《发酵工程实验报告》PPT课件
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2.由酶活的计算方法 酶活=F×m/30×31×V
其中V=0.3ml,F=1, 所以得到植酸酶酶活=11.07U/L
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13
谢谢欣赏！
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14
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11
（2）酶活的测定
反应顺序
样品1
1.加酶液/ml
0.3
2.加植酸钠/ml 0.9
Fra Baidu bibliotek
3.加乙酸缓冲液 /ml
0.9
4.混匀
√
5.37℃水解 30min
√
6.依次加入 TCA/ml
0.9
7.加显色液/ml 3
8.37℃水浴显色 /min
20
9.测OD值
0
样品2 0.3 0.9 0.9 √ √ 0.9 3 20 1.568
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4
四.实验步骤
1.先将实验所需溶液按相应浓度配置好。
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5
2.标准曲线制作
• （1）按表稀释磷溶液
试管号
123456
标准P液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
蒸馏水/ml 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0
相当无机磷
/ug
0 2 4 6 8 10
显色液/ml 3 3 3 3 3 3
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6
水浴加热
将装好的溶液摇匀，放 在37℃水浴锅中持续 20min,冷却。
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7
显色反应
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8
测稀释液的吸光值
在波长为660建n筑m精选处课件测吸光值
9
绘制标准曲线
以无机磷为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
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3.样品中植酸酶活力的测定
（1）酶液制备：摇瓶液为试样，在离心机中 以3000r/min转速离心15min，取清液 。
发酵工程实验报告
实验五 植酸酶酶活的测定
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1
一.实验目的
• 1.复习酶活力的测定方法。 • 2. 鉴定摇瓶发酵的黑曲霉的产酶能力。
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2
二.实验原理
• 植酸酶活性单位：样品在植酸钠浓度为 5.0mol/L,温度37℃，PH5.5的条件下，每 分钟从植酸钠中释放1umol无机磷，即为1 个植酸酶活性单位。
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样品3 0.3 0.9 0.9 √ √ 0.9 3 20 3.159
样品空白 0.3 0.9(TCA) 0.9 √ √ 0.9(植酸钠） 3 20 0.286
12
五.实验结果
1.取吸光度OD=3.159，将其替换为标准直线 中的y=1.0579x-0.1094中的y值，得到 x=3.0895，此值即为无机磷的质量。
• 在酸性溶液中正磷酸与钼酸作用生成磷钼 酸，后者当有还原剂（如Vc）存在时，立 即转化为蓝色还原物质，其最大吸收在 660nm处。
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3
三.试剂
1.乙酸缓冲液 2.植酸钠溶液 3.10%TAC 4.2.5%钼酸钠 5.10%Vc 6.17%硫酸 7.硫酸二氢钾（标准磷液） 8.显色液： （17%硫酸）：（水）：（2.5%钼酸钠）： （10%Vc）=1：2：1：1
其中V=0.3ml,F=1, 所以得到植酸酶酶活=11.07U/L
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（2）酶活的测定
反应顺序
样品1
1.加酶液/ml
0.3
2.加植酸钠/ml 0.9
Fra Baidu bibliotek
3.加乙酸缓冲液 /ml
0.9
4.混匀
√
5.37℃水解 30min
√
6.依次加入 TCA/ml
0.9
7.加显色液/ml 3
8.37℃水浴显色 /min
20
9.测OD值
0
样品2 0.3 0.9 0.9 √ √ 0.9 3 20 1.568
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四.实验步骤
1.先将实验所需溶液按相应浓度配置好。
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2.标准曲线制作
• （1）按表稀释磷溶液
试管号
123456
标准P液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
蒸馏水/ml 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0
相当无机磷
/ug
0 2 4 6 8 10
显色液/ml 3 3 3 3 3 3
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水浴加热
将装好的溶液摇匀，放 在37℃水浴锅中持续 20min,冷却。
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显色反应
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测稀释液的吸光值
在波长为660建n筑m精选处课件测吸光值
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绘制标准曲线
以无机磷为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
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3.样品中植酸酶活力的测定
（1）酶液制备：摇瓶液为试样，在离心机中 以3000r/min转速离心15min，取清液 。
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实验五 植酸酶酶活的测定
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一.实验目的
• 1.复习酶活力的测定方法。 • 2. 鉴定摇瓶发酵的黑曲霉的产酶能力。
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二.实验原理
• 植酸酶活性单位：样品在植酸钠浓度为 5.0mol/L,温度37℃，PH5.5的条件下，每 分钟从植酸钠中释放1umol无机磷，即为1 个植酸酶活性单位。
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样品3 0.3 0.9 0.9 √ √ 0.9 3 20 3.159
样品空白 0.3 0.9(TCA) 0.9 √ √ 0.9(植酸钠） 3 20 0.286
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五.实验结果
1.取吸光度OD=3.159，将其替换为标准直线 中的y=1.0579x-0.1094中的y值，得到 x=3.0895，此值即为无机磷的质量。
• 在酸性溶液中正磷酸与钼酸作用生成磷钼 酸，后者当有还原剂（如Vc）存在时，立 即转化为蓝色还原物质，其最大吸收在 660nm处。
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三.试剂
1.乙酸缓冲液 2.植酸钠溶液 3.10%TAC 4.2.5%钼酸钠 5.10%Vc 6.17%硫酸 7.硫酸二氢钾（标准磷液） 8.显色液： （17%硫酸）：（水）：（2.5%钼酸钠）： （10%Vc）=1：2：1：1