第二章 细胞破碎与提取要点
生物分离工程5(细胞破碎技术)
01
02
03
04
生物制药
用于提取和分离药物、蛋白质 、酶等生物制品。
食品工业
用于提取植物和动物细胞中的 营养成分，如植物油、动物蛋
白等。
环境科学
用于处理废水中的有害物质， 如重金属、有机污染物等。
农业领域
用于提取植物细胞中的有用成 分，如植物激素、天然色素等
。
02
细胞破碎技术的基本原理
物理法
01
表面活性剂法
利用表面活性剂改变细胞 壁的通透性，使细胞内容 物释放出来。
有机溶剂法
利用有机溶剂如丙酮、乙 醇等溶解细胞壁，使细胞 内容物释放出来。
生物法
酶解法
利用酶如溶菌酶、蛋白酶等将细胞壁分解，使细胞内容物释 放出来。
细菌分泌的蛋白酶
利用某些细菌分泌的蛋白酶将细胞壁分解，使细胞内容物释 放出来。
细胞破碎技术的历史与发展
最早的细胞破碎技术可以追溯到19世纪末，当时人们开始使用机械研磨法破碎细胞。
随着科技的发展，出现了多种新型的细胞破碎技术，如超声波破碎、高压均质破碎、 化学渗透压破碎等。
近年来，随着生物技术的快速发展，细胞破碎技术也在不断改进和完善，以满足更 高效、环保和低成本的需求。
细胞破碎技术的应用领域
细胞破碎过程需要消耗大量的能量，这可能导致生产成本的增
加。
可能引起样品污染
02
在破碎过程中，如果设备或条件控制不当，可能会引起样品的
交叉污染或样品中原有成分的降解。
对细胞的损伤
03
高强度的破碎条件可能会对细胞内部结构造成损伤，影响后续
的分离和提取过程。
04
细胞破碎技术的应用案例
在制药行业中的应用
细胞核质分离提取的方法
温馨小提示：本文主要介绍的是关于细胞核质分离提取的方法的文章，文章是由本店铺通过查阅资料，经过精心整理撰写而成。
文章的内容不一定符合大家的期望需求，还请各位根据自己的需求进行下载。
本文档下载后可以根据自己的实际情况进行任意改写，从而已达到各位的需求。
愿本篇细胞核质分离提取的方法能真实确切的帮助各位。
本店铺将会继续努力、改进、创新，给大家提供更加优质符合大家需求的文档。
感谢支持！(Thank you for downloading and checking it out!) 阅读本篇文章之前，本店铺提供大纲预览服务，我们可以先预览文章的大纲部分，快速了解本篇的主体内容，然后根据您的需求进行文档的查看与下载。
细胞核质分离提取的方法（大纲）一、引言1.1研究背景1.2细胞核质分离提取的意义二、细胞核质分离提取的基本原理2.1细胞结构概述2.2核质分离提取的基本过程三、细胞核质分离提取方法3.1物理方法3.2化学方法3.3生物方法四、细胞核质分离提取实验步骤4.1细胞样品的制备4.2核质分离4.3核质提取4.4核质纯化4.5核质质量检测五、细胞核质分离提取方法比较与选择5.1不同方法的优缺点5.2方法选择依据六、细胞核质分离提取在科研中的应用6.1基因组学研究6.2蛋白质组学研究6.3细胞信号传导研究七、实验注意事项及常见问题7.1实验操作注意事项7.2常见问题及解决方法八、总结与展望8.1细胞核质分离提取技术进展8.2未来发展方向与应用前景一、引言1.1研究背景细胞核质分离提取技术是细胞生物学与分子生物学领域中的一项基础性技术，广泛应用于基因表达调控、基因功能研究、基因调控网络构建等方面。
随着科学技术的不断发展，对细胞核质分离提取技术的要求也越来越高，需要更加精确、高效的方法来满足科研工作的需求。
细胞核质分离提取技术的研究与发展，有助于我们深入理解基因表达调控机制，为疾病的诊断、治疗和预防提供新的思路和方法。
DNA提取方法和步骤
DNA提取方法和步骤DNA提取是生物学实验中常见的操作步骤，用于从细胞或组织中提取纯化DNA。
DNA提取的主要目的是获得纯净的DNA样品，以便进行后续的实验，如PCR、限制酶切、测序等。
下面我们将详细介绍DNA提取的方法和步骤。
1.细胞破碎：将待提取DNA的细胞或组织进行破碎，以释放细胞内的DNA。
细胞破碎的方法有很多种，包括机械破碎、酶解、热破碎等。
其中，常用的方法是机械破碎，如用搅拌器或超声波振荡器将样品强力搅拌或振荡，以破坏细胞膜和细胞壁。
2.蛋白质除去：细胞破碎后，通过蛋白酶的作用，将细胞内的蛋白质降解，并与蛋白质结合的DNA一同除去。
常用的蛋白酶有蛋白酶K、丝氨酸蛋白酶等。
需要注意的是，蛋白酶的适宜浓度和作用时间需要根据实验的要求进行优化。
3.DNA纯化：在蛋白质除去后，将细胞产生的碱基、RNA等杂质与DNA分离。
常用的纯化方法有酚/氯仿方法、盐方法和硅胶柱法等。
其中，酚/氯仿方法是最早被使用的DNA纯化方法，其基本原理是将DNA与蛋白质、RNA等杂质分离，从而得到纯净的DNA。
酚/氯仿方法的步骤如下：a.向破碎细胞溶液中加入等体积的酚/氯仿混合液，轻轻摇晃离心管混匀，使DNA分配在有机相和水相之间。
b.离心管在高速离心机中离心15分钟，使混合液分为有机相、界面层和水相三个层次。
c.使用移液器将上清液（水相）转移到新的离心管中，注意避免吸入有机相。
d. 向上清液中加入1倍体积的冰冷异丙醇（Isopropanol），使DNA沉淀。
使用移液器轻轻颠倒离心管使DNA沉淀。
e.在-20℃冷冻保存30分钟或在室温下沉淀15分钟，以便DNA更好地沉淀。
f.在高速离心机中离心DNA沉淀，沉淀时间约为10分钟，沉淀结束后将上清液倒掉。
g.用70%乙醇洗涤DNA沉淀，然后在室温下晾干。
h.使用适量的缓冲液（如TE缓冲液）重新溶解DNA。
4.DNA沉淀：将纯化后的DNA样品进行沉淀，以去除残留的盐、酚、异丙醇等。
生化工艺——第二章细胞破碎
²
第二节
细胞壁的破碎
一、珠磨破碎 破碎原理：利用在高速搅拌作用下， 破碎原理：利用在高速搅拌作用下，细胞和微球相 被破碎。 互磨擦碰撞而受剪切力被破碎。 破碎作用遵循一级动力学定律： 破碎作用遵循一级动力学定律：
1 ln = kt 1− x
特点：适用范围较广；但有效能量利用率很低， 特点：适用范围较广；但有效能量利用率很低，设 计操作时应充分考虑冷却系统的热交换能力； 计操作时应充分考虑冷却系统的热交换能力；影响破碎 率的操作参数较多，过程优化设计较复杂。 率的操作参数较多，过程优化设计较复杂。
1 − x = exp( − kt )
影响因素：细胞种类、浓度和超声波的能量等。 影响因素：细胞种类、浓度和超声波的能量等。 特点：是很强烈的破碎方法；适用范围广； 特点：是很强烈的破碎方法；适用范围广；但有效 能量利用率极低，对冷却要求相当苛刻，不易放大， 能量利用率极低，对冷却要求相当苛刻，不易放大，多 在实验室使用。 在实验室使用。
细胞壁的破碎方法总结
方法 机 械 法 技术 原理 效果 成本 举例 动物组织及 动物细胞 匀浆法（片型） 匀浆法（片型） 细胞被搅拌器 劈碎 研磨法 超声波法 细胞被研磨物 磨碎 用超声波的空 穴作用使细胞 破碎 适中 适中 适中 便宜 适中 昂贵 细胞悬浮液 小规模处理 细胞悬浮液 大规模处理
匀浆法（孔型） 匀浆法（孔型） 须使细胞通过 的小孔， 的小孔，使细 胞受到剪切力 而破碎 珠磨破碎法 细胞被玻璃珠 或铁珠捣碎
总结 A、在大规模cell破碎中，高压匀浆机和珠 磨机用得最多; B、高压匀浆机最适合于酵母和细菌; C、珠磨机适用范围较广，可用于酵母和细 菌，但对真菌菌丝和藻类更合适.
三、超声波破碎 破碎原理：超声波作用下液体发生空化作用， 破碎原理：超声波作用下液体发生空化作用，产生 使细胞破碎。 极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎。 ²
rna提取过程中的关键步骤及注意事项
一、概述RNA提取是生物学研究中的重要步骤，它涉及到从细胞或组织中提取出RNA分子，为后续的分子生物学实验和分析提供基础数据。
在RNA提取过程中，有许多关键步骤和注意事项需要注意，才能确保提取到高质量的RNA样品。
本文将重点介绍RNA提取过程中的关键步骤及注意事项。
二、样品采集和保存1. 样品的采集要尽量避免受到外界环境的污染，采集器具要事先经过严格的消毒处理。
2. 采集后的样品应立即冷藏或置于液氮中保存，避免RNA降解。
三、细胞破碎1. 细胞破碎是RNA提取的第一步，直接影响到RNA的得率和质量。
常用的方法包括酚-氯仿法、超声波法和离心破碎法等。
2. 选择合适的细胞破碎方法，要充分破碎细胞膜，释放出RNA分子，同时避免RNA的降解。
四、蛋白质沉淀1. 蛋白质沉淀的目的是去除DNA和蛋白质，以纯化RNA。
常用的方法包括酚-氯仿法和硅胶柱法。
2. 在进行蛋白质沉淀时，要注意去除酚相和混合相中的DNA和蛋白质，以免对RNA纯化产生影响。
五、RNA沉淀和洗涤1. RNA沉淀的方法有乙醇沉淀法和硅胶柱法等，选择合适的方法要根据样品的特点和后续实验的需要进行。
2. 在RNA洗涤的过程中，要充分去除盐和其他杂质，以保证提取到干净的RNA样品。
六、RNA溶解和质量检测1. RNA溶解的过程要充分溶解RNA，并保证溶解液的质量纯净。
2. 对提取得到的RNA样品进行浓度和完整性的检测，以确保RNA的质量达标。
七、总结RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，本文介绍了RNA提取过程中的关键步骤和注意事项。
通过严格控制每个步骤，可以保证提取到高质量的RNA样品，为后续的实验和分析提供可靠数据。
希望本文能够帮助读者更好地理解RNA提取过程，并在实验操作中取得更好的效果。
八、RNA存储和稳定性1. 存储RNA样品时，应尽量避免反复冻融，因为这样容易导致RNA 降解。
合适的储存温度通常为-80摄氏度。
2. 另外，干燥的RNA样品更容易保存，因此可以考虑使用适当的稳定剂，如DEPC水或RNAlater等，来保护RNA在样品采集至提取过程中的稳定性。
第二章细胞破碎技术PPT课件
碎片分离 （离心分离、双水相萃取、膜分离）
提取 初步纯化 （沉淀、吸附、萃取、超滤、结晶）
精制 高度纯化 （重结晶、离子交换、色谱分离、膜分离）
成品加工 （浓缩、无菌过滤、干燥、成型）
2.1 概述 2.2 细胞壁的成分和结构 2.3 细胞破碎技术 2.4 破碎率的评价及破碎率的选择依据
2.1 概述
一、微生物细胞
细胞外层结构
革兰氏阴性菌（Gram-negative），泛指革兰氏染色反应呈红色的细菌。葡萄 球菌、链球菌。 革兰氏阳性菌（Gram Positive）是能够用革兰氏染色染成深蓝或紫色的细菌。 大肠杆菌。
各种微生物细胞壁的结构及组成
1、细菌的细胞壁
几乎所有细菌的细胞壁都是由坚固的骨架——肽聚 糖组成，是聚糖链借短肽交联而成，使细胞具有 一定的形状和强度。
综上所述：
不同生物体或同一生物体的不同部位，细胞破 碎难易程度不同，因此因采用不同的细胞破 碎方法进行破碎。
如：动物器脏细胞没有细胞壁，细胞膜比较脆 弱，容易破碎；植物和微生物细胞都具有纤 维素、半纤维素或肽聚糖组成的细胞壁，应 采用专门的破碎方法进行破碎。
二、植物细胞
真核细胞具有真正的细胞核，其结构要比 原核生物复杂的多。和原核细胞一样，真 核细胞也具有一层细胞膜。
除了细胞膜，真核细胞具有一些有特殊作 用的细胞器。
植物和大多数真菌具有细胞壁。
动 物 细 胞 模 式 图
植 物 细 胞 模 式 图
对于已停止生长的植物细胞来说，其细胞壁 可分为初生壁和次生壁两部分。初生壁是细 胞生长时期形成的。次生壁是细胞停止生长 后，在初生壁内部形成的结构。
对于胞内产物，则需首先收集菌体，进行细胞破 碎，使代谢产物转入液相中，然后，再进行细胞 碎片的分离。
细胞破碎方法课件PPT
通过离心法或过滤法分离出未破碎细胞和细胞碎片，然后通过显微镜观察或细胞计数器测定细胞数量，计算破碎 率。
蛋白质的提取率
提取率
破碎后可溶性蛋白质占细胞内总蛋白质 的比例，反映了蛋白质的释放和提取效 果。
VS
测定方法
通过考马斯亮蓝法或紫外吸收法测定可溶 性蛋白质的含量，再与细胞内总蛋白质的 含量进行比较，计算提取率。
细胞破碎方法课件
• 细胞破碎概述 • 物理法 • 化学法 • 生物法 • 破碎效果的评估
01
细胞破碎概述
细胞破碎的定义
01
细胞破碎是指通过物理或化学手 段将细胞壁和膜结构破坏，释放 出细胞内含物的过程。
02
细胞破碎是生物制药、生物燃料 、生物化学品等领域中常用的技 术手段，用于获取细胞内含物并 应用于各种生产和研究。
细胞破碎的原理
细胞壁和膜结构的机械性质
细胞壁和膜结构是细胞的保护层，具有抵抗内部压力和维持细胞形态的作用。 通过施加外力或改变环境条件，可以破坏细胞壁和膜结构，实现细胞破碎。
细胞内含物的释放
细胞破碎后，细胞内的水分、离子、有机物等物质会释放出来，这些物质可以 用于提取、分离和纯化等下游操作。
细胞破碎的方法分类
详细描述
通过瞬间释放高压水流或高压气体，使细胞受到强大的冲击力而破碎，这种方法 破碎效率高，但设备成本较高。
03
化学法
酶解法
总结词
利用酶分解细胞膜上的蛋白质或其他成分，使细胞膜破裂， 释放出细胞内的物质。
详细描述
酶解法是一种温和的破碎方法，适用于破碎各种类型的细胞 ，包括动物细胞、植物细胞和微生物细胞。酶解法的优点在 于对细胞内物质的破坏性小，能够保持细胞内物质的生物活 性。常用的酶有蛋白酶、酯酶和糖酶等。
细胞破碎 实验报告
实验报告：细胞破碎研究背景细胞破碎是生物学实验中常用的一种技术手段，它能够将细胞膜破坏，释放细胞内的各种生物分子，如DNA、蛋白质和细胞器等。
破碎细胞是进行细胞分析、蛋白质提取和基因研究的重要步骤。
本实验旨在探究细胞破碎的原理和方法，并通过一系列实验验证其效果。
实验步骤步骤一：制备细胞悬液1.选择目标细胞，如细菌、酵母或动物细胞等。
2.从培养物中收集细胞，使用无菌工具将其转移到离心管中。
3.使用离心机将细胞以合适的速度离心，去除培养基并获得细胞沉淀。
4.用无菌缓冲液（如PBS）洗涤细胞沉淀，去除残余培养基和细胞代谢产物。
5.经过洗涤后，加入适量的缓冲液，利用悬浮液作为细胞的储存液。
步骤二：选择合适的细胞破碎方法1.根据细胞类型和研究目的，选择合适的细胞破碎方法。
常见的方法有机械破碎、化学破碎和超声破碎等。
2.对于细菌和酵母等单细胞生物，机械破碎是常用的方法。
可以使用超高速离心机、高压均质机或超声波细胞破碎仪等设备进行破碎。
3.对于动物细胞和组织，化学破碎是常用的方法。
可以使用洗涤剂、酶或有机溶剂等进行细胞破碎。
4.在选择破碎方法时，需要考虑细胞的脆弱性、目标生物分子的稳定性以及实验操作的方便性等因素。
步骤三：进行细胞破碎实验1.将制备好的细胞悬液转移至破碎试剂中，按照要求的工作浓度进行操作。
2.根据破碎方法的要求，进行细胞破碎。
如使用机械破碎方法，将细胞悬液置于高速离心机中，设定合适的离心时间和转速。
3.完成破碎后，收集破碎液，并立即进行下一步实验或储存。
步骤四：实验验证和数据分析1.从破碎液中提取目标生物分子，如DNA、蛋白质等。
2.使用适当的分析方法，如凝胶电泳、免疫印迹等，对提取的生物分子进行分析和检测。
3.比较不同破碎方法的效果和提取产量，评估细胞破碎的效果和可行性。
结果和讨论根据不同细胞类型和破碎方法的选择，我们成功地破碎了目标细胞，并获得了目标生物分子。
通过实验验证和数据分析，我们发现不同的破碎方法对于不同的细胞类型和生物分子具有不同的破碎效果和产量。
细胞的分离和破碎
CLICK HERE TO ADD A TITLE
CONTENTS
2.1 发酵液的预处理
壹
请在此添加较简洁标题内容
贰
请在此添加较简洁标题内容
去除发酵液中部分杂质，以利于后续各步操作 杂质中影响最大的是高价无机离子和杂蛋白等
预处理的具体方法
高价无机离子的去除方法
去除钙离子：通常使用草酸。但由于草酸溶解
度较小，不适合用量较大的场合。
去除镁离子：加入三聚磷酸钠，与镁离子形成络合物。
用磷酸盐处理，也能大大降低钙离子和镁离子的浓度。例如：环丝氨酸的提取。
去除铁离子: 加入黄血盐，使其形成普鲁士蓝沉淀而除去。
杂蛋白质的除去 沉淀法 盐析 调节pH→pI 吸附法 加入吸附剂或沉淀剂 变性法 加热，大幅度调节pH，加有机溶剂或表面活性剂等。
胶体双电层的构造
絮凝
指在某些高分子絮凝剂存在下，在悬浮粒子之间发生架桥作用而使胶粒形成粗大（10mm）的絮凝团的过程。
絮凝剂的分类
根据活性基团在水中解离情况的不同，絮凝剂可分为非离子型、阴离子型和阳离子型三类。 根据其来源的不同，工业上使用的絮凝剂又可分为如下三类：
絮凝效果与絮凝剂的分子量和类型、加量，溶液的pH，搅拌速度和时间等因素有关。
3. 机械破碎法与非机械法的比较
比较项目
机械法
非机械法
破碎机理
切碎细胞
溶解局部壁膜
碎片大小
细小
较大
内含物释放
全部
部分
黏度
高（核酸多）
低（核酸少）
时间，效率
时间短，效率高
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
包涵体主要由蛋白质构成，其中大多是基因表 达产物。这些基因表达产物没有生物活性。为 此，欲获得天然活性态的目标产物，必需分离 包涵体后，溶解包涵体并使其中的目标蛋白恢 复应有的天然活性。所以，包涵体的出现不仅 增加了生化工程师生物分离设计的难度，也为 生物化学家的蛋白质折叠（protein folding）机 理研究提出了新的课题。
三、包含体及其纯化
例：外源蛋白在大肠杆菌中的积累
蛋白0 人胰岛素 β -丙酰胺酶
γ-人体干扰素
凝乳酶原 牛生长激素 β -内酰胺酶 人胰岛素原
产物占菌体总蛋白/%
50% 20% 25%
>30%
5%~26%
外源蛋白的积累 形成包含体 在细胞间区 形成包含体 形成包含体 形成包含体 形成间区包含体 形成包含体
（聚丙烯酰胺凝胶、等电聚焦、毛细管电泳等）
3、根据蛋白质性质确立分离方法
溶解度不同：等电点，有机溶剂，盐析 电荷不同：电泳，离子交换 分子形状大小不同：离心，透析，凝胶过滤
四、蛋白质的制备流程： 原料液
细胞分离(离心，过滤)
细胞－胞内产物 清液－胞外产物
细胞破碎
包含体
碎片分离
溶解(加盐酸胍、脲) 复性
工业化应用：经济性（高收率，纯度次要） 一般研究：80%-90%纯度 结构研究：95%以上纯度 医疗：全面分析
三、确立有效成分的测定方法
1、蛋白质初步提取和浓缩
吸附法 超滤法 沉淀法（盐析、有机溶剂沉淀、等电点沉淀） 透析
三、确立有效成分的测定方法
2、蛋白质高效分离细菌及病毒中对热不太敏感的物质
㈢．化学法
1． 溶剂处理法： 丙酮、氯仿、甲苯等
溶解胞膜上脂质化合物，使细胞结构破坏。
2． 表面活性剂法
破坏细胞膜，释放目的物（需与其它方法结合应用）。
（四）酶解法
1． 自溶法
保温一定时间，通过细胞本身的酶将细胞破坏。
2． 外加酶法
将细胞壁分解，使内含物释放出来。 细菌：加溶菌酶（结合反复冻融或加EDTA） 酵母：采用β-葡聚糖酶 霉菌：添加几丁质酶 植物材料：加纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶等。
粗分离(盐析、萃取、超过滤等) 脱盐(凝胶过滤、超过滤) 纯化(层析、电泳)
浓缩(超过滤)
精制(结晶、干燥)
首先：
材料的选择和预处理 细胞的破碎和细胞组分分离 有效成分的萃取
第二节 材料的选择、预处理与保存
一、原料选择原则： ➢有效成分含量高、原料来源丰富，易得； ➢原料中杂质含量少； ➢原料成本低等；
2、目的物的特性
⑴．细胞中的位置 游离状：只需温和破碎，除去不溶部分。 结合状：结合在膜或细胞器内，先收集膜或细胞器，再破碎
⑵．敏感性 温度、pH、氧、剪切力、杂酶等影响
⑶. 处理量 有些处理量大，如组织捣碎机等。 有些处理量少，如超声波破碎等。
二、破碎方法
㈠ 机械法
原理：机械运动产生剪切力的作用破细胞 具体方法：
第二章 蛋白质的制备 ---细胞破碎与萃取
第一节 蛋白质制备总则
一、目标：高效率、高收率、高纯度、高活性
二、方法选择依据： 根据不同蛋白质的性质和研究目的
1、蛋白质的性质：
来源、 胞内（胞外）、 可溶性、 分子大小、 等电点、 稳定性（对温度、pH、蛋白酶、金属离子的耐受性）等
2、研究目的：
考虑产品的质量、数量和经济性 越到后面的纯化越困难，增加成本，延长操作时间，收率低
重组DNA技术为大规模生产目标蛋白质提供了 崭新的途径，开辟了现代生物技术发展的新纪 元。但是，人们在分离纯化基因工程表达产物 时遇到了意想不到的困难，很多利用大肠杆菌 为宿主细胞的外源基因表达产物（如尿激酶、 人胰岛素、人生长激素、白细胞介素－６、人 γ－干扰素等）不仅不能分泌到细胞外、而且 在细胞内凝聚成没有生物活性的固体颗粒－包 涵体（inclusion bodies IBs)。
包涵体（inclusion bodies），或包含体，是无定 形的蛋白质的聚集，不被任何膜所包围。细胞破 碎后，包涵体呈颗粒状，致密，低速离心就可以 沉淀。包涵体难溶于水中，在变性剂溶液（如盐 酸胍、脲）中才能溶解。在这些溶液中，溶解的 蛋白质呈变性状态，即所有的氢键、疏水键全被 破坏，疏水侧链完全暴露，但一级结构和共价键 不被破坏。因此当除去变性剂时，一部分蛋白质 可以自动折叠成具有活性的正确构型，这一折叠 过程称为蛋白质的复性。
1.组织捣碎机： 适用：动植物组织 2.匀浆器 适用：较柔软、易分散的组织细胞 3.研钵 适用：微生物（细菌）与植物细胞
㈡ 物理法
1．超声波破碎
2．渗透压冲击法：适用：处理胞壁较脆弱的微生物。
细胞放在高渗溶液中，由于渗透压作用，细胞内水分向外 渗出，细胞发生收缩，当达到平衡后，将介质快速稀释或 将细胞转入水或缓冲液中，由于渗透压发生突然变化，胞 外的水分迅速渗入胞内，使细胞快速膨胀而破裂
注意动物的 年龄与性别
微生物生长 的对数期
植物采收 具有季节性
二、原料的预处理：
动物原料：采集后要立即处理，去除结缔组织、
脂肪组织等，并迅速冷冻贮存。
植物原料：要择时采集并就地去除不用的的部分，
有用部分保鲜处理。
微生物：及时将菌细胞与培养液分开，进行保鲜处理。
三、原料的保存方法
（1）冷冻法：适用于所有生物原料。常用-40℃速冻。 （2）有机溶剂脱水法：丙酮，该法适用于原料少而价值高、
有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。
（3）防腐剂保鲜：常用乙醇、苯酚等。适用于液体原
料，如发酵液、提取液等。
第三节 细胞破碎
一、破碎方法的原则和依据
原则：最大提取、不易变性、减少干扰
具体须从材料特性和目的物特性综合考虑。
1、材料细胞的特性
动物细胞无细胞壁，易破碎，只需用温和方法 植物细胞有细胞壁难破碎，须用中等或强度大的方法 微生物细胞较复杂，一般用较强的方法
3．反复冻融法：-15℃～-20℃， 适用：动物材料
将待破碎的细胞冷至－15℃到－20℃，然后放于室温(或 40℃)迅速融化，如此反复冻融多次，由于细胞内形成冰 粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。这种方 法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜 采用此法。
4．急热骤冷法： 85～90℃数分钟，冰浴冷却