糜胰蛋白酶水解蛋白部位
一、糜胰蛋白酶水解蛋白部位
胰蛋白酶 胰脏 Arg ，Lys
糜蛋白酶
胰脏
Tyr ，Phe ，Trp
Leu
，Met ，His ，Asu ，Gln
二、糜蛋白酶激活条件及检测原理
1. 糜蛋白酶原激活原理
牛的α-胰凝乳蛋白酶的氨基酸残基数245个，分子量约2.5万，第57位组氨酸、102位天冬氨酸、195位丝氨酸等三个残基在催化作用中起着中心作用。195位丝氨酸受二异丙基氟磷酸（DFP ）的作用受特异的修饰而丧失活性，即所谓丝氨酸蛋白酶。
糜蛋白酶原
A
α-糜蛋白酶
+
两个二肽
2. 糜蛋白酶和底物(BAEE)反应原理
PH7.0 25℃
三、胰蛋白酶激活条件及检测原理
1.胰蛋白酶原激活原理
胰蛋白酶原胰蛋白酶+ 六肽
牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量为23300，活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。胰蛋白酶受肠激酶或胰蛋白酶本身的激活，第6位赖氨酸与第7位异亮氨酸残基之间的肽键被切断，水解掉一个六肽，酶分子空间构象发生改变，产生酶的活性中心，于是胰蛋白酶原变成了有活性的胰蛋白酶
2.胰蛋白酶与底物（BTEE）反应原理
酪蛋白磷酸肽的药理作用
酪蛋白磷酸肽的药理作用 【摘要】酪蛋白磷酸肽具有促进钙、铁、锌的吸收、利用，增强精卵的结合等作用。近年来对其进行了深入研究发现它在增强机体免疫力，促肿瘤细胞凋亡方面有潜在的药理作用，通过对其作用机制的研究，将为其用于临床提供理论依据。 【Abstract】Casein protein phosphorylation peptide with the promotion of calcium,iron,zinc absorption,utilization and enhance the integration of sperm，In recent years their has conducted in-depth study found that it enhanced immunity,and promote apoptosis of tumor cells have the potential pharmacological effects,through the mechanism of its role will be to provide a theoretical basis for clinical. 【Key words】Casein Phospho peptides; Pharmacological effects 英文：Casein Phospho Peptides(CPP) 别名：酪蛋白磷肽 化学结构：CPP的活性中心是成串的磷酸丝氨酸和谷氨酸族，其基本结构可表示为-serp-serp-serp-glu-glu-，相对分子质量约2000~4000。 性状：乳白色或淡黄色粉末，有轻微的芳香气味。易溶于水，水溶液呈中性，在酸性条件下不易沉淀。有良好的热稳定性。 来源与结构：Nato[1]最早用酪蛋白喂养大鼠,在肠内容物中发现CPP。Nicholas等[ 2-3]用胰酶或胰蛋白酶水解酪蛋白,精制、纯化制备CCP。CPPs有α和β两种构型[4]，其主要功能区是αSI-(59-79)5P和β(1-25)4P，不同条件下制备的CPP 都含有相同的核心构:-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu-(Ser:丝氨酸,Glu:谷氨酸,P:磷酸基)。此结构中磷酸丝氨酸残基［-Ser(P)-］成簇存在,在肠道pH弱碱性环境下带负电荷,可阻止消化酶的进一步作用,使CPP不会被进一步水解而在肠道中稳定存在。同时,-Ser(P)-对CPP 的功能发挥起重要作用。冯凤琴等[5]研究了CPP的纯度、CPP 中氮与磷摩尔比值(N∶P)与其功能的关系,发现N∶P 越小,CPP的肽链越短,磷酸基密度越大,CPP 纯度越高,促进钙吸收和利用的作用越强。 1 酪蛋白磷酸肽的药理功能 1．1 促进小肠对钙的吸收25-(OH)2VitD3可促进钙吸收,其吸收率取决于小肠内游离的钙离子浓度。人日常膳食中,谷类等植物性食物中含有大量的植酸、肌醇六磷酸等高磷成分,它们在小肠下端pH 7~8 的环境下与钙结合成磷酸钙沉淀,因此影响钙离子的被动吸收。CPP[1] 能抑制磷酸钙沉淀的形成,使游离钙保持较高的浓度,促进钙离子的被动吸收,从另一个途径提高钙离子的吸收率。冯凤琴等[3]用pH-stat法观察实验室制得的CPP抑制磷酸钙沉淀的效果。结果发现0．11~0．12 g/L的CPP使磷酸钙沉淀的形成延缓5~40 min。相同条件下,不加
酪蛋白水解物
酪蛋白水解物 一、中文名称：酪蛋白水解物 二、拉丁文名称/或英文名称：Lactium 三、主要成分：多肽 四、酪蛋白水解物（Lactium）的来源 酪蛋白水解物（Lactium）是以脱脂牛奶为原料，经过分离酪蛋白、水解、喷雾干燥等程序得到的一种酪蛋白水解产物。其典型化学成分为：蛋白质75%，脂肪1%，水分5%，灰分15%，乳糖1%。可溶解于水，无苦味，pH2-9时稳定，热稳定，可耐180℃高温50min。 酪蛋白水解后得到的αs1-Cn （f91-100），是一种含10个氨基酸的三维结构多肽，在Lactium中的典型含量为1.8%，其氨基酸序列为：Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Arg。 五、酪蛋白水解物（Lactium ）生产工艺流程图和简述 1.工艺流程图： 脱脂牛奶 酪蛋白分离 碱化 胰蛋白酶水解
酸化 热处理 巴氏杀菌 浓缩、喷雾干燥 过筛 包装 2. 工艺说明 1.）以脱脂牛奶为原料，沉淀分离酪蛋白 2.）使用氢氧化钠将其碱化到pH为7.5-8.5之间 3.）在40-55℃下用胰蛋白酶进行水解。得到的产物中，游离10肽在干物质中的含量最低为1.8%。 4.）用盐酸进行酸处理，将pH降到3.0- 5.0 5.）在90℃下热处理1.5分钟 6.) 85℃进行巴氏杀菌、浓缩，此步骤为关键控制点 7.）喷雾干燥（进风温度180-200℃），得到粉末产品。 8.）过筛得到粒度在1mm以下的均匀粉末，其中游离10肽的含量最低为1.8%。此过程为关键控制点。
3. 拟公告的生产工艺简述：以脱脂牛奶为原料，经过酪蛋白分离、水解、浓缩、喷雾干燥等工艺制成。 六、酪蛋白水解物（Lactium）对酸奶的促进作用 酸奶具有促进肠道蠕动与消化和机体物质的代谢，并具有提高人体免疫力、防衰老、抗肿瘤等作用。酸奶中的大量乳酸菌及乳酸代谢产物能调节人体肠道微生态平衡，达到补充营养、防病、治病和保健的目的。 将酪蛋白水解物(含蛋白质7.6%)以2%(w/w)添加到奶液中混合发酵,做空白样对照。研究了二者发酵过程中各发酵参数的变化,并对二者的质构进行了分析比较。研究结果表明:酪蛋白水解物能明显促进酸奶发酵;促发酵作用随所添加的水解物水解程度提高而增强;添加酪蛋白水解物改变了酸奶发酵过程中的 pH 下降速度,在发酵中期二者的 pH 下降速度之间存在最大差距;质构分析表明添加2%酪蛋白水解物对酸奶整体质构有所改善。 七、酪蛋白水解物（Lactium）的作用 1、增强记忆力 2、提高精神状态、集中注意力 3、提高睡眠质量下降 4、缓解压力 5、控制体重 6、美容养颜 八、酪蛋白水解物（Lactium）的适应人群 1、记忆力下降者 2、注意力不集中精神状态不佳者 3、失眠、睡眠质量下降者 4、工作、生活、学习压力大者 5、肥胖人群 6、需要美容养颜者 九、酪蛋白水解物（Lactium）的社会及经济效益 在现代社会，生活节奏加快，人们面对的各种各样的压力越来越大。由于个体差异，
酪蛋白课程报告
生物技术学院 课程论文 课程名称：高级生物化学成绩： 教师签名：
酪蛋白研究进展综述 提纲：酪蛋白简介－酪蛋白亚基结构－酪蛋白酶特性－酪蛋白活性肽研究进展 摘要：酪蛋白是一种含磷钙的结合蛋白，常见于哺乳动物及其乳汁中，如母牛、羊 以及人奶。酪蛋白对酸敏感，pH较低时会沉淀，因此本科生实验室常用其进行蛋 白质的沉淀反应。哺乳动物的主要蛋白是α-酪蛋白，然而人类乳汁中没有α-酪蛋 白，人乳中的酪蛋白主要是β-酪蛋白形式。对于人类幼儿而言，酪蛋白是氨基酸 的来源，但同时，它也是钙和磷的主要来源，同时，因为胃的酸性环境，酪蛋白还 能在胃中形成凝乳以便消化。本文综合中外文献，对酪蛋白进行了研究进展综述。 关键词：酪蛋白；蛋白亚基；活性肽 酪蛋白简介 在20℃，pH值为4.6时，牛乳中能沉淀下来一种呈酸性的蛋白质，我们将其称为酪蛋白。酪蛋白又名干酪素、乳酪素、酪朊，在牛奶中含量非常丰富。它是一种含磷的蛋白质，具有极高的营养价值，其中含有多种生物活性肽，因此它具有抗菌、降血压、抗氧化和促进双歧杆菌增殖等功能。 酪蛋白在母体蛋白质序列内是无活性的，通过体内或体外酶水解的方式释放出来后，它们即可作为具有类似激素活性的调节物质。这些产物可用作肽类药物、肽类试剂，主要用于科学试验和生化检测;也可用于活性肽功能性食品中，具有增强机体防御功能、调节生理节律、预防疾病和促进康复等功能。 酪蛋白的亚基结构 酪蛋白的分子质量约为20－25ku，由4类遗传变种组成，分别为αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白和K-酪蛋白。其中，αs2-酪蛋白是牛乳中的主要酪蛋白，占总含量的38%；β-酪蛋白含量仅次于αs-酪蛋白，占总含量的35%，
胰蛋白酶活力测定
实验胰蛋白酶活力测定 一、原理 福林—酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原为蓝色化合物（钨蓝和钼蓝）。 蛋白质中含具酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用胰蛋白酶水解蛋白底物，生成含酚基的氨基酸与福林—酚试剂反应，生成蓝色化合物，在一定的范围内，蓝色化合物颜色的深浅与酶活力的大小成正比。 二、实验仪器 试管 7220分光光度计 恒温水浴锅 三、实验试剂 福林试剂B：见福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度部分(冰箱中) 0.55mol/L碳酸钠溶液：58.3g无水碳酸钠溶于蒸馏水，稀释并定容至1000ml 10%三氯乙酸溶液 0. 2mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)： 0.5% 酪素溶液：称取0.5g酪素，以0.5mol/L氢氧化钠1ml湿润，再
加少量0. 2mol/L 磷酸缓冲液稀释。在水浴中煮沸溶解，冷却，稀释并容至100ml ，冷藏在(冰箱)里。 500ug/L 酪氨酸溶液 胰蛋白酶溶液(冰箱中) 四、实验步骤 标准曲线的制作：按下表加入试剂： 0.20.40.60.81.0蒸馏水 1.0 0.80.60.40.20500ug/L 酪氨酸溶液6 54321管号 各管中加0.5%酪素2ml ，于37℃水浴中反应15分钟，然后加入10%三氯乙酸3ml ，过滤除去沉淀，取清液1ml ，加入0.55mol/L 碳酸钠5ml ，再加入福林试剂1ml ，于37 ℃水浴中显色15分钟，测OD 680。 以光密度为纵坐标，酪氨酸的微克数为横坐标绘制标准曲线。 样品测定：取干燥的试管2支，按下表加入试剂
0 OD6801 1福林试剂B 5.0 5.0 0.55mol/L碳酸钠溶液 37水浴中显色15分钟1 1上清液 过滤3.0 3.0 10%三氯乙酸溶液1.0 0 2mg/ml胰酶溶液0 1.0 0. 2mol/L磷酸缓冲液 37水浴中酶解15分钟2.0 2.0 0.5%酪素溶液 备注2 1 管号 五、结果计算 酶活力：在37℃下每分钟水解酪素产生lug酪氨酸为一个活力单位。样品中含酶活力单位=A/15 ╳F A—样品测定光密度查曲线得相当酪氨酸ug数 F—酶液稀释倍数 原始数据：（注：7号为待测液） 液体编 号 0 1 2 3 4 5 7 分光光 度计值 0 0.057 0.172 0.201 0.255 0.373 0.919 分光光 度计值 0 0.057 0.173 0.194 0.263 0.386 0.928 分光光 度计值 0 0.068 0.174 0.194 0.271 0.391 0.934
酪蛋白磷酸肽的概况
酪蛋白磷酸肽的概况 第一节：酪蛋白磷酸肽的基本概况 中文名称：酪蛋白磷酸肽 英文名称：Casein Phosphopeptides 钙是人体内含量最丰富的元素之一，对人体健康起着十分重要的作用，然而它也是最易缺乏的矿物质元素之一。当今世界上缺钙已成为一大营养问题，即使经济很发达的国家也未能幸免，在我国表现得尤为突出。据报道，我国老年人因缺钙引起的骨质疏松发病率高达30%-50%，儿童因缺钙引起的佝偻病高达40%，妊娠妇女缺钙比例也非常高，严重威胁着人们的健康。因此，补钙是众所需求。 现代研究已证实钙缺乏的主要原因并不是食物不足，而是由于吸收率低下。如何提高钙的吸收率，是人们长期以来一直在进行的研究。而今从牛奶中分离的一种生物活性肽——酪蛋白磷酸肽（CPP），由于具有很强的促钙吸收活性，正成为功能性食品添加剂的开发和研究热点。 酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptides），简称CPP，是以牛奶酪蛋白为原料，经单一酶或复合酶水解，再对水解产物进行分离纯化而得到的含有簇磷酸丝氨酚的多肽。专家们认为，将钙和CPP应用于各类食品中，作为一种食品基料，可提高食品的附加值，使人们长期存在的钙摄取量不足的问题得以解决，有效地预防骨质疏松症和儿童缺钙症。 CPP具有促进成长期儿童骨骼和牙齿发育的作用，并能预防和改善骨质疏松症，促进骨折患者的康复，预防和改善缺铁性贫血；还具有抗龋齿作用。 CPP可添加于各类食品。包括饮料、烘烤食品、冷饮、乳制品、发酵食品、快餐食品、糖果、果酱、儿童咖喱饭、口香糖及保健品和调料中，可满足各种年龄段人群的需要。CPP还可用于动物饲料中，促进动物体外受精。纯CPP和高纯CPP可应用于制药工业，能进一步促进钙质吸收，防止矿物质流失。
蛋白酶活力的测定
实验三蛋白酶活力的测定 一、目的 掌握用分光光度计法测定蛋白酶活力的原理与操作技术。 二、原理 蛋白酶水解酪蛋白，其产物酪氨酸能在碱性条件下使福林——酚试剂还原，生成鉬蓝与钨蓝，以比色法测定。 三、试剂及仪器 1．福林—酚试剂 称取50g钨酸钠(Na2WO4?2H2O)，12.5g钼酸钠(Na2MoO4?2H2O)，置入1000mL原底烧瓶中，加350mL水，25mL85%磷酸，50mL浓盐酸，文火微沸回流10h，取下回流冷凝器，加50g硫酸锂(Li2SO4)和25mL水，混匀后，加溴水脱色，直至溶液呈金黄色，再微沸15min，驱除残余的溴，冷却，用4号耐酸玻璃过滤器抽滤，滤液用水稀释至500mL。 使用时用2倍体积的水稀释。 2．0.4mol/L碳酸钠溶液：称取42.4g碳酸钠，用水溶解并定容至1000mL。 3．0.4mol/L三氯乙酸溶液：称取65.5g三氯乙酸，用水溶解并定容至1000mL。 4．2%酪蛋白溶液 称取2.00g酪蛋白(又名干酪素)，加约40mL水和2~3滴浓氨水，于沸水浴中加热溶解，冷却后，用pH7.2磷酸缓冲溶液稀释定容至100mL，贮存于冰箱中。 5．pH7.2磷酸缓冲液 0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液：称取31.2g磷酸二氢钠(NaH2PO4?2H2O)，用水溶解稀释至1000mL； 0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液：称取71.6g磷酸氢二钠(Na2HPO4?12H2O)，用水溶解稀释至1000mL； pH7.2磷酸缓冲溶液：取28mL 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液和72mL 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液，用水稀释至1000mL。 6．标准酪氨酸溶液： 准确称取0.1g DL-酪氨酸，加少量0.2mol/L盐酸溶液(取1.7mL浓盐酸，用水稀释至100mL)，加热溶解，用水定容至1000mL，每毫升含DL-酪氨酸100微克。 7．仪器：分光光度计、试管 四、操作步骤 1．标准曲线绘制 在上述各管中各取1mL，分别加入5mL 0.4mol/L碳酸钠溶液，1mL福林—酚试剂，于400C水浴显色20min，在680nm波长下测吸光度，绘制标准曲线，在标准曲线上求得吸光度为1时相当的酪氨酸μg数，即为K值。 2．酶液的制备
胰蛋白酶的动力学研究
实验三：胰蛋白酶的动力学研究 一.实验目的 1.掌握酶的米氏常数km值和Vmax的测定原理和方法。 2.了解底物浓度对酶促反应速率的影响。 二.实验原理 1.米氏方程：V=Vmax[S]/km+[S] V是反应初速度，[S]是底物浓度 2.采用双倒数作图法，对1/V=km/(Vmax[S])+1/Vmax作图： 3.本实验以酪蛋白为底物，来测定胰蛋白酶的km值 氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡： －NH3是弱酸，完全解离时PH为11－12或更高，若用碱滴定－NH3所释放的H＋来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示滴定终点。 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使－NH3释放H＋，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。 如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品为多种氨基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明水解作用已完全。 三.试剂与仪器 1.0.5%的胰蛋白酶溶液，用无离子水溶解。 2.酪蛋白酶溶液：40g/L，30 g/L，25 g/L，20 g/L，15 g/L，10 g/L，5 g/L，2.5 g/L；用稀碱溶解。
3.0.25%的酚酞溶液：2.5g酚酞用50%的酒精溶解，定容至1L。其变色范围是8.0—10.0（无色红 色）。 4.中性甲醛溶液：75ml分析纯甲醛加15ml0.25%酚酞乙醇溶液，以0.01mol/lNAOH滴定至微红，密闭 存放于棕色玻璃瓶中。 四.操作步骤 1. 组号 1 2 3 4 5 6 7 8 2.准备：7个50ml的三角瓶（分别编号：0 6），分别加入2.5ml中性甲醛与1滴酚酞（如果所取 甲醛已是微红色，则不用加碱；若不是微红色，以0.01mol/lNAOH滴定至微红色）。7瓶溶液的颜色应当一致。 3.滴定空白：按照操作1中的组号分别在0号三角瓶中加入5ml相对应的酪蛋白底物，以0.01mol/l 标准的NAOH滴定到微红色，记录消耗NAOH的体积。 4.1个200ml的碘量瓶（带磨口塞三角瓶），加40ml操作1中的组号相对应的酪蛋白底物，记为V空白， 在37℃水浴恒温锅中水浴10min，胰蛋白酶溶液也要在37℃水浴恒温锅中水浴10min。 5.10min到点后，取4ml胰蛋白酶溶液加入到酪蛋白溶液中，充分混匀，立即取出5ml反应液加入1 号三角瓶中，计时开始（0时刻）。滴入2滴酚酞，用0.01mol/lNAOH滴定至微红色，记录体积V0min。 6.按照操作5的步骤，在保温2min，4min，6min，8min，10min后，分别取反应液加入到2——6号 三角瓶中，分别滴入2滴酚酞，并用0.01mol/lNAOH滴定至微红色，分别记录体积V2min、V4min、V6min、V8min、V10min。 五.结果与分析 1.
生物活性肽研究现况和进展_李勇
生物活性肽研究现况和进展 李 勇 (北京大学公共卫生学院营养与食品卫生学系,北京,100083) 摘 要 生物活性肽指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物,包括内源性和外源性生物活性肽;其吸收机制优于游离氨基酸,且具有氨基酸不可比拟的生理功能和改善食品感官效应。海洋生物活性肽资源丰富,有增强免疫、抗氧化、抗高血压、抗肿瘤、抗菌和抗病毒等活性,开发利用前景广阔。关键词 肽,生物活性肽,海洋生物活性肽,生理功能 收稿日期:2006-01-03 1 肽和生物活性肽基本概念 肽(peptides )是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,是蛋白质的结构与功能片段,并使 蛋白质具有数以千万计的生理功能。肽本身也具有很强的生物活性。氨基酸是其基本构成单位,由2个或3个氨基酸脱水缩合而成的肽分别叫二肽和三肽,以此类推为四肽、五肽。一般说来,肽链上氨基酸数目在10个以内的叫寡肽,10～50个的叫多肽,50个以上的叫蛋白质。人们习惯上也把寡肽中的二、三肽称为小肽。由于构成肽的氨基酸种类、数目与排列顺序的不同,决定了肽纷繁复杂的结构与功能。 生物活性肽(biologically active peptide /bioactive peptide /biopeptide )是指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物,又称功能肽(func -tional peptide )。肽由氨基酸组成,人体存在20种氨基酸,由不同的氨基酸的种类排列,加上数量排列形成,再加上还可能有的二级、三级结构,其种类是十分庞大的。每一种活性肽都具有独特的组成结构,不同活性肽的组成结构决定了其功能。此外活性肽在生物体内的含量是很微量的,但却具有显著的生理活性。据研究,有些多肽在10-7mol /L 的浓度时仍具有生理活性,就是说1m L 的多肽用60倍水稀释后,仍然具有生理功能。而且生物体可依据生理状态来合成和降解活性肽,因此,具有调节功能的活性肽的半衰期均很短。1975年Hughes 等首先报道从动物组织中发现了具有类吗啡活性的小肽;1979年Brantl 等从酶解的酪蛋白水解产物中分离到1个七肽物质(Tyr -Pro -Phe -Pro -Gly -Pro -Ile ),为β-酪蛋白的第60～66氨基酸残基片段,具有阿片活性。阿 片样肽(opioidpeptide )具有类阿片受体配体活性,能够作为激素和神经递质与体内的受体相互作用,具有镇痛和调节人体情绪、呼吸、脉搏、体温的功能。内源性阿片肽包括脑啡肽、内啡肽、强啡肽、孤啡肽。目前 已经从小麦谷蛋白和大米蛋白中提取出了外源性阿片样肽。它们与普通镇痛剂的不同点是经过消化道进入人体后无任何副作用,不会有成瘾性,这方面已成为药理学、功能食品学研究的热点。目前已经从动、植物和微生物中分离出多种多样的生物活性肽。生物活性肽的结构可以从简单的二肽到较大分子的多肽(数百个氨基酸)。生物活性肽的生物学意义主要体现在其吸收机制优于氨基酸和具有氨基酸不可比拟的生理功能两个方面,其生理功能主要有类吗啡样活性、激素和调节激素的作用,对生物体内的酶具有调节和抑制功能,免疫调节,抗血栓,抗高血压,降胆固醇,抑制细菌、病毒,抗癌作用,抗氧化和清除自由基作用,改善元素吸收和矿物质运输,促进生长,调节食品风味、口味和硬度等。因此,生物活性肽是筛选药物、制备疫苗和食品添加剂的天然资源宝库。 2 生物活性肽分类 2.1 按来源分———内源性生物活性肽和外源性生物活性肽 目前,生物活性肽尚无较为一致的分类方法。按其来源可分为内源性的生物活性肽和外源性的生物活性肽两类。内源性生物活性肽即机体内存在的天然的生物活性肽,主要包括体内一些重要内分泌腺分泌的肽类激素,如促生长激素释放激素、促甲状腺素、肝脏合成的类胰岛素生长因子、胸腺分泌的胸腺肽、脾脏中的脾脏活性肽、胰腺分泌的胰岛素等;由血液或组织中的蛋白质经专一的蛋白水解酶作用而产生的组织激肽,如缓激肽、胰激肽;作为神经递质或神经
胰蛋白酶活性测定
胰蛋白酶活性测定 在动物胰脏中，胰蛋白酶是以无活性的酶原状态存在的。在生理条件下，胰蛋白酶原随胰液分泌至十二指肠后，在小肠上腔有Ca2+的环境中，为肠激酶或胰蛋白酶所激活，其肽链 N -端的赖氨酸与异亮氨酸之间的一个肽键被水解，失去一个酸性6肽，其分子构象发生一定的改变后转变为具有催化蛋白质水解活性的胰蛋白酶。 胰蛋白酶原分子量约为24 000，其等电点为pH8.9；胰蛋白酶的分子量约为23 400，其等电点为pH 10.8。 胰蛋白酶在pH3.0时最稳定，其浓溶液可贮存于冰箱（0℃以下）数周而活性无显著丧失。pH＜3时，胰蛋白酶易变性。 PH＞５时，胰蛋白酶易自溶。胰蛋白酶催化活性的最适pH为7.6～7.8。 重金属离子、有机磷化合物和反应产物都能抑制胰蛋白酶的活性。胰脏、卵清和大豆中也含有一些蛋白质对胰蛋白酶活性具有抑制作用。 [原理] 胰蛋白酶能催化蛋白质的水解，对于由碱性氨基酸（如精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的肽键具有高度的专一性。此外，胰蛋白酶也能催化由碱性氨基酸的羧基所形成的酰胺键和酯键，有高度的专一性仍表现为对碱性氨基酸羧基一侧的选择对此等化学键的催化水解活性的敏感度为：酯键＞酰胺键＞肽键。因此，可以利用含有这些化学键中任一种键型的底物来研究胰蛋白酶的专一催化活性。 本实验方法一采用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯[（BAEE），N-benzoyl-L-arginine ethyl ester]作为底物. N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）在波长253nm下的紫外光吸收远远弱于N-苯甲酰-L-精氨酸[（BA），benzoyl-L-arginine]的紫外光吸收。在胰蛋白酶的催化下，BAEE随着酯键的水解，水解产物 BA逐渐增多，反应体系的紫外光吸收亦随之相应增加，以△A253nm计算胰蛋白酶的活性。 胰蛋白酶的BAEE单位定义为：以BAEE为底物，在一定反应条件下，每分钟使△A253nm增加
实验六 胰蛋白酶的结晶及活力测定
实验一胰蛋白酶的结晶及活力测定 原理 胰蛋白酶（trypsin，EC.3.4.21.4）通常是以无活性的胰蛋白酶原（trypsinogen）形式存在于动物的胰脏中。在生理条件下，胰蛋白酶原随胰液分泌到十二指肠后，在小肠上腔有钙离子的环境中被肠激酶（enterokinase）或胰蛋白酶所激活，其肽链N端的赖氨酸与异亮氨酸之间的一个肽键被水解而失去一个酸性6肽，分子构象发生改变，转变成有生物活性的胰蛋白酶。 胰蛋白酶原的M r约为24000，其等电点为pH8.9。胰蛋白酶的的M r为23400，等电点为pH10.8。胰蛋白酶在酸性条件下稳定。通常在pH3.0的溶液内，在4的冰箱内储存数约乃至2年其活性无显著变化。当溶液的pH值小于2.5时，胰蛋白酶易变性；pH大于5.0时，容易发生自溶；在pH7.6~8.0时，其催化水解的活性最佳。 重金属离子，有机磷化合物和某些反应产物均可抑制胰蛋白酶的活性。在胰脏、卵清和大豆中含有一些对胰蛋白酶活性具有抑制作用的天然抑制剂。 胰蛋白酶催化水解蛋白质的能力，表现在它对碱性氨基酸（如精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸所形成的肽键具有高度的专一性。此外，还能催化水解有碱性氨基酸所形成的酰胺键和酯键，胰蛋白酶对这些化学键催化水解活性的敏感性依次是酯键＞酰胺键＞肽键。因此，可以利用含有这些化学键的人工合成的化合物为底物来研究胰蛋白酶的专一性催化活性。 在动物的胰脏中除了存在胰蛋白酶外，还有另外两种与胰蛋白酶的性质相似的蛋白水解酶，即：胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）亦称糜蛋白酶，弹性蛋白酶(elastase)。在制备过程，采用常规的方法往往很难将三者彼此分离开。而采用具有高度专一性的亲合层析法可将它们分开。 从胰脏中提取胰蛋白酶，一般是用稀酸将胰腺细胞中含有的胰蛋白酶原提取出来，然后根据等电点沉淀的原理将提取液的pH调至酸性（pH3.0左右），使大量的酸性蛋白沉淀析出。经硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原，胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原沉淀，抽滤后的沉淀物经水溶解并调至pH8.0，用极少量的胰蛋白酶将胰蛋白酶原激活，同时溶液中的胰凝乳蛋白酶原、弹性蛋白酶原也被激活。三种酶原激活相互作用过程如下： 流程图
天然功能性食品添加剂——酪蛋白磷酸肽的研究进展
天然功能性食品添加剂——酪蛋白磷酸肽的研究进展 摘要：酪蛋白磷酸肽( CPPs) 是含有成簇的磷酸丝氨酸的生物活性肽，现已证明， CPPs 具有重要生理功能。本文就 CPPs 的结构、理化性质、制备工艺、检测方法、生理功能及应用进行了系统的概述。 关键词：酪蛋白磷酸肽；结构；制备；生理功能；应用 引言 酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphope Ptides，CPPs）是以牛奶酪蛋白为原料，经过单一或复合蛋白酶的水解，再对水解产物分离纯化后得到的含有磷酸丝氨酸簇的天然生理活性肽[1]。CPPs能促进机体肠粘膜对钙、铁、锌和硒，尤其是钙的吸收和利用，被誉为“矿物质载体”。CPPs是目前唯一促进钙吸收的活性肽，同时在提高机体免疫力、改善繁殖性能等方面也有重要作用。日本、德国等国家已把CPPs定为功能性食品，与CPPs相关的研究越来越受到我国科学家和食品工作者的广泛关注。 1 CPPs的结构 牛乳酪蛋白的主要成分为αs1、αs2、β和κ-酪蛋白，除κ一酪蛋白外，α和β一酪蛋白都具有成簇存在的磷酸丝氨酸残基(Ser一P)。酪蛋白经体外酶水解后，产生CPPs，CPPs的核心部位是由3个磷酸丝氨酸残基组成的一个一Ser(P)一残基簇，后面紧接着2个一Glu一残基，即一serP一SerP一SerP一Glu一Glu一，现已证明这个结构是发挥其生物活性必不可少的。 Hiroshil等1974年用动物实验表明，酪蛋白可在动物体内形成CPPs，并确定其结构为serP一serP-SerP一Glu一Ile一Pro一Asn。1996年Nieholasf 习等用胰蛋白酶水解酪蛋白，得到包含有一SerP一SerP一SerP-Glu一Glu一序列的CPPs，从而得知了CPPs实际上是一类含有磷酸丝氨酸和谷氨酸的短肽，其产品分子量不均一[2]。 2 CPPs的理化性质 2.1 溶解性 CPPs 产品具有良好的溶解性，其pH值为2.0～10.0，其溶解性除在pH值4.0 约为90%外，其他均高于90%，且溶解性随 pH 值的增高而增大。 2.2 起泡性 CPPs 产品较酪蛋白具有更好的起泡性和泡沫稳定性。 2.3 乳化力 CPPs 产品乳化力较好。但与酪蛋白相比有所下降。同时，CPPs 产品的乳化性和乳化稳定性与酪蛋白相比，分别下降了2.89%和1.45倍。 2.4 热稳定性在 CPPs 产品加工时可以进行有效的杀菌处理，在100 ℃ 30 min 条件下杀菌不会使产品外观改变。CPPs作为钙、铁吸收促进剂，Ca2 +的存在不会影响产品的色泽[3］。 3 CPPs的制备工艺 在 Hannu 等［4］的一项研究中总结了制备生物活性肽(包括CPPs)的途径主要有以下 3 种: 一是在体内通过消化酶的水解，二是用有蛋白水解性的微生
蛋白酶整理
一、蛋白酶的分类、主要用途及作用 二、产蛋白酶菌株的筛选 三、产酶发酵 四、蛋白酶活性测定的方法
蛋白酶的分类、主要用途及作用 酶：酶是具有生物催化功能的生物大分子。 蛋白酶：水解蛋白质肽键的一类酶的总称 蛋白酶分类： 1据水解多肽的方式分为内肽酶和外肽酶 2据反应的最适pH值分为酸性，碱性，中性蛋白酶 蛋白酶简介：广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。催化蛋白质水解的酶种类很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶等。蛋白酶对所作用的底物有严格的选择性，一种蛋白酶只能作用于蛋白质分子中一定的肽键，如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键。蛋白酶分布广泛，主要存在于人和动物消化道中，在植物和微生物中含量丰富，由于动植物资源有限，工业生产上生产蛋白酶制剂主要利用枯草杆菌等微生物发酵设备。
一、酸性蛋白酶 定义： 酸性蛋白酶是一种能在酸性环境下水解蛋白质的酶类 注：酸性蛋白酶是指蛋白酶具有较低的最适pH,不是指酸性基团存在于酶的活性部位. 简介： 主要来源于动物的脏器和微生物分泌物，包括胃蛋白酶、凝乳酶和一些微生物蛋白酶。根据其产菌的不同，微生物酸性蛋白酶可以分为霉菌酸性蛋白酶、酵母菌酸性蛋白酶和担子菌酸性蛋白酶，根据作用方式可以分为两类：一类是与胃蛋白酶相似，主要的产酶微生物是曲霉、青霉和根酶等；另一类是与凝乳酶相似，主要产酶微生物是毛酶和栗疫酶等， 从酶的活力-PH曲线分析,在酶的活性部位中含有一个或更多的羧基，这一类蛋白酶中研究最彻底的是胃蛋白酶。酸性蛋白酶具有较好的耐酸性，目前用于工业化生产的酸性蛋白酶大多为霉菌酸性蛋白酶，此类酶的最适作用pH值为3.0左右，当pH值升高时，酸性蛋白酶的酶活会明显降低，且此类酶不耐热，当温度达到50℃以上时很不稳定，从而限制了酸性蛋白酶的应用范围。 基本性质 酸性蛋白酶的最适PH从2左右(胃蛋白酶)到4左右 应用 1酿酒：酸性蛋白酶在酿酒的过程中起协同作用，具有溶解发酵原料，促进微生物繁殖，降解酵母菌体蛋白等多种功能。 2毛用酸性蛋白酶最适ph3.5，最适温度40度，用该酶处理预处理后的羊毛，可以得到较大的减量率和较好的细度。面临的问题：酶对羊毛的作用活力不高。3食品工业：食品上用以淀粉改良，提高食品风味、改良品质，因能提高氨基酸含量 4啤酒生产：能有效阻断双乙酰生成，缩短啤酒成熟期。 饲料添加剂：提高饲料利用率。 二、碱性蛋白酶 简介 碱性蛋白酶是由造育的地衣芽孢杆菌发酵而得，主要成分为枯草杆菌蛋白酶，是一种内切酶，催化部位为丝氨酸，分子量约为27300。碱性蛋白酶是由造育的地衣芽孢杆菌发酵而得，主要成分为枯草杆菌蛋白酶，是一种内切酶，催化部位为丝氨酸，分子量约为27300。
生物活性肽的研究及其进展讲解
生物活性肽的研究及其进展 摘要：生物活性肽作为一种来源广泛、种类繁多、功能性良好的生命因子，目前已成为全球范围内的研究热点。研究表明这些肽除具有常规的生物活性,如增加矿物质吸收、调节血压、抗菌、抗氧化、降胆固醇、免疫调节之外还对人类营养有调节作用,因而受到广泛关注。本文综述了生物活性肽的种类、生理功能、吸收、制备研究进展,以期为生物活性肽的进一步研究和应用提供参考。 关键词：生物活性肽，生理活性，吸收 Research and progress of biological active peptide Abstract:Bioactive peptides as one rich sources, wide variety, good functional life factors have been a global research hot spot. Studies have shown that these peptides have some conventional biological activities, such as increase mineral absorption, adjust blood pressure, antibacterial, antioxidant, decrease cholesterol, regulate immune. What’s more, they also have a regulating effect on human nutrition, so they have attracted widely attention. The kinds of bioactive peptides was reviewed in this paper, preparation research progress of physiological function, absorption and biological active peptide in order to provide reference for further research and application. Key words:Biological active peptide, Physiological activity, Absorb 1.功能肽的简介 肽(peptides)是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,是蛋白质的结构与功能片段,并使蛋白质具有数以千万计的生理功能。肽本身也具有很强的生物活性。是由蛋白质中20种天然氨基酸以不同的组合和排列的方式构成的，从二肽到复杂的线性或者环状的多肽的总成。一般说来,肽链上氨基酸数目在10个以内的叫寡肽,10～50个的叫多肽,50个以上的叫蛋白质。人们习惯上也把寡肽中的二、三肽称为小肽。由于构成肽的氨基酸种类、数目与排列顺序的不同,决定了肽纷繁复杂的结构与功能。 生物活性肽( biologically active peptide/ bioactive peptide/ biopeptide) 是指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物,又称功能肽(functional peptide)[1]。肽由氨基酸组成,人体存在20 种氨基酸,由不同的氨基酸的种类排列,加上数量排列形成,再加上还可能有的二级、三级结构,其种类是十分庞大的[2,3]。每一种活性肽都具有独特的组成结构,不同活性肽的组成结构决定了其功能。此外活性肽在生物体内的含量是很微量的,但却具有显著的生理活性。据研究,有些多肽在10 - 7mol/ L 的浓度时仍具有生理活性,就是说1 mL 的多肽用60 倍水稀释后,仍然具有生理功能。功能肽是源于蛋白质的多功能化合物，是多样化且来源充足的食品原料，具有多种人体代谢和生理调节功能，如易消化吸收、促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等[4] 现代营养学研究发现，人体摄入蛋白质经消化道中的酶作用后，大部分是以寡肽的形式
蛋白酶催化蛋白质水解
蛋白酶催化蛋白质水解 1、酶的重要性 生命的最主要、最基本的特征在于生物体的新陈代谢，具体表现为活体经常由外部摄取所需要的物质，以生物能为动力，经过体内同化、更新、异构化，并排出一些物质，发散热能至外界。机体或单个细胞的所有这些化学反应，基本上是在催化剂作用下完成的。酶是人体内新陈代谢的催化剂，只有酶存在，人体内才能进行各项生化反应。人体内酶越多，越完整，其生命就越健康。当人体内没有了活性酶，生命也就结束。人类的疾病，大多数均与酶缺乏或合成障碍有关。2、酶的生物学功能 在生物体内，酶发挥着非常广泛的功能，具体功能如下： （1）信号转导和细胞活动的调控都离不开酶。特别是激酶和磷酸酶的参与。 （2）酶也能产生运动。通过催化肌球蛋白上ATP的水解产生肌肉收缩，并且能够作为细胞骨架的一部分参与运送胞内物质。 （3）参与在动物消化系统的工作。以淀粉酶和蛋白酶为代表的一些酶可以将进入消化道的大分子（淀粉和蛋白质）降解为小分子，以便于肠道吸收。淀粉不能被肠道直接吸收，而酶可以将淀粉水解为麦芽糖或更进一步水解为葡萄糖等肠道可以吸收的小分子。不同的酶分解不同的食物底物。 （4）在代谢途径中，多个酶以特定的顺序发挥功能：前一个酶
的产物是后一个酶的底物；每个酶催化反应后，产物被传递到另一个酶。有些情况下，不同的酶可以平行地催化同一个反应，从而允许进行更为复杂的调控：比如一个酶可以以较低的活性持续地催化该反应，而另一个酶在被诱导后可以较高的活性进行催化。酶的存在确定了整个代谢按正确的途径进行；而一旦没有酶的存在，代谢既不能按所需步骤进行，也无法以足够的速度完成合成以满足细胞的需要。实际上如果没有酶，代谢途径，如糖酵解，无法独立进行。例如，葡萄糖可以直接与ATP反应使得其一个或多个碳原子被磷酸化；在没有酶的催化时，这个反应进行得非常缓慢以致可以忽略；而一旦加入己糖激酶，在6位上的碳原子的磷酸化反应获得极大加速，虽然其他碳原子的磷酸化反应也在缓慢进行，但在一段时间后检测可以发现，绝大多数产物为葡萄糖-6-磷酸。于是每个细胞就可以通过这样一套功能性酶来 完成代谢途径的整个反应网络。 3、酶的分类 酶可分为二类，第一类是所谓的单纯酶，其催化活性仅由酶蛋白提供；第二类称为结合酶，除了蛋白质外，还需含有其他成分才呈现催化活性。这些成分包括无机离子，Fe卄、Zn卄.Mn卄等或有机化 合物，如硫胺素焦磷酸、黄素腺嘌呤二核苷酸等。这些化学组分称为辅助因子，这类化合物称为辅酶。这类酶也称为全酶。 按国际生化会的规定，将现已分离得到的2000多种酶按所催化 的反应类型分类，可分为以下六种。 (1)氧化还原酶
小肽
小肽在动物营养中的作用 传统的蛋白质消化、吸收理论认为：蛋白质在肠道内，由胰蛋白酶和糜蛋白酶作用生成游离氨基酸和寡肽，寡肽在肽酶的作用下完全被水解成游离氨基酸，并以游离氨基酸形式进入血液循环，即动物对蛋白质的需要就是对氨基酸的需要，给动物提供充足的必需氨基酸，动物就能获得满意的生产性能，这一观点一直指导着动物营养的研究和生产实践，给蛋白质营养的研究引入了一个误区。 早在1921年Boegland就提出了小肽转动的可能性，但人们受其传统蛋白质消化吸收理论的影响，对其完整吸收的方式难易接受，至到60年代以后，许多学者作了大量的试验发现，用纯合日粮或低蛋白平衡氨基酸饲粮饲喂动物并不能达到最佳生产性能（Caldron和Jensen1989；Baker，1997；Colnago，1991；Newey和Smyth1960）并观察到动物肠道能够吸收小肽，循环血液中确有大量肽存在。表明了肽的吸收影响蛋白质的合成与降解，且对动物生产免疫产生作用，小肽在蛋白质营养中的作用逐渐被广大营养学者所认识。 1.小肽的吸收机制 50年代，Agar等（1953）观察到，肠道能够完整转运双目肽，其后Naey和Smith（1959，1960）首先提出肽可被完全转运的确切证据。但直到80年代，肽类被完整吸收的观点才被人们重视，肽类的研究也随之展开。 小肽的吸收机制与氨基酸完全不同，游离氨基酸是主动运输，逆浓度转运，通过不同的钠离子泵或非钠离子泵转运系统而进行（Matten和Payne，1980；Mathews，1991；Wellner和Meigler，1981）。近20年的研究结果表明，不同品质蛋白质在胃肠道水解为不同数量的寡肽与氨基酸，寡肽通过特殊转运系统进入细胞，小肽逆浓度依赖于氢离子浓度（Addison等，1972，1975；Meththews，1987；Ganapathy等，1981，1984；）或钙离子浓度（Vincenzinni等，1989）的非钠泵转运，小肽吸收具有更快更高的速度和效率（Marraw，1972），比FAA(游离氨基酸)具有更多的优越性；小肽可能至少有三种吸收机制。①依赖H+ 离子浓度和Ca+离子浓度的主动转运过程（Matthews，1987；LincenzinI等，1989），需要消耗A TP这种转运方式在缺氧或添加代谢抑制剂的情况下被抑制；②具有PH依赖性非耗能性NA+/ H+ 交换转运系统。Daniel等（1994）研究发现，小肽转运的动力来源于质子的电化学梯度。位于小肠粘膜刷状缘顶端细胞NA+/ H+互运通道的活动引起质子活动，当小肽以易化扩散方式进入细胞，易导致细胞内PH值下降，从而使NA+/ H+互运通道活化而释放出H+，使细胞内PH值恢复到原来水平。当缺少H+时，小肽的吸收依靠膜外的底物浓度进行；当细胞外H+浓度高于细胞内时，则通过产电共转运系统逆底物浓度转运；③谷胱甘肽（GSH）转运系统（Cincenzini等1989）此生理意义目前尚不清楚。 2.小肽的吸收特点 小肽吸收比FAA更具有更多的优越性：①小肽吸收速度快；②小肽吸收耗能低；③小肽吸收可避免氨基酸之间的吸收竞争；④载体不易饱和等特点（Ganapathy等，1981，1985；Rerat 等1988，1992）乐国伟（1997）报道，分别在鸡的十二指肠灌注CPS（主要由小肽组成的酶解酪蛋白）和相应组成的FAA混合物，10min后，CPS组门静脉血液循环中的一些肽量和总肽量显着高于FAA组，表明小肽的吸收不仅比FAA快，而且还有吸收率高，吸收强度大的优势。赵昕红等（1999）、Rerat等（1988）都表明了小肽吸收比FAA快。 3.肽的营养作用 3.1消除FAA的吸收竞争，促进氨基酸的吸收。FAA的吸收存在竞争现象，如精氨酸和赖氨酸在吸收时相互竞争载体上的结合位点而发生颉抗，游离精氨酸和赖氨酸有降低门静脉赖氨酸水平的倾向。施用晖等（1996）在研究不同比例小肽与FAA吸收的影响时发现：当完全以小肽的形式供给动物时，赖氨酸的吸收速度不再受精氨酸的影响。 因小肽吸收机制本身不易饱和，转运速度快，能缓解肠壁细胞对不同FAA摄入的竞争，故小肽的氨基酸能够迅速吸收。Bamba等（1992）报道，小肽作不肠腔的吸收底物，不仅增加刷状缘膜的氨基酸肽酶活性，而且提高二肽酶和氨基酸载体的活性和载体数目。Kara等（）1993
第三章-酶
第三章酶化学 （一）名词解释 1.米氏常数； 2.寡聚酶； 3.比活力(specific activity) 4.变构酶； 5.同工酶； 6.活性中心； 7. 竞争性抑制作用； 8. 非竞争抑制作用； 9. 反竞争性抑制作用10.酶的专一性；11. 酶原的激活；12. 别构效应；13. 正协同效应；14. 共价修饰调节；15. 酶活力；16. 不可逆抑制作用；17. 可逆抑制作用。 1.变构酶活性中心外还有___________，当以v对[S]作图时，它表现出______型曲线，而不是典型的米氏酶所具有的_______曲线。 2.酶活性的国际单位（I.U.）定义为在最适条件下，将底物转化为产物的速度为_______的酶量。 3.对于符合米氏方程的酶，v-[S]曲线的双倒数作图（Lineweaver-Burk作图法）得到的直线，在横轴的截距为___________，纵轴上的截距为____________。 4.若同一种酶有n个底物就有________个K m值，其中K m值最________的底物，一般为该酶的最适底物。 5.蛋白质磷酸化时，需要__________酶，而蛋白质去磷酸化需要_______酶。 6.当底物浓度等于0.25K m时，反应初速度与最大反应速度的比值是______。 7.酶催化反应的实质在于降低反应的______，使底物分子在较低的能量状态下达到______态，从而使反应速度______。 8.___ ____抑制剂不改变酶促反应V max，______抑制剂不改变酶促反应K m。 9.谷丙转氨酶属于___________酶类；它的系统名称是___________。 10.复合酶类有___________和___________两部分组成。 11.合成酶类催化由_______合成一种物质的反应,且必须有_______参加. 12.酶活性中心有两个功能部位,一是___________,一是___________. 13.天冬氨酸转氨甲酰酶的别构激抑活剂为________,别构抑剂_________. 14.对同一种酶来说,酶的比活力越___________,___________越高. 15.解释别构酶作用机理的两个重要模型是___________和___________. 16.磺胺类药物是___________,可干扰___________合成. 17.酶是生物催化剂,其化学本质属于___________或___________ （三）选择题 1.下面关于米氏常数K m的论述哪一个是正确的? 1)与ES复合物形成及分解的速度常数都有关系 2)在不同类型的抑制作用中，K m都改变