标本片的制备及染色目的要求能利用不同的材料进行细菌标本片的制备，会进行常规染色，并认识细菌的不同染色特性。
仪器及材料酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、美蓝染色液、革兰氏染色液、瑞氏染色液、染色缸、染色架、洗瓶、显微镜、香柏油、乙醇乙醚、擦镜纸、细菌培养物(大肠杆菌、葡萄球菌等)、细菌病料、无菌镊子和剪刀、特种铅笔等。
方法与步骤 4大步：涂片→干燥→固定→染色（一）病料触片、美兰染色1．触片(抹片)用剪刀和镊子将剪刀和镊子在火焰上灼烧灭菌，稍冷却后，用镊子固定病料一角，剪刀剪下，将切面在玻片上涂抹或压印。
剪刀和镊子用完后一定要灭菌；整个操作过程始终在酒精灯附近进行。
2．干燥触片涂面向上，置火焰上方约20cm处加热干燥。
3．固定固定的方法因染色方法不同而异。
美兰染色和革兰氏染色用火焰固定。
(1)火焰固定是最常用的方法，将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上方约10cm处来回通过数次，以手背触及玻片微烫手为宜。
(2)化学固定血片、组织触片用瑞氏或姬姆萨氏染色时，用甲醇固定。
固定的目的是使菌体蛋白质凝固，形态固定，易于着色，并且经固定的菌体牢固黏附在玻片上，水洗时不易冲掉。
兼有灭菌作用。
4．染色在经火焰固定的抹片上，滴加美蓝染色液覆盖整个涂面，染色2～3min，水洗，晾干或吸水纸轻压吸干，镜检。
结果：病料和细菌都呈蓝色。
（二）细菌培养物涂片、革兰氏染色1．涂片取洁净的玻片一张，把接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌后，取1～2环的无菌生理盐水，放于载玻片的中央，再将接种环灭菌，冷却后，无菌操作从固体细菌培养物上挑取菌落或菌苔少许，与生理盐水混匀，作成直径1cm的涂面。
接种环使用前后都需灼烧灭菌。
整个操作过程始终在酒精灯附近进行。
若为组织病料，则用烙刀和接种环进行涂片。
方法为：用烙刀在病料表面某处进行烧烙→烙刀灭菌后在烧烙处切口→接种环灭菌后从切口处伸入取病料→将病料涂于玻片上做成涂面。
2．干燥触片涂面向上，置火焰上方约20cm处加热干燥。
显微标本制作的一般原理及步骤(精)
1.1 涂片法
• 主要用于血液、精液、尿、痰、微 生物等不能切成薄片的液态材料， 可在载玻片上涂成单层细胞，再经 固定，脱水，染色等手段制成永久 标本。演示
1.2 铺片法
• 主要用于动植物组织的表皮层观察。 可活体取待观察动植物组织，用尖 镊子撕去一层表皮，迅速平铺在载 玻片上。 如: 洋葱表皮细胞的铺片制 备。演示
• 但在经过固定，脱水，透明，包埋等手续后就可把材料切成 较薄的片子，再用不同的染色方法以显示不同细胞组织的形 态及其中某些化学成份含量的变化，就可以在显微镜下清楚 地看到其中不同的区域组分状态。切片也便于保存，所以是 教学和科研中常用的方法。
一、实验原理
• 生物显微制片方法 非切片法：涂片，铺片，压片，磨片，整装片 切片法：石蜡切片法，火棉胶切片法，冰冻切片法
• 尽可能避免使组织膨胀或收缩，并且软硬合适 于切片；
• 增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，同时 增加媒染作用和染色能力； 固定液同时是防腐液，使材料不致变质腐败。
2.3 脱水
• 脱水过程的作用是用一种既能与水又能与透明液混 合的液体来逐渐置换样品中游离的水。
• 现采用的脱水剂一般是丙酮或乙醇来进行梯度脱水。 脱水的时间，可根据组织的类型，大小而定。
2 常用试剂
• 2.2 常用脱水剂：酒精，正丁醇，叔丁醇，丙酮等
• 2.3 常用透明剂：二甲苯，甲苯，氯仿，丁香油等。
• 2.4 常用粘贴剂
• 明胶粘贴剂
明 胶 1g 蒸馏水 石碳酸 2g 甘 油 蛋白粘贴剂
100ml 15ml
新鲜蛋清 25 ml 甘 油 25 ml 石炭酸 0.5 g • 2.5 包理剂：石蜡，火棉胶，明胶等。 • 2.6 封固剂：阿拉伯树胶，加拿大树胶。
生物玻片标本制作工艺
生物玻片标本制作工艺引言：生物玻片标本制作是生物学研究中不可或缺的重要环节，它可以将生物样本的细胞、组织或器官固定在玻片上，以便于观察和分析。
本文将介绍生物玻片标本制作的工艺流程和注意事项。
一、标本获取与处理1. 标本获取：选择合适的生物样本，如细胞、组织或器官，根据实验需要进行采集。
采集时应注意避免污染和损伤。
2. 标本固定：将采集到的标本立即进行固定处理，以保持其形态和结构的完整性。
常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。
固定前需要根据标本类型和实验要求选择适当的固定剂和浓度。
3. 去水处理：固定后的标本需要进行去水处理，以去除固定剂残留和改善后续染色效果。
去水过程中要注意温度和时间的控制，避免标本变形和失去染色性。
二、标本切片制备1. 标本包埋：将去水后的标本进行包埋处理，常用的包埋剂有石蜡和冰冻剂。
包埋剂的选择应根据标本类型、实验目的和后续分析方法来确定。
2. 标本切片：将包埋的标本切割成薄片，常用的切片工具有手动切片机和冰冻切片机。
切片时要注意切割速度和刀片的角度，以保持切片的质量和完整性。
3. 标本贴片：将切好的标本片取出并贴在玻片上，常用的贴片方法有热贴法和冷贴法。
贴片时要避免产生气泡和折叠，保持标本的平整和清晰。
三、标本染色与包裹1. 标本染色：根据实验需要进行标本染色，常用的染色方法有核染色、细胞器染色和特定蛋白染色等。
染色前要根据实验目的和标本类型选择适当的染色剂和染色时间。
2. 标本包裹：染色后的标本需要进行包裹处理，常用的包裹剂有覆盖玻片剂和封片胶。
包裹时要避免产生气泡和污染，保持标本的清晰和稳定。
四、标本保存与存储1. 标本保存：将制作好的生物玻片标本进行干燥处理，避免水分和氧气的接触。
保存时要注意避光和防潮，以延长标本的保存时间。
2. 标本存储：将干燥的玻片标本放入标本盒或标本袋中，标注好相关信息，如标本名称、采集日期和存放位置等。
存储时要避免温度过高和震动，以保持标本的完整性和质量。
生物标本制作方法和技术
1、干制标本植物腊叶标本植物腊叶标本要保管在密封干燥的腊叶标本橱内新制标本因为常有害虫和虫卵寄生，入橱最好用药消毒。
就是用二硫化碳约0。
5KG 盛在容器内，放入杀虫箱（1。
7平方米）中，两日后开箱，使毒气散尽，拿出标本。
二硫化碳气体比空氧重。
药品应放在标本上面。
或者把未上台纸的标本放入0。
5%升汞酒精（工业用75%）溶液中浸一次，制好后入橱。
升汞）有毒，并不能与金属起化学作用，切忌使用金属器械。
用时要带橡皮手套，事后用肥皂北朝洗手，标本用什么药品杀虫，应在台纸上注明，以防中毒。
腊叶标本橱内要放樟脑精以防虫害。
分类入橱标本要进行分类才便于利用。
植物根、茎、叶花果实的干制标本，可按课本上的次序排列。
分类标本在按照分类系统，分科排列。
目前标本室常用的分类系统有恩格斯（AENGLER）、克朗奎（A。
CRONGUIST）等分类系统。
橱门上应有分科目录表，橱内要有分科标签，便于查找。
维修如果标本中的叶片脱落，可用毛笔刷胶水（植物胶）在叶背面，按照自然姿态贴好，阴干。
枝茎断裂的要用醋酸乙烯胶粘贴，再贴上胶水纸。
发霉和虫蛀的标本，用毛笔蘸95%酒精或10%福尔马林液洗刷，干后用毛笔刷除霉斑。
台纸和盖纸破损的要调换新的。
移动标本，手脚要轻，不要翻转颠倒。
入橱标本，不要太挤。
标本外借，要多用填纸包装，注意防潮。
植物种子标本要选择典型无病虫害的新种子，清除杂质后晒干，装入种子瓶中，并贴上标签，经常检查，以防发霉虫蛀。
昆虫标本和植物病虫害等盒装标本大型昆虫的腹部和柔软部分以及烘干的幼虫，都容易发霉。
盒装的昆虫生活史、病虫害等标本里的安瓿容易破碎和标签脱落，可将损坏部分掉换℃℃。
植物损坏部分可按照维修腊叶标本方法维修。
盒装标本内应放入樟脑、硅胶等防虫防潮药品。
其它化石标本要防止震动和碰撞，损坏时用石膏填补和聚醋酸乙烯胶（乳白胶水）粘接。
鸟卵标本卵壳损坏，可分块取下粘贴。
循环系统干制标本是用赛璐珞作填充物的，脆性大，要防震，如果损坏，可以用毛笔蘸丙酮液粘接。
透射电镜标本制备方法
透射电镜标本制备方法由于电镜电子束穿透能力的限制，必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用，这种薄片称为超薄切片。
常用的超薄切片厚度是50-70nm。
在透射电镜的样品制备方法中，超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。
超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似，需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
一取材的基本要求组织从生物活体取下以后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部各种酶的作用，出现细胞自溶现象。
此外，还可能由于污染，微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。
因此，为了使细胞结构尽可能保持生前状态，必须做到快、小、准、冷: (1)(动作迅速，组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2.5%戊二醛固定液。
(2)(所取组织的体积要小，一般不超过1mm×1mm×1mm。
也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形。
因为固定剂的渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。
(3)(机械损伤要小，解剖器械应锋利，操作宜轻，避免牵拉、挫伤与挤压。
(4)(操作最好在低温(0?,4?)下进行，以降低酶的活性，防止细胞自溶。
(5)(取材部位要准确。
取材方法:将取出的组织放在洁净的蜡版上，滴一滴预冷的固定液，用两片新的、锋利的刀片成“拉锯式”将组织切下并修小，然后用牙签或镊子将组织块移至盛有冷的固定液的小瓶中。
如果组织带有较多的血液和组织液，应先用固定液洗几遍，然后再切成小块固定。
二(固定固定的目的是尽可能使细胞中的各种细胞器以及大分子结构保持生活状态，并且牢固地固定在它们原来所在的位置上。
固定的方法有物理的和化学的两大类。
物理的方法系采用冰冻、干燥等手段来保持细胞结构;化学的方法是用一定的化学试剂来固定细胞结构。
现通常使用化学方法对组织或细胞进行固定。
常用固定剂有1、四氧化锇 (osmium tetroxide，)是一种强氧化剂，与氮原子有较强的亲和力，因而对于细胞结构中的蛋白质成分有良好的固定作用。
树脂包埋标本的制备方法
树脂包埋标本的制备方法树脂包埋标本制备方法在生物学、地质学等领域具有广泛的应用，它能够将珍贵的样本保存下来，便于长期观察和研究。
本文将详细介绍树脂包埋标本的制备方法，包括材料选择、操作步骤和优化技巧。
一、树脂包埋标本制备的意义和应用树脂包埋标本制备技术是一种将实物样本嵌入固态树脂中，使其具有较高观赏性和保存价值的方法。
这种方法不仅可以保护标本，防止其腐烂、变形，还可以使标本更加美观，便于展示和观察。
树脂包埋标本广泛应用于博物馆、学校、科研机构等地。
二、树脂包埋标本的制备材料和工具1.树脂材料：选择适合包埋的树脂材料，如环氧树脂、聚氨酯树脂等。
要求树脂具有良好的流动性和固化性能。
2.硬化剂：根据树脂的种类选择合适的硬化剂，按照说明书比例与树脂混合。
3.容器：选用干净、无毛刺的容器，如玻璃瓶、塑料盒等。
4.工具：镊子、刀片、刷子、搅拌器等。
三、树脂包埋标本制备的步骤和方法1.准备工作：将所需标本清洗干净，修整形状，确保表面光滑。
如有需要，可进行染色处理。
2.填充模具：将标本放入容器中，加入适量树脂和硬化剂混合物，注意留出一定空间以防止树脂膨胀时溢出。
3.搅拌混合：用搅拌器充分搅拌树脂和硬化剂，确保混合均匀。
4.倒入模具：将搅拌好的树脂倒入容器，轻轻震动使其充满整个空间，同时排出气泡。
5.固化：将容器放入固化设备中，按照设定时间进行固化。
不同树脂的固化时间有所不同，需根据具体产品说明调整。
6.取出标本：固化完成后，从容器中取出树脂包埋标本，用刀片或刷子修整表面，去除多余树脂。
7.抛光：用砂纸或抛光机对标本表面进行抛光，使其光滑美观。
四、注意事项及优化技巧1.选择合适的树脂和硬化剂：根据标本材质和保存要求，选择适合的树脂和硬化剂。
2.防止气泡产生：在倒入树脂过程中，尽量排出气泡，以确保标本表面光滑。
3.控制固化温度和时间：根据树脂产品说明，确保固化温度和时间合适，以免影响树脂性能。
4.修整和抛光技巧：在修整和抛光过程中，注意保持标本原型，尽量减少对表面的破坏。
常用标本制备技术.
常用标本制备技术一、常用光镜标本制备技术1.切片标本的制备：常用的切片方法为石蜡切片，其制备程序如下：⑴取材从动物身体割取所需的新鲜组织一小块（厚度约0.5厘米）。
手术愈快愈好，以防组织的死后变化。
⑵固定把切取的小块组织，迅速投入预先配好的固定液[如10%福尔马林、0.5%锇酸、包氏液、岑克氏液、卡氏等固定液]中固定，使组织细胞的蛋白质变性，组织块硬化，以保存组织细胞原有的形态。
⑶冲洗（洗涤）组织块自固定液取出后，须经流水冲洗或乙醇洗涤，使组织中含有的固定液全部除去，直至洗净为止。
⑷脱水脱水的目的在于除去组织中的水分。
因为组织中的水分和石蜡是不相溶的，为不使组织块在脱水时产生收缩，所以一定要经过各级浓度的脱水剂（如乙醇等）将水分脱净。
⑸透明组织块脱水后，须经既可和乙醇相混，亦可作石蜡溶剂的透明剂（如二甲苯）透明，使组织中的乙醇被透明剂所替代，才能浸蜡包埋。
⑹浸蜡浸蜡是将包埋剂（石蜡）透入整个组织的过程。
石蜡透入组织需要一定的温度（石蜡熔点）。
所以浸蜡都在恒温箱中进行。
⑺包埋制备一定形状的容器（如纸盒等），倒入熔化的石蜡，迅速夹取浸透石蜡的组织块放入盒内，待表面石蜡凝固后立即将容器投入水中，使它凝固成蜡块。
⑻切片组织块经上述处理后，不仅变硬，且有石蜡支撑，可用切片机将包埋组织的蜡块切成薄片，一般厚度是5～8微米。
⑼贴片把由切片机切下的蜡条，分割成小段，分别排放于滴有蒸馏水的载玻片上，在展片台上微热，使皱褶的蜡片伸展平正。
⑽烘片把贴有蜡片的载玻片置于45℃恒温箱中，烘烤3～4小时，使切片干燥。
⑾脱蜡与复水组织切片的脱蜡等过程是在染色缸中进行的，因此须预先准备洁净的染色缸，并分别放入二甲苯、各级浓度的乙醇及染料溶液，按顺序贴好标签。
染色前须先进行脱蜡和复水，即用二甲苯溶去切片上的石蜡后再经各级浓度乙醇（自高浓度到低浓度）下行到水的过程。
因为没有经过复水处理的切片不能用水溶性染料染色，所以在染色前必须再度复水。
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制作出的骨骼标本洁净美观，结构完整，骨的连结自然真实，骨间膜、椎间盘、肋软骨、耻骨间盘、韧带、关节囊、关节软骨等牢固地与骨连结在一起，胸廓，骨盆，脊椎等完全保持了其本来形态。采用双氧水浸泡处理软组织，有以下优点：
（1）双氧水放氧产生氧泡的物理作用使与骨结合紧密的软组织松动，与骨较易分离，而干燥后这些软组织与骨的结合又变得紧密牢固了。
3、xx标本制作
（1）按要求进行标本取材。
（2）xx、涂色。
（3）装瓶、保存（若标本上涂色彩，不宜保存在本院配方的保存液中，以防脱色，仍须保留在5%—10%的甲醛溶液中）。
三、人体骨骼标本双氧水法制作
（一）目的
利用局解后的废旧材料制作人体骨骼标本
（二）材料
经防腐固定的局解后尸体标本、工业用双氧水、汽油和带盖标本箱。
切片浸入二甲苯3～10分钟→二甲苯+纯乙醇（1：1）→纯乙醇→95%乙醇→80%乙醇→70%乙醇→50%乙醇（以上每级乙醇停留的时间约2～5分钟）→蒸馏水2分钟。
⑿染色切片染色以后可增加组织细胞结构的对比度。常用的生物染料是苏木素和伊红，简称H.
E.染色。苏木素是一种碱性染料，经苏木素染色的结构呈蓝紫色（如细胞核）。组织中可被碱性染料着色的结构称嗜碱性。伊红是一种酸性染料，被伊红染色的结构呈红色或粉红色（如细胞质）。可被酸性染料着色的结构称嗜酸性。H.
二、大体解剖技术操作规程及其注意事项
（一）大体解剖标本的收集与防腐固定处理
1、收集标本时，须登记死者的死亡原因、性别、年龄等，办妥自愿捐献手续、家属签字等手续，免留后患。若系无主尸体亦须在公安、保卫部门办妥有关手续。
2、进行消毒处理，避免传染病蔓延。
3、进行固定防腐注射，配制5%—10%的甲醛溶液作颈总动脉与股动脉灌注，按照标本大小选择注射剂量。如注射溶液过浓，解剖时容易造成肌纤维及血管断裂，过淡时标本容易腐败。温度高时注射5%左右溶液，温度低时注射10%左右溶液。根据季节气温的不同在5%—10%之间浮动。
⑶冲洗（洗涤）组织块自固定液取出后，须经流水冲洗或乙醇洗涤，使组织中含有的固定液全部除去，直至洗净为止。
⑷脱水的目的在于除去组织中的水分。因为组织中的水分和石蜡是不相溶的，为不使组织块在脱水时产生收缩，所以一定要经过各级浓度的脱水剂（如乙醇等）将水分脱净。
⑸透明组织块脱水后，须经既可和乙醇相混，亦可作石蜡溶剂的透明剂（如二甲苯）透明，使组织中的乙醇被透明剂所替代，才能浸蜡包埋。
4、注射完后标本在注射台上保留一到两天，使其毛细血管中溶液渗均匀，再行放入3%—5%的甲醛溶液中保存。
5、每具标本注射后必须在尸池中浸泡六个月后，方可进行大体解剖，如解剖过早则不易保存。
6、若收集标本须作铸型标本用，宜将标本即时放血，取材越新鲜越好。剩余部分作局部注射保存。若作关节韧带等标本，取材后马上将肌肉等及时剥离，以防腐败发臭。收集腐败标本后可作沙埋腐蚀后取骨架为标本。
将这些软组织很容易地清除掉）。
3、脱脂：
将上述材料凉干后入汽油中脱脂4个月。注意材料要干燥，容器要密封，中途更换1次汽油即
可。
4、清洁和保存：
将脱脂后的材料置通风处让汽油挥发，然后浸入1%的洗衣粉内将表面的油渍洗净，再用清水冲洗干净。之后，置阴凉干燥处风干（为防止肋骨缩水变形，可用木条或有机玻璃支撑固定，待干后拆掉），涂刷清漆两遍即可保存。
⑹浸蜡是将包埋剂（石蜡）透入整个组织的过程。石蜡透入组织需要一定的温度（石蜡熔点）。所以浸蜡都在恒温箱中进行。
⑺包埋制备一定形状的容器（如纸盒等），倒入熔化的石蜡，迅速夹取浸透石蜡的组织块放入盒内，待表面石蜡凝固后立即将容器投入水中，使它凝固成蜡块。
⑻切片组织块经上述处理后，不仅变硬，且有石蜡支撑，可用切片机将包埋组织的蜡块切成薄片，一般厚度是5～8微米。
⑼贴片把由切片机切下的蜡条，分割成小段，分别排放于滴有蒸馏水的载玻片上，在展片台上微热，使皱褶的蜡片伸展平正。
⑽烘片把贴有蜡片的载玻片置于45℃恒温箱中，烘烤3～4小时，使切片干燥。
⑾脱蜡与复水组织切片的脱蜡等过程是在染色缸中进行的，因此须预先准备洁净的染色缸，并分别放入二甲苯、各级浓度的乙醇及染料溶液，按顺序贴好标签。染色前须先进行脱蜡和复水，即用二甲苯溶去切片上的石蜡后再经各级浓度乙醇（自高浓度到低浓度）下行到水的过程。因为没有经过复水处理的切片不能用水溶性染料染色，所以在染色前必须再度复水。脱蜡与复水的步骤如下：
（4）0～4℃ 10%蔗糖
0.1M磷酸缓冲液800ml。前300ml速灌。后500ml缓慢滴入。约30
分钟。
5．取材：
取出两侧相应节段（据大体解剖学而定）全部脊神经节，并放入10%蔗糖
0.1M磷酸缓冲液内。置冰箱内过夜。
6．冰冻切片厚40～50微米，并收集于
0.1M磷酸缓冲液中。
7．成色反应（O-D法，有关A液、B液、C液配制见上）
（二）大体标本解剖
1、将收集保存六个月以上的标本捞出、冲洗后，放入尸体台即可进行解剖。
2、解剖前必须将镊、钳、剪、刀等工具准备完好，方可动手操作。视其操作部位，必须熟悉所作部位解剖层次结构，用圆刀切开皮肤并剥离之，用尖刀或剪等修洁神经、血管、肌肉等结构。大体标本制作之关键在于熟悉层次结构和熟练的操作技巧。否则易切断或破坏相关结构，且制作的标本不美观。若作系解教学标本宜采取两侧分别以深、浅层制作。完成后放入本院配制之保存液中待用。
4．动物灌注：
注射后4～5天进行，开胸经左心室\升主动脉插管，同时剪开右心耳灌注如下药液：
（1）0～4℃柠檬酸钠速灌300ml。
（2）0～4℃生理盐水速灌1000ml。
（3）0～4℃ 2%多聚甲醛
1.25%戊二醛
0.1M磷酸缓冲液1000ml。前300ml速灌。后700ml缓慢滴入。全过程约40分钟。
（三）特殊标本制作
1、铸型标本
（1）根据所取材料，按需要处理。
（2）配制好铸型剂并加不同染料（一般示红色动脉，示静脉蓝色，示胆道绿色，示神经黄色等）。
（3）分别采取不同腐蚀法，腐蚀后冲洗，装瓶保存。
2、包埋标本
（1）取出所需材料修洁凉干（有条件可抽空包埋）。
（2）按需要选择好包埋材料。
（3）包埋造型。
（1）0～4℃蒸馏水冲洗切片三次。
（2）放入A液30分钟（置冰箱）。
（3）0～4℃蒸馏冲洗切片三次。
（4）放入B液30分钟（置冰箱）。
（5）0～4℃蒸馏水冲洗切片三次。
（6）放入C液中（置冰箱）。
8．蛋白甘油贴片
（3）Tris液的配制
①取
3.6ml冰醋酸加蒸馏水至300ml。
②取
4.08g无水醋酸钠加蒸馏水至150ml。
③取上液①279ml和上液②126ml混合，即为Tris液。
④混合后用精密试纸测其PH为
4.4则可用。
（4）O-D法中有关溶液配制
①A液的配制取
0.1MTris液10ml、
0.2%明明胶液50ml、硝普钠200mg加蒸馏水至100ml、联大茴香胺80mg加蒸馏水至40ml、
1.5%H2O
20.8ml混合即得A液。
②B液的配制取
0.1Mtris液10ml、
0.2%明胶液50ml、硝普钠8g、蒸馏水140ml混合即得B液。
③C液的配制取
0.1Mtris液20ml、
0.2%明胶液100ml、蒸馏水280ml混合即可得C液。
2．定穴及针入xx：
根据《针灸学》[1]、《兽医针灸手册》[2]确定。
取Ⅰ液190ml、Ⅱ液810ml混合后加蒸馏水稀释至2000ml即得
0.1M磷酸缓液（PH
7.4）。
②2%多聚甲醛
0.1M磷酸缓冲液的制备:20g多聚甲醛加
0.1M磷酸缓冲至1000ml即得此液。
③2%多聚甲醛
1.25%戊二醛
0.1M磷酸缓冲液的制备:25%戊二醛50ml溶液加2%多聚甲醛
0.1M磷酸缓冲液至1000ml即得。
3．动物分组、xx及HRP引入方式：
将实验用家兔随机分成5组，即穴区组\神经干组、切断神经组、切断血管组和空白对照组。用2%戊巴比妥纳、接40mg/kg体重，进行腹腔麻醉。
穴区组、切断神经组、切断血管组，均在家兔某一目标穴区直接注射20%HRP液20μl，神经干组在家兔目标穴区下神经干内注射20%HRP液20μl，空白对照组则在家兔目标穴区直接注射20μl生理盐水。
1．主要溶液的制备
（1）20%HRP液20μl、HRP粉末5mg加20μl生理盐水即此液。
（2）2%多聚甲醛加
1.25%戊二醛
0.1M磷酸缓冲液（PH
7.4）。
①0.1M磷酸缓冲液的制备：
Ⅰ液：
NaH2PO4·H2O
27.6g加蒸馏水稀释至1000ml。
Ⅱ液：
Na2HPO4·12H2O
71.6g加蒸馏水稀释至1000ml.
过氧化氢（xxxx化工厂）
（三）仪器设备与材料
100ml量筒、分析天平、500ml量筒、1000ml烧杯、2000ml烧杯、家免饲养笼、50μl微量注射器、精密试纸、普通光学显微镜，等。
四）实验对象
本院动物室提供的家兔，体重2000±20g。
（五）实验环境
室温18～25℃，相对湿度60%～75%。
（六）操作步骤
0.5%伊红（95%乙醇溶液）2～5分钟→95%乙醇分色（在显微镜下检查核呈蓝紫色，细胞质及结缔组织呈粉红色）→95%乙醇轻洗（洗净玻片上剩余的伊红染液）。
⒀脱水已染色的组织切片，为了长久保存，又须再经各级浓度的乙醇脱水。即将上述已被染色的组织切片依次放入95%乙醇1分钟→纯乙醇（I）1分钟→纯乙醇（Ⅱ）2～5分钟。
（三）方法
1、取材：
取骨质无损的标本，整体的或局部的均
可。
2、软组织处理：
将大块软组织包括筋膜、肌肉、内脏、脑等除掉后，常温下浸入5%-10%的双氧水中，利用双氧水放氧产生气泡的机械作用使软组织松动，15-30天后取出，用清水冲洗后将骨膜撕掉，但韧带、关节囊、软骨、肌腱、骨间膜等可按需修洁保留（如做散的骨标本，则可