各级菌种制作方法

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菌种怎么制作,菌种保藏方法

菌种怎么制作，菌种保藏方法1、将土豆切成块，放入烧杯中煮半个多小时，煮好后过滤溶液备用。

2、将琼脂放入溶液中，然后重新将其烧开，琼脂完全溶化后继续煮一段时间。

3、煮好后将汁液分放至试管内，并用高压锅消毒杀菌，消毒后斜放试管，待凝固后开始接种。

4、用酒精对嫩蘑菇进行杀菌，并在无菌箱内将其切成小块，切好后可接种至琼脂基质上。

5、堵上试管口，将琼脂基质放入培养箱，长满菌丝后便可形成一级菌种。

一、菌种怎么制作1、一级菌种（1）向烧杯内放入切成块的土豆，然后煮30多分钟，煮好后过滤溶液备用。

（2）向溶液内放入琼脂，再将其烧开，待琼脂完全溶化后继续煮一段时间。

（3）煮好后，将汁液分放至试管，再用高压锅消毒杀菌。

消毒后将试管斜放，直到冷凉凝固后即可开始接种。

（4）用酒精对嫩蘑菇做杀菌处理，然后在无菌箱内切成小块，接种至琼脂基质上面。

（5）用塞子堵上试管口，再将琼脂基质放入培养箱内，待长满菌丝后即可形成一级菌种。

2、二级菌种（1）将煮熟的大豆和谷粒置于无菌的条件下晾干，再装入经过高温杀菌的玻璃瓶内。

（2）将瓶子封口，放入高压锅中，经高压灭菌后放在无菌室冷凉。

（3）将培养瓶放至无菌箱内，再放入一级菌种，用的小匙挖出黄豆大小的菌种接种入玻璃瓶。

（4）接种后要封口，再将玻璃瓶放到培养室中，待长满菌丝后即可备用。

3、三级菌种（1）制备方法与二级菌种基本一致，培养基可使用煮熟的麦粒、玉米粒及棉籽。

（2）三级菌种的菌丝长满后即可取出来培育，经历三级菌种的培育后可完全制成平菇菌。

二、菌种保藏方法1、斜面低温保藏法将菌种接种至适宜的固体斜面培养基上，待菌种充分生长后用油纸将棉塞部分包扎好，然后放入冰箱，温度控制在2-8°C即可。

2、甘油管保存法（1）将80%甘油用高压蒸汽做灭菌处理，再将菌种放置在斜面培养基上培养，用无菌水制成高浓度的菌悬液。

（2）将1毫升甘油与菌液混匀，使甘油的浓度达到10-30%，然后放在-70°C的环境中冻存。

食用菌菌种分类和固液菌种制作方法

食用菌菌种分类和固液菌种制作方法一、固体菌种母种→原种→栽培种1、母种母种：在试管或平皿琼脂培养基上生长的纯菌种称为母种，因为是用试管制作的，也称之为试管种，因为是最早一级的菌种，也称之为一级种。

试管的规格一般为22mm×220mm、20mm×200mm、18mm×180mm三种，如果采用液体菌种建议使用18mm×180mm，封口用棉花或硅胶塞。

平皿的规格为直径90mm，封口用Parafilm封口膜。

为了扩大生产，母种可以转接成更多的母种，叫做母种的扩繁。

在各级菌种中，母种的纯度最高，决不允许有杂菌污染。

衰老和退化的母种也不能投入生产，出现不纯或者退化的母种要进行提纯和复壮，提纯和复壮不能达到效果就应该淘汰。

母种的来源有两种，一种是从科研单位及菌种生产机构购买的，一种是组织或孢子分离后经出菇试验确认遗传稳定和高产的母种。

母种培养时间：7-10天，不同品种有差异。

食用菌菌种分类和固液菌种制作方法2、原种原种：原种是母种的菌丝体转接到棉籽壳、玉米芯、木屑或高粱粒、麦粒、枝条等固体培养基上培养而成的食用菌菌种，也叫做二级种。

原种制作的容器有：500ml罐头瓶、750ml罐头瓶、点滴瓶、专用菌种瓶等，罐头瓶封口用菌袋裁成见方封口，点滴瓶用棉花封口。

原种的用途是扩繁栽培种用的，即母种→原种→栽培种→栽培袋，也可以用原种直接转接到栽培袋中，即：母种→原种→栽培袋，这样不仅能够缩短菌种制作周期，也能更好的保证菌种纯度。

原种培养时间：20-30天，根据制作容器和品种不同而有差异。

3、栽培种栽培种：原种经过转接扩大繁殖后称之为栽培种，栽培种用于转接栽培袋，是生产中使用量最大的食用菌菌种，也叫做三级种。

三级种制作的容器有：500ml罐头瓶、750ml罐头瓶、点滴瓶、专用菌种瓶等，除了这些和原种一样的容器，栽培种使用最多的是15cm×30cm、17cm×33cm的折角袋，封口用棉花或者专用的无棉盖体。

菌种生产类型及生产流程

菌种生产类型及生产流程菌种生产工艺流程食用菌制种工艺流程图一级种培养基制备高压灭菌接种培养筛选提纯原始种中试后确定一级种保存孢子或组织分离一级种转管扩大菌种二级种培养基制备高压灭菌接种培养二级菌种罐头瓶菌种袋三级种培养基制备高压或常压灭菌接种三级菌种栽培培养菌种生产类型及生产流程制种设备器材药品一制种设备1
菌种生产类型及生产流程—菌种生产类型
一、菌种生产类型食用菌菌种是通过三级逐步扩大培养的方式来生产的，所以通常把菌种分为一级菌种、二级菌种和三级菌种。 1．一级菌种从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体，在生产上称一级菌种菌丝体或一级菌种或试管种或母种。一级菌种是在实验室内经分离提纯后获得的菌种，培育技术较复杂，对制种设备要求较高，通常由专门的育种单位来培养。
菌种生产类型及生产流程—制种设备、器材、药品
（二）基本器具玻璃器皿：试管、三角瓶、培养皿、漏斗、烧杯、酒精灯、菌种瓶、试剂瓶等衡量器具：天平、杆秤、磅秤、量杯、量筒、移液管等基础设备：药品橱、玻璃器皿橱、一级种配料工作台……
菌种生产类型及生产流程—制种设
备、器材、药品
（三）基本药品一级菌种常用化学药剂：化学纯的葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、KH2PO4、K2HPO4、MgSO4、 NaOH、HCl、麦芽浸出膏、酵母浸出膏、广泛或精密pH试纸等。二、三级菌种常用化学药品：工业级的石膏、碳酸钙、石灰、MgSO4、过磷酸钙、 KH2PO4、K2HPO4等。
菌种生产类型及生产流程—菌种生产类型
2．二级菌种由一级菌种扩大繁殖成的菌丝体，有的称为原种，它是一级菌种和三级菌种之间的过度种。 3、三级菌种由二级菌种扩大繁殖成的菌丝体，是直接用于栽培的菌种，又称栽培种或生产种。二、三级菌种的培养基及其制种过程大同小异。

不同类型平菇菌种制作方法

不同类型平菇菌种制作方法
棉籽壳菌种、麦粒菌种、枝条菌种、液体菌种在发菌、出菇以及接种成本、效率等方面都具有很大的差异，为提高种植户的经济效益，相关专家整理出了不同类型平菇菌种制作的方法，供广大种植朋友们参考。

1.麦粒种制备
配方：麦粒99%，石膏1%，麦粒先用温水加1%石灰浸泡至无白心，然后捞出加石膏拌匀装瓶(350g/瓶)，126°C灭菌120min，冷却后无菌接种(每瓶接种量为四分之一平板母种)，接种后25°C恒温培养至菌丝满瓶。

2.棉籽壳种制备
配方：棉籽壳85%，麸皮13%，石灰1%，石膏1%，原料预湿后拌料装袋(17cmX35cm聚丙烯袋，每袋装湿料0.9kg)，料含水量为62%，料装袋后于126°C灭菌120min，两头接种，每个平板菌种接2袋。

接种后25°C恒温培养至菌丝满袋。

3.枝条种制备
杨木枝条（规格12cmx0.4cmx0.7cm）扎捆后放入桶内，再加1%石灰水浸泡24h以上，捞出沥水撒麸皮，使每根枝条均匀粘上麸皮后装袋。

枝条装袋前后各在袋底部和顶部铺一层棉籽壳种培养基。

装袋后126°C灭菌120min，冷却后一头接种（袋接种量为四分之一平板母种）。

接种后于25°C恒温培养至菌丝满袋。

4.液体种制备
培养基配方：葡萄糖20g、蛋白胨2g、硫酸镁0.5g、氯化钙0.1g、磷酸二氢钾0.5g、B族维生素100ug、蒸馏水100ml。

准确称量原料后煮沸定容，分装三角瓶后每瓶加玻璃珠10粒，121℃灭菌30min，冷却后接种，每瓶接打孔母种块10块，接种后置于转速160r/min、25°C的恒温振荡培养箱中培养7天。

食用菌原种的制作方法

食用菌原种的制作方法食用菌原种是培育高品质食用菌的开始，其制作方法关系到菌种的品质和生长效果。

下面将介绍10种关于食用菌原种的制作方法，并详细讲解每种方法的具体操作步骤、注意事项和优缺点。

1. 伏击法制种法伏击法制种法是一种常见的食用菌原种制作方法，其操作简单，适用于多种食用菌的原种制作。

具体方法如下：步骤一：准备原料。

选一定数量的食用菌菌盖和菌蒂，尽量选用种粒外形完整、表面干净、无病害的菌盖和菌蒂。

步骤二：将菌盖和菌蒂归并，放到70%酒精中清洗30秒，然后取出沥干。

步骤三：将菌盖和菌蒂放到滤纸上，擦干表面水分，放到蒸汽锅中蒸10分钟，杀灭病菌和杂菌。

步骤四：将蒸好的菌盖和菌蒂拿出来，再次擦干表面水分，放到培养基上。

步骤五：放到恒温摇床上培养，震荡180rpm，28℃，恒温培养7-14天，即可获得食用菌原种。

优点：操作简单，适用范围广，菌株易保存。

缺点：成活率较低，制作时间较长。

2. 含砂蒸法制种法含砂蒸法制种法是应用含石英砂的菌种培养基来制作食用菌原种，能提高种粒触蒸面积，提高出菌率和菌株的品质。

具体方法如下：步骤一：准备含砂菌种培养基。

将玉米粉、蔗糖、石英砂和蒸馏水按一定比例混合，制作含砂菌种培养基。

步骤二：准备原料。

选一定数量的食用菌菌盖和菌蒂，按照比例加入含砂菌种培养基中。

步骤三：将含菌培养基放在琼脂板上，在30℃下反复震动震荡搅拌。

步骤四：将培养好的固体菌种放在75%-80%的相对湿度内，保持湿润并置于通风且恒温保持在22℃下。

步骤五：待菌体生长到一定大小时，再将其移植到适宜的菌床中。

优点：出菌率高，菌株品质好。

缺点：制备过程中需掌握好配方和稠度。

3. 傅里叶红外辐射制种法傅里叶红外辐射制种法是利用电极辐射灯产生的热量来使制种容器内的培养液升降温，低温使菌体沉积在液表面，高温则使其下沉到液底，实现制种的目的。

具体方法如下：步骤一：将食用菌种子与蔓茎切片、米糠混合后，加入到恒温恒湿的发酵箱内。

生产菌种制备工艺流程

检测仪器
不合格需排查原因并改进。
7
生产菌种制备完成
经检测合格的二级种子作为生产菌种备用。
-
做好菌种的保存和记录。
生产菌种制备工艺流程
序号
工艺流程步骤
详细描述
所需设备
注意事项
1
菌种选择
从保藏的菌种库中挑选性能优良、符合生产需求的菌种。
菌种保藏设备
确保菌种的活性和纯度。
2
活化培养
将挑选的菌种接种到适宜的培养基中，在特定条件下进行培养，使其恢复生长活力。
培养箱
控制培养温度、湿度和时间。
3
一级种子培养发酵罐
严格无菌操作，防止染菌。
4
质量检测
对一级种子进行质量检测，包括菌液浓度、纯度、活性等指标。
检测仪器
不达标的种子需重新培养。
5
二级种子培养
合格的一级种子接入二级种子培养基，进一步扩大培养规模。
大型发酵罐
监控培养过程中的参数变化。
6
二级种子质量检测
重复质量检测步骤，确保二级种子符合生产要求。

各级菌种制作方法

各级菌种制作方法菌种制作是指将其中一种菌株培养并保存下来，以便于进一步研究或应用。

下面是各级菌种制作方法的详细介绍。

一、纯菌种制备方法纯菌种是指由单一菌株组成的菌种，制备纯菌种的方法有多种，下面介绍两种常见的方法。

1.1分生培养法该方法适用于无色泽的菌株。

步骤如下：1)从菌落中选取一个单一菌落，用培养棒沾取并悬浮于无菌水中。

2)取适量的悬浮液在琼脂平板上均匀涂布，待菌落分开成单个菌落后进行分离。

3)通过连续分离单个菌落的方法，分离纯菌株。

4)将纯菌株进行培养、鉴定以及保存。

1.2筛选法该方法适用于具有色泽的菌株。

步骤如下：1)从菌落中选取一个单一菌落，用培养棒沾取并悬浮于无菌水中。

2)将悬浮液均匀涂布在琼脂平板上。

3)在菌落上加覆一层深色染料，如卢戈尔液或磷酸钠溴酚蓝溶液。

4)观察菌落的颜色变化，选取与其它菌落颜色不同的菌落进一步培养、鉴定和保存。

二、菌种保存方法菌种的保存可以使用不同的方法，主要包括以下几种。

2.1低温保存法低温保存法是最常用的保存菌种的方法，其原理是通过将菌种置于低温环境中，减缓菌落的生长速度，以达到保存的目的。

常用的低温保存方法包括冷冻保存和液氮冷冻保存。

2.2干燥保存法干燥保存法是将菌种培养后的菌落通过空气干燥或冷冻干燥的方法，得到菌种粉末或冻干菌种。

该方法的优点是保存周期长、操作方便，适用于许多菌种的保存。

2.3阳离子凝胶保存法阳离子凝胶保存法是将菌液用阳离子树脂凝胶包裹，并置于低温环境中保存。

该方法适用于保存不能耐受冷冻或冷冻干燥的菌种，保存时间较长。

2.4液态保存法液态保存法是将菌液置于无菌平板或培养基中，倒入试管或培养瓶中，密封保存。

该方法适用于快速生长的菌种，操作简便，但菌种保存时间相对较短。

母菌种是指在菌种制备过程中，从纯菌种中培养得到的大量菌液。

母菌种的制备方法有多种，下面介绍两种常见的方法。

3.1瓶培法瓶培法适用于产菌量较多的菌株。

步骤如下：1)在无菌条件下，将纯菌株接种于试管中的液体培养基中。

各级菌种制作方法

1,母种:又叫一级种,用直径18-22cm的试管制备.常用配方:去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂10-20克,水1000毫升,先把土豆去皮称重,切成小块煮至熟而不烂,过滤加水至1000毫升,再把琼脂剪成小段,放入锅内,边搅边煮,待琼脂溶化后加入葡萄糖,由于琼脂质量各有不同加入份量要看情况而定，装管前取一小勺浮在凉水中冷却观察其硬度适合然后分袋试管,用棉花塞塞住试管口,放入小高压锅内灭菌,当压力表达到个压力时,再灭菌30分钟,取出试管放成斜面,放置2-3 天后,无杂菌感染再放入接种箱内接种,接了种的试管放入培养室内进行培养,温度要求25℃左右,相对湿度75%以下.2,原种:二级种,一般采用原种瓶和罐头瓶.培养料不要装的太满,装至瓶肩.原种的制备多采用谷粒种,锯沫种和棉子壳种.①谷料种:用玉米,小麦为原料,精选后煮沸,使种子变软即成,不要煮的太熟,开花.熟后离火泡5分钟（不开盖而能吸足水份）而后装瓶,用小型或中型高压锅灭菌,放至温度25℃左右接入母种,放培养室内培养.一般25-30天即成.②木屑种:木屑78%,麦麸20%,石膏1%,糖1%,料:水=1:,拌匀装瓶,灭菌,接种培养.一般25-30天即成.③棉子皮:因棉子皮各种营养丰富,一般不需要加其它物质,只加1%的糖和石膏,用料倍的水拌匀即可,而后装瓶,灭菌,接种,培养即可.推荐通用配方：木屑（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤糠夫：6斤糖：斤菇耳壮：两石膏：1斤3,生产种:三级种可用木屑,玉米,棉籽皮,菌草,麦秸等为原料,根据所栽培的品种,采用不同的配方,用聚乙烯或聚丙烯,直径15-28cm塑料袋装料,然后用常压灭菌锅灭菌,达到100℃后,再维持100℃8-10小时.待袋稍凉后出锅,使栽培袋温度降至25℃左右再用原种接种,而后放到培养室的培养架上培养.推荐配方：■地栽木耳配方锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤糠夫：5斤豆粉：2斤菇耳壮：两白灰：1斤■平菇猴头香菇金针菇配方锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤菇耳壮：两糠夫：5斤白灰：1斤。

栽培种菌种制作工艺流程

栽培种菌种制作工艺流程栽培种菌种制作工艺流程主要包括以下几个关键步骤：
1. 母种（一级种）制作：
- 选取优良菌株：首先选择遗传稳定性好、生产性能优良的原始菌株。

- 制作培养基：按照特定配方配制适宜菌种生长的琼脂培养基，高温灭菌后冷却至接种温度。

- 接种操作：无菌条件下，从保存的菌种试管或冷冻管中取出少量菌丝体，接入已冷却的固体培养基平板或斜面中，置于恒温培养箱内培养。

2. 原种（二级种）制作：
- 制作培养料：根据菌种特性和栽培要求，配制适合菌丝生长的固体或半固体培养料，同样进行灭菌处理。

- 接种与培养：待培养料冷却后，在无菌环境中，将长势良好的母种接种到原种培养料中，密封后放置于适宜的温度和湿度条件下培养，让菌丝充分生长发育。

3. 栽培种（三级种）制作：
- 大量制备培养料：根据栽培规模，大量配置含水量、营养成分适宜的栽培种培养料，经高温灭菌后冷却备用。

- 接种与扩大培养：将已发育成熟的原种均匀撒播或插入栽培种培养料中，适当压实并做好保湿措施，继续在适宜条件下进行大规模培养，直至菌丝充满培养料，达到可以用于栽培的标准。

4. 质量检测与保存：
- 在整个制作过程中，要定期检查菌丝生长状况，确保无杂菌污染。

- 栽培种制作完成后，进行质量检测，确认菌种活力、纯度达标后方可用于大面积栽培。

- 对于暂时不用的菌种，应按照相应菌种的保存条件妥善保存，以保持其活性和遗传稳定性。

以上是通用的菌种制作流程，不同种类的食用菌或药用菌可能在培养基配方、培养条件以及接种方式等方面存在一定的差异。

食用菌菌种分级和生产的基本工艺流程

食用菌菌种分级和生产的基本工艺流程一、菌种分级食用菌的菌种分为三级，即母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)。

1、母种(一级种) 通过孢子或组织分离培养获得，并经鉴定为种性优良，遗传和生理性状相对稳定的在试管斜面上生长和保存的纯菌丝体。

也有人称之为试管种。

2、原种(二级种) 由母种转接到天然基质(培养基)上经培养而成的菌种。

这是菌丝体和天然基质的混合体。

3、栽培种(三级种) 由原种转接在天然基质(培养基)上扩大繁殖而成的菌种。

栽培种也是菌丝体和天然基质的混合体。

栽培种常作为栽培用菌种，或直接出菇。

也有人称之为生产种。

二、菌种生产的基本工艺流程作为栽培用的菌种，国内外均采用固体培养，使用固体菌种。

其大致工艺流程为：母种→母种扩繁(培养基制备→接种→培养检查→成品)↓↓←原种成品←(培养检查←冷却接种←灭菌←配料分装)原种制作栽培种制作(配料分装→灭菌→冷却接种→培养检查) →栽培种成品三、母种(一级种)制作母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。

(一)、常用培养基及配方培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。

培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。

第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。

如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。

第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5。

第四，经过严格灭菌，保持无菌状态。

这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。

这一点必须在配制时就考虑到。

这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。

食用菌制种技术

食用菌制种技术菌种生产程序，通常分为母种、原种和栽培种3个层次，也就是通常所说的一级、二级、三级菌种。

其中母种的分离选育技术性强，要求精化；而原种和栽培种的制作则相对比较简单。

下面介绍各级菌种的制作技术。

一、母种的分离选育母种主要采用人工选择、诱变育种、杂交育种和原生质融合等手段获得。

作为一般制种专业户，可以采用人工选择方式分离培育母种，具体步骤与操作方法如下。

1.采集种源从野生或人工栽培群体中，选择有代表性的优良菇体作为种源。

①种菇选择时间。

一般在11月上中旬，在第1批和第2批菇中挑选。

因为这段时间蘑菇生长正是旺盛时期，菌丝生活力强，子实体健壮，质量好，加之气温适宜，蘑菇能正常成熟。

②种菇的标准是：八成熟，朵形圆正，肉质肥厚，颜色洁白，无病虫害。

采集一二朵符合上述标准的种菇编上号码，作为分离母种的材料。

从栽培室采集的应标有原菌株代号。

2.培养基配制琼脂培养基又叫PDA培养基，常用配方为：马铃薯200克、琼脂16克～18克、葡萄糖20克、水1000毫升。

先将马铃薯洗净去皮，切成薄片，置于铝锅内加水煮沸15分钟～30分钟至薯块酥而不烂为止。

煮后用6层～8层事先浸湿拧干的纱布过滤，过滤后加入琼脂16克～18克（气温低时加16克，气温高时加18克）再煮，并不断搅拌，使固体琼脂完全溶化，再用4层～6层纱布过滤。

将滤液加水至1000毫升加入20克葡萄糖，搅拌溶化趁热分装试管。

装入量为试管高度的1/4～1/5，注意培养基不要粘着试管口，管口用棉塞塞紧，或将汁液装入玻璃三角瓶内，每瓶装量为20毫升。

然后置于高压锅内，在压力达108千帕，锅内温度为121℃灭菌30分钟左右。

灭菌后及时取出，趁热将试管斜排于桌上，冷却后即成为固体斜面培养基。

菌种自制方法

三、钾（K）
筋中含钾量最多（烟杆也有），晒干后磨成粉末。在制作土著微生物堆肥时掺入较好。
※土著微生物发酵肥制作方法
一、材料（每1000kg堆肥需要的材料）：
⒈鸡、猪、牛、羊、鸭子等家畜的生粪或生人粪，约600kg-700kg。
⒉锯末、稻皮、稻草、杂草等200kg-300kg。
将果实酵素稀释500倍对养猪、养鸡、果树、蔬菜等使用，动植物不易得病，效果很好。
※三种辅助材料的制作方法
一、生鱼氨基酸生鱼氨基酸是指用鲜鱼的废弃物制作的液体。
Hale Waihona Puke 料及制作方法：选与青鱼一样，背部发青的鱼较好，其它鱼类、动物内脏也可以。
鱼头、骨头、内脏等残渣与等量红糖混拌，2-3天后，开始形成液体，10天左右可完熟，提取液体使用（滤渣作发酵肥时使用）。生鱼氨基酸含氮素量较多，在植物营养生长时期使用有奇效，又是发酵堆肥不可缺少的材料。同时又是水田、旱田的氮素肥料和家畜饲料的蛋白质营养剂。
在稻茬上，采取的土著微生物，对低温冷害有抵抗力，又能消除连作带来的危害，所以对水田、旱田、果树、蔬菜、猪舍、鸡舍使用时有很好的效果。
2、原种制作方法：（1）把采集的土著微生物原液稀释500倍与麦麸或米糠混拌，再加入500倍的天惠绿汁、生鱼氨基酸、乳酸菌等，调整水分达65-70%。装在能通气的口袋或水果筐中或堆积在地面上，厚度30cm左右为宜，在室温18℃时发酵2-3天后，就可以看到米糠上形成的白色菌丝，此时堆积物内温度可达到50℃左右，应每天翻1-2次，如此经过5-7天，形成疏松白色的土著微生物原种――土著微生物③号。
发酵过程结束，容器剩下的三分之一空间填满烧酒后，用塑料布封口，15天后抽出液体，这时须将酿制后的营养液保留容器容量的三分之一，过滤后放在另一个容器里密封避光保存。

食用菌各级菌种的制作

感谢您的根据菌种特性，选择合适的培养基配方，并进行灭菌处理
接种与培养：将菌种接入培养基中，控制好温度、湿度、光照等条件，促进菌种的生长繁殖
采收与保存：当菌种长满整个培养基时，进行采收并妥善保存，以备后续使用
栽培种制作
栽培种制作：将原种接种到栽培种培养基中，培养成栽培种
接种方法：采用无菌操作技术，保证菌种纯度
食用菌菌种制作
菌种制作的基本原理
菌种分离：从自然界中分离出食用菌的纯菌种
培养基制备：制备适合食用菌生长的培养基
接种与培养：将纯菌种接种到培养基上，进行培养
菌种鉴定：对培养出的菌种进行形态学和生物学鉴定，确保其纯度和优良性状
菌种保藏：对优良菌种进行保藏，以备后续生产和研究使用
鉴定：对分离得到的菌种进行形态学和生物学鉴定，确保其纯度和质
量。
保存：将纯化的菌种进行低温保存，以备
后续使用。
一级菌种的制作
母种的定义和作用
母种制作
母种制作所需的材料和工具
母种制作的具体步骤和注意事项
母种制作过程中的常见问题和解决方法
原种制作
母种制作：选择优良菌株，进行培养基制备、接种、培养等步骤
培养基配方：根据菌株特性选择合适的培养基配方
接种方法：采用无菌操作技术进行接种
培养条件：控制温度、湿度、光照等条件，促进菌丝生长
二级菌种的制作
栽培种制作
母种准备：选择优良菌株，制备培养基原种制作：将母种接入原种培养基，培养至菌丝长满瓶栽培种制作：将原种接入栽培种培养基，培养至菌丝长满瓶接种方法：采用无菌操作技术，保证菌种纯度培养条件：控制温度、湿度、光照等条件，促进菌丝生长质量检测：对菌种进行质量检测，保证菌种质量和纯度

第三章菌种制作

第三章食用菌制种技术
3.1 菌种生产流程及设备 3.2 培养基的制备技术 3.3 菌种的分离与培养
3.1 菌种生产流程及设备
1. 菌种及菌种类型菌种是一种重要的生物资源，根据使用目的不同，主要可以分为保藏用菌种、试验用菌种和生产用菌种。从食用菌栽培的角度而言，所谓的菌种就是指生产用菌种。
5. 菌种质量鉴定
（1）外观要求 ① 菌丝已长满培养基，菌丝致密、粗壮、洁白； ② 菌丝不老化、不萎缩、不自溶成黄水，瓶底不积水
（2）菌龄要求 ① 要用正处在生长旺盛期的母种(原种)接种进行原种(栽培种)的生产。 ② 原种和栽培种在常温下(20℃)可放置3个月（满瓶后三个月内的有效，草菇一个月内有效)
在菌种制备过程中，从母种、原种至栽培种，各个阶段的目的要求有所不同，所选用的原料也应有所区别。母种初生菌丝一般较嫩弱，分解养分能力差，要求培养基营养丰富，需选用易被菌丝吸收利用的物质，如糖类、马铃薯、麦芽汁等为原料。原种和栽培种所需数量较多，且菌丝分解养分能力强，可选用农作物的秸秆、木屑、玉米芯等作为原料。
菌种是指以适宜的培养基为载体进行纯培养的菌丝体，也就是培养基和菌丝体的联合体。
3.1 菌种生产流程及设备
食用菌的菌种是通过三级逐步扩大培养的方式来生产的。在生产上，根据菌种来源和生产目的，通常把菌种分为一级种、二级种和三级种。
一级种(母种)：经过孢子分离或组织分离获得的纯菌丝体。
二级种(原种)：将母种移接在木屑、谷粒、棉籽壳等天然培养基上，扩大培养后得到的瓶或袋装的菌种
步骤
种菇消毒采收孢子
整菇插种法钩悬法孢子印法
接种孢子
1.种菇消毒
菌柄去2/3
苞被有：75%酒精棉球擦无 0.25%新洁尔灭浸2~3min 无菌纱布吸干表面水分

食用菌母种、原种、栽培种制作步骤

食用菌母种、原种、栽培种制作步骤食用菌菌种的质量对食用菌生产至关重要。

菌种的好坏，菌种的保存直接影响到食用菌的产品质量和产量、效益和成败，所以我们要制作优良的食用菌菌种，更要有优良的菌种保存方法，以保存菌种的生活力和优良性状，确保菌种纯种、无污染。

一、菌种制作食用菌菌种分三种即母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）1.制作母种（一级种）1.1菌种采集选择健壮无病虫害的食用菌子实体。

经表面消毒后，放在无菌的厚纸上，使子实体菌褶向下，在通风条件下经过12--24h，等子实体放出孢子后，将纸折叠起来风干，放入塑料袋中，里面放几粒干硅胶，封好口，放入2--4℃冰箱中，可保存起来长期备用。

1.2母种培养基制作配方：马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、纯净水1000ml。

先把马铃薯切成大约1cm大的小方块，放入1000ml 纯净水中煮30min，过滤后加入琼脂、0.2-0.3%的磷酸二氢钾、再加入20g葡萄糖，溶解后分别装入试管，每个试管装量1/5-1/4，用棉塞封好试管口，外加塑料膜扎紧，放入压力灭菌锅1.3㎏/cm灭菌30min，待温度降至60℃将试管摆成30-35度倾斜面，冷却后观察几天，无受到杂菌污染即可接种，孢子液用灭菌的自来水将孢子稀释，在无菌操作环境下将孢子悬浮液移到试管琼脂斜面上，在25℃下培养，很容易萌发生长成菌丝，然后用石蜡封口置于4-5℃恒温箱中可保存6个月。

2.制作原种（二级种）将木屑78%、麦麸20%、糖1%、石膏1%加入水拌匀（100kg料加125kg水），培养基原料拌匀后拿试纸测ph 值，ph值在6-7为宜，然后装入大口的罐头瓶至瓶肩部，将培养料压平压紧，抹干净瓶的培养料，拿完好无破损的塑料薄膜扎紧瓶口，放入压力灭菌锅1.4-1.5㎏/cm灭菌1.5-2h，冷却至25℃即可进行无菌接种，用接种针从母种试管斜面上挑取少量菌丝体接入瓶中，接种后在25℃恒温箱中培养30d菌丝可长满，即可作为原种（二级种）。

蘑菇菌种的配制方法

蘑菇菌种的配制方法1、母种制作技术，一般处于保存期的大球盖菇菌种的菌丝处在缓慢生长或停止生产状态，所以在制作生产用的母种前，必须对保存的菌种进行复壮，以便将处于旺盛生长状态的菌种接入母种或原种培养基上，促进菌丝快速生长，获得菌丝粗壮、浓白、生长势旺的菌种。

（1）培养基配方：I号：PDA(马铃薯200g、葡萄糖18g、琼脂18g、水1000m1)。

Ⅱ号：PDA+硫酸镁1．5g+磷酸二氢钾3g+蛋白胨2g、水1000ml。

Ⅲ号：马铃薯100g、干杂木屑100g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。

上述配方的培养基经高压20分钟灭菌消毒后制成试管斜面，3天内用完。

（2）制作方法：通过组织分离技术，将选取的大球盖菇组织块接入I号培养基上(或接入需复壮的保存种)。

在24到28℃条件下经10至15天培养，菌丝长至试管1：3--1：4时，挑取菌丝扩展前端浓密、粗壮的部分转入Ⅱ号或Ⅲ号培养基上，采用两点接种法，以使菌丝迅速长满培养基表面(一般15到20天)提高菌丝的质量。

经Ⅱ号、Ⅲ号复壮培养基培养的菌丝表现为浓白、粗壮、生命力强，以利原种菌丝的生长，缩短原种培养时间，提高成品率。

2、原种及生产种制作（1）配方：I号：小麦或大麦88％、米糠或麦麸10％、石膏或碳酸钙1％、石灰0．5％、含水量65％(加入米糠或麸皮主要是使培养基疏松，增加透气性，菌丝走向好)。

Ⅱ号：小麦25％、稻草64％、麦麸10％、石膏粉1％、含水量65％--70％。

Ⅲ号：杂木屑42％、杂刨木花42％、米糠或麦麸15％、硫酸镁0．2％、石膏或碳酸钙1％、含水量70％。

以上配方在1．3--1．5kg／平方米压力下，消毒2--2．5小时，3天内用完。

（2）原料选择和配制：实践证明：制作大球盖菇原种和生产种的培养基主原料以麦粒最好，木屑、刨木花次之，稻草最差。

（3）麦粒的选择：应选深黄或暗红色皮韧性大、浸泡时不易破皮的麦粒为好，从吸水率来看大麦优于小麦。

幸福菇菌种制作技术

幸福菇菌种制作技术
幸福菇的菌种分为母种（一级）、原种（二级）、栽培种（三级）。

一、母种制作
首先将母种的培养基制作好，配方为：马铃薯200克，琼脂20克，葡萄糖20克，水1000毫升。

制作时，先将土豆去皮切片后，置容器内，加水1000毫升，加热煮沸30分钟，将土豆片捞出，用双层纱布过滤，滤液中再加入琼脂，不断搅拌，待琼脂溶解后，分装试管，装量为试管长度2/5左右，按常规塞好棉塞，在高压锅内灭菌30分钟左右。

常压锅灭菌60分钟左右，开锅将试管培养基在平台上摆置成斜面。

冷却两天后，然后选择无病害、形体美观、健壮的菌株进行消毒，从中取一块菌肉，放入试管中培养基上，塞好棉塞。

（此操作在无菌箱或无菌室进行），待七天后长满菌丝为母种。

二、原种、栽培种制作
1、选料：选择无霉烂、新鲜棉子壳或小麦、玉米做培养基，凡是用谷粒做培养基都要进行浸泡、煮沸。

2、配方：棉子壳78%，麦麸20%，石膏粉1%，水60公斤，PH5-7。

3、拌料：将棉子壳、麦麸、石膏粉加水搅拌均匀，使培养基含水量65%，PH7.5。

4、装瓶：选择750毫升的菌种或菌种专用袋，装瓶要求松紧一致，培养料装至瓶肩，扎好瓶口或系好袋口。

5、灭菌：装好瓶要及时灭菌，一般高压锅灭菌3小时，常压锅灭菌8-10小时。

6、接种：灭好菌的瓶，冷却后运到接种箱或无菌操作台进行接种，接种前要将工具、手严格消毒，接种箱用烟雾剂灭菌40分钟，再进行接种。

7、培养：接种好的菌种放入培养室进行培养，保持培养室温度25℃，一个月后就可栽培。

菌种制备工艺流程图

菌种制备工艺菌种的分离纯化1、初筛以迅速筛出大量的达到初步要求的分离菌落为目的，以量为主。

将原菌种制备成菌悬液或单孢子悬液，梯度稀释，涂布分离平板，28±0.5℃培养6-8天，成熟后挑单菌落传F1斜面，F1斜面成熟后传F2斜面，同时转接种子瓶、发酵瓶进行初筛。

F2斜面成熟后转接种子瓶、发酵瓶进行复筛。

具体的工艺过程如下：⑴、菌悬液或单孢子悬液制备——将菌种震荡均匀或使用玻璃珠打散，梯度稀释至合适的浓度，该浓度要保证涂布平板后能够分离出单菌落，通常稀释至10-7。

菌种的来源通常有：高单位罐批的发酵液、保存的用于生产的冻存管菌种等。

⑵、分离平板的涂布与培养——将梯度稀释的菌悬涂布到分离平板上培养，培养温度：28±0.5℃，相对湿度40%—45%，通常培养6～8天即可生长出合适的单菌落，培养时第一天正置平板，第二天起倒置培养。

⑶、F1斜面的培养——在分离平板上选取合格的单菌落接种到F1斜面上，合格单菌落的特点为：菌落直径4～6mm、圆形、边缘不光滑、中间有白色小突起，不规则皱褶、扁平、产生孢子。

F1斜面的培养温度：28±0.5℃，湿度40%—60%，通常培养6—8天即成熟。

成熟的斜面特征为菌苔微厚而丰满，分布有白色孢子，表面呈鼠灰色，背面呈黑色。

⑷、F2斜面的培养——选取生长良好、无杂菌的成熟F1斜面，使用接种针转接到F2斜面，F2斜面的培养温度：28±0.5℃，湿度40%—60%，通常培养6—8天即成熟。

⑸、初筛—— F2斜面接种的同时，使用接种铲刮取约0.5—1cm2的菌苔至种子瓶，种子瓶在28℃的摇床上培养22—24h，然后按照8%—10%的接种量移种至发酵瓶中，发酵瓶在28℃的摇床上培养（240rpm）至200h放瓶，依据发酵瓶的放瓶效价初选出合适的F1斜面，通常选取发酵单位高于3500u/ml的F1斜面。

2、复筛复筛是精选，以质为主，也就是以精确度为主。

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