微生物限度检查法(2).控制菌检查方法验证讲义
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
微生物限度检查法(2)
控制菌检查方法的验证
1
控制菌检查方法的验证
确认所采用的方法适合于该药品的控制菌 检查 若药品的组分或原检验条件发生改变可能 影响检验结果时，检查方法应重新验证 验证时，依各品种项下微生物限度标准中 规定检查的控制菌选择相应验证的菌株 试验菌液：10-100cfu/ml生理盐水的菌悬液
5
2.离心沉淀集菌法
低速离心（500转/分5分钟）取上清液（弃取抑菌 成分的固体微粒） 高速离心（3000-3500转/分30分钟）弃去上层抑 菌的液体部分，留管底2ml。 本法适用于抑菌作用不强的中西药品，如：平喘 胺片 、速效感冒片（先低速，后高速）；小儿惊 风散（低速离心）。本法操作较烦琐，药品中污 染的微生物有一定的损失。
2
验证方法及结果判断
试验组: 供试液＋试验菌→ (依相应控制菌 检查法检查) 检出试验菌 阴性菌对照组:目的 验证方法的专属性。大 肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌采用金黄色 葡萄球菌；铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球 菌、梭菌采用大肠埃希菌→不得检出 若试验组未检出试验菌→应消除抑菌活性
3
消除抑菌活性的方法 应根据供试品性质，检验目的， 试验菌的性质及检验条件等 通过试验确定
10
5.联合使用
适用于抑菌作用较强的中西药制剂。 如：①复方洗必泰栓（水溶性基质）金黄 色葡萄球菌的检验—用1%吐温-80稀释液制 备供试液＋膜法过滤＋滤膜置含5%吐温-80 的硫乙醇酸盐增菌液中→（+）；②生白安 片（含盐酸小檗胺）大肠杆菌检验—低速 离心＋薄膜过滤法→（+）。
11
方法:1.培养基稀释法 2.离心沉淀集菌法 பைடு நூலகம்.薄膜过滤法 4.中和法 5.联合使用
4
1.培养基稀释法
供试品加稀释剂稀释到一定倍数后进行检 验（虽然供试品中污染的菌也稀释，但由 于检验结果规定是不得检出，因而有些品 种用稀释法可检出目的菌）。 如百喘朋片[1：10 稀释液3ml 结果（＋） 试验菌28-96个] 。 本法适用于一般抑菌作 用不强的中西药品。
6
3.薄膜过滤法
本法适用于有抑菌作用的液体制剂。 如：葡萄糖酸洗必泰含漱剂，氯霉素滴眼 剂等。 注意：供试液应加入较多量的稀释液稀释 后，再注入滤器中。
7
8
9
4.中和法
①磺胺类可加对氨基苯甲酸（100ml增菌培养基 中含1%对氨基苯甲酸0.5-1.0ml）如：复方新诺明 片 ②含重金属盐类可用含巯基化合物（硫乙醇酸钠， L-胱氨酸）的培养基作增菌培养液。如：磺胺嘧 啶银软膏-金黄色葡萄球菌与绿脓杆菌的检验 ③脂溶性药物用表面活性剂中和。如：复方痔疮 栓（含洗必泰）中的绿脓杆菌的检验，仅用吐温80制备供试液即可
控制菌检查方法的验证
1
控制菌检查方法的验证
确认所采用的方法适合于该药品的控制菌 检查 若药品的组分或原检验条件发生改变可能 影响检验结果时，检查方法应重新验证 验证时，依各品种项下微生物限度标准中 规定检查的控制菌选择相应验证的菌株 试验菌液：10-100cfu/ml生理盐水的菌悬液
5
2.离心沉淀集菌法
低速离心（500转/分5分钟）取上清液（弃取抑菌 成分的固体微粒） 高速离心（3000-3500转/分30分钟）弃去上层抑 菌的液体部分，留管底2ml。 本法适用于抑菌作用不强的中西药品，如：平喘 胺片 、速效感冒片（先低速，后高速）；小儿惊 风散（低速离心）。本法操作较烦琐，药品中污 染的微生物有一定的损失。
2
验证方法及结果判断
试验组: 供试液＋试验菌→ (依相应控制菌 检查法检查) 检出试验菌 阴性菌对照组:目的 验证方法的专属性。大 肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌采用金黄色 葡萄球菌；铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球 菌、梭菌采用大肠埃希菌→不得检出 若试验组未检出试验菌→应消除抑菌活性
3
消除抑菌活性的方法 应根据供试品性质，检验目的， 试验菌的性质及检验条件等 通过试验确定
10
5.联合使用
适用于抑菌作用较强的中西药制剂。 如：①复方洗必泰栓（水溶性基质）金黄 色葡萄球菌的检验—用1%吐温-80稀释液制 备供试液＋膜法过滤＋滤膜置含5%吐温-80 的硫乙醇酸盐增菌液中→（+）；②生白安 片（含盐酸小檗胺）大肠杆菌检验—低速 离心＋薄膜过滤法→（+）。
11
方法:1.培养基稀释法 2.离心沉淀集菌法 பைடு நூலகம்.薄膜过滤法 4.中和法 5.联合使用
4
1.培养基稀释法
供试品加稀释剂稀释到一定倍数后进行检 验（虽然供试品中污染的菌也稀释，但由 于检验结果规定是不得检出，因而有些品 种用稀释法可检出目的菌）。 如百喘朋片[1：10 稀释液3ml 结果（＋） 试验菌28-96个] 。 本法适用于一般抑菌作 用不强的中西药品。
6
3.薄膜过滤法
本法适用于有抑菌作用的液体制剂。 如：葡萄糖酸洗必泰含漱剂，氯霉素滴眼 剂等。 注意：供试液应加入较多量的稀释液稀释 后，再注入滤器中。
7
8
9
4.中和法
①磺胺类可加对氨基苯甲酸（100ml增菌培养基 中含1%对氨基苯甲酸0.5-1.0ml）如：复方新诺明 片 ②含重金属盐类可用含巯基化合物（硫乙醇酸钠， L-胱氨酸）的培养基作增菌培养液。如：磺胺嘧 啶银软膏-金黄色葡萄球菌与绿脓杆菌的检验 ③脂溶性药物用表面活性剂中和。如：复方痔疮 栓（含洗必泰）中的绿脓杆菌的检验，仅用吐温80制备供试液即可