细胞因子的ELISA方法检测

实验报告

1.取已包被抗体并完成封闭的酶标条2条，分别装于酶标架上。在每条酶标条的1~6孔分别加入稀释液100微升。

2.向第6、7孔加入分别加入2000pg/ml PGFβ1标准品100微升。

3.用加样枪吹吸混匀第6孔的液体，注意避免气泡形成。混匀后其浓度约为1000pg/ml。

4.再吸出100微升加入第5孔，吹吸混匀。其浓度变为500pg/ml。以此类推，一直加到第2孔。吸去多余的100微升。

5.向第8、9孔各加入100微升样品1。10、11孔加入100微升样品2.

6.封口膜覆盖酶标板，防止水分挥发。

7.将酶标板置于37℃温箱孵育120min。

8.取出孵育后的酶标板，揭开封口膜，甩去孔中液体，注意甩动方向，避免液体流入相邻酶标孔，造成交叉污染。

9.加入洗涤液，注意不要溢出至相邻孔，造成交叉污染。静置3min后甩去孔中液体，重复以上洗涤过程4次。在吸水纸上拍干孔中液体。

10.每个孔各加入酶标记抗体100微升。封口膜覆盖酶标板，将酶标板置于37℃温箱孵育60min。

11. 取出孵育后的酶标板，揭开封口膜，甩去孔中液体。再加入洗涤液，静置3min后，甩去孔中液体，重复以上洗涤过程4次。在吸水纸上拍干孔中液体。

12. 每个孔各加入底物A 100微升，再加入底物B各100微升。晃动酶标板混匀。将酶标板放入37℃温箱孵育15min显色。

13. 取出孵育后的酶标板，见酶标板孔中液体呈蓝色。

14. 每个孔各加入终止液100微升，可见液体变成淡黄色。

15.用酶标仪在450nm处测OD值。结果如下：

16. 分析结果：

将2组标准品的OD值和标本1、标本2的4个副本的OD值合并得到平均值。根据各自的OD值，在半对数坐标上标出62.5、125、250、500、1000、2000这6个不同稀释度标准品所处的位置，将6个点连线集会成标准曲线。

根据2个标本的OD值标出其在OD值普通坐标上的位置，虚线连接其在标准曲线上的位置，再用虚线连接确定其在浓度坐标上的位置。推算出浓度分别为300pg/ml和400pg/ml。