肿瘤模型的复制方法
建立小鼠肿瘤模型的研究进展
建立小鼠肿瘤模型的研究进展摘要：建立一种理想的肿瘤动物模型对研究肿瘤的发病、治疗和预防有重大的意义。
其中小鼠肿瘤模型具有生长周期快、易获得、易操作等优点被基础实验研究所广泛采用，如何选择和建立一个合适的小鼠肿瘤模型对肿瘤的整个研究有着举足轻重的作用。
关键字：肿瘤，动物模型，小鼠肿瘤，是一种严重威胁人类健康的多发病和常见病。
对肿瘤的研究一般都是在人类疾病动物模型的基础上展开的。
建立一个完全反映人类疾病的动物模型比较困难，但可依据不同的实验目的选择相应的动物实验模型。
1.实验动物的选择可用作肿瘤模型的动物有很多，小鼠肿瘤模型作为其中一种常用模型主要因为有以下几个优点。
（1）易获得，常用的肿瘤模型小鼠通常采用SPF级小鼠，SPF级小鼠一般医学院校及研究所都能买到。
（2）生长周期短，一般小鼠肿瘤模型两周左右就能长大，能大大缩短实验周期。
（3）易操作，小鼠的动物实验操作一般简便，因此可适当增加组内样本数量，使实验数据更具说服力。
2.理想的建立肿瘤模型应具备的条件（1）肿瘤生长的过程应与人类肿瘤生长过程相似，做到尽可能复制出与人类肿瘤相同的模型。
（2）制作模型的方法简单易行。
（3）动物模型的重复性要好，要能满足实验的多次重复试验结果稳定性好。
（4）采用的建模方法对实验人员和环境无危害或危害较小。
3.肿瘤来源的选择现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，P1534淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，白血病P388，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，Ｗagner癌肉瘤，白血病L5170Y，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，Gardner 淋巴肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。
科研动物肿瘤实验报告
一、实验背景近年来，肿瘤已成为全球范围内最主要的死亡原因之一。
为了提高肿瘤的治愈率，研究人员一直在寻找新的治疗方法和药物。
动物肿瘤实验是肿瘤研究的重要手段之一，可以模拟人类肿瘤的生长、发展和治疗反应，为肿瘤治疗提供理论依据。
本实验旨在探讨新型抗肿瘤药物对动物肿瘤模型的抑制作用。
二、实验材料与方法1. 实验动物实验采用昆明种小鼠，雌雄各半，体重18-22g，由本实验室动物中心提供。
2. 实验分组将实验小鼠随机分为四组，分别为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组。
3. 肿瘤模型制备采用小鼠乳腺癌细胞株（4T1）建立动物肿瘤模型。
将4T1细胞以1×10^6个细胞/只的浓度接种于小鼠背部皮下，观察肿瘤生长情况。
4. 实验方法（1）对照组：不给予任何药物处理，仅观察肿瘤生长情况。
（2）模型组：给予相同剂量的溶剂，观察肿瘤生长情况。
（3）低剂量组：给予低剂量的抗肿瘤药物，观察肿瘤生长情况。
（4）高剂量组：给予高剂量的抗肿瘤药物，观察肿瘤生长情况。
5. 数据收集与分析（1）观察肿瘤生长情况，记录肿瘤体积、重量等指标。
（2）统计肿瘤生长曲线，分析各组肿瘤生长速度。
（3）采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析，比较各组间差异。
三、实验结果1. 肿瘤生长情况实验结果表明，与对照组相比，模型组、低剂量组和高剂量组的肿瘤体积和重量均显著减小（P<0.05）。
其中，高剂量组的肿瘤体积和重量减小最为明显。
2. 肿瘤生长曲线通过统计肿瘤生长曲线，可以看出高剂量组的肿瘤生长速度明显低于对照组、模型组和低剂量组。
3. 数据分析采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析，结果表明高剂量组与低剂量组、模型组及对照组相比，肿瘤体积和重量差异具有统计学意义（P<0.05）。
四、讨论本实验结果表明，新型抗肿瘤药物对动物肿瘤模型具有显著的抑制作用。
高剂量组的肿瘤体积和重量减小最为明显，说明药物在较高剂量下具有更强的抗肿瘤效果。
小鼠肿瘤模型的原理和方法及流程
小鼠肿瘤模型的原理和方法及流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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常见肿瘤动物模型一览
致癌物
诱发性肿瘤模型——致癌物给予途径
1.涂抹法（皮肤癌） 2.经口给药法（消化道或消化腺) 3.注射法 4.气管灌注法（肺癌） 5.穿线法 6.埋藏法
诱发性肿瘤模型——举例
• 1.肺癌（Carcinoma of the lung)
• [简述]：在实验功物身上诱发肺癌，要比诱发其他肿 瘤困难得多，诱癌率低，呼吸道给药的方法常常诱发 多种肺外肿瘤而不是肺肿瘤。 • [方法]： ①二乙基硝胺(DEN)诱发小鼠肺癌：小鼠每周皮下注 射1％DEN水溶液1次，每次剂量为56mg／kg； ②乌拉坦诱发肺腺癌：小鼠(A系，1-1.5月龄)每次每 只腹腔注入马拉坦生理盐水液0.1-0.3ml，间隔3-5日 再注，共注2-3个月每只小鼠用量约为100mg
[特点]： • ①DEN总量达868mg，观察时间为100天，发癌 率可达40％ ，DEN总量达1176mg，观察时间为 半年时，发癌率可达94％ ，其中支气管鳞状 细胞癌占41％。
• ②乌拉坦注后3个月肺腺癌发生率为100％，且 多数为多发性，诱发肺肿瘤的部位和组织分型 与人类肺肿瘤相近似。
• 2.食管癌（Carcinoma of esophagus)
三.移植性肿瘤动物模型及其研究方法
常用疾病造模方法
常用疾病造模方法一、复制方法和应用动物疾病模型的复制，是用人为的方法，使动物在一定的致病因素（物理的、化学的、生物的）作用下，造成动物组织、器官或全身一定损害，出现某些类似人类疾病的功能、代谢、形态结构方面的变化或各种疾病，通过这种手段来研究人类疾病的发生、发展规律，为研究人类疾病的预防、治疗（包括新药物试用）提供理论依据。
所以动物疾病模型的复制，在医学科学研究中占有十分重要的地位。
目前我国生物医学科学研究中，动物疾病模型主要用于三个方面：即实验生物学、实验病理学和实验治疗学（新药筛选亦属于实验治疗学范畴）。
由于研究目的不同，对于疾病模型的要求也有所区别。
如实验病理学，它着重于研究用某种特定方法复制出某些疾病。
整个疾病复制过程，就是它的研究内容，目的是通过疾病的复制去探讨疾病的病因学和发病原。
而实验治疗学则完全不同，疾病的复制仅是它研究的开始，因为它的主要目的是为了阐明在该病的发生发展过程中，某些治疗措施或药物的疗效如何。
诱发性动物模型的复制方法不外是用生物的、物理的、化学的和各种环境因子作用于动物而产生。
生物学因素包括细菌、病毒、寄生虫、细胞、生物毒素、激素等各种致病原，通过接种而使正常动物发生疾病。
如接种细菌、病毒于敏感动物使其产生各种传染病。
目前已知的150余种人畜共患病提供了极有意义的传染病材料。
从流行病学、病理学或并发症等不同角度研究，首先要充分了解动物与人在疾病易感性和临床表现等方面的同异处。
例如轮状病毒可引起婴儿急性坏死性肠类，犬感染轮状病毒后的表现只是亚临床的。
然而严重威胁幼犬的肠道病毒是细小病毒，而人对细小病毒则并不易感。
物理因素是多方面的。
例如在机械力作用下产生各种外伤性脑损伤、骨折等模型，气压变动复制高空病、潜水病；温度改变产生各种烧伤和冻伤；放射线照射可复制各型放射病，引起免疫功能抑制或诱发Spragae-Dawley 系大鼠乳腺癌；闪光刺激诱发癫痫模型；噪音刺激引起听源性高血压及改变行为记忆功能等。
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型），并将其与直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型作比较。
一、间接肝原位移植瘤模型的制备1. 用新鲜的肝癌外科手术切除标本（来自长海医院，患者为1名47岁男性，病理诊断：肝左叶肝细胞癌，粗梁型，Ⅱ级），在Hanks液中，去除坏死组织和非癌组织后切成1～2 mm3小块。
2. 取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤长到直径约1 cm时切取肿瘤，在Hanks液中，去除坏死组织后切成1～2 mm3小块，裸鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉后，行左上腹横切口，暴露肝脏。
3. 取上述2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠肝右叶深部实质内，全层关腹。
二、直接肝原位移植瘤模型的制备1. 同一例新鲜肝癌手术切除标本，处理方法同皮下移植，裸鼠处理同间接肝原位移植，取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头直接植入裸鼠肝右叶深部实质内。
2. 皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型的制备。
三、病理检查和相关指标检测1. 解剖和组织学检查（1）所有裸鼠接种后，分组分笼饲养，自由进食，每天观察1～2次。
（2）当裸鼠处于全身衰竭状态时处死并作大体解剖，对接种瘤和转移瘤分别进行观察、测量，记录肿瘤侵袭和转移情况，重要器官（主要为肝和肺）经10%中性甲醛固定后，常规石蜡制片，光学显微镜检查。
2. 周围血甲胎蛋白(AFP)检测处死前，均采用摘眼球采血的方法获得血液，用生化法检测AFP的分泌量。
3. 瘤细胞DNA含量分析留取部分移植瘤标本采用流式细胞术进行DNA含量分析。
注意事项目前，肝癌的复发和转移仍然是其术后长期存活的主要障碍。
为了研究肿瘤的转移机制，建立接近于人体的肿瘤动物模型显得尤为重要。
高级病理学：肿瘤的动物实验方法
终止后2-3个月，29个小鼠中４个癌 前病变，4个癌瘤。
（四）应用放谢线等辐射引起实验肿瘤 的方法
1、“X”线照射：
（1）6,500 ~ 13,000伦→照射大鼠骶部时， 前剂量 → 溃疡性“X”射线皮炎 后剂量 → 肉瘤
（上述实验亦可由放射性磷引起）
2、注入放射性物质或辐射 引起皮肤癌、肉瘤、白血病等。
3、日光照射及紫外线照射 日光照射：每天7小时——6-7个月，600小
时以上，裸露部分的皮肤癌变↑↑ 照射剂量增加，癌发生提前,多数量为生
27 - 28大卡 11-15个月出现
33.3大卡 8个月出现
41大卡 耳、鼻、足部、眼部出现
移植瘤甲胎蛋白白蛋白前白蛋白转铁蛋白在人休内证明这种蛋白的产生是困难的但利用裸鼠移植做这方面的研究工作是完全可能的大星等建立了一种胃原发的绒毛膜上皮细胞癌的裸鼠移植瘤株这个瘤株hcg还可产生雌激素孕酮和胎盘性催乳素胎盘性碱性磷酸酶患鼠性腺和乳腺呈现妊娠性变化机能性肿瘤functioningtumor3各种治疗方法的研究1化学药物的筛选
（2）保持了原发瘤的特异蛋白，激素分泌及其 它功能
肝癌、肝母细胞癌 → 甲胎蛋白 结肠癌、直肠癌 → 癌胚抗原 肾癌、肝癌 → 促红细胞生存因子。 绒毛膜上皮细胞癌 → HCG 部分胃癌 → 雌激素受体，铁传递蛋白受体
（3）染色体核型： 保持了人染色体核型——“X“型 （而裸鼠染色体核型——“Λ”型 ） （4）保持了人原发瘤的抗原性 （5）保持了人原发瘤对抗癌药的感受性
肿瘤的动物实验方法
一、肿瘤动物实验的途径：
主要途径有三个 1、自发—— 获得足够大量的动物的自发性肿瘤病例 2、诱发—— 使用各种化学物质或辐射在动物身上引起肿瘤 3、移植—— 将自发或诱发的肿瘤从一个动物接种到另一动
体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验的具体步骤及方法
体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验的具体步骤及方法体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性，最终筛选出具有
一定抗性的细胞克隆。
培养条件
一、
用含10%小牛血清的DMEM培养液，5%CO2，37℃培养。
实验步骤
二、
1. 将CHO细胞培养在含10%血清的DMEM培养液中，先用DOX（阿霉素）0.01
ug/ml 诱导培养CHO细胞3个月。
2. 然后在3个月内逐步增倍DOX的浓度达0.1 ul/ml，接着进行DOX低浓度的筛选。
3. 随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆RC1作CHO和RC1对DOX的剂量-反应
曲线，求CHO和RC1的IC50值。
4. 抗性倍数即为RC1的IC50与CHO的IC50。
三、注意事项
1. 要具备培养细胞的实验室条件，谨防污染。
2. 通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC50值，以确定其实诱导浓度。
3. 采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株，对阿霉素等产生抗性的细胞株，
往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。
肿瘤小鼠造模方法
肿瘤小鼠造模方法肿瘤小鼠模型是研究肿瘤发展、治疗和预防的重要工具。
通过模拟人类肿瘤的形成和发展过程，可以更好地了解肿瘤的病理生理特征，并为肿瘤的早期诊断和治疗提供有益的信息。
下面我们将介绍几种常用的肿瘤小鼠造模方法。
1. 异种移植模型异种移植模型是最常用的肿瘤小鼠模型。
它通过将人类肿瘤细胞或肿瘤组织移植到小鼠体内形成肿瘤。
该方法可以用于研究肿瘤的生长、转移、侵袭和药物敏感性等方面。
在异种移植模型中，首先需要获取人类肿瘤细胞或肿瘤组织样本。
常用的来源包括人类肿瘤细胞株、肿瘤切片、肿瘤移植瘤等。
然后，将这些样本注射到小鼠体内，通常是通过皮下注射、腹腔注射或静脉注射的方式。
注射后，观察肿瘤的生长情况，定期测量肿瘤体积，并进行影像学检测以评估肿瘤的进展和治疗效果。
2. 转基因小鼠模型转基因小鼠模型是通过改变小鼠基因组中的特定基因，使其表达或缺失某种特定基因，从而模拟人类特定基因异常引起的肿瘤。
这种模型常用于研究特定基因对肿瘤发生和发展的影响。
转基因小鼠模型的制备通常分为两个步骤：基因敲除和基因敲入。
基因敲除是指将目标基因从小鼠基因组中彻底删除，而基因敲入是指将目标基因导入小鼠基因组中，使其表达或缺失。
基因敲除通常采用胚胎干细胞技术。
首先，通过体外培养的方法获得小鼠胚胎干细胞，然后，通过基因编辑技术，将目标基因从胚胎干细胞基因组中删除。
最后，将这些基因敲除的胚胎干细胞注入到小鼠的早期胚胎中，使其发育成为具有目标基因敲除的小鼠。
基因敲入通常采用质粒转染、病毒载体转染或基因修复等方法。
通过以上方法，将目标基因导入小鼠的基因组中，使其表达或缺失。
这种模型的制备过程比较复杂，需要专业的实验条件和技术支持。
3. 化学诱导模型化学诱导模型是通过给予小鼠特定的诱癌物，如化学物质或药物，来诱发肿瘤的形成。
这种模型可以模拟某些环境因素或生理机制与肿瘤发生的关系。
在化学诱导模型中，首先选择合适的诱癌物，如DMBA（二甲基苯并[a]芘）、DEN（二乙胺）等。
pdx模型构建方法
pdx模型构建方法
PDX模型构建方法是一种用于研究肿瘤发生和发展的技术。
它可以将人类肿瘤细胞移植到实验动物体内，以模拟肿瘤的发展
过程。
PDX模型构建方法的主要步骤包括：细胞收集、细胞培养、细胞移植、细胞增殖和细胞分析。
首先，细胞收集是PDX模型构建方法的第一步，它需要从患
者体内收集肿瘤细胞。
这些细胞可以从活检标本中收集，也可以
从肿瘤组织中收集。
其次，细胞培养是PDX模型构建方法的第二步，它需要将收
集的肿瘤细胞培养在体外培养基中，以增加细胞的数量。
第三，细胞移植是PDX模型构建方法的第三步，它需要将培
养的肿瘤细胞移植到实验动物体内，以模拟肿瘤的发展过程。
第四，细胞增殖是PDX模型构建方法的第四步，它需要在实
验动物体内观察肿瘤细胞的增殖情况，以了解肿瘤的发展过程。
最后，细胞分析是PDX模型构建方法的最后一步，它需要对
肿瘤细胞进行分子分析，以了解肿瘤的发展机制。
总之，PDX模型构建方法是一种用于研究肿瘤发生和发展的
技术，它包括细胞收集、细胞培养、细胞移植、细胞增殖和细胞
分析五个步骤。
它可以帮助研究人员更好地理解肿瘤的发展机制，为肿瘤治疗提供有效的指导。
如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定
如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定小鼠肿瘤模型的建立及鉴定是癌症研究中非常重要的一步，可以用于研究肿瘤的发生机制、治疗策略以及评估新的抗癌药物。
下面将详细介绍小鼠肿瘤模型的建立及鉴定的方法并提供一些实用的技巧。
肿瘤模型建立的方法主要包括人工移植方法、化学物质诱导方法和遗传工程方法。
一、人工移植方法：1.将人类肿瘤细胞、移植物肿瘤组织或细胞株移植到小鼠体内，可以通过裸鼠或免疫缺陷小鼠模型建立人类肿瘤模型。
当细胞或组织取出并经过相关处理后，通过给小鼠注射或将其移植到小鼠体内，研究人类肿瘤的生长和发展。
2.移植人体肿瘤片段。
3.使用免疫缺陷小鼠模型，如裸鼠、严重联合免疫缺陷小鼠等，可以接受外源组织移植而不会引发排斥反应。
二、化学物质诱导方法：1.化学物质诱导肿瘤模型是通过给予小鼠致癌物质或诱导剂来诱发肿瘤发生。
2.应遵循相关伦理原则使用易获得且时间成本低的致癌物质。
3.诱导剂可通过各种途径给予小鼠，如口服、皮下注射、腹腔注射等。
4.对于使用化学物质诱导的肿瘤模型，需要在给药期间和给药后对小鼠进行定期观察和血液检测，以评估肿瘤的发生和发展情况。
三、遗传工程方法：1.遗传工程方法可利用转基因技术将特定肿瘤相关基因引入小鼠体内，例如，通过敲除或激活肿瘤抑制基因或癌基因等，产生特定类型的肿瘤模型。
2.通过基因敲除、敲入或点突变技术，可改变小鼠体内特定基因的表达水平，以模拟人类肿瘤的发生和发展。
确定小鼠肿瘤模型建立成功后1.观察和检测小鼠是否出现明显的肿瘤体积增大和质地变硬等症状。
2.定期观察小鼠的体重变化，以评估肿瘤对小鼠健康状况的影响。
3.使用体重表、肿瘤质量表等测量工具定期测量肿瘤体积，以评估肿瘤生长速度。
4.进行组织学检测，通过活体组织活检或解剖后进行病理学检测，以确定肿瘤种类和分级。
5.对肿瘤样本进行免疫组织化学染色、分子生物学检测等，以确定肿瘤的分子特征。
总结：建立和鉴定小鼠肿瘤模型是一项复杂的工作，需要专业的知识和技术支持。
肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法.
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瘤株的组织学类型和生长特征趋于稳定，并 能在同系、同种或异种动物体内移植并连续传代。
生长特征，包括接种成活率、生长速度、自 动消退率、宿主寿命与宿主反应等。
细胞系：原代培养物经首次传代成功后即为细 胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系 所组成。
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(3)瘤细胞悬液接种法 如每次需要接种的动物数量较多时，可用瘤细胞 悬液接种:
取几个瘤块 --->除去坏死部分 ---> 混合瘤块 ---> 剪成小块 --->匀浆器单向研匀 ---> 放入无菌容器 ---> 生理盐水稀释成1:3~1:4悬液
每只动物接种0.2ml；整个操作应在30min内完成；每 次抽吸前应将细胞混匀。
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[结果判定] 给药后每天观察肿瘤生长情况，记录发生时 间和位置。 肿瘤结节长到一定程度,每周用脚规测量皮下肿 瘤2次。测定肿块的最大径(a)和最小径(b)。 肿瘤体积(cm3) = ab2/2
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将肿瘤体积变化对时间作出生长曲线,可由曲线 的斜率变化判断药物抑制肿瘤生长的作用,尤其 应观察肿瘤能否完全消退。
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它比前述的自发性和诱发性动物肿瘤更易实施。 现有移植性肿瘤接种成功率可达100%, 可在同一 时间内获得大量(数十至百余只动物)、生长相当 均匀的肿瘤。
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一、动物的选择
移植性肿瘤常用的动物为小鼠、大鼠和地鼠。 研究药物的抗肿瘤作用可选择三种或三种以上小 鼠、大鼠的移植性肿瘤进行实验治疗；抗肿瘤药 物筛选时，每批动物的来源应一致；
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一、诱发性肿瘤动物模型的基本方法
基因工程小鼠肿瘤模型介绍
基因工程小鼠肿瘤模型介绍自发或诱导肿瘤模型都带有相当的随机性、不确定性，产生的肿瘤类型、特征也经常不能满足研究的需要。
随着基因工程技术的发展成熟，对小鼠进行遗传修饰—包括转入新基因、删除基因、基因替换等成为可能。
研究发现，在小鼠上过表达某些致癌基因或者敲除某些抑癌基因可以导致小鼠易发肿瘤。
于是利用基因工程手段来研发各类小鼠肿瘤模型的工作越来越多。
比如 p53 基因敲除的小鼠，纯合体一般在 3、4 个月内发生各类肿瘤，杂合体在6 个月之后也多发肿瘤。
组织特异性地敲除 Pten 基因，则导致这种特定的组织中高发肿瘤。
过表达 Ras、Myc 等这些癌基因的转基因鼠也易发各种肿瘤。
人们可以把在临床研究中发现的与肿瘤相关的基因突变通过基因工程手段，如转基因、基因编辑等方法复现在小鼠基因组上，验证这种突变的致癌作用，以及探寻该种基因突变驱动的肿瘤的生物标志物（Biomarker）、诊断和治疗方法等。
基因修饰小鼠模型（genetically engineered mouse model, GEMM）产生的肿瘤也可以移植到相同遗传背景的其它小鼠体内，建立异体移植瘤模型，这被称为 GDA（GEM-derived allograft）模型。
这里有个非常好的栗子：GEM 肿瘤模型的例子即KPC（LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre）小鼠。
KrasG12D是人类肿瘤中常见的Kras 基因的活化突变体，Trp53R172H则是 p53 基因的突变体。
在这两个基因编码区和启动子之间插入 loxp-Stop-loxp 序列，然后将这两个基因构件转入小鼠基因组，制作出双转基因小鼠。
由于「Stop」序列的存在，这两个基因并不会被转录。
当双转基因小鼠再与Pdx-Cre 小鼠配在一起，Pdx 驱动表达元件使Cre 重组酶得以在胰腺组织特异表达，切除一对loxp 之间的「Stop」序列，KrasG12D和Trp53G12D基因开始表达，其结果是小鼠在2、3 个月内几乎都有胰腺肿瘤发生，并有肿瘤转移现象。
设计两种制备胆囊癌模型的实验方法
设计两种制备胆囊癌模型的实验方法胆囊癌（Gallbladder cancer，GBC）是一种高度恶性的肿瘤，常常发生于中老年人。
该疾病发病率相对较低，但其对患者健康的危害非常大，常常导致严重的并发症，并在短时间内迅速发展和扩散。
为了研究胆囊癌的病理生理机制，应该建立一种实验模型，该实验模型能够模拟人类胆囊癌的发病过程，并可用于新药研发和治疗方法的优化。
本文将介绍两种制备胆囊癌模型的实验方法。
一、动物模型法1. 思路及方法本方法通过在实验动物体内植入癌细胞或直接注射致癌物质来建立胆囊癌模型。
实验材料主要包括小鼠、大鼠、兔子等常用实验动物和人工培养的肝癌细胞株、胆囊癌细胞株等。
具体实验流程如下：（1）动物准备根据实验需要选择合适的实验动物，并按照实验室动物管理规定进行饲养、麻醉等操作。
（2）细胞培养获取胆囊癌细胞株，进行人工培养至指定密度。
收集癌细胞，稀释至适宜浓度。
（3）植入癌细胞将癌细胞移植至实验动物的胆囊内或胆囊周围组织中，通过术后监测动物的体重、活动度、食欲等生理指标来评估实验效果。
（4）注射致癌物质将致癌物质注射至实验动物的胆囊内或胆囊周围组织中，随访动物的健康状况，观察动物出现的癌症病变。
2. 优缺点该方法操作简单，成本较低；可以制备各种类型的模型，如胆囊切除前后、炎症后、基因修饰等模型；但是由于动物模型的复杂性以及饲养难度大、费用高，此方法不适用于大规模的高通量筛选。
二、胆囊癌细胞移植法1. 思路及方法该方法利用人工培养的胆囊癌细胞移植到另外一只动物体内，通常移植到裸鼠、同种异体小鼠中，形成胆囊癌模型。
具体实验流程如下：（1）胆囊癌细胞培养获取人工培养的胆囊癌细胞，进行文化和扩增，检测细胞的活性。
（2）裸鼠/小鼠建立选用合适的实验动物进行裸鼠或小鼠建立，检测鼠体前列腺特异蛋白（PSA）基因和CD1d缺陷，避免自身免疫反应。
（3）细胞移植将培养好的胆囊癌细胞移植至裸鼠或小鼠身体内部，监测实验动物的体重、活动、食欲等指标，并定期观察生长的癌瘤。
动物肿瘤造模实验方案
动物肿瘤造模实验方案
动物肿瘤造模实验是一种常用的动物实验方法，用于研究肿瘤的发生、生长、转移和治疗方案。
下面是一个可能的动物肿瘤造模实验方案：
1. 选择动物模型：常用的动物模型包括小鼠、大鼠和兔子等。
根据研究目的和肿瘤类型选择合适的动物模型。
2. 选择肿瘤细胞系：常用的肿瘤细胞包括人源性肿瘤细胞系和动物源性肿瘤细胞系。
根据研究目的和肿瘤类型选择合适的肿瘤细胞系。
3. 准备肿瘤细胞：将肿瘤细胞培养至合适浓度，并用生理盐水或其它合适的载体悬浮。
4. 动物模型建立：将肿瘤细胞注射到动物体内建立肿瘤模型。
常用的注射方式包括皮下、脾脏或其他器官内注射。
5. 观察肿瘤生长：观察肿瘤模型的生长情况，包括肿瘤体积、肿瘤质地、肿瘤血液供应等。
6. 取样分析：在不同时间点取样，对肿瘤模型进行分析，包括病理学检查、免疫组化分析、分子生物学检测等。
7. 肿瘤治疗试验：根据研究目的，对肿瘤模型进行治疗试验，可以采用化疗、放疗、免疫治疗或其它治疗方法。
8. 结果分析：根据实验结果进行数据分析和统计，并对实验结果进行解读和讨论。
需要注意的是，动物实验需要遵守伦理规范和相关法律法规，确保实验过程的合法性和道德性，并尽量减少对动物的伤害和痛苦。
在进行动物肿瘤造模实验时，应严格按照相关实验规范进行操作，并有专业实验人员进行监督和管理。
乳腺癌实验动物模型综述
乳腺癌实验动物模型综述乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁女性的健康。
为了更好地理解乳腺癌的发病机制、评估治疗效果和开发新的治疗策略，建立乳腺癌实验动物模型是至关重要的。
本文将综述乳腺癌实验动物模型的发展历程、种类和特点。
基因工程模型：基因工程模型是通过改变实验动物的基因来模拟人类乳腺癌的发生和发展。
这些基因包括BRCABRCAp53等与乳腺癌发生密切相关的基因。
基因工程模型具有可控性强、发病机制明确等优点，但需要一定的时间和技术条件。
化学诱导模型：化学诱导模型是通过给予实验动物化学物质来诱导乳腺癌的发生。
常用的化学物质包括DMBA、DES等。
化学诱导模型具有操作简单、发病时间短等优点，但发病机制不如基因工程模型明确。
移植模型：移植模型是将人类乳腺癌组织移植到实验动物体内，从而建立乳腺癌模型。
移植模型具有发病机制明确、实验周期短等优点，但需要严格的无菌条件和操作技术。
发病机制研究：乳腺癌实验动物模型可用于研究乳腺癌的发病机制，如细胞增殖、凋亡、血管生成等。
药物筛选：乳腺癌实验动物模型可用于筛选抗乳腺癌药物，为临床治疗提供参考。
放疗和化疗研究：乳腺癌实验动物模型可用于研究放疗和化疗对乳腺癌的治疗效果和副作用。
随着科技的不断进步，乳腺癌实验动物模型将更加精细和多样化，为乳腺癌的研究和治疗提供更多的可能性。
同时，我们也需要加强伦理审查和规范实验动物的使用，确保实验动物的福利和数据的可靠性。
未来，我们期待通过使用先进的基因编辑技术和干细胞技术，创建更加真实的乳腺癌实验动物模型，以推动我们对乳腺癌发病机制的理解和治疗策略的开发。
乳腺癌实验动物模型在研究乳腺癌的发病机制、评估治疗效果和开发新的治疗策略方面具有重要作用。
不同的乳腺癌实验动物模型各有其优点和局限性，需要根据具体的研究目的和条件选择合适的模型。
我们也需要实验动物的福利和使用规范，确保实验结果的可靠性。
未来，随着科技的发展，我们期待创建出更加精细和多样化的乳腺癌实验动物模型，以推动我们对乳腺癌的理解和治疗。
肿瘤动物模型常用建立方法
肿瘤动物模型常用建立方法肿瘤动物模型是用于研究和测试肿瘤发生、发展和治疗的工具。
建立适当的肿瘤动物模型对于揭示肿瘤的生物学特性和评估各种治疗方法的有效性至关重要。
以下是常用的肿瘤动物模型建立方法。
1. 移植瘤模型：这是最常见和简化的动物模型建立方法之一。
它涉及在动物体内或体外移植人类或动物来源的肿瘤细胞株。
这些细胞可以从肿瘤组织中分离得到，并在实验室中培养。
移植瘤模型的优点是易于建立和控制，但它不能反映肿瘤的整个发展过程。
2. 转基因模型：转基因动物模型是通过将特定的基因突变导入小鼠或其他动物体内来模拟肿瘤。
这些基因突变可以是人类肿瘤相关基因的突变，也可以是具有肿瘤形成潜能的其他基因的突变。
转基因模型可以提供更真实的肿瘤发展和治疗反应，但其建立过程相对复杂和耗时。
3. 化学诱发模型：这种方法通过给动物暴露于化学物质，如化学致癌物质或腺病毒，来诱发肿瘤的发生。
这些化学物质可以引起DNA损伤或基因突变，从而促进肿瘤的形成。
化学诱导模型可以提供与人类肿瘤相似的病理特征，但其应用范围受到化学物质的选择和剂量的限制。
4. 遗传模型：遗传模型使用特定品系的小鼠或其他动物，这些动物因其自身的遗传缺陷而具有高发生肿瘤的风险。
这些遗传模型可以是自然突变品系，也可以是通过基因工程技术引入的遗传缺陷。
遗传模型可以提供对特定肿瘤类型和易感因素的研究，但其适用范围受到特定品系的限制。
以上是常见的肿瘤动物模型建立方法。
根据具体研究目的和研究条件的不同，选择合适的肿瘤动物模型对于取得可靠的研究结果至关重要。
不同模型的优劣势需要综合考虑，并根据研究的需要进行合理选择。
小鼠肿瘤模型的建立方法及评价手段
小鼠肿瘤模型的建立方法及评价手段小鼠肿瘤模型的建立方法及评价手段癌症是当今世界范围内的一种重大疾病，而且其影响范围越来越广泛，与此同时，由于癌症的病发机制尚不完全明确，因此对于防治癌症的研究和探索主要依靠动物模型研究。
小鼠肿瘤模型是目前研究肿瘤发病机制和癌症治疗的重要手段，在注射人类肿瘤细胞后，小鼠可呈现人体肿瘤组织细胞移植的特性。
相对于人体肿瘤实验和传统的肿瘤细胞培养，小鼠肿瘤模型的优异之处在于能够创造肿瘤微环境，仿真人体肿瘤的生长和转移过程，以提高癌症的治疗效果。
本文将详细介绍小鼠肿瘤模型的建立方法以及常见的评价手段。
一、小鼠肿瘤模型的建立方法1.1 人体肿瘤细胞移植模型人体肿瘤细胞移植模型以人类肿瘤细胞在裸鼠或小鼠体内移植后的肿瘤实体为基础，分为无血液供应的固体肿瘤模型和有血液供应的血液源性肿瘤模型两种。
在移植人类肿瘤细胞时，要确保细胞的活力和数量，同时条件控制的严谨性也是建立模型成功的关键。
以草甸欧豆荚腺癌细胞(A549)为例，在室温下用胰蛋白酶消化并在热水浴中加温25分钟，离心后取上清液，将细胞恢复在人工营养的体外环境中培养至稳定生长。
然后注射生长正常的A549细胞到裸鼠的皮下尽处，便成为一个人体肿瘤细胞移植模型。
1.2 化学诱导肿瘤模型化学诱导肿瘤模型是通过注射某些化学物质来诱导荷尔蒙依赖性肿瘤，可以有效地模拟荷尔蒙依赖性肿瘤的发病原因及其恶化过程。
在采用二甲基亚硝胺(DMN)诱导大鼠膀胱癌时，过程如下：将DMN溶于苏木精中，经过研磨混合后注射大鼠，每次剂量控制在4-25mg/kg，2个月后检查其膀胱肿瘤的形成情况。
化学物质注射后，不同的化学物质会引起不同部位的肿瘤，如DMN会引起膀胱癌。
1.3 基因敲除技术建立小鼠肿瘤模型目前最为先进的小鼠肿瘤模型是通过基因敲除技术构建。
通过选择与癌症相关的基因，并在小鼠体内干扰其功能，从而让小鼠形成癌症。
其中胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)是一种与人类肿瘤密切相关的基因，在建立小鼠肿瘤模型时被广泛用于其基因干扰的研究。
python肿瘤模型三种方法参数调优
python肿瘤模型三种方法参数调优Python肿瘤模型三种方法参数调优随着计算机技术的不断发展，计算机模拟已经成为生物医学领域中不可或缺的一部分。
在癌症研究中，肿瘤模型是一种重要的工具，可以帮助科学家更好地理解肿瘤的形成和发展过程，并探索新的治疗方法。
而Python作为一种高级编程语言，也被广泛应用于生物医学领域中。
本文将介绍Python肿瘤模型三种方法参数调优的详细步骤。
一、背景介绍1. 肿瘤模型肿瘤模型是指用数学公式和计算机程序来描述肿瘤生长和发展过程的数学模型。
根据不同的目标和需求，可以采用不同类型的数学模型来描述肿瘤生长过程。
常见的肿瘤模型包括：Gompertz 模型、Logistic 模型、Lotka-Volterra 模型等。
2. PythonPython是一种高级编程语言，具有简单易学、代码可读性强等特点，在科学计算、数据分析等领域广泛应用。
Python提供了丰富的科学计算库和可视化工具，如NumPy、SciPy、Matplotlib等，可以方便地进行数据处理和结果展示。
二、Python肿瘤模型三种方法参数调优1. Gompertz 模型Gompertz 模型是一种常用的肿瘤生长模型，可以描述肿瘤生长速率随时间而减缓的特点。
Gompertz 模型的数学公式为：V(t) = V0 * exp(-exp(a*(t-t0)+1))其中，V(t)表示时间t时刻的肿瘤体积；V0表示初始体积；a和t0是模型参数。
调优步骤如下：Step 1：导入所需库```import numpy as npimport matplotlib.pyplot as pltfrom scipy.optimize import curve_fit```Step 2：生成模拟数据```# 生成时间序列t = np.linspace(0, 20, 100)# 设置初始体积和模型参数V0 = 100a = 0.05t0 = 5# 根据公式计算体积序列V = V0 * np.exp(-np.exp(a*(t-t0)+1)) + np.random.normal(0, 10, len(t))```Step 3：定义函数并拟合曲线```# 定义函数def gompertz_func(t, Vmax, a, t0):return Vmax * np.exp(-np.exp(a*(t-t0)+1))# 拟合曲线popt, pcov = curve_fit(gompertz_func, t, V, p0=[200, 0.1, 10]) ```Step 4：可视化结果```# 绘制原始数据和拟合曲线plt.plot(t, V, 'b.', label='data')plt.plot(t, gompertz_func(t, *popt), 'r-', label='fit')plt.legend()plt.show()```2. Logistic 模型Logistic 模型是一种常用的肿瘤生长模型，可以描述肿瘤生长速率随时间而减缓，并最终趋于饱和的特点。
肿瘤移植(TT)小鼠模型具体方法及步骤
肿瘤移植(TT)小鼠模型具体方法及步骤原型物种人来源黑色素瘤B16细胞导致的肿瘤肝转移及肺转移模式动物品系SPF级C57BL/6小鼠，健康，雄性，4~6W，体重为18g~20g。
实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期4-6 weeks建模方法恶性黑色素瘤(malignant melanoma MM)的发病率较低, 但恶性度高, 转移早而广泛，且对常规放疗有较强抗性，临床治疗颇为棘手，目前尚无有效的治疗方法，其常规治疗主要有免疫治疗、化疗、生物治疗、近距放射疗法和外束放射疗法等。
近年恶性黑素瘤发病率和死亡率明显上升，肿瘤侵袭及转移是其治疗失败的主要原因，很大一部分肿瘤病人在初治时已有微小的或潜在的转移病灶。
为了能彻底治愈癌症，控制肿瘤侵袭和转移是治疗的关键。
黑色素瘤B16细胞株是生长在C57BL/6小鼠耳根部的自发性肿瘤，C57BL/6小鼠的B16移植瘤和转移瘤模型是肿瘤研究的常用模型之一。
小鼠成瘤实验：取对数生长的细胞，胰酶消化后培养基重悬收集细胞，用无菌磷酸盐缓冲液(PBS)调整细胞密度备用。
选用C57BL/6J 小鼠建立B16 细胞肿瘤转移模型，每组10 只。
试验组小鼠尾静脉注射浓度为5×10 6 /L 的B16 细胞悬液0.1ml，每组于接种细胞次日起腹腔注射药物，10 日后改为隔日注射一次。
于第21天，处死动物，取肝脏及肺组织，解剖镜下计数转移的结节数量，数码相机拍照，并对各组小鼠肺转移结节的数目进行统计学分析。
应用肿瘤转移疾病模型模型评价各组小鼠尾静脉注射接种肿瘤细胞后，生长良好，体重无明显变化，组间无明显差异。
第21 天时处死小鼠，取肝脏及肺组织，解剖镜下观察，可发现肝脏及肺组织有明显转移的结节。
解剖镜下计数转移的结节数量，可见给药组小鼠肝脏及肺结节数目明显低于阴性对照组。
取材：1.实验结束后每组取肝组织、肺组织和肿瘤组织，每个组织从瘤体中央分为2份，一份置于甲醛固定；另一份液氮冷冻置于-80度保存，用于分子生物学和WB检测等等。
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肿瘤模型的复制方法
复制动物肿瘤的方法很多，如将实验动物用放射线照射或静脉、局部注射放射性同位素；使用各种化学致癌剂（烷化剂、多环芳香烃类、芳香胺类、氨基偶氮染料、亚硝胺类）；使用植物毒素（如苏铁素、黄樟素等）；使用金属（如铬、镍、砷、镉等）；使用RNA和DNA 肿瘤病毒；使用多种致癌性霉菌毒素（其中致癌作用最强者为黄曲霉素）等，均可诱发成各种肿瘤。
诱发性肿瘤模型其数量在诱发性动物模型中占首位。
一般是利用致癌物质通过口服、注入、埋藏和涂抹等方式使动物发生肿瘤。
能诱发动物肿瘤的病毒也有不少报导，例如小鼠白血病病毒（MLV）、鸡白血病病毒（ALV）和猫白血病病毒（FLV）分别能引起大小鼠，鸡和猫白血病。
Rous鸡肉瘤病毒可使田鼠、鸡、鸭、鹌鹑、猴、蛇等多种动物发生肉瘤。
猫肉瘤肉毒（FSV）可使大鼠、猫、犬和猴发生肉瘤。
人类腺病毒能诱发小鼠、田鼠肉瘤和淋巴瘤。
（一）诱发性肿瘤动物模型
1．肝癌二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌：取体重250g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘。
按性别分笼饲养。
除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用。
共约4个月可诱发成肝癌。
或单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。
4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌：用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2不应超过1.5～2mg/kg，4～6月就有大量的肝癌诱发成功。
2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌：给成年大鼠含0.03%2AAF标准饲料。
每日每平均2～3mg2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。
二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：用剂量为每日0.3～14mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予，6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。
亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌：用1%OAAF苯溶液（约0.1ml含1mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。
实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。
或用2.5mgOAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。
黄曲霉素诱发大鼠肝癌：每日饲料中含0.001～0.015ppm，混入饲料中喂6个月后，肝癌诱发率达80％。
2．胃癌甲基胆蒽诱发小鼠胃癌：取20g左右的小鼠，无菌手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。
含MC的线结是用普通细线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。
MC浓度为0.05～0.1g20-甲基胆蒽内浸入10～20根线。
手术埋线后4～8个月可诱发成功胃癌。
用不对称亚硝胺，剂量为0.25ml/kg体重，3个月后全部动物发生前胃乳头状癌，7～8个月后有85～100%发生前胃癌。
昆明种最敏感。
A系次之，615系小鼠敏感性最差。
此外还可用甲基亚硝基醋酸尿素给BD大鼠饮水中加2mg/kg体重，每周5次饮用，520天后全部大鼠均发生了腺胃癌。
3．食管癌甲基苄基亚硝胺（MBNA）诱发大鼠食管癌：取体重100g以上的Wistar大鼠，任其食用含甲基苄基亚硝胺的饮水，并将MBNA掺入饲料中使每日摄入量达0.75～1.5mg/kg体重。
80～100天可诱发成食管癌。
也可用二烃黄樟素（Dihydrosafrole），它是一种制备啤酒的调味品，在大鼠饲料中加入百万分之二千五百至一万（2500～10000ppm）黄樟素，就能引起20～75%的食管癌。
用0.2%或0.005%的甲基苄基亚硝胺水溶液，给动物经口灌喂，每天一次，大鼠灌注剂量为1mg/kg体重，至第27天即发现一例食管乳头状瘤，154天发现第一例食管癌，11个月食管癌的发生率为53%。
4．肺癌二乙基亚硝胺（DEN）诱发小鼠肺癌：小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次剂量56mg/kg，DEN总剂量达到868mg，观察时间为100天左右时，发癌率可达40%。
而DEN总剂量达到1176mg，观察时间为半年左右时；发癌率可达94%。
乌拉坦诱发肺腺癌：小鼠（A系，1～11/2月龄）较大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%乌拉坦生理盐水液0.1～0.3ml，间隔3～5日再注，共注2～3个月，每只小鼠用量约为100mg，注后3个月肺腺癌发生率为100%，而且多数为多发性，这种诱发瘤为良性。
此外还可用气管内注入苯并芘、硫酸铵气溶胶、甲基胆蒽等诱发肺癌。
如猴气管内注入3，4苯并芘（苯并花为3～15mg与等量之Fe2O3混合液），每周一次，共10次，6只猴中有2只诱发肺的鳞状上皮癌。
亦有人用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入，13个月后所有大鼠都发生了肺腺癌。
用0.2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内注入，每次0.1ml（含甲基胆蒽5mg）每周一次，共6次，53周后有62.5%动物发生了肺癌。
5．鼻咽癌二甲基胆蒽（MC）诱发大鼠鼻咽癌：取直径2～3mm的硬质塑米管，在酒精灯上小火拉成锥形，每段长约3.5cm，管内填以结晶体MC。
小管一端用火封闭，以防药物外溢，尖端用针刺数孔，使MC能从小妃溢出。
取体重120g左右的大白鼠，雌雄均可，
乙醚麻醉后，由前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔较小管粗端为小的特点，稍加用力，迫使小管全部进入鼻腔内，其尖部可达鼻咽腔。
不需另加固定，即可使小管长期留于鼻腔内。
待到预定时间（半年以上），或动物自行死亡时，到其鼻咽部，10%福尔马林固定，脱钙后，石蜡包埋，进行连续切片。
发癌率可达60%以上。
二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌：取120g左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用磨平针尖的8号针头，从前鼻孔轻轻插入，针尖可达鼻咽腔。
经注射器灌注用1%吐温-80新配的33.3%DEN混悬液0.02ml(含DEN6.7mg)每周1次，共15～20次，可诱发成鼻咽癌。
6．宫颈癌取雌性小白鼠，以附有0.1mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下，借助于阴道扩张器及磨纯的弯针，将线穿入宫颈。
经右宫角背部穿出，使线结固定于宫颈口。
线的另一端则固定于背部肌肉，缝合皮肤，挂线以后，同日开始连续注射青霉素2～3天。
以防术后感染。
至一定时间（半年左右）处死动物，宫颈组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片。
7．结肠癌给四周龄的雄性大白鼠，皮下注射二甲基苄肼（Dimethlhydrazine,DMH）每周一次，连续21周，每次DMH21mg/kg。
最后一次给药后1～4周，处死动物。
降结肠部位用Bouin液固定，脱水，石蜡包埋，切片。
所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液，并加EDTA37mg，用氢氧化纳（0.1N）液将pH调至6.5备用。
（二）移植性肿瘤动物模型
目前临床所用的抗肿瘤药中，大多数是经动物移植性肿瘤试验筛选而发现的。
应用动物移植性肿瘤筛选药物的优点是：使一群动物同时接种同样量的瘤细胞，生长速率比较一致，个体差异较小，接种成活率近100%，对宿主的影响相类似，易于客观判断疗效，可在同种或同品系动物中连续移植，长期保留供试验用，试验周期一般均较短，试验条件易于控制等。
因此目前抗肿瘤药筛选大多数采用动物移植瘤作为筛选模型。
目前世界上保存的动物移植肿瘤约有400株，但筛选试验常用者仅20～30种。
据1984年统计，我国在同系、同种动物中已建立各种动物和人的常见的瘤株64个。
例如小鼠肺腺瘤（HP615）、小鼠子宫颈瘤27号（U27）、小鼠脑瘤22（B22）、小鼠淋巴细胞性血病（L615）、裸鼠人肝瘤移植瘤和人脑恶性胶质细胞瘤（NCS—1）等。
动物肿瘤可通过移植传代而培养出所需要的肿瘤细胞株。
瘤株是一种组织学类型和生长特性已趋稳定，并能在同系或同种动物中连续传代的肿瘤细胞模型。
肿瘤移植于健康动物，
相当于活体组织培养，可长期保存瘤种，供实验所用。
实验中常用腹水瘤和实体瘤两种方式进行移植。
对于会产生腹水的肿瘤，可将其一定数量的细胞注入受体动物腹腔形成腹水瘤或产生腹水。
实体瘤移植也是在无菌条件下，把实体瘤切成2～3mm小块，植于受体动物皮下。
自体式同系动物肿瘤植不产生排导现象。
同种动物移植时可结合注射肾上腺皮质激素、抗肿瘤药物和适当量的放射等方法，降低宿主免疫排斥反应。
异种动物肿瘤移植始于Leidy （1834年），难度较大。
近50年来异体移植常用下列方法：①接种于皮下或粘膜下，优点是易观察，但排斥作用大，效果欠佳。
②动物肿瘤移植于鸡胚尿囊膜。
特点是较易存活，但人类肿瘤无成功报导。
③人类肿瘤接种于大鼠、豚鼠、兔的眼前房。
缺点是细胞不能传代。
④移植于动物脑内。
肿瘤生长快，但难度大，不易观察。
1983年Bodgen等人用无胸腺大鼠肾包膜下移植人体肿瘤筛选新药，全部实验仅需11天，且命中率高，这项工作为临床病人的药物筛选带来了福音。
60年代以来国外已建立可移植性人体肿瘤数百种，这些瘤株能防止由传代伴随的形成和功能的退化。
1969年Rygaaid首次成功地将人类肿瘤移于无胸腺裸小鼠，这为异种动物肿瘤移植开辟了新局面。
由于裸小鼠缺乏T淋巴细胞功能，所以是极为理想的肿瘤移植模型材料。