几种基因敲除鼠简介
传统ES打靶基因敲除敲入小鼠技能
传统ES打靶基因敲除敲入小鼠技能传统ES 打靶基因敲除/敲入小鼠技术技术原理传统的基因打靶技术制备基因敲除（KO ）/敲入（KI ）基因打靶技术是建立在DNA同源重组与胚胎干细胞等技术基础上的分子生物学技术。
同源重组是指当外源DNA 片段与宿主基因组片段同源性高时，同源DNA 区部分可与宿主DNA 的相应片段发生交换（即同源重组）。
基因打靶就是通过同源重组技术将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的。
基因打靶技术目前已被广泛认为是一种理想的特定修饰与改造生物体遗传物质的最佳方法。
尤其是条件性和诱导性基因打靶系统的建立，使得对基因在时间和空间上的靶位修饰更加明确、效果更加精确可靠，该技术的发展已经为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究和治疗手段，并已显示出巨大的应用前景及商业价值。
服务流程和周期、管路敷设技术通过管线不仅可以解决吊顶层配置不规范高中资料试卷问题，而且可保障各类管路习题到位。
在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。
管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。
线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。
、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。
两种基因敲除小鼠的培育
七周重
黑鼠 灰鼠
八周重
黑鼠 灰鼠
九周重
黑鼠 灰鼠
十周重
黑鼠 灰鼠
十一周重
黑鼠 灰鼠
十二周重
黑鼠
3
心电图
4
生理指标
HR
SBP
DBP
MBP
心率
收缩压
舒张压
平均动脉压
C-S
547.1
104.3
67.0
79.2
C-C
448.3
98.4
68.5
78.8
5
项目
血液常规
单位 C-S C-C C57BL/6
WBC
两种基因敲除小鼠的培育
摘要
从美国哈佛大学引进了两种基因敲除小鼠。
这两种品系小鼠的体内分别缺少Cystatin C （胱抑素C ）和 Cathepsin S（组织蛋白 酶 ），简称C-C 和 C-S。在三年的培育过程 中，我们对其生长繁殖、生理生化等一系列 指标作了测定，现将结果汇报如下。
一、材料和方法
#LUC %NEUT %LYMPH
白细胞计数
大未染色细胞计数 中性细胞比率 淋巴细胞比率
10^9/L
10^9/L % %
4.54
0 5.8 .4 76.2
5.89
14.2 81.2
%MONO
%EOS %BASO %LUC RBC HGB HCT MCV MCH MCHC
项目名称 血清总蛋白 血清白蛋白 血清球蛋白
项目代码 TP ALB GLOB
单位 g/L g/L g/L
C-S 50.4 35.1 15.4
C-C 50.8 34.1 16.6
血清白球比
血清丙氨酸氨基转移酶 血清天门冬氨酸氨基转移酶 血清总胆红素 血清碱性磷酸酶 血清甘油三酯 血清总胆固醇 血清肌酸激酶 血清肌酐 尿素 钠
Nlrc4基因敲除小鼠模型介绍
Nlrc4基因敲除小鼠模型介绍
基因敲除小鼠是什么？是否就是我们平日所说的实验室用的小白鼠?其实小鼠有很多种，小白鼠只是其中一种，通常普通的小白鼠多被药厂用作临床试验，而基因敲除的小鼠，则用于更尖端的生物医学研究。
基因敲除小鼠技术原理：是先在小鼠的胚胎干细胞上通过基因重组的办法进行基因修饰——就是将胚胎干细胞中的靶向基因改掉,然后将“修饰”后的胚胎干细胞植入小鼠的早期胚胎,生成嵌合体小鼠。
这种嵌合体小鼠长大后,体内同时存在被“修饰”过的基因和未被“修饰”的基因。
下面是，Nlrc4基因敲除小鼠介绍
Nlrc4炎症小体小鼠模型，可用于炎症小体、免疫、感染、糖尿病、肾病疾病药物研发的相关研究。
利用CRISPR/Cas9技术，敲除Nlrc4基因Exon，获得Nlrc4基因敲除小鼠模型。
基因敲除小鼠介绍
基因敲除小鼠介绍展开全文持续活化的Cre敲除基因的效率较高，但敲除基因的时间点不可控，导致基因敲除可能发生在发育早期或非预期的实验时间窗。
诱导型CreER虽具有时间可控性，提高了遗传操作的精确度，但敲除基因效率较低。
为了提高诱导型CreER的基因敲除效率，需要高剂量且多次给予tamoxifen诱导，这不仅对实验小鼠有毒副作用、长期影响其健康状况，而且会引起基因敲除以外的一些混淆的表型。
Cre小鼠通常不需要纯合小鼠，通常杂合子的Cre小鼠表达量已经足够重组了。
纯合子Cre插入位点不确定，可能导致非预期表型。
Cre 小鼠可能带有毒性，对内源基因表达有影响。
Cre小鼠作用的时间点是不可控的，其剪切效率比Cre ER高。
CreER会有leaky(泄露)的情况。
CreER的结果直接取决于tamoxifen诱导时间窗口的基因表达的情况，他莫昔芬可以在胚胎期给药，可以穿过胎盘屏障。
当然也有一种和谐的解决方法：例如2020年周斌组发表的Generation of a self-cleaved inducible Cre recombinase for efficient temporal genetic manipulation文章。
该研究构建了一种新的诱导型Cre重组酶，可通过自我剪切将诱导型CreER转变成持续活化的Cre，实现时间可控的高效遗传操作。
这种新型Cre重组酶结合了诱导型CreER和持续活化的Cre重组酶的优点，既提高了重组效率又具有时间可控性，弥补了传统CreER和Cre重组酶介导的遗传操作技术的缺陷，突破了长期阻碍基因功能研究的瓶颈，可广泛应用于器官发育、组织再生和疾病进程中的基因功能研究。
生殖系统漏表达现象他莫昔芬的给药时间窗口，6-8天才会代谢，连续给药比较好雌激素诱导型 Cre-ER将雌激素受体（estrogen receptor，简称ER）的配体结合区与Cre 重组酶相融合，形成定位于胞浆中的融合蛋白（Cre-ER）。
完全性基因敲除大鼠构建技术原理及流程
完全性基因敲除大鼠构建技术原理及流程完全性基因敲除大鼠是通过CRISPR/Cas9基因敲除技术，针对靶基因设计和构建gRNA与Cas9表达质粒，造成目的基因的功能区域被敲除，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的大鼠模型。
完全性基因敲除包括：移码突变、片段基因敲除、双/多基因敲除。
移码突变鼠的建系原则与流程1、通过针对靶基因设计、构建相应的gRNA质粒，体外转录为RNA后，与Cas9 mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子大鼠；2、F0代杂合子大鼠与野生型大鼠进行交配，获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子大鼠；3、选择来自同一只F0代大鼠，基因型一致的F1代大鼠，达到性成熟后进行互配，可获得F2代大鼠。
对获得的F2代大鼠进行PCR及测序鉴定，理论上，F2代大鼠中25%为纯合子，50%为杂合子，25%为野生大鼠。
片段基因敲除鼠的建系原则与流程1、通过针对靶基因不同位点设计、构建相应的一对gRNA质粒，体外转录为RNA后，与Cas9 mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子大鼠；2、F0代杂合子大鼠与野生型大鼠进行交配，获得PCR鉴定阳性的F1代杂合子大鼠；3、选择来自同一只F0代大鼠，基因型一致的F1代大鼠，达到性成熟后互配，可获得F2代大鼠。
对获得的F2代大鼠进行PCR及测序鉴定，理论上，F2代大鼠中25%为纯合子，50%为杂合子，25%为野生大鼠。
双（多）基因敲除鼠的建系原则与流程1、通过针对两个靶基因分别设计、构建相应的gRNA质粒，体外转录为RNA后，与Cas9 mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代多基因杂合子大鼠；2、F0代杂合子大鼠与野生型大鼠进行交配，获得PCR和测序鉴定阳性的F1代双基因杂合子大鼠；3、选择双基因杂合子大鼠进行杂交，获得F2代大鼠。
对获得的F2代大鼠进行PCR及测序鉴定。
基因敲除小鼠的制作方法
一、常规基因敲除鼠( Conventional Knockout )常规基因敲除是通过基因打靶，把需要敲除的基因的几个重要的外显子或者功能区域用 Neo Cassette 替换掉。
这样的小鼠其全身所有的组织和细胞中都不表达该基因产物。
此类基因敲除鼠一般用于研究某个基因在对小鼠全身生理病理的影响，而且这个基因没有胚胎致死性。
二、条件性基因敲除小鼠( Conditional Knockout )条件性基因敲除小鼠是通过基因打靶，把两个 loxP 位点放到目的基因一个或几个重要的外显子的两边。
该小鼠和表达 Cre 酶小鼠杂交之前，其目的基因表达完全正常。
当和组织特异性表达 Cre 酶的小鼠进行杂交后，可以在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其他组织或细胞表达正常。
条件性基因敲除鼠适用范围为：( 1 )该基因有胚胎致死性；( 2 )用于研究该基因在特定的组织或细胞中的生理病理功能。
三、基因敲入小鼠( Knockin )基因敲入小鼠是通过基因打靶，把目的基因序列敲入到小鼠的相应基因位点，使用小鼠的表达调控元件指导目的基因表达。
此类基因敲入鼠一般用于药物的筛选，信号通路的研究等。
一、 ZFN 技术制作基因敲除鼠ZFN 能够识别并结合指定的基因序列位点，并高效精确地切断。
随后细胞利用天然的DNA 修复过程来实现 DNA 的插入、删除和修改，这样研究人员就能够随心所欲地进行基因组编辑。
这在过去是无法想象的，传统的基因敲除技术依赖细胞内自然发生的同源重组，其效率只有百万分之一，而 ZFN 的基因敲除效率能达到 10% 。
利用这些技术进行小鼠基因的定点敲除和敲入，可以把时间从一年缩短到几个月。
这项技术中设计特异性的 ZFN 是最关键的环节，目前研究者采用计算生物学方法设计高特异性的 ZFN，但 ZFN的脱靶( off target )，也就是把不该切的地方切了的问题仍是一个挑战。
也正因为这个原因，利用 ZFN 技术进行小鼠的基因修饰还无法完全取代传统技术。
几种基因敲除鼠简介
目录
• 基因敲除鼠概述 • 条件性基因敲除鼠 • 全敲除鼠 • 诱导性基因敲除鼠
01 基因敲除鼠概述
基因敲除鼠的定义
• 基因敲除鼠：通过基因工程技术，将特定基因从 老鼠体内敲除，从而产生具有特定表型特征的转 基因动物。
基因敲除鼠的用途
疾病模型
药物筛选
基因敲除鼠可以模拟人类遗传性疾病 的发生和发展过程，用于研究疾病的 发病机制和治疗方法。
全敲除鼠通常是通过将经过基因 编辑的胚胎干细胞注入早期胚胎 中，然后移植到代孕母鼠体内发
育而成。
全敲除鼠的应用
01
02
03
疾病研究
全敲除鼠可以模拟人类遗 传性疾病，用于研究疾病 的发病机制、病理生理变 化和药物筛选等。
药物研发
全敲除鼠可以用于评估新 药对特定基因缺陷的治疗 效果，加速药物的研发进 程。
部分基因敲除鼠
03
将特定基因部分敲除或敲低，产生具有部分缺失或降低该基因
表达的转基因动物。
02 条件性基因敲除鼠
条件性基因敲除鼠的原理
条件性基因敲除鼠是通过基因打靶技术，将特 定基因的启动子替换为可诱导的启动子，使得 基因的表达只在特定条件下被激活或沉默。
可诱导的启动子通常来源于激素响应元件或化 学诱导系统，如四环素响应系统、干扰素响应 系统等。
药物研发
利用条件性基因敲除鼠可以筛选出 对特定疾病有疗效的药物，缩短药 物研发周期并提高成功率。
条件性基因敲除鼠的优缺点
优点
条件性基因敲除鼠具有高度特异性，可以避免全身敲除基因带来的副作用；同 时，可以在特定时间和空间范围内研究基因的功能，提高实验的可控性和精确 度。
缺点
条件性基因敲除鼠的构建过程复杂，需要较高的技术要求和时间成本；同时， 诱导系统的效果可能受到多种因素的影响，如激素水平、给药方式等。
基因敲除小鼠
基因敲除小鼠摘要基因敲除小鼠是一种常用的实验动物模型，可以帮助科学家研究基因在生物体发育和功能中的作用。
本文将介绍基因敲除小鼠的定义、用途以及常用的敲除方法，帮助读者了解基因敲除小鼠在生物学研究中的重要性和应用。
引言基因敲除小鼠是指通过干扰或删除特定基因，使小鼠体内该基因表达受到抑制或消失的实验模型。
这种模型被广泛应用于基因功能研究、疾病机制研究以及药物开发等领域。
基因敲除方法基因敲除小鼠的制备有多种方法，其中最常用的是胚胎干细胞敲除和CRISPR/Cas9系统。
胚胎干细胞敲除胚胎干细胞敲除是一种传统的基因敲除方法。
首先，从小鼠胚胎中获得胚胎干细胞，然后通过基因转染或基因突变等方式，使目标基因发生敲除突变。
最后，将敲除的胚胎干细胞注入到早期小鼠胚胎中，形成敲除小鼠。
CRISPR/Cas9系统CRISPR/Cas9系统是一种新兴的基因编辑技术，已经在基因敲除小鼠制备中得到广泛应用。
该系统利用Cas9核酸酶和特定的引导RNA来定向切割目标基因的DNA链，从而导致基因发生敲除或突变。
基因敲除小鼠的应用基因敲除小鼠在生物学研究中有着广泛的应用，以下是其中几个重要的应用领域：基因功能研究通过敲除特定基因，科学家可以观察与该基因相关的表型变化，从而揭示该基因在生物体发育和功能中的作用。
这对于揭示基因调控网络、疾病机制的研究具有重要意义。
疾病模型研究基因敲除小鼠常被用来构建各种疾病模型，如癌症、心血管疾病等。
这些模型可以模拟人类疾病的发生和发展过程，为相关疾病的研究提供了有力的工具。
药物开发基因敲除小鼠在药物开发中也起着重要的作用。
通过敲除特定基因可以观察药物对目标基因的影响，从而评估药物的疗效和安全性。
结论基因敲除小鼠是一种重要的实验动物模型，被广泛应用于基因功能研究、疾病模型研究以及药物开发等领域。
不同的敲除方法可根据具体实验需求选择使用。
基因敲除小鼠在解析基因功能、揭示疾病机制和评估药物疗效方面发挥着重要的作用，为生物学研究提供了强大的工具。
基因敲除小鼠
neo、tk基因均被保留 对G418有抗性，对GANC敏感
2.基因敲除技术步骤
2.4 基因敲除小鼠的产生 2.4.1 将中靶的ES细胞注入到BALB/c小鼠囊胚，接种到新的培养皿中进行培养。 2.4.2 将正常发育含ES细胞的囊胚移植入受体小鼠子宫内 2.4.3 嵌合体小鼠的鉴别：通过观察小鼠被毛的颜色就可确定嵌合体小鼠。 2.4.4 基因敲除小鼠的制备：因为在同源重组过程中，ES细胞的2条染色体中一般只有1条进行重组，得到嵌合 体小鼠后，还要经过至
甚至发现有健康不良者或逃出笼外 , 其它鼠也最好淘汰 , 这种动物不宜用于繁殖。
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少2代的繁育过程才能得到基因敲除小鼠。
二、
基因敲除小鼠的基因型鉴定
1.利用PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定
1.1 提取小鼠尾部DNA组织 1.2 PCR扩增与琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型
1.2.1 针对不同的Fam172a+/-，Fam172a-/-，WT设计不同的引物 1.2.2 采用PCR仪进行扩增：变性→退火→延伸 1.2.3 取PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳 1.2.4 根据凝胶成像仪中的条带鉴别基因型 可能的结果分析 Fam172a+/-出现两条带，Fam172a-/-只出现一条带，WT出现一条带，但Fam172a-/-和WT出现的位置不 同。
细胞筛选出来， 目前常用的筛选方法有正负双向选择法。
正负双向选择法
neo基因保留，tk基因被切除 对G418和GANC都有抗性
筛选出中靶ES
靶向载体
neo:正向选择基因。具有新霉 素(G418)抗性，其在发生随机 组合和同源重组的细胞中都可 以表达。 HSV-tk：负向选择基因。在发 生同源重组时别剪切掉，发生 随机组合时被保留。tk基因可 使无毒的丙氧鸟苷（GANC） 转化为毒性核苷酸而杀死细胞。
基因工程小鼠名称解读
基因工程小鼠名称解读基因工程小鼠是指通过人为干预小鼠基因组的技术手段，使其表达特定基因或缺失特定基因，从而实现对基因功能的研究和相关疾病模型的建立。
这些小鼠通常被用于研究基因功能、疾病机制、药物筛选等方面。
在基因工程小鼠的命名中，常用的方式是根据其基因改造方式或目的来命名。
以下是一些常见的基因工程小鼠名称及其解读：1. 转基因小鼠（Transgenic mice），这类小鼠是通过将外源基因导入小鼠的基因组中而得到的。
这些外源基因可以来自其他物种，如人类或其他动物。
转基因小鼠常用于研究特定基因的功能、表达模式等。
2. 敲除小鼠（Knockout mice），这类小鼠是通过人为干预使特定基因在小鼠体内失去功能的方式得到的。
一般采用基因敲除或基因靶向突变技术，使小鼠体内特定基因的表达受到抑制或完全消除。
敲除小鼠常用于研究基因的功能缺失对生理和病理过程的影响。
3. 过表达小鼠（Overexpression mice），这类小鼠是通过人为干预使特定基因在小鼠体内过度表达的方式得到的。
通过引入外源基因或增强内源基因的表达水平，使小鼠体内特定基因的表达量显著增加。
过表达小鼠常用于研究基因的过度表达对生理和病理过程的影响。
4. 突变小鼠（Mutant mice），这类小鼠是指在小鼠基因组中引入或产生突变的小鼠，突变可以是点突变、插入突变、删除突变等。
突变小鼠常用于研究特定基因突变对生理和病理过程的影响。
除了上述常见的命名方式，基因工程小鼠还可以根据具体的研究目的、基因改造技术等来命名，例如组织特异性表达小鼠、条件性基因敲除小鼠等。
需要注意的是，基因工程小鼠的命名通常是根据研究者或研究机构的需求和约定来进行的，不同研究领域和实验室可能会有不同的命名方式和规范。
总体而言，基因工程小鼠的命名旨在描述其基因改造方式、基因功能或研究目的，以便研究者能够清楚地了解其特点和应用范围。
几种基因敲除鼠简介
研究结果显示三种受体酪氨酸激酶在不同组织中的表达量有很大区 别,表明三种受体酪氨酸激酶在不同组织中在功能上存在较大的差异.
Tyro 三受体酪氨酸激酶亚家族的配体及其结构特点
Tyro 三受体酪氨酸激酶家族三种 受体的共同配体是Gas六和Protein S.
♦Gas六 growth arrest-specific gene 六 与血清抗凝因子Protein S有 四六%以上的氨基酸同源,是依赖于 维生素K的蛋பைடு நூலகம்.
二 免疫系统
通过将小鼠的三个基因TYRO三, MER,和 AXL去除或阻断,可以复制出自身免疫疾 病的动物模型,这些小鼠表现出了广泛的自身免疫疾病的症状,包括类风湿关节炎和 系统性红斑狼疮等.为认识自身免疫性疾病的分子机理提供了重要的线索.近年来 Tyro三受体酪氨酸激酶亚家族在肿瘤中所起的作用正在受到关注.
Toll like receptor TLRs 表达特征
TLRs表达于多种免疫细胞,如淋巴细胞,树突状细 胞及巨噬细胞,以及多种与外界直接接触的组织黏膜 上皮细胞,如肺、肾、小肠和生殖管道.这些TLR受体 构成天然免疫防线的第一道屏障.TLRs在调节机体自 身免疫反应中具有重要的作用,研究表明内源性的配 体如RNA和DNA可活化TLR受体进而诱导典型的自 身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮 systemic lupus erythematosus,SLE ,TLR受体在肿瘤、动脉粥样硬化 、糖尿病 、肥胖等慢性疾病中的作用正逐渐被人们 所认识和重视.
♦ Mer 又名Eyk,Nyk,Tyro一二
RTKs介导的信号传递途径作用广泛而且重要, 涉及到细胞生长、分化、增殖和代谢等,一旦发生 变异往往会诱导癌症等疾病的发生.
Tyro三受体酪氨酸激酶亚家族的特征
Cfh基因敲除小鼠背景介绍
Cfh基因敲除小鼠背景介绍
Cfh基因敲除小鼠背景介绍
补体因子H，又称H因子1和CFH、FH，是一种含唾液酸的糖蛋白。
CFH 是血液中最丰富的补体成分之一，其中肝脏是体内CFH蛋白的主要来源。
此外，CFH还由其他类型的细胞分泌，包括单核细胞、成纤维细胞或内皮细胞。
该基因是补体激活调节因子RCA基因簇的成员，编码由20个短同源重复序列（SCR）构成的蛋白质。
这种蛋白质被分泌到血液中，在调节补体介导的免疫系统中起着不可或缺的作用，该免疫系统参与微生物防御、免疫复合物处理和细胞程序性死亡。
CFH保护自身细胞免受补体激活，但不保护细菌和病毒。
CFH的错误调节可能对处理外来感染或降低宿主细胞补体活性的能力产生不利影响。
过度活跃的H 因子可能导致对病原细胞的补体活性降低，增加对微生物感染的易感性。
活性不足的H 因子可能会导致对健康宿主细胞的补体活性增加，导致自身免疫性疾病。
基因敲除小鼠的方法
基因敲除小鼠的方法
1. CRISPR/Cas9基因编辑技术，CRISPR/Cas9技术是一种高效的基因编辑工具，可以用来精确地敲除小鼠基因。
首先，科学家设计合成一段RNA序列，使其与目标基因序列相匹配，然后将这段RNA和Cas9蛋白复合体导入小鼠胚胎内。
复合体会通过识别并切割目标基因，导致基因敲除。
2. 胚胎干细胞技术，另一种常见的基因敲除小鼠方法是利用胚胎干细胞。
科学家可以将设计好的基因敲除载体导入小鼠胚胎干细胞中，使其发生基因敲除。
然后，这些修改过的干细胞可以被植入小鼠胚胎内，从而产生基因敲除小鼠。
3. 遗传改造小鼠技术，除了CRISPR/Cas9和胚胎干细胞技术，科学家还可以利用遗传改造技术来实现基因敲除。
这种方法涉及到选择性育种和杂交，通过选择性地交配和繁殖，最终得到具有特定基因敲除的小鼠品系。
总的来说，基因敲除小鼠的方法主要包括CRISPR/Cas9基因编辑技术、胚胎干细胞技术和遗传改造小鼠技术。
这些方法都是在实验室条件下进行的，需要经过严格的实验设计和操作流程，以确保
基因敲除的准确性和有效性。
同时，这些方法也为科学家提供了强大的工具，用于研究基因在生物体内的功能和作用机制。
实验室常用小鼠简介-(同济)
基因表达基本知识
DNA一级结构上调控基因表达的元件 （基因表达盒结构）
5’-UTR promoter
enhancer 3’-UTR
enhancer promoter
UTR exon
Poly A signaling Chromosome sequence
基因敲除小鼠
基因敲除小鼠
基因修饰ES细胞的获得及囊胚注射
器官移植模型
1. 肾移植模型 2. 异位心脏移植模型 3. 小肠移植模型 4. 骨髓移植模型
5. 肝移植模型
6. 皮肤移植模型 7. 胰腺（胰岛）移植模型 8. 慢性排斥（BM12）
自身免疫性疾病模型
1、自发型I型糖尿病动物模型 NOD小鼠 2、诱导型I型糖尿病动物模型： 药物（STZ、Alloxan、环磷酰胺等）诱导破坏小鼠胰岛 3、自发型系统性红斑狼疮小鼠
肿瘤模型
移植瘤实验：将人移植入BalB/C、祼鼠、C57BL/6、Rag1等小鼠体内。
诱导癌/肿瘤模型：使用二乙基亚硝胺 (diethy lnitrosam ine, DEN)等诱 癌剂灌胃及自由饮水，长期诱导可产生肝癌模型。
基因修饰小鼠
1、基因敲除小鼠
2、基因敲入小鼠
3、基因捕获小鼠 4、转基因小鼠 5、条件性基因表达小鼠 6、条件性基因敲除小鼠
ALR：
与NOD小鼠具有共同祖先的小鼠，白色，两者有70%的基因组完全 相同，但MHC不相同。对I型糖尿病具有很强的诱导耐受。常用于 NOD的对照小鼠。 杂交鼠：由两个近交系杂交获得后代，性状不稳定。小鼠遗传操作 未进行彻底的小鼠。
免疫研究常见的小鼠动物模型
1、器官移植模型 2、自身免疫性疾病模型 3、超敏反应模型 4、肿瘤模型
ApoE基因敲除小鼠模型特点及原理介绍
ApoE基因敲除小鼠模型特点及原理介绍
展开全文
ApoE小鼠品系名：C57BL/6
ApoE小鼠毛色：黑色
ApoE小鼠基因名：Apoe， apolipoprotein E
ApoE小鼠染色体：7号
ApoE小鼠打靶技术：同源重组
ApoE小鼠基因型：ApoE（-/-）
ApoE小鼠表型特征：ApoE基因剔除小鼠模型表现出异常高血脂症状，随着月龄增加将出现大量类似动脉粥样硬化前期的损伤。
ApoE基因敲除小鼠简介:
ApoE基因敲除小鼠是通过同源重组技术制备的具有3号外显子纯合缺失的小鼠模型。
该小鼠模型表现出异常高血脂症状，在3月龄时即出现动脉脂肪堆积。
随着月龄增加将出现大量类似动脉粥样硬化前期的损伤。
17月龄时小鼠脑内将出现脂瘤性纤维瘤，同时还有脂质小球和泡沫细胞。
最新研究还发现该基因剔除小鼠的学习记忆能力出现障碍（赛业可提供ApoE小鼠）。
ApoE基因是目前国内外研究的热点之一，ApoE与CHD、高脂血症、脑梗塞、AD及慢性乙型肝炎等疾病相关。
ApoE基因敲除小鼠是研究该基因与多种相关疾病的重要模型。
基因敲除小鼠的方法
基因敲除小鼠的方法基因敲除小鼠模型是生物医学研究领域中常用的实验动物模型之一。
通过对特定基因进行敲除，科研人员可以研究该基因在生物体内的功能和影响，从而深入了解该基因对生物体的生理和病理过程的调控作用，为人类疾病治疗和药物研发提供重要的实验基础。
下面我们将介绍关于基因敲除小鼠的方法。
一、基因敲除小鼠的原理和意义1.1 基因敲除原理基因敲除是指通过人工手段破坏特定基因的DNA序列，使其失去功能。
在小鼠模型中，通常利用基因敲除技术将目标基因进行突变或删除，从而观察小鼠在不同生理状态下的表型变化，探索目标基因在生物体内的功能和作用机制。
1.2 基因敲除的意义基因敲除小鼠模型可以帮助科研人员研究特定基因的生物学功能，了解其在生物体内的作用机制。
基因敲除小鼠模型也能够为疾病研究和药物开发提供重要的实验依据，有助于发现新的治疗靶点和疾病治疗方法。
二、基因敲除小鼠的制备方法2.1 基因敲除小鼠的选择在进行基因敲除小鼠实验前，首先需要选择合适的小鼠品系和基因靶向。
常用的小鼠品系包括C57BL/6、BALB/c等，而基因敲除的选择通常基于目标基因在疾病或生理过程中的重要性。
2.2 敲除载体的构建和筛选制备基因敲除小鼠需要先构建敲除载体，通常采用基因工程技术将靶向基因进行突变或删除，然后将这些构建好的载体导入至小鼠胚胎干细胞中，进行筛选和培养。
2.3 胚胎干细胞的培养与筛选在培养和筛选过程中，科研人员需要将导入敲除载体的胚胎干细胞引入小鼠胚胎中，然后进行体外培养和筛选，以筛选出正常的敲除基因小鼠。
2.4 敲除小鼠的鉴定和繁殖成功培育出的敲除小鼠需要进行PCR鉴定和繁殖，以得到稳定传代的敲除小鼠品系。
对敲除小鼠进行系统的表型观察和分析，以确定目标基因敲除后的表型变化。
三、基因敲除小鼠的应用和前景3.1 基因敲除小鼠在生物学研究中的应用基因敲除小鼠模型广泛应用于生物学研究领域，包括生理学、免疫学、神经科学、遗传学等各个领域。
Il17a基因敲除小鼠背景介绍
Il17a基因敲除小鼠背景介绍
IL17A（白细胞介素17A；也称为CTLA8）是IL-17受体家族的成员，由该基因编码的蛋白质是由活化的T细胞产生的促炎细胞因子。
IL-17A介导的下游途径诱导炎症分子、趋化因子、抗微生物肽和重塑蛋白的产生。
编码的蛋白质对宿主防御、细胞运输、免疫调节和组织修复产生重要影响，在诱导先天免疫防御中起关键作用。
这种细胞因子刺激非造血细胞并促进趋化因子的产生，从而将髓样细胞募集到炎症部位。
该细胞因子还调节NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶的活性，可以刺激IL6和环氧合酶2（PTGS2/COX-2）的表达，并增强一氧化氮（NO）的产生。
图1. IL-17A 和 IL-17F 介导的免疫
IL-17A在各种传染病、炎症和自身免疫性疾病以及癌症中起着关键作用。
高水平的这种细胞因子与几种慢性炎症性疾病相关，包括类风湿性关节炎，牛皮癣和多发性硬化症。
Th17细胞和IL-17也与克罗恩病（CD）和溃疡性结肠炎（UC）有关，这是两种主要形式的炎症性肠病（IBD）。
严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（SARS-CoV-2）引起的肺损伤在很大程度上是细胞因子（例如IL17A）加强的炎症反应的结果。
明星鼠系列之—— B-p53基因敲除小鼠
B-p53基因敲除小鼠----明星鼠系列之肿瘤疾病研究利器P53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因。
根据研究显示，人类大约一半的肿瘤发生与p53基因异常有关，因此p53基因的相关功能成为当前肿瘤分子生物学研究的热点。
因此，B-p53基因敲除小鼠成为了研究人类肿瘤的最佳模型鼠。
同时，B-p53基因敲除小鼠也成为了深入研究肿瘤疾病的重要工具。
p53基因介绍p53是一种肿瘤抑制基因。
在所有恶性肿瘤中，50%以上会出现该基因的突变。
由这种基因编码的蛋白质是一种转录因子其控制着细胞周期的启动。
许多有关细胞健康的信号向p53蛋白发送。
关于是否开始细胞分裂就由这个蛋白决定。
如果这个细胞受损，又不能得到修复，则p53蛋白将参与启动过程，使这个细胞在细胞凋亡中死去。
正常p53基因的生物功能好似“基因组卫士”，在G1期检查DNA损伤点，监视基因组的完整性。
如有损伤，p53蛋白阻止DNA复制，以提供足够的时间使损伤DNA修复；如果修复失败，p53蛋白则引发细胞凋亡；如果p53基因的两个拷贝都发生了突变，对细胞的增殖失去控制，导致细胞癌变。
B-p53基因敲除小鼠发展前景目前，我国很多实验室所用的p53基因敲除小鼠多来自国外实验室，仅限于科研交流，不能用来进行商业性的药理毒理及致癌实验。
由于这些小鼠在不同实验室里与不同遗传背景的小鼠进行交配繁殖之后，遗传背景非常复杂且不稳定，造成实验结果重复性差，不同实验室得到的结果不能进行平行比较，所以不能作为国家致癌实验检定标准。
而致癌性实验却是药物非临床安全性评价的重要内容。
所以，B-p53基因敲除小鼠可以更好的解决p53基因敲除模式小鼠品系不纯，遗传背景复杂的问题，利用C57BL/6近交系遗传背景的小鼠胚胎干细胞制备B-p53基因敲除小鼠，并成功得到F1代小鼠，经过种群扩增后，B-p53基因敲除小鼠遗传背景清晰，可以做为标准动物用于致癌实验，改变国家药物致癌实验的动物模型不统一的局面。
基因敲除小鼠概念及原理
基因敲除小鼠概念及原理
基因敲除小鼠是一种通过基因敲除技术创造出来的实验动物模型。
基因敲除技术是一种新的分子生物学技术，建立在基因同源重组技术基础以及胚胎干细胞技术基础上。
基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。
基因敲除小鼠的原理是利用基因同源重组进行基因敲除。
具体来说，通过同源重组将外源基因定点整合入小鼠的基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的。
这种技术克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。
基因敲除小鼠具有广泛的应用前景和商业价值，特别是在发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科的研究和治疗中。
这种技术的出现为这些学科提供了一个全新的、强有力的研究、治疗手段，具有重要的意义。
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Tyro 3, Axl和Mer三种受体的胞外结构域与神经细胞黏附分子高度同源。此外， 三种受体均在小脑的柏金氏细胞（Purkinje细胞）中表达，Tyro3 还在颗粒神经元 和Bergmann神经胶质细胞中表达。其共同配体也在小脑Purkinje细胞中表达，这表 明Tyro3, Axl和Mer及其配体Gas6很可能在神经系统中发挥重要的作用。
介绍几种基因敲除鼠的应用价值
Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族简介
Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族属于受体酪胺酸激酶 (RTKs) 家族成员，也称UFO受体酪氨酸激酶亚家 族，包括三个成员，又被命名为TAM受体酪氨酸 激酶：
♦Tyro3 又名Sky，Brt，Tif, Rse, Dtk, Etk-2
♦ Axl 又名Ark，Ufo，Tyro 7
Toll like receptor（TLRs）表达特征
许多肿瘤尤其是上皮来源的肿瘤可检测到不同TLR受体的
表达或上调。并且它的表达与肿瘤的增生，侵袭，恶性转化 ，抵抗凋亡及抗药性的产生密切相关。活化肿瘤细胞TLR受 体，通过调节基质金属蛋白酶(metalloproteinases)及整合素 (integrins)增强了肿瘤细胞的侵袭及转移；并且合成促炎因 子及免疫抑制分子，增加肿瘤细胞对细胞毒性淋巴细胞的抗 性，引起免疫逃逸。 其中TLR 4与肿瘤的发生高度相关。
♦Gas6和Protein S的结构基本相似， 由Gla（a-carboxylated aminoterminus）结构域、四个前后重复的 上皮生长因子样结构域、一个与性 激素结合球蛋白（SHBG）类似的大 的碳末端结构域组成
Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族的功能研究
Tyro3家族的三种受体酪氨 酸激酶与配体Gas6和Protein S结合,其构象发生变化，形 成同源或异源二聚体，胞内 段酪氨酸残基发生磷酸化，， 激活受体本身的酪氨酸蛋白 激酶活性，催化下游分子， 起到信号转导的作用。能够 在包括细胞增殖、迁移、黏 附、吞噬等方面发挥重要功 能，参与免疫、神经、生殖、 心血管和血液等系统的调控。
♦ Mer 递途径作用广泛而且重要， 涉及到细胞生长、分化、增殖和代谢等，一旦发生 变异往往会诱导癌症等疾病的发生。
Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族的特征
Tyro 3受体酪氨酸激酶家 族成员的分子均由与细胞 黏附分子相关的胞外配体 结合域：两个免疫球蛋白 （Ig）样的结构域和两个纤 维连接蛋白III（FN III）重 复序列相连，胞内区：酪 氨酸激酶结构域，以及跨 膜区组成
Tyro 3 优先表达于中枢神经系统中，而在肾脏、卵巢、睾丸等组 织中表达水平较低，在造血细胞系中的表达量变化较大。
Axl
在卵巢滤泡细胞、造血系统、骨骼肌、心肌以及睾丸组织 中 的表达水平较高。近来有研究发现Axl在肿瘤重建血
管的内皮细胞中高表达。
Mer 在神经组织、淋巴结、脉管系统、肺、肾脏以及卵巢、前 列腺等生殖系统中均有明显的表达，同时在一些原代培养 和肿瘤细胞系中也有较高的表达。
最近的研究报道表明TAM受体参与TLR受体信号通路的 负调控，防止过强的免疫反应给机体带来自身免疫性疾病 等不利影响
Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族的特征
酪氨酸激酶是一组催化酪氨酸残基磷酸化的酶，通过从三磷酸
腺苷ATP上转移一个磷原子到酪氨酸残基上，而使底物蛋白活化。 通过活化底物蛋白，参与细胞的信号转导，最终，这些信号转导 进入细胞核内，引起某些基因表达水平的改变。
Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族表达特征
Tyro 3亚家族三种受体酪氨酸激酶在人或动物的成熟组织 中均有广泛的表达。但表达量却有较大差异。
Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族敲除鼠的功能研究
1 生殖系统
通过对基因敲除小鼠的研究发现，敲除三个基因（AXL，MER，TYRO3）中的一 个或两个，小鼠能够生存且具有生育能力。三个基因都敲除后，小鼠虽然能够生存 ，但通过组织学检查发现，雌性小鼠卵巢中的细胞凋亡增加，但仍具有生育能力。 与此不同，所有三基因敲除的雄性小鼠都不能产生成熟精子，完全丧失生育能力， 其成熟个体睾丸的大小约为正常小鼠睾丸的三分之一。
2 免疫系统
通过将小鼠的三个基因TYRO3, MER,和 AXL去除或阻断，可以复制出自身免疫 疾病的动物模型，这些小鼠表现出了广泛的自身免疫疾病的症状，包括类风湿关节 炎和系统性红斑狼疮等。为认识自身免疫性疾病的分子机理提供了重要的线索。近 年来Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族在肿瘤中所起的作用正在受到关注。
新近的理论认为动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的发生
不单纯是简单的脂质代谢障碍，而是动脉壁的慢性进行性炎 症过程。TLR受体与AS的形成密切相关。研究表明，AS的血 管内膜有TLR2表达，TLR2通过识别内源性和外源性的配体 氧化脂蛋白和脂质并活化内皮细胞，造成内皮细胞的损伤， 致AS形成。
TAM受体酪氨酸激酶广泛地抑制 TLR及TLR-诱导的细胞因子产生
小结
TLR2：可应用于AS的研究 TLR3: 可应用于与病毒感染相关疾病的研究中 TLR4：在肿瘤相关疾病的研究中有应用价值
这三种基因敲除鼠在炎症反应中均具有重要的意义
AXL ：在肿瘤相关疾病的研究中有应用价值 Tyro 3：在神经系统的研究中具有重要作用 Mer ：在血液、免疫等疾病的研究中具有重要作用
研究结果显示三种受体酪氨酸激酶在不同组织中的表达量有很大区 别，表明三种受体酪氨酸激酶在不同组织中在功能上存在较大的差异。
Tyro 3受体酪氨酸激酶亚家族的配体及其结构特点
Tyro 3受体酪氨酸激酶家族三种 受体的共同配体是Gas6和Protein S.
♦Gas6（growth arrest-specific gene 6）与血清抗凝因子Protein S有 46%以上的氨基酸同源，是依赖于 维生素K的蛋白。
Toll like receptor（TLRs）表达特征
TLRs表达于多种免疫细胞，如淋巴细胞，树突状 细胞及巨噬细胞，以及多种与外界直接接触的组织 黏膜上皮细胞，如肺、肾、小肠和生殖管道。这些 TLR受体构成天然免疫防线的第一道屏障。TLRs在 调节机体自身免疫反应中具有重要的作用，研究表 明内源性的配体如RNA和DNA可活化TLR受体进而 诱导典型的自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮 (systemic lupus erythematosus，SLE) ，TLR受体在 肿瘤、动脉粥样硬化、糖尿病 、肥胖等慢性疾病中 的作用正逐渐被人们所认识和重视。