芽孢杆菌的分离鉴定2
芽孢杆菌的筛选和鉴定的一般流程
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枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法
枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于自然环境中的细菌，具有重要的应用价值，被广泛应用于农业生产中的抗病、增产、改善土壤等方面。
因此，对枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法进行研究具有重要意义。
以下将介绍枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法。
一、枯草芽孢杆菌分离方法：1. 样品采集：根据研究需要，选择合适的样品，如土壤、植物组织、水等。
采集样品时要注意避免外源性污染，尽量避免使用过多的抗生素。
2. 样品处理：将采集到的样品进行处理，如土壤样品需要经过悬浮液稀释法进行样品制备，植物组织需要进行消毒处理等。
3. 分离培养基选择：根据枯草芽孢杆菌的生长特性，选择合适的分离培养基。
通常可以选用液体培养基（如TSA、LB培养基）或固体培养基（如TSA、PDA培养基）。
固体培养基还可以添加适当的抑菌剂来抑制其他细菌的生长。
4. 分离培养：将样品制备好后，均匀涂布在选择的培养基上，然后进行培养。
液体培养基需要在适当的温度和速度下进行摇床培养，固体培养基需要静置培养。
培养时间一般为24-48小时。
5. 子培养：在培养基上出现孤立的菌落后，用离心管吸取菌落，再划线接种到新的培养基上，进行连续传代培养。
一般选择形态特征明显、菌落形状规则的菌落进行子培养。
6. 纯化：通过连续传代培养，最终获得纯种的枯草芽孢杆菌。
纯化的细菌可以通过形态观察、生理生化特性检测等方法进行初步鉴定。
二、枯草芽孢杆菌鉴定方法：1. 形态观察：观察菌落形态、色素、菌体形态等。
枯草芽孢杆菌的菌落通常呈乳白色或灰白色，形状为圆形或不规则形。
2. 胞内酶活性检测：通过检测枯草芽孢杆菌的胞内酶活性来鉴定，如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。
常用方法为利用不同培养基的酶基质进行相关酶活性检测。
3. 生理生化特性检测：包括对枯草芽孢杆菌的耐温、耐酸碱性、氧化还原反应等生理生化特性的检测。
4. 分子生物学鉴定方法：利用分子生物学方法，如PCR、16S rRNA基因测序等来鉴定枯草芽孢杆菌。
两株海水鱼肠道芽孢杆菌的分离鉴定及特性分析
摘 要：为获 取 具 有 益 生 特 性 的 芽 孢 杆 菌 （Ｂａｃｉｌｌｕｓ）应 用 于 养 殖 生 产，从 野 生 蓝 点 马 鲛 （Ｓｃｏｍｂｅｒｏｍｏｒｕｓ ｎｉｐｈｏｎｉｕｓ）和许氏平-（Ｓｅｂａｓｔｅｓｓｃｈｌｅｇｅｌｉｉ）肠道内分离筛选出两株芽孢杆菌，分别命名为 ＹＢ１和 ＹＨ２，其革兰 氏染色均呈阳性，基于形态学观察、生理生化特征分析及 １６ＳｒＤＮＡ序列比对，鉴定 ＹＢ１为蜡样芽胞杆菌 （ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓＹＢ１），ＹＨ２为壁芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓｍｕｒａｌｉｓＹＨ２）。分析了温度、ｐＨ和 ＮａＣｌ含量（ｗ／ｖ％）对 ＹＢ１和 ＹＨ２生长的影响，选取蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶特性培养基检测了 ＹＢ１和 ＹＨ２的产酶特性，并通过腹 腔注射的方式测定了 ＹＢ１和 ＹＨ２对许氏平-和大菱鲆（Ｓｃｏｐｈｔｈａｌｍｕｓｍａｘｉｍｕｓ）的安全性。结果显示：ＹＢ１适 宜的生长条件为温度 １５～３５℃、ｐＨ５～９、ＮａＣｌ含量 ０～２％，最适生长条件为温度 ３５℃、ｐＨ７、ＮａＣｌ含量 ０； ＹＨ２适宜的生长条件为温度 １５～４５℃、ｐＨ５～９、ＮａＣｌ含量 １％ ～３％，最适生长条件为温度 ３０℃、ｐＨ５、ＮａＣｌ 含量 ２％；ＹＢ１和 ＹＨ２均具有产淀粉酶和蛋白酶的特性；ＹＢ１在浓度≤１×１０８ｃｆｕ·ｍＬ－１时对大菱鲆和许氏平 -均是相对安全的，ＹＨ２在浓度≤１×１０８ｃｆｕ·ｍＬ－１时对大菱鲆是相对安全的。研究表明：ＹＢ１和 ＹＨ２具有 作为有益菌应用于海水鱼养殖的潜力，可作为候选菌株开发为芽孢杆菌微生态制剂。
加了 枯 草 芽 孢 杆 菌 的 饲 料 投 喂 大 黄 鱼 （Ｌａｒｉｍｉｃｈｔｈｙｓｃｒｏｃｅａ），提高了大黄鱼的增重率，调 节了鱼体非特异性免疫，减少了疾病的发生。因 此，芽孢杆菌在海水鱼养殖中的应用可促进其产 业的健康和可持续发展［２］。
枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定
枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定一、目的：掌握芽孢杆菌属常见种的分离，鉴定方法和技术。
将土壤样品中分离的芽孢杆菌属未知种鉴定到属。
二、原理：芽孢杆菌能产生芽孢，在沸水中加热不会失去生理活性，但是不能产生芽孢的细菌会失去活性。
，因而得到芽孢菌属，经过进一步分离及生理生化鉴定得到枯草芽孢杆菌。
三、材料和器皿：显微镜、培养皿（12个）、试管（12个）、三角瓶（5个）、烧杯、移液管（）、涂布棒（6个）、载玻片、接种环、接种针、试管架、灭菌锅、培养箱培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、淀粉培养基、v.p.实验培养基、肉汤琼脂培养基孔雀绿溶液、番红复染液、NaOH溶液、草酸铵溶液、碘液、乙醇四、操作步骤菌种的分离和纯化（1）土壤的采集：取土壤表层5~10厘米下的肥土100g左右，把采得的土壤放入纸袋中带回实验室分离。
（2）平板的制备：融化三角瓶中的牛肉膏蛋白胨培养基，以每皿20ml左右倒入6个平板上。
（3）稀释分离法：秤取土壤5g放入含有45ml水的三角瓶中，摇动片刻，然后将此瓶用小火加热至悬浊液沸腾，维持15分钟，而后静止5分钟。
吸取上层液0.5ml加入到含有4.5ml的无菌水的试管中，制成1:100浓度的悬液，然后分别吸取10-2和10-3土壤悬浊液个0.1ml滴加到上述牛肉膏蛋白胨培养基平板上，每种稀释2皿，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于37℃恒温培养1~2天。
（4）挑菌及纯化：从上述分离的平板上分别挑取2个单菌落中部分菌落，然后在牛肉膏蛋白胨培养基上划线纯化，经菌落特征的观察和镜检，确定是否是芽孢杆菌纯种后，从中选择一株转接于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，置37℃培养1~2天备用。
菌种的鉴定1、形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等）（1）单个菌种的形态（2）菌种形态的观察2.革兰氏染色3.芽孢染色4.菌体大小测验5.枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定一、淀粉水解一、原理许多芽孢杆菌产生淀粉酶，能将淀粉培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
产淀粉酶芽孢杆菌分离和测定
产淀粉酶芽孢杆菌分离和测定生物11.1魏凡棣 37实验目的：对可产生淀粉酶的芽孢杆菌进行分离的测定实验原理：1.传代培养：从土壤中提取微生物，经过一段时间的培养就会大量滋生形成菌落，不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态构造上也有许多明显的反应，而为了保存某种已经获得的菌株，一般采用低温（4摄氏度）抑制微生物的生长，使其保留活性。
2.细胞染色：微生物细胞在碱性，中性及弱酸性溶液中通常带负电，而燃料电离之后染色部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色。
而革兰氏染色则首先用草酸铵结晶紫进行初染，使所有细菌都着结晶紫的蓝紫色；后用卢戈氏碘液媒染增强染料在菌体中滞留能力；后用95%乙醇脱色，由于细胞构造不同革兰氏阴性细菌中碘—结晶紫易洗脱，而经过复染后又被番红染成红色。
3.在显微镜下测定芽孢杆菌的大小：目镜测微尺是一块可放入接目镜内圆形小玻片。
有精准刻度，使用时放入接目镜中隔板上，用以测量经放大后的细胞物像。
由于不同显微镜或不同目镜和物镜组合放大倍数不同，其代表实际长度也不同。
因此，使用前必须校正，以求出在该倍数下每小格所代表的相对长度，后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，计算出细胞实际大小4.芽孢杆菌对淀粉的水解：微生物对大分子物质如淀粉不能直接利用，必须依靠产生胞外酶将大分子物质水解才能被吸收利用。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精双糖和单糖。
5.温度对芽孢杆菌生长影响的测定：微生物的生长繁殖受外界环境因素的影响，环境条件适宜时微生物生长良好，环境条件不适宜时微生物生长受到抑制，甚至导致微生物死亡。
而不同类型的微生物对温度的适应能力也有所差别。
实验器材：高压蒸汽灭菌锅牛肉膏蛋白胨 NaCl 蒸馏水土样试管培养皿移液管涂布器酒精灯显微镜革兰氏染液载玻片显微镜测微尺二甲苯擦镜纸淀粉‘实验步骤：一、芽孢杆菌的分离纯化：1.取合适量的牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，蒸馏水按一定比例配成牛肉膏蛋白胨培养基。
调整PH至7.4到7.6。
产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定
孢杆 菌 ， 枯 草 芽孢 杆 菌 的产 淀粉 酶 能 力优 于蜡 样 芽孢杆 菌 。 关键词 ： 芽孢 杆 菌 ； 淀粉酶 ； 分 离； 鉴 定
Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｍ ｙ ｌ ａ ｓ ｅ －Ｐｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎｇ Ｂａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ Ｗ ＡＮＧ Ｌｅ ｉ ．ＣＨＥＮ Ｙｕ － ｆ ｅ ｉ ．ＹＡＮＧ Ｌ ｉ ｕ
产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定
王磊 ， 陈字飞 ， 杨柳
（ 吉林 工商学 院 食 品工程学院 ， 吉林 长春 １ ３ ０ ５ ０ ７ ）
摘
一
要： 从土壤 中分 离筛选出产淀粉 酶的茵株 ， 经淀粉培养基初 筛后 ， 采用Ｄ Ｎ Ｓ法对发酵提取的粗酶液进行 总酶活和
淀粉酶活力的测定， 通过 形态观察和 生理生化反 应对筛出的菌株进行鉴定。 结果表 明： 分 离到 ４株产淀粉酶 芽孢杆
枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法研究
枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法研究枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的益生菌，具有广泛的应用前景。
为了进一步研究枯草芽孢杆菌的特性和应用价值，需要进行有效的分离和鉴定方法的研究。
本文将介绍一种常用的枯草芽孢杆菌分离与鉴定方法，以供参考。
一、枯草芽孢杆菌的分离方法1. 采集样品：选择环境中富含枯草芽孢杆菌的样品，如土壤、植物根际土壤等。
使用无菌采样器具采集样品，并尽量避免外界污染。
2. 处理样品：将采集得到的样品（如土壤）样品称重，加入适量的无菌生理盐水中，进行悬浮液的制备。
通过振荡或搅拌等方式使样品充分悬浮。
3. 稀释样品：将制备好的样品悬浮液进行适度的稀释，以获得合适的菌落形成数量。
常用的方法是制备10^-1至10^-6的稀释液，通过分别取不同稀释液进行接种。
4. 铺平培养：将适量的稀释液取出，均匀地涂布在菌落计数板上或含有适宜培养基的琼脂培养基平板上。
用冷热板或菌液器辅助涂布，注意避免产生气泡。
5. 培养条件：将铺平的培养板放入恒温培养箱，温度设定为适宜的生长温度，一般为30-37摄氏度，培养时间一般为24-48小时。
6. 菌落取样：在菌落形成后，使用无菌物质（如铂丝、无菌酒精灯火焰炙烧的铁丝等）挑选出单个菌落，并将其转移到新的琼脂平板上。
重复此操作，直到获得纯种的枯草芽孢杆菌。
二、枯草芽孢杆菌的鉴定方法1. 形态学观察：采用显微镜观察培养得到的枯草芽孢杆菌菌落和孢子的形态特征。
枯草芽孢杆菌形成的菌落通常为凹陷型或突起型，孢子则呈椭圆形，具有芽胞的特征。
2. 细胞染色：将培养得到的枯草芽孢杆菌菌落取出，进行细胞染色。
常用的方法是使用革兰氏染色和孢子染色。
革兰氏染色可用于观察细菌细胞的染色性质和形态特征，孢子染色则可用于观察细菌芽胞的形态特征。
3. 生理生化特征检测：通过生理和生化实验，检测枯草芽孢杆菌的一些代谢特征。
包括对碳源的利用情况、产酶的能力、乳酸发酵能力等。
常用方法包括碳源利用试验、酶活性测试、氧化还原试验等。
一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件优化
一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件优化一、引言枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的芽孢形成细菌，广泛存在于土壤、水体、植物表面等环境中。
枯草芽孢杆菌具有良好的免疫调节、抗菌、促生长等生物学特性，被广泛应用于农业、食品、医药等领域。
针对不同用途的需求，分离鉴定枯草芽孢杆菌并优化其发酵条件，能够提高其生物活性和产量，为其在实际应用中发挥更好的效果。
二、枯草芽孢杆菌的分离鉴定1.样品采集与处理首先，从自然环境、农田土壤或其他植物表面等样品中采集含有枯草芽孢杆菌的样品。
将样品带回实验室后，进行分离和处理，避免混杂其他细菌或真菌。
2.菌株分离将处理后的样品进行稀释，接种于富含培养基中，利用传统分离方法（如平板分离法、稀释平板法等）进行分离。
通过观察不同菌落形态和颜色，筛选出枯草芽孢杆菌单菌株。
3.生理生化鉴定对分离到的枯草芽孢杆菌进行生理生化鉴定，包括形态学观察、生长特性、氧化还原反应、产酶活性等。
利用生化试剂盒进行相关检测，确定菌株的生物学特性。
4.分子鉴定通过16SrRNA序列分析或蛋白质质谱鉴定等分子生物学方法，确认所分离到的枯草芽孢杆菌的属种分类，并与数据库中的已知菌株进行比对验证。
5.枯草芽孢杆菌存取将鉴定完成的枯草芽孢杆菌单菌株保存在甘油保存流质中，存放在-80°C低温冰箱中备用。
1.发酵基质的选择选择适宜的发酵基质对枯草芽孢杆菌的生长和代谢具有重要影响。
常用的基质包括葡萄糖、大豆粉、玉米粉等，可以根据具体需求进行配比调整。
2.发酵菌种培养条件通过扩种培养，将枯草芽孢杆菌预培养至指数生长期，然后接种至发酵罐中，保持较高的菌液浓度，有利于产酶和生长。
3.发酵条件的控制在发酵过程中，通过控制温度、pH值、通气速率、发酵时间等因素，调节菌体生长、产酶效率和产物生成速率。
通常，较适宜的发酵条件为温度37°C-42°C，pH值6.0-8.0，通气速率1.0-2.0L/min。
活性芽孢杆菌的分离、鉴定
2.0 1.117
表2 标准麦芽糖溶液成分表及OD测定值
(2)粗酶液淀粉酶活力测定
按以下顺序操作： 取20 ml具塞刻度试管,预先洁净灭菌干燥,编号。取粗酶液1 ml于各只刻度试管 中，于60℃水浴中预热5min柠檬酸淀粉缓冲液同时在60℃水中预热5min，→ 取柠檬酸淀粉缓冲液1ml加入具塞刻度试管中,于60℃水浴中保温30min→加入 1.5 ml 3,5-二硝基水杨酸,沸水中5 min,迅速冷却,加蒸馏水定容至20 ml。③定 容后,摇匀,用分光光度计测定OD540 nm值。在上述条件下以单位体积样品在30 min释放1 mg麦芽糖所需的酶量为一个麦芽糖单位表示酶活性。 在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量按下列公式计算酶活力 酶活力测定公式： 淀粉酶活力=麦芽糖含量（mg）·淀粉酶原液总体积（mL）/所加淀粉质量
后培养：应让变异处理后细胞在液体培养基中培养几小时，使细 胞的遗传物质复制，繁殖几代，以得到纯的变异细胞。
三、高产菌株发酵条件优化
1.原理：以淀粉酶的活力做为检测的指标。 采用单因素试验筛选高产菌生长及产淀粉酶的最佳碳源和最佳氮 源，通过正交试验对高产菌的发酵条件进行优化，建立高产菌株 的最佳摇瓶发酵条件。经相关文件检索，本实验选则碳源浓度、 氮源浓度、无机盐浓度、接种量四个对于发酵较重要的因素进行 优化。 2. 材料与仪器： 高产菌株斜面 控温摇床、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、PH试纸、紫外分光光度 计 种子液培养、初始发酵培养基 蔗糖、麦芽糖、乳糖、糊精、玉米粉1. 6%、酵母膏1. 6%、尿素0. 2%、黄豆饼粉1. 6%、0．05% CaCO3、Zn SO4、CuSO4、Mn SO4·H2O、Mg SO4·7H2O
实验材料与仪器
1、实验材料：河北大学生科楼院前土壤 2、仪器设备：高压蒸汽灭菌锅、培养皿、培养基分装器、PH试纸、移液管 、吸耳球、玻璃棒、量筒、三角刮、试管、试管架、酒精灯、电子天平、显 微镜、三角烧瓶、洗瓶、接种针、接种环、双层瓶、擦镜纸、德汉氏小管、 直尺、记号笔等。 诱变箱：微波炉（E30E-3） 离心机、721分光光度计； 3、培养基和试剂： （1）培养基：淀粉培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、种子培养基、糖发酵培 养基、明胶培养基、柠檬酸盐培养基、醋酸铅培养基、蛋白胨液体培养基（ 吲哚实验）、葡萄糖蛋白胨培养基（V.P.、M．R实验）、硝酸盐液体培养基 、酪素培养基 （2）试剂：碘液、孔雀绿染液、番红染液、乙醚、吲哚试剂、KOH、α -耐 酚、甲基红、格里斯氏试剂、锌粉、3%H2O2 、柠檬酸缓冲液、1%淀粉溶 液、3,5-二硝基水杨酸
土壤中苏云金芽孢杆菌的分离纯化与初步鉴定
作者 简介 ：王立 （１９８１一），男 ，哈尔 滨人 ，大学 本科 ，助理 工程 师 ．
间 为 ２００９年 ｌＯ月 ２－２００９年 ｌ０月 ４ 日。供 试 土 样 详 细来 源 以及相 应 采集 条件 见 表 ｌ。
表 １供试 土样 来 源
土 壤 中 苏 云 金 芽 孢 杆 菌 的 分 离 纯 化 与 初 步 鉴 定
王 立 刘 利 檬 张 思 雅
（哈 药 集 团生物 工程 有 限公 司 １５００２０）
苏 云金 芽孢 杆 菌 是 于 １９０１年 从 德 国苏 云 金 城 面 粉 厂 的某 批染 病 地 中海 粉 暝 中分 离 出 的杆 菌 。苏 云金 芽孢 杆 菌 （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，Ｂｔ）是广 泛 分 布 的革 兰 氏 阳性 细菌 ，《伯 杰 氏细 菌鉴 定 手 册 》中列 为 第 ２类第 １８群 芽孢 杆 菌属 。
牡丹 江铁岭 河南山
Ｍｄｊ００１ １０月 ４日 １４：２０黄豆地 ，睛
绥化是北林 区腰房村
ＳＨＯＯ１ １０月 ４日 ９：Ｏ０ 马铃 薯地 ，晴
佳 木 斯 市 常 青 乡 五 一 村 ＪｍｓＯ０１ １０月 ４日 １３：Ｏ０ 农 田 ，多 云
１．２ 试 剂 ＢＰ固体 培 养 基 配 方 为 牛 肉膏 ３克 ，蛋 白胨 ｌＯ
苏 云金 芽 孢 杆 菌 最初 由 自然 死 亡 昆虫 的虫 尸 中 分离 获得 。 １９８７年 从 土壤 中找 到新 的苏 云金 芽 孢 杆 菌 ，改 变 了只有 从 找 到 死 虫 体 中才 能找 到 这 些 细 菌 的 历史 。 至今 ，已从 世 界 各 地 采 集 的 昆 虫 、土 壤 、蚕 渣 、仓 库灰 尘 、植物 体 表 面 等 基 质上 分 离 到 数 万 株 苏 云金 芽孢 杆 菌 。
枯草芽孢杆菌的分离和鉴定
微生物学教程
枯草芽孢杆菌
Bacillus Subtilis
实验目录
01 关于枯草芽孢杆菌 02 枯草芽孢杆菌的分离和纯化 03 枯草芽孢杆菌的鉴定 04 研究前景和意义
1 关于枯草芽孢杆菌
profile of bacillus subtilis
枯草芽孢杆菌
是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜， 周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到 柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明， 污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋 白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对 此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及 腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
4 研究前景和意义 Research Prospect and meaning
枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌不仅在饲料中应用比较广泛，在污水处理及生物肥发酵 或发酵床制作中应用也相当广泛，是一种多功能的微生物。 1． 市政和工业污水处理，工业循环水处理，腐化槽、化粪池等处理， 畜牧养殖动物废料、臭味处理，粪便处理系统，垃圾、粪坑、粪池等 处理； 2．畜牧、家禽、特种动物及宠物养殖，水产养殖； 3．可以与多种菌种混配，在农业生产中具有重要作用。（如：JT菌 种） 4. 帮助消化，消化道益生菌
前景展望
THANK YOU .
S！
土样的采集
平板的制备
稀释分离法
挑菌及纯化
3 枯草芽孢杆菌的鉴定 Identification of Bacillus subtilis
芽孢杆菌的分离及芽孢杆菌制剂的制备
芽孢杆菌的分离及芽孢杆菌制剂的制备
芽孢杆菌是一种常见的细菌，它具有生长快、耐高温、抗干扰等优点，因此在医药、
食品、环保等多个领域都有广泛的应用。
本文将介绍芽孢杆菌的分离方法和芽孢杆菌制剂
的制备过程。
一、芽孢杆菌的分离
1、样品采集和处理：可以从厨房、卫生间、污水处理厂、食品加工场等环境样品中
采集芽孢杆菌。
采样前需要先清洁样品表面，避免表面杂菌的干扰。
将样品收集到采样袋
或容器中，并加入适量的生理盐水或其他缓冲液。
2、菌落计数：将样品加入到适当的培养基中进行培养，培养条件为35℃，24小时。
接着取出培养板进行菌落计数，如果菌落数大于一定数量，说明样品中含有芽孢杆菌。
3、分离芽孢杆菌：将培养板上的单个菌落用无菌擀膜或针头收集到离心管中。
然后
加入适量的生理盐水并通过液态培养进行分离，同时需要注意保持样品的无菌状态。
4、鉴定菌株：通过生化试剂或PCR等方法对分离得到的菌株进行鉴定，确定是否为芽孢杆菌。
1、芽孢杆菌的培养：选取鉴定后的芽孢杆菌菌株，通过液态培养或固态培养进行增殖。
如果是液态培养，则在恰当的时间点收集菌液；如果是固态培养，则将菌落收集到无
菌瓶中加入液体培养基，在含氧条件下进行多次的摇床培养，直到达到所需的菌量。
2、芽孢杆菌制剂的制备：将芽孢杆菌菌株添加到合适的载体中，如生物胶、淀粉等，然后培养、干燥、添加辅料等处理过程，最终制得芽孢杆菌制剂。
三、结论
通过以上的实验步骤，我们可以快速而准确地分离出芽孢杆菌，并制备出高质量的芽
孢杆菌制剂。
这对于芽孢杆菌的应用和研究有着重要的作用。
2,4-滴丁酯抗性细菌巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的分离和鉴定
一
富集培养基为牛肉膏蛋 白胨 固体培养基 ， 添加 定量的 ２ ， ４ ． 滴丁酯 ； 分离培养基和斜 面培养基均
为牛肉膏蛋 白胨固体培养基。
１ ． ２ 实验 方法
１ ． ２ ． １ ２ ， ４ ． 滴 丁 酯抗 性 细 菌的 富集 、 分 离和 纯化
作物的创 制将 打破 ２ ， ４ 一 滴 丁酯不 能用于双子 叶作
作者简介 ： 滕春红 ， 副教授 ， 主要从事除草剂生物化 学及应 用技术研 究
取某生产 ２ ， ４ 一 滴 丁酯 的农 药厂排污 口的污 泥样 品 为处理对象 ， 用无菌 生理盐水溶解后制得土壤悬浊 液， 参考瓶培养富集技术 ， 在２ ５ ０ ｍ Ｌ三角瓶中， 加入 ｌ Ｏ Ｏ ｍ Ｌ富集培 养基 （ 含２ ， ４ ． 滴丁酯 的浓度 为 ｌ Ｏ Ｏ ｍ ｇ ／ Ｌ ） ， 按 １ ０ ％ 的接种量 接种 土壤悬液， 置 ３ ０ ℃、 ２ ０ ０ ｒ ／ ａ ｒ ｉ ｎ的摇床培养 ７ ｄ ， 将培养液按 １ ０ ％接 种量接种于 ２ ， ４ － 滴 丁酯浓 度为 ２ ０ ０ ｍ ｇ ／ Ｌ的新 鲜富
关键词
２ ， ４ ． 滴 丁酯 ； 抗性； 巨大芽孢 杆 菌 ； 鉴 定
杂草问题 。抗 ２ ， ４ ． 滴丁酯大豆 的培育 ， 将为东北地 区大豆生产提供技术支撑 ， 同时， 为我国转基 因大豆
的 开发 和应 用起 到 巨大 的推 动作 用 。
近ｌ ０ 余 年来 ， 抗 除草 剂作 物迅 速 发展 ， 特 别 是转基 因抗 草甘膦 作物 的广泛 种植 ， 给农 业 生产 带来 了革新变 化 ， 少耕 与免耕及 作物 窄行 种植 的 推行有 了可靠 保证 ， 杂 草防治体 系变 得更 为简 单 而有效 ， 不仅给农 民带来 了巨大经济效 益 ， 而且对 农药工业特别 是 除草剂工 业 、 品种筛 选 与创制 及 除草剂产品销售带来 了深刻的影 响 Ｉ ２ Ｊ 。 大量抗 除 草剂 转 基 因作 物 品种 的推 广 和种 植， 给世界农业带来 了前所未有 的改变 ， 但是 随之
枯草芽孢杆菌的分离及筛选
枯草芽孢杆菌的分离及筛选枯草芽孢杆菌是一种常见的土壤细菌，广泛存在于自然环境中，可发酵多种有机物，在生物降解、环境清洁等方面有广泛应用。
本文将介绍枯草芽孢杆菌的分离及筛选方法。
一、土样采集与处理选择土壤样品时应注意，最好是新鲜土壤，不含过多杂质和残留农药、化学物质等。
首先，将土壤样品放入干净无菌试管中，并加入生理盐水，与搅拌器进行搅拌，使土壤悬浮于生理盐水中。
然后将其过滤，再将过滤液离心，离心后上清液即处理好的样品。
取样品1ml加入小培养皿中，加入适量的20%固体土壤样品，混匀后将其平均涂布于营养琼脂平板上，再进行孵育。
通常，孵育温度为30-37℃，培养基的选择可根据实验需要进行不同的调配。
通过枯草芽孢杆菌的鉴定，可判断其种类和特性。
可采用革兰染色法、形态学观察法、生理生化测定法等多种方法进行鉴定。
1. 革兰染色法：将菌落划入微滴水中，然后将其固定，加入革兰染色液，约定时间后用水冲净，用镜片沥干，用显微镜观察。
2. 形态学观察法：通过对菌落的形态、色素、形状、运动方式等特征进行观察，再与已知菌株进行对照，确定其种类和特性。
3. 生理生化测定法：可通过测定该菌株的生理生化特性，如酸碱反应、氧需求等，进一步确定其种类和特性。
1. 抗生素筛选：将分离得到的枯草芽孢杆菌接种于含有不同抗生素的墨汁琼脂平板上进行筛选，观察不同菌落的生长情况并记录，最终确定其抗性水平。
2. 发酵产物筛选：通过枯草芽孢杆菌的发酵产物、酶活性等特性，进行筛选。
将菌株接种于适当的发酵培养基中，培养一定时间后采集发酵产物进行分析。
3. 生化代谢产物筛选：通过分离并鉴定菌株代谢产物，确定其产物种类和达到的水平，寻找有价值的代谢产物。
综上所述，枯草芽孢杆菌的分离和筛选具有重要的应用价值，为生物降解、环境治理等领域开拓了新的途径。
希望本文对有关人员能够提供一些参考和帮助。
土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定
土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定
芽孢杆菌是一种常见于土壤中的细菌，可以利用芽孢的特性来对其进行分离和鉴定。
以下是大致的步骤：
1. 取一些土壤样品，将样品放入含有营养物质的培养基中，控制培养基的pH和温度，促进芽孢杆菌的生长。
2. 等待一段时间后，可以观察到一些形状独特，颜色和质地与培养基不同的菌落。
这些可能是芽孢杆菌，需要进行进一步的检测。
3. 从菌落中取出一小部分，进行墨汁染色观察。
芽孢杆菌的孢子可以呈现出黑色，证实了是否为芽孢杆菌。
4. 对初步鉴定结果进行进一步确认。
可以通过形态学和生理学等方法进行进一步鉴定，例如利用实验室仪器对菌落的组成和代谢产物进行分析，或者进行基因测序。
需要注意的是，鉴定芽孢杆菌需要严格控制实验室环境、操作规范和实验安全。
应当遵循相应的法规和安全指南，以保证实验的可靠性和安全性。
枯草芽孢杆菌分离及筛选鉴定实验方案
以补充胍基，可加速反应。反应式如下： 2 丙酮酸—— >乙酰甲基甲醇 + 2 二氧化碳；
-2H 乙酰甲基甲醇———— >二乙酰；
+KOH
缩合 二乙酰 + NH=C(NH 2)2———— >红色化合物 2、 培养基和试剂 培养基：蛋白胨 5g，葡萄糖 5g，NaCl 5g，蒸馏水 1000ml。调节 PH 6.5，每管分装
氯化钠 ５克
琼脂 １８克
2. 革兰氏染色 3. 芽孢染色 4. 菌体大小测量 5．枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定：
一 过氧化氢酶测定 1、原理：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和氧 2、试剂： 3—10%过氧化氢 培养基：肉汤琼脂培养基 3、操作步骤：将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上， 30 培养 1—2 天。取一干净载玻片，在
四、淀粉水解 1、原理：
许多芽孢杆菌产生淀粉酶， 能将培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进 一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 2、 培养基及试剂： 培 养 基 ： 在 肉 汤 琼 脂 中 添 加 0.2% 的 可 溶 性 淀 粉 ， 分 装 于 三 角 瓶 。
0.1MPa(15lbf/in2)20min 灭菌备用。
试剂： 卢哥尔氏碘液 3、步骤：
将培养基融化后，冷却至 50 摄氏度左右，倒成平板，凝固后取菌种点钟于平板上 （每皿点钟 2 点），一般于 30 摄氏度培养 2—4 天，形成菌落后， 在平板上滴加卢哥 尔氏碘液，以铺满菌落为度，平板呈蓝色，而菌落周围如有五色透明圈出现，说明 淀粉被水解，透明圈的大小，可表明水解能力的大小。
上面加一滴 3—10%的过氧化氢，挑取一环培养 1—2 天的菌苔，在过氧化氢 溶液中涂抹， 若有气泡（氧气）出现，记作过氧化氢酶阳性， 无气泡者为阴性。 也可将液直接加入斜面上，观察气泡的产生。
枯草芽孢杆菌的分离与鉴定
枯草芽孢杆菌的分离与鉴定枯草芽孢杆菌是一种常见的芽孢杆菌，广泛分布于土壤、水体等环境中。
该菌具有极强的抗逆性，可以在高温、低温、酸碱等各种恶劣环境下存活和繁殖。
此外，枯草芽孢杆菌还具有很高的代谢活性和生物学特性，被广泛应用于食品、医药、化工等领域。
枯草芽孢杆菌的分离和鉴定是研究其生物学特性和应用价值的重要步骤。
下面介绍一种常规的分离和鉴定方法。
1. 选择适宜的培养基和培养条件枯草芽孢杆菌是一种厌氧菌，通常需要选择富含营养物质和适宜的pH、温度等培养条件的培养基来进行分离和培养。
常用的培养基包括厌氧培养基、肉汤培养基、营养琼脂培养基等。
在选用培养基时，需根据研究对象和实验要求进行选择。
2. 样品处理和接种将样品收集到无菌容器中，并在避光下尽快送到实验室进行处理。
将样品加入适量的生理盐水或其他缓冲液中，进行适当的稀释后，从中取出一定量的液体或固体，接种到培养基上。
3. 培养和观察将接种好的培养基放置在适当的环境中进行培养，观察菌落的生长情况、形态特征等。
枯草芽孢杆菌通常在48小时内开始生长，生长后的菌落大小通常为1-3mm，形态呈不规则的肉眼可见点状或细菌丝状，表面为平滑或粗糙，颜色从白色到灰色等不等。
根据菌落的形态特征和大小、颜色等可初步判断是否为枯草芽孢杆菌。
4. 鉴定针对初步判断为枯草芽孢杆菌的菌株，需进行进一步的鉴定和鉴别。
常用的鉴定方法包括生理生化检测、生化反应检测、DNA序列分析等。
其中，生物化学检测可通过对菌落的形态、营养物质的利用情况、代谢产物等进行分析来进行鉴定。
在实验设计过程中，应该根据样品来源、实验需求来设计相应的检测方式，保证分离和鉴定的可靠性和准确性。
综上所述，枯草芽孢杆菌的分离与鉴定是菌类学研究和应用中的重要步骤。
只有凭借可靠的实验方法和技术流程，才能保证研究成果的准确性和可靠性。
芽孢杆菌的分离鉴定2
芽孢杆菌的分离与鉴定二、纯化菌株的鉴定：（一）观察菌落形态：观察平板菌落形态：菌落为扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶，（二）观察菌体形态：A.细菌的革兰氏染色1、涂菌：用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约lcm的菌膜。
涂菌后将接种环火焰灭菌。
2、干燥：于空气中自然干燥。
亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。
3、固定：目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。
此制片可用于染色。
4、初染：于制片上滴加结晶紫染液，染lmin后，用水洗去剩余染料。
5、媒染：滴加卢戈氏碘液，冲去残水，滴两滴卢戈式碘液，覆盖住菌膜。
1min后水洗。
6、脱色：滴加95%乙醇脱色，30s后立即水洗或用卢戈式碘液流加冲洗至流出液刚好无色，立即水洗。
7、复染：滴加番红或复红液复染lmin，水洗。
8、滤纸吸干、油镜镜检：革兰氏阳性菌染成蓝紫色，革兰氏阴性菌染成淡红色。
B.细菌的芽孢染色(1)加1～2滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2～3环培养18～24h的枯草芽孢杆菌菌苔于试管中，并充分混匀打散，制成浓稠的菌液。
(2)加5%孔雀绿水溶液2～3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。
(3)将此试管浸于沸水浴(烧杯)中，加热15～20min。
(4)用接种环从试管底部挑数环菌于洁净的载玻片上，并涂成薄膜，将涂片通过微火3次固定。
(5)水洗，至流出的水中无孔雀绿颜色为止。
(6)加沙黄水溶液，染2～3min后，倾去染液，不用水洗，直接用吸水纸吸干。
(7)干燥后用油镜观察。
芽孢绿色，菌体红色。
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芽孢杆菌的分离与鉴定实验器材：铲子（1）,盆（1）,电子天平（1），洗耳球(1)，接种勾和环（1）,1ml吸管（7）,玻璃涂棒（1）,平皿（12）,250ml带玻璃珠三角瓶（1）,双层纱布（1）,试管（7），标签纸（1）,恒温箱，显微镜（4）。
实验试剂：无菌水，1mol/L NaOH、1mol/L HCL、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、复红液、5%孔雀绿、沙黄、乙醚、吲哚试剂、40%NaOH、肌酸牛肉蛋白胨培养基：牛肉膏1g，蛋白胨2g，Nacl 1g，水200ml，ph7.2，琼脂3.0-4.0g；生孢培养基：0.1%蛋白胨，0.1%葡萄糖，0.07%酵母粉，0.02%硫酸镁晶体（七水），0.02%硫酸铵，0.1%磷酸氢二钾（3水），1.5%琼脂；一、土壤中芽孢杆菌的筛选A.培养基配置步骤：（1）称量：按比例称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠，共置于烧杯中；（2）溶解：先加入适量无菌水，加热使其溶解，再补足水至总量；（3）调pH：用1mol/L NaOH或1mol/L HCL调PH至7.6；（4）过滤：用滤纸过滤；（5）融化琼脂：加入3.5克琼脂，继续加热至完全溶解，补足因加热蒸发失去的水分；（6）分装与包扎：摆斜面（7）灭菌：121℃，灭菌20minB.实验步骤：（一）采集土样: 每个采样点选取土壤较肥沃、有代表性的地块约0．2 cm2，五点法采集。
取5～10cm深土壤，每一个土样约500 g。
将土样放入无菌的纸袋中，并记录采集的时间、地点、植被类型，4℃保存备用。
（二）土壤悬液制备：称取10g土样，放入盛有99ml无菌水并带有玻璃珠的250ml三角瓶中，振荡摇晃20min，使土样与水充分混合，将细胞分散，两层纱布过滤，然后将锥形瓶置于90℃水浴锅，加热20min，制备成土壤悬液。
（三）土壤悬液稀释：用一支1ml的无菌吸管从锥形瓶吸取过滤的土壤悬液1ml加入盛有9ml 无菌水的大试管中，震荡均匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一只盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1 、 10-2 、 10-3、 10-4、10-5、 10-6 不同的稀释度。
（四）倒平板：将牛肉膏蛋白胨培养基加热融化，冷却至45-50度倒平板，每个梯度两个平行，共12个，每皿15ml左右。
平皿凝固后，在平皿底部分别用记号笔用：10-1 、 10-1、10-2、 10-2 、 10-3、 10-3、10-4、 10-4、10-5、 10-5、10-6、10-6。
（五）涂布：用无菌吸管分别将10-1 、 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的土壤稀释液各吸取0.2ml，将菌悬液小心的对号滴入已写好稀释度的平皿表面中央，再用无菌玻璃棒在培养基表面轻轻的涂布均匀，倒置放置，待培养。
（六）培养：将接种好的平皿倒置于37℃温箱中培养，大约1-2天。
（七）平板划线分离纯化：将培养好的单个菌落分别挑取少许细胞接种到牛肉膏蛋白胨培养基斜面培养基上，置于37℃温箱中培养24小时左右，待长出菌苔，镜检其特征是否一致，有杂菌，需再一次分离纯化，直至获得纯培养。
(八)生孢培养：再分别挑取单个菌落划线接种于生孢培养基，于37度培养箱培养，直至长出单个菌落。
二、纯化菌株的鉴定：（一）观察菌落形态：观察平板菌落形态：菌落为扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶，（二）观察菌体形态：A.细菌的革兰氏染色1、涂菌：用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约lcm的菌膜。
涂菌后将接种环火焰灭菌。
2、干燥：于空气中自然干燥。
亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。
3、固定：目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。
此制片可用于染色。
4、初染：于制片上滴加结晶紫染液，染lmin后，用水洗去剩余染料。
5、媒染：滴加卢戈氏碘液，冲去残水，滴两滴卢戈式碘液，覆盖住菌膜。
1min后水洗。
6、脱色：滴加95%乙醇脱色，30s后立即水洗或用卢戈式碘液流加冲洗至流出液刚好无色，立即水洗。
7、复染：滴加番红或复红液复染lmin，水洗。
8、滤纸吸干、油镜镜检：革兰氏阳性菌染成蓝紫色，革兰氏阴性菌染成淡红色。
B.细菌的芽孢染色(1)加1～2滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2～3环培养18～24h的枯草芽孢杆菌菌苔于试管中，并充分混匀打散，制成浓稠的菌液。
(2)加5%孔雀绿水溶液2～3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。
(3)将此试管浸于沸水浴(烧杯)中，加热15～20min。
(4)用接种环从试管底部挑数环菌于洁净的载玻片上，并涂成薄膜，将涂片通过微火3次固定。
(5)水洗，至流出的水中无孔雀绿颜色为止。
(6)加沙黄水溶液，染2～3min后，倾去染液，不用水洗，直接用吸水纸吸干。
(7)干燥后用油镜观察。
芽孢绿色，菌体红色。
三、生理生化试验1、芽孢杆菌对生物大分子的分解利用（1）明胶(Gelatin)液化试验A.试验原理：明胶是一种具有在温水中溶解时形成凝胶性质的动物蛋白质，某些细菌能分泌蛋白酶分解其中蛋白，致使失去凝胶性质而没有凝固性。
明胶的分解是一种酶促反应，与这一变化有关的酶称明胶酶，无此酶的微生物则不能液化明胶。
在20℃以下的室温观测生长情况和明胶是否液化。
如菌种已生长，明胶表面无凹陷且为稳定的凝块，则为明胶水解阴性。
如明胶凝块部分或全部在37℃以下变为可流动的液体，则为明胶水解阳性。
如菌种已生长，明胶未液化，但明胶表面菌苔下出现凹陷小窝(须与未接种的对照管比较，因培养过久的明胶因水分散失也会凹陷)也是轻度水解，按阳性记录。
若菌种未生长，则或是不在明胶培养基上生长，或是基础培养基不适宜。
B.明胶(Gelatin)液化培养基：蛋白胨1g，明胶20一30g，水200ml，pH7.2-7.4，分装试管，培养基高度约4．5cm，115℃灭菌。
C.实验步骤: 1、取四支明胶（高层）培养基试管，用记号笔标记号。
2、挑取18-24h的菌种穿刺接种子明胶(Gelatin)液化培养基，并有两支未接种的空白对照。
于37℃温箱中培养，培养2-5天。
3、观察明胶的液化情况。
（2）淀粉水解试验A.原理：某些细菌可以产生能水解培养基中淀粉的淀粉酶，使淀粉水解成麦芽糖和葡萄糖等小分子物质，在被细菌吸收利用，淀粉水解后，遇碘液不再变蓝色。
观察细菌的生长情况，如果菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉水解，为阳性。
透明圈的大小可以初步判断细菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外淀粉酶活力的高低。
B.淀粉水解试验培养基：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，可溶性淀粉0.2g，琼脂1.8g，ph7.2,121℃灭菌30min。
配置时，先用少量水将淀粉调成糊状，在火上加热，边搅边加水及其他成分，溶化后补足水分。
C.试验步骤：1、将固体淀粉培养基溶化后冷却至50℃左右，无菌制成平板。
2、用接种针取少量待检菌在平板上划“十”形接种。
3、将平板倒置在37℃温箱中培养24小时左右。
4、观察细菌的生长情况，将平板打开盖子，滴入少量lugol’S碘液于平皿中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板，观察菌苔周围是否出现无色透明圈。
2、芽孢杆菌对含氮化合物的分解利用（1）吲哚试验A.实验原理：吲哚实验是用来检测吲哚的产生。
有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸，吲哚与对二甲基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。
但并非所有的微生物都有分解色氨酸的能力，因此吲哚实验可以作为一个生物化学检测的一个指标。
B.吲哚培养基：蛋白胨1g，nacl0.5g，蒸馏水100ml，ph7.2-7.4，高压蒸汽灭菌115度20min。
C.吲哚试验试剂：对二甲基氨基苯甲醛8g，乙醇(95％)760m1，浓HCl l60ml。
D.吲哚试验步骤：1、将细菌分别接种于装有蛋白胨培养液的试管中，置37℃恒温箱中培养24—48h。
2、在培养液中加入乙醚l-2mL，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂(加入吲哚试剂后切勿摇动试管。
以防破坏乙醚层影响结果)3、观察结果：如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，即为吲哚试验阳性反应，否则为阴性。
3、芽孢杆菌对碳水化合物的分解利用（1）V-P试验A. V—P试验原理：某些细菌在葡萄糖蛋白胨培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合、脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用生成红色化合物，即伏-普反应阳性，不产无色物质者为反应阴性，称V—P反应。
B. V—P试验培养基：蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，k2HPO4 0.5g，水100ml，pH值7.0-7.2，每管分装4.5ml，115℃灭菌C. V-P试验（乙酰甲基甲醇试验）步骤：1、用无菌接种环挑取单个菌落分别接种于有5mL萄萄糖蛋白胨培养液的试管中，置37℃恒温箱中培养24—48h。
2、取出试管，振荡2 min，再加入40%NaOH溶液lO一20滴，并用牙签挑入约O.5-lmg肌酸，振荡试管，以使空气中的氧溶入，置37℃恒温箱中保温15-30min后。
3、观察结果。
若培养液呈红色，即为V-P试验阳性反应，否则为阴性。
4、芽孢杆菌的运动性观察（穿刺培养）：（1）取两支牛肉膏蛋白胨半固体培养基，用接种针粘取少许菌苔，沿试管中央自上而下穿入，尽量沿原路返回，穿刺线要直。
（2）置于37℃温箱中培养48小时左右。
（3）观察菌体在半固体培养基中的生长状况，若向四周扩撒，说明能运动，着生鞭毛。
枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。
单个细胞 0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。
在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
为好氧或兼性厌氧的杆菌，一般为革兰氏染色阳性。
在某种环境下，菌体内的结构发生变化，经过前孢子阶段，形成一个完整的芽孢。
芽孢对热、放射线和化学物质等有很强的抵抗力。
在化学组成方面，在芽孢内含有大量营养细胞中不存在的二吡啶羧酸的钙盐；在结构方面，芽孢的原生质外围有三层膜，从内到外是厚的皮层（cortex）、孢子壳和孢子外膜。
在芽孢杆菌属中，对种的划分是以菌体的大小、孢子的形状及其在菌体内的位置、糖的利用及其产物、能否还原硝酸，以及在高浓度的食盐条件下能否生长等为依据。