标准曲线

总糖和还原糖的测定

（3,5-二硝基水杨酸比色法）

标准曲线的测定

班级：

姓名：

学号：

试验时间：

同组同学：

一、实验目的

1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理。

2、学习比色法测定还原糖的操作和分光光度计的使用。

二、实验原理

还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取

出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其他产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在过量的NaoH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中含糖量和总糖的含量。

三、实验器材和药剂

器材：7支具塞刻度试管、烧杯、刻度吸管、容量瓶、分光光度计、水浴锅

药剂：分析纯葡萄糖、3,5-二硝基水杨酸、NaoH、酒石酸钾钠

四、实验步骤

1、准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，保存备用。

2、将6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml 含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。

3、取7支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min取出，冷却至室温，用蒸馏水补足至10ml，加塞后颠倒混匀备用。

4、在分光光度计上进行比色。调波长540nm，用0号管调零点，分别测出1~6号管的光密度值。

5、以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量(mg)为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。

五、数据处理

标准曲线的制作

原始数据：

六、思考与讨论

1、2R系数为什么不等于1，误差有哪些？

答：在实验过程中可能添加药品存在误差，刻度吸管没有润洗，分光光度计没有调零，沸水浴不够完全，添加的药品没有充分混匀。量取溶液时俯视或仰视刻度线。在使用分光光度计的时候溶液不足比色皿体积的1/3，手污染了比色皿的光滑一侧。在使用比色皿时没有对比色皿进行润洗。