蛋白裂解液(参考资料)

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蛋白裂解液配方

蛋白裂解液配方
蛋白裂解液是一种在生物学和生物化学实验中常用的试剂，用于裂解或溶解细胞，释放细胞内的蛋白质。

以下是一个基本的蛋白裂解液的常见配方，但请注意，具体的配方可能因实验目的和样品类型而有所不同。

常见的蛋白裂解液配方：
1.RIPA缓冲液：
•50 mM Tris-HCl pH 7.4
•150 mM NaCl
•1% Triton X-100
•0.5% 钠脱氧胆酸
•0.1% SDS
• 1 mM EDTA
• 1 mM PMSF（苯甲磺酰氟）
注：可以根据实验需求加入蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂等。

emmli裂解缓冲液：
•2% SDS
•10% 甘油
•60 mM Tris-HCl pH 6.8
•100 mM DTT（二硫代硫酸钠）
注：此为常用于SDS-PAGE的裂解液，可用于蛋白质的电泳分析。

3.蛋白裂解酶消化液：
•50 mM Tris-HCl pH 8.0
•150 mM NaCl
• 1 mM EDTA
•1% Triton X-100
•0.5% NP-40
•蛋白酶（如胰蛋白酶）或其他特定的蛋白酶
注：此液体适用于进行蛋白酶的部分或完全消化。

请注意，这些配方中的成分可以根据具体的实验需求进行调整。

在制备蛋白裂解液时，应该遵循严格的实验室规范，并根据样品的特性和实验目的选择合适的裂解液。

此外，对于某些特定的实验，可能需要添加蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂等以保护蛋白质不被降解。

CelLyticTM系列蛋白裂解液

CelLyticTM系列蛋白裂解液
高效率操作步骤简单,省时高得率得率远优于传统冻融或超声法高活性温和非变性条件下抽提活性蛋白高兼容与蛋白酶抑制剂、鳌合剂、离液剂等很好兼容抽提的蛋白无需去除CelLyticTM 试剂即可进行下游实验：亲和纯化 Western blot 凝胶迁移检测报告基因检测……
566.28 2136.42 566.28 3758.04 2535.39 3938.22
501.93 3320.46
566.28 2084.94 3989.7
527.67 3629.34 5302.44
促销价¥
384.81 2375.80 685.97 2375.80 409.91 1505.79 2651.86 1054.05 1648.00 393.18 1187.90 217.50 711.07 4341.69 368.08 1271.56
哺乳动物细胞和组织裂解
C2978
CelLytic™ M Cell Lysis Reagent
C3228
CelLytic™ MT Cell Lysis Reagent
CE0500 NXTRACT
R0278
CelLytic™ MEM Protein Extraction Kit CelLytic™ NuCLEAR™ Extraction Kit For mammalian tissue or cultured cells RIPA Buffer
P8215
Protease Inhibitor Cocktail for use with fungal and yeast extracts
P8465
Protease Inhibitor Cocktail for use with bacterial cell extracts

裂解液提蛋白说明书

RIPA裂解液(强)提蛋白(2007-07-18 11:31:26)转载▼对于培养细胞样品：1. 融解RIPA裂解液，混匀。

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。

按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。

按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

再用手指轻弹以充分裂解细胞。

充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注：裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混匀。

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。

(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

)4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。

然后同样离心取上清，用于后续实验。

直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

蛋白裂解液的成分及作用

蛋白裂解液的成分及作用嘿，你问蛋白裂解液的成分及作用啊？这可有的说呢。

先说成分哇。

蛋白裂解液里一般有各种盐类，像氯化钠啥的。

这就好比给蛋白来点调料，让它们能更好地被处理。

还有表面活性剂，这玩意儿能把蛋白从细胞里或者组织里给弄出来。

就像个小助手，把蛋白给拽出来。

另外呢，可能还有蛋白酶抑制剂，这是为了防止蛋白被不该分解的酶给弄碎了。

我记得有一次，我看别人做实验，看到蛋白裂解液里那些成分，感觉好神秘呢。

再说说作用。

蛋白裂解液的一大作用就是把蛋白从各种地方弄出来，让它们能被研究。

比如说从细胞里把蛋白解放出来，这样就能研究这些蛋白是干啥的啦。

我有个朋友，他做实验的时候就靠蛋白裂解液把蛋白弄出来，然后去分析这些蛋白的功能。

就好像把蛋白从一个神秘的地方解救出来，然后去了解它们的故事。

蛋白裂解液还能让蛋白保持稳定。

有了那些成分在，蛋白就不容易坏掉或者变形。

就像给蛋白穿了一件保护衣，让它们能好好地被研究。

我有一次看到一个实验，要是没有蛋白裂解液，那些蛋白很快就不行了，根本没法做实验。

另外呢，蛋白裂解液能让实验更方便。

不用费劲地去想别的办法弄蛋白，直接用蛋白裂解液一处理，蛋白就出来了。

我有个同事，他做实验的时候可喜欢用蛋白裂解液了，说省了好多事儿。

我给你讲个事儿吧。

有一次我去一个实验室参观，看到他们在研究一种新的蛋白。

他们就用蛋白裂解液把蛋白从细胞里弄出来，然后进行各种分析。

我就觉得蛋白裂解液好神奇啊。

所以啊，蛋白裂解液的成分有盐类、表面活性剂、蛋白酶抑制剂等，作用是把蛋白弄出来、保持蛋白稳定、让实验更方便。

下次你看到蛋白裂解液的时候，就可以想想它的这些作用哦。

蛋白裂解液的种类

蛋白裂解液的种类蛋白裂解液是一种常用于蛋白质提取和分析的试剂，具有多种不同的种类和配方。

下面将介绍几种常见的蛋白裂解液及其特点。

1. RIPA裂解液RIPA（Radioimmunoprecipitation Assay）裂解液是一种常用的蛋白裂解液，用于细胞裂解和蛋白质提取。

它的主要成分包括盐类、离子型洗涤剂（如NP-40或Triton X-100）、蛋白酶抑制剂（如苯甲酰氟化物）和缓冲剂（如Tris-HCl）。

RIPA裂解液能够有效地破坏细胞膜，并且可以溶解大部分细胞组分，适用于多种蛋白质的研究。

2. SDS裂解液SDS（Sodium Dodecyl Sulfate）裂解液是一种常用的蛋白裂解液，用于蛋白质电泳分析。

它的主要成分是SDS和Tris-HCl缓冲液。

SDS裂解液能够使蛋白质变性并带负电荷，使其在电场中按照分子大小进行迁移，便于分析和测定。

3. Urea裂解液Urea裂解液是一种常用的蛋白裂解液，用于蛋白质的变性和解聚。

它的主要成分是尿素和Tris-HCl缓冲液。

尿素能够破坏氢键和疏水作用力，使蛋白质变性并解聚，便于后续的分析和提取。

4. NP-40裂解液NP-40（Nonidet P-40）裂解液是一种非离子型洗涤剂，常用于细胞裂解和蛋白质提取。

它的主要成分是NP-40和Tris-HCl缓冲液。

NP-40裂解液能够有效地破坏细胞膜，并且具有低表面张力和渗透压，有利于蛋白质的提取和分析。

5. RIPA-Lysis裂解液RIPA-Lysis裂解液是一种改良版的RIPA裂解液，常用于细胞裂解和蛋白质提取。

它的主要成分包括盐类、离子型洗涤剂（如NP-40或Triton X-100）、蛋白酶抑制剂（如苯甲酰氟化物）和缓冲剂（如Tris-HCl），与RIPA裂解液相似。

不同之处在于RIPA-Lysis裂解液中添加了额外的蛋白酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂，可以更好地保护蛋白质的完整性。

总结：蛋白裂解液是一种用于蛋白质提取和分析的重要试剂，常见的种类包括RIPA裂解液、SDS裂解液、Urea裂解液、NP-40裂解液和RIPA-Lysis裂解液等。

蛋白裂解液教程文件

蛋白裂解液蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择：全细胞：NP-40或RIPA细胞质（可溶）：Tris-HCl细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton细胞膜：NP-40或RIPA细胞核：RIPA线粒体：RIPARIPA裂解液配方加水到 100mlAprotinin 10μg/μl ；用10mM HEPES-KOH（PH8.0）溶解，备用。

●Nonidet P-40简称NP-40，乙基苯基聚乙二醇,常用非离子性去垢剂。

●Na-deoxycholale，脱氧胆酸钠，离子型去垢剂。

离子型去垢剂主要作用有：裂解细胞；溶解蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；很适合做WB，但在Co-IP中使用，需要谨慎。

●亮抑霉肽（Leupeptin）：抑制丝氨酸蛋白酶包括胰蛋白酶、纤溶酶、猪胰激肽原酶）和半胱氨酸蛋白酶（包括木瓜蛋白酶和组织蛋白酶B）●抑肽素A（Pepstatin A）抑制各种天门冬氨酸蛋白酶，例如组织蛋白酶D、肾素、胃蛋白酶、细菌天门冬氨酸蛋白酶和HIV蛋白酶；●胰凝乳蛋白酶抑制剂（Chymostatin）抑制具有糜蛋白酶类特异性丝氨酸蛋白酶（包括糜蛋白酶、胃促胰酶、组织蛋白酶 G）和大多数丝氨酸蛋白酶（包括组织蛋白酶B，H，L）●抗木瓜蛋白酶（Antipain）抑制木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和纤溶酶。

●氟化钠抑制酸性磷酸酶●正钒酸钠：抑制碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶（tyrosine phosphatase）●焦磷酸钠（sodium pyrophosphate）：抑制丝氨酸-苏氨酸磷酸酶（serine－threonine phosphatase）。

在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。

蛋白质的提取过程中，我们要经常加和蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。

另外在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不可少的，本文总结了常用的蛋白酶抑制剂PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制剂，EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠，Na3VO4 原矾酸钠，BETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠，Na2P2O4 焦磷酸钠等。

(推荐)细胞组织裂解(提蛋白)方法

第一种方法蛋白匀浆缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5) 150 mM NaCl5 mM EDTA1 % NP-40 1 mM PMSF操作步骤直接用这个进行组织匀浆然后于10000 rpm 离心20分钟收集上清作SDS－PAGE电泳从染色的情况来看所得到的总蛋白纯度都不错条带比较清晰。

我是作的小鼠八种常规组织也包括肾脏在内。

将抽提好的蛋白分装后直接放在负八十保存。

上样大概3~8ul每孔都可以的具体看个人需要。

70v 浓缩，150v分离第二种方法裂解液配方：尿素：8M CHAPS:4% DTT:65mM(现加）PMSF:1mM(现加）MiliQ 水操作步骤：取300mg样品在液氮环境下研磨，加入1ml裂解液混匀，室温静置1小时（实验证明改为匀浆更好，蛋白降解轻），15000g离心1小时，取上清测定蛋白质浓度。

在裂解液中加IPG buffer有两个作用:1,增强蛋白质的溶解性2,可以结合核酸,在沉淀的时候予以除去。

建议最好加，浓度从0.5-2%不等（这取决于您样品蛋白质的难溶程度）。

IPG buffer 是载体两性电解质，IPG buffer另外一个作用是促进蛋白质溶解的,所以IEF前一定要加，裂解液中没有IPG buffer可以么？（可以的，最后上胶条的时候可以再加）不过，我觉得液氮研磨以后，最好是粗离心一下，把一些结缔组织给离心掉（150g既可）然后再加裂解液。

裂解液加1ML应该没什么问题，主要取决你以后蛋白的浓度。

用这个方法最好经丙酮沉淀一次比较好）第三种方法建议最好加完裂解液后再用超声波破碎，我做肝脏蛋白提取时一般采取400W工作10秒，间歇10秒，次数15次，一次结束后大约30分钟再重复上述步骤一次（因为不同的样品用一根超声柱子，可能会导致污染，所以一定要用双蒸水冲洗干净，再用70%乙醇洗一下，再用水洗一次），另外样品超声时要置于冰浴中，以免产热做过的是用10ml蛋白裂解液来匀浆3克的组织，最终用考马斯亮兰染色法测得的蛋白浓度大概为 30~50 ug/ul测595 OD值时，设定一个只用水的空白，把所有测得的值都减去这个空白。

CelLyticTM系列蛋白裂解液

CelLyticTM系列蛋白裂解液
高效率操作步骤简单,省时高得率得率远优于传统冻融或超声法高活性温和非变性条件下抽提活性蛋白高兼容与蛋白酶抑制剂、鳌合剂、离液剂等很好兼容抽提的蛋白无需去除CelLyticTM 试剂即可进行下游实验：亲和纯化 Western blot 凝胶迁移检测报告基因检测……
哺乳动物细胞和组织裂解
C2978
CelLytic™ M Cell Lysis Reagent
C3228
CelLytic™ MT Cell Lysis Reagent
CE0500 NXTRACT
R0278
CelLytic™ MEM Protein Extraction Kit CelLytic™ NuCLEAR™ Extraction Kit For mammalian tissue or cultured cells RIPA Buffer
50ML 250ML 1KT
50ML 500ML 1KT
目录价¥
592.02 3655.08 1055.34 3655.08 630.63 2316.6 4079.79 1621.62 2535.39 604.89 1827.54 334.62 1093.95 6679.53 566.28 1956.24
566.28 2136.42 566.28 3758.04 2535.39 3938.22
501.93 3320.46
566.28 2084.94 3989.7
527.67 3629.34 5302.44
促销价¥
384.81 2375.80 685.97 2375.80 409.91 1505.79 2651.86 1054.05 1648.00 393.18 1187.90 217.50 711.07 4341.69 368.08 1271.56

RIPA 蛋白裂解液说明书

ShineGene Molecular Biotech,Inc. 上海闪晶分子生物科技有限公司
2、在做免疫沉淀或免疫共沉淀时，最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解； 3、本品中未加入蛋白酶抑制剂，需自备 PMSF。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。 4、裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
WebSite：
Add: Floor 2 ,Building A,328#hina Tel: +86-21-54460832 Web: Fax:+86-21-54460831 E-mail: master@
Add: Floor 2 ,Building A,328# Wuhe Road, Shanghai 200233 China Tel: +86-21-54460832 Web: Fax:+86-21-54460831 E-mail: master@
ShineGene Molecular Biotech,Inc. 上海闪晶分子生物科技有限公司
蛋白裂解液(RIPA)
使用说明书
本品是一种传统的细胞组织快速裂解液。使用本品裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。主要成分为 50mM Tris (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40， 0.1% SDS。使用本品裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。保存条件：4℃ 制备细胞裂解产物： 1、800g 4℃离心 5 分钟，收集细胞，估计细胞离心后的体积(PCV,106 cells ≈ 20ul PCV, 107 cells ≈ 100 ul PCV) 2、每 50~100ul PCV 加入 5 倍体积的蛋白裂解液（250~500ul）,冰浴中放置 10 分钟，且每隔 5 分钟在漩涡混合仪震荡 30 秒； 3、12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物； 4、假如所得蛋白产物较为粘稠，可 95℃加热 5 分钟，然后迅速冰浴 5 分钟，12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。制备组织裂解产物： 1、取 50-100mg 组织在冰上剪成碎片，用预冷的 PBS 洗涤 2 次，离心弃去 PBS； 2、加入 0.5-1ml 预冷的蛋白裂解液； 3、4℃用玻璃匀浆器匀浆 20-40 次，直到 95%的细胞被破碎，然后在冰浴中放置 10 分钟，且每隔 5 分钟在漩涡混合仪震荡 30 秒； 4、12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物； 5、假如所得蛋白产物较为粘稠，可 95℃加热 5 分钟，然后迅速冰浴 5 分钟，12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物。 6、20%的甘油保存于-70℃或-20℃。注意事项： 1、在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；

全蛋白提取组织裂解液配方

Western-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液1.110% Triton X-100Triton X-100 10ml蒸馏水90ml混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混匀1.210% 去氧胆酸纳去氧胆酸纳1g蒸馏水10ml避光保存1.3200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)PMSF 174.2mg异丙醇5ml分装，-20℃保存1.4100mmol/L EDTAEDTA 372.24mg蒸馏水10ml1.51mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)亮抑酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.61mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)抑蛋白酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.71mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)胃蛋白酶抑制剂2mg甲醇2ml分装，-20℃保存2.工作液2.1Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：Tris-base 605mgNaCl 900mg蒸馏水75ml用HCl调整pH值为7.42.210% Triton X-100 10mL2.310% 去氧胆酸纳 2.5mL2.4100mmol/L EDTA 1mL2.5用前加入：1mg/mL亮抑酶肽100μl1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl200mmol/L PMSF 500μl各成分的终浓度Tris-base 50mmol/L，pH 7.4Triton X-100 1%去氧胆酸纳0.25%NaCl 150mmol/LEDTA 1 mmol/L亮抑酶肽1μg/mL抑蛋白酶肽1μg/mL胃蛋白酶抑制剂1μg/mLPMSF 1mmol/L。

蛋白裂解液

蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择：全细胞：NP-40或RIPA细胞质（可溶）：Tris-HCl细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton细胞膜：NP-40或RIPA细胞核：RIPA线粒体：RIPARIPA裂解液配方加水到 100mlAprotinin 10μg/μl ；用10mM HEPES-KOH（PH8.0）溶解，备用。

●Nonidet P-40简称NP-40，乙基苯基聚乙二醇,常用非离子性去垢剂。

●Na-deoxycholale，脱氧胆酸钠，离子型去垢剂。

离子型去垢剂主要作用有：裂解细胞；溶解蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；很适合做WB，但在Co-IP中使用，需要谨慎。

在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。

蛋白质的提取过程中，我们要经常加和蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。

另外在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不可少的，本文总结了常用的蛋白酶抑制剂PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin 抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制剂，EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠，Na3VO4 原矾酸钠，BETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠，Na2P2O4 焦磷酸钠等。

RIPA 裂解液说明书

1RIPA 裂解液说明书货号：C1008规格：100ml保存：-20℃保存，12个月有效。

产品简介：多种成分均可从细胞中提取总蛋白，如Triton、SDS、NP-40等。

RIPA 裂解液((RIPA Lysis Buffer )是采用一种温和的裂解方法获得总蛋白的裂解液。

所获得的蛋白质可用于PAGE 电泳、Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。

Weak RIPA Lysis Buffer 主要由Tris、NP-40、sodium deoxycholate 等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

操作步骤(仅供参考):(一)贴壁培养细胞1、取RIPA Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF 终浓度为1mM。

2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS 或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。

.按照6孔板每孔加入150～250μl 含有PMSF 的裂解液的比例，加入RIPA Lysis Buffer。

移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。

置于冰上或4℃裂解，通常裂解液作用于细胞1～3s 内，细胞就会被裂解。

通常6孔板每孔细胞加入150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。

4、10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5、后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)悬浮培养细胞1、取RIPA Lysis Buffer 置室温溶解混匀后，加入PMSF，使PMSF 终浓度为1mM。

2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

3、用手指轻弹细胞，使其松散。

按照6孔板每孔细胞加入150～250μl 含有PMSF 的裂解液的比例，加入RIPA Lysis Buffer 。

蛋白裂解液

蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择：全细胞：NP-40或RIPA细胞质（可溶）：Tris-HCl细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton细胞膜：NP-40或RIPA细胞核：RIPA线粒体：RIPARIPA裂解液配方1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor and 10μl phosphataseAprotinin 10μg/μl ；用10mM HEPES-KOH（PH8.0）溶解，备用。

●Nonidet P-40简称NP-40，乙基苯基聚乙二醇,常用非离子性去垢剂。

●Na-deoxycholale，脱氧胆酸钠，离子型去垢剂。

离子型去垢剂主要作用有：裂解细胞；溶解蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；很适合做WB，但在Co-IP 中使用，需要谨慎。

●亮抑霉肽（Leupeptin）：抑制丝氨酸蛋白酶包括胰蛋白酶、纤溶酶、猪胰激肽原酶）和半胱氨酸蛋白酶（包括木瓜蛋白酶和组织蛋白酶B）●抑肽素A（Pepstatin A）抑制各种天门冬氨酸蛋白酶，例如组织蛋白酶D、肾素、胃蛋白酶、细菌天门冬氨酸蛋白酶和HIV蛋白酶；●胰凝乳蛋白酶抑制剂（Chymostatin）抑制具有糜蛋白酶类特异性丝氨酸蛋白酶（包括糜蛋白酶、胃促胰酶、组织蛋白酶G）和大多数丝氨酸蛋白酶（包括组织蛋白酶B，H，L）●抗木瓜蛋白酶（Antipain）抑制木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和纤溶酶。

在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。

蛋白质的提取过程中，我们要经常加和蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。

全蛋白提取组织裂解液配方

全蛋白提取组织裂解液配方Western-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液10% Triton X-100Triton X-100 10ml蒸馏水90ml混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混匀10% 去氧胆酸纳去氧胆酸纳1g蒸馏水10ml避光保存200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)PMSF 174.2mg异丙醇5ml分装，-20℃保存100mmol/L EDTAEDTA 372.24mg蒸馏水10ml1mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)亮抑酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)抑蛋白酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)胃蛋白酶抑制剂2mg甲醇2ml分装，-20℃保存2.工作液Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：Tris-base 605mgNaCl 900mg蒸馏水75ml用HCl调整pH值为7.410% Triton X-100 10mL10% 去氧胆酸纳 2.5mL100mmol/L EDTA 1mL用前加入：1mg/mL亮抑酶肽100μl1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl 200mmol/L PMSF 500μl各成分的终浓度Tris-base 50mmol/L，pH 7.4 Triton X-100 1%去氧胆酸纳0.25%NaCl 150mmol/LEDTA 1 mmol/L亮抑酶肽1μg/mL抑蛋白酶肽1μg/mL胃蛋白酶抑制剂1μg/mLPMSF 1mmol/L。

蛋白裂解液(参考资料)

蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择：全细胞：NP-40或RIPA细胞质（可溶）：Tris-HCl细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton细胞膜：NP-40或RIPA细胞核：RIPA线粒体：RIPARIPA裂解液配方RIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl (pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g （0.1%）0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml （1%）Aprotinin10μg/μl100μl10μg/ml加水到100mlAprotinin 10μg/μl ；用10mM HEPES-KOH（PH8.0）溶解，备用。

●Nonidet P-40简称NP-40，乙基苯基聚乙二醇,常用非离子性去垢剂。

●Na-deoxycholale，脱氧胆酸钠，离子型去垢剂。

离子型去垢剂主要作用有：裂解细胞；溶解蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；很适合做WB，但在Co-IP中使用，需要谨慎。

●亮抑霉肽（Leupeptin）：抑制丝氨酸蛋白酶包括胰蛋白酶、纤溶酶、猪胰激肽原酶）和半胱氨酸蛋白酶（包括木瓜蛋白酶和组织蛋白酶B）●抑肽素A（Pepstatin A）抑制各种天门冬氨酸蛋白酶，例如组织蛋白酶D、肾素、胃蛋白酶、细菌天门冬氨酸蛋白酶和HIV蛋白酶；●胰凝乳蛋白酶抑制剂（Chymostatin）抑制具有糜蛋白酶类特异性丝氨酸蛋白酶（包括糜蛋白酶、胃促胰酶、组织蛋白酶G）和大多数丝氨酸蛋白酶（包括组织蛋白酶B，H，L）●抗木瓜蛋白酶（Antipain）抑制木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和纤溶酶。

裂解液及电泳条件

蛋白质提取裂解液的选择：3-[(3-胆酞胺丙基-二乙胺]-丙磺酸（CHAPS）两性电解质（Carrier Ampholyte）三正丁基磷(TBP)蛋白酶抑制剂(PMSF)二硫苏糖醇(DTT)从对虾肌肉中提取蛋白：裂解液：1.裂解液1：8M尿素9.6g，4%CHAPS 0.8g，40mM Tris 0.0484g，用前每1mL裂解液中添加5 μL Carrier Ampholyte，200mM TBP 10μL。

（项秀平，2011）2.裂解液2：浓度8mol/L尿素、浓度2mol/L硫脲、浓度2%CHAPS、浓度10μl/ml PMSF、浓度18mmol/L DTT、浓度0. 5% IPG缓冲液。

（田美，2010）电泳：裂解液1所用电泳条件：1.等电聚焦程序电压(v) 升压模式持续时间作用S1 250 线性30min 除盐S2 500 线性30min 除盐S3 4000 线性30min 除盐S4 8000 快速 1.5h 升压S5 8000 快速60000Vh 聚焦S6 500 快速任意时间保持2.SDS-PAGE电压V 时间作用80 30min 浓缩170 4h 分离裂解液2所用电泳条件：1.等电聚焦程序电压(v) 升压模式持续时间作用S1 120 线性3h 除盐S2 500 线性1h 除盐S3 1000 线性1h 除盐S4 8000 快速3h 升压、聚焦S5 500 快速4h 保持2.SDS-PAGE电泳参数设置:电流按每根胶条10mA,电泳30min后换用20mA,电压600V,功率100W。

直至溴酚蓝指示线跑至胶底缘时电泳结束。

从对虾血液中提取蛋白：1.裂解液：7 M urea, 2 M thiourea, 4% CHAPS, 30 mM Tris（Frédéric Silvestre，2010）电泳条件：（王宝杰，2011）1.等电聚焦程序电压(v) 升压模式持续时间作用S1 40 快速4~6 除盐S2 500 快速 1 除盐S3 1000 线性 2 除盐S4 3000 线性 2 除盐S5 5000 线性 2 升压S6 8000 线性 2 升压S7 8000 快速80000Vh 聚焦2.SDS-PAGE电流时间40mA 20min60mA 至溴酚蓝前沿从对虾肝胰腺提蛋白：1.裂解液：尿素( 7mol/L) 、2mol硫脲、0. 5% IPG Buffer(pH3-10, NL) 、65 mmol/L DTT、4% CHAPS（秦兆宇，2007）电泳条件：（秦兆宇，2007）1.等电聚焦电压( V/v) 30 60 200 500 1000时间(t/h) 6 6 1 1 1电压( V/v) 5000 8000 Gradient 8000 uf总Vh时间(t/h) 1 2 7 488372.SDS-PAGE电流时间15mA 15min40mA 5h另一种肝胰腺蛋白提取方法：（1）自中国明对虾头胸甲后缘中点沿纵向剪开并剥除头胸甲，裸露出肝胰脏，用小镊子轻轻取下肝胰脏，液氮中急速冷冻，冻存于-80oC 冰箱中。

蛋白裂解液之欧阳科创编

蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择：全细胞：NP-40或RIPA 细胞质（可溶）：Tris-HCl 细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton 细胞膜：NP-40或RIPA 细胞核：RIPA 线粒体：RIPARIPA裂解液配方1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor and 10μl phosphatase inhibitor加水到 100mlAprotinin 10μg/μl ；用10mM HEPES-KOH（PH8.0）溶解，备用。

●Nonidet P-40简称NP-40，乙基苯基聚乙二醇,常用非离子性去垢剂。

●Na-deoxycholale，脱氧胆酸钠，离子型去垢剂。

离子型去垢剂主要作用有：裂解细胞；溶解蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；很适合做WB，但在Co-IP中使用，需要谨慎。

●亮抑霉肽（Leupeptin）：抑制丝氨酸蛋白酶包括胰蛋白酶、纤溶酶、猪胰激肽原酶）和半胱氨酸蛋白酶（包括木瓜蛋白酶和组织蛋白酶B）●抑肽素A（Pepstatin A）抑制各种天门冬氨酸蛋白酶，例如组织蛋白酶D、肾素、胃蛋白酶、细菌天门冬氨酸蛋白酶和HIV蛋白酶；●胰凝乳蛋白酶抑制剂（Chymostatin）抑制具有糜蛋白酶类特异性丝氨酸蛋白酶（包括糜蛋白酶、胃促胰酶、组织蛋白酶G）和大多数丝氨酸蛋白酶（包括组织蛋白酶B，H，L）●抗木瓜蛋白酶（Antipain）抑制木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和纤溶酶。

●氟化钠抑制酸性磷酸酶●正钒酸钠：抑制碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶（tyrosine phosphatase）焦磷酸钠（sodium pyrophosphate）：抑制丝氨酸-苏氨酸磷酸酶（serine－threonine phosphatase）。

在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。

蛋白质的提取过程中，我们要经常加和蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。

蛋白裂解液之欧阳术创编

蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选全细胞：NP-40或RIPA细胞质（可溶）：Tris-HCl细胞质（细胞骨架）：Tris-TritonS 11 ：NP-40 或RIPA细胞核：RIPA线粒体：RIPARIPA裂解液配方lml RIPA buffer contains 35(11 proteinase iiihibitorand lOglphosphatase inhibitorM水到100mlAprotinin lOgg/gl ;用lOmM HEPES-KOH ( PH8.0 )溶解，备用。

.Nonidet P-40简称NP-40,乙基苯基聚乙二醇，常用非离子性去垢剂。

• Na-deoxycholale, flj氧皿酸钠，离子型去垢剂。

离子型去垢剂主要作用有：裂解细胞；潘解蛋白，尤其是可以洛解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；很适合做WB，但在Co-IP中使用，需要谨慎。

•覚抑§ Jft ( Leupeptin )：抑制丝氨酸蛋白酶包括唳蛋白阳、纤溶酶、猜胰激肽原1 ) fn半胱氮酸蛋白阳(包括木瓜蛋白阳和组级蛋白1B)•抑肽素A ( Pepstatin A )抑制各种天门冬氨酸蛋白萌，例如组级蛋白M D.肾素、胃蛋白繭、细菌天门冬氨酸蛋白1 HIV蛋0K；•庚凝乳蛋白爾抑制剂(Chymostatin ) JJ制具有糜蛋白萌类特异性丝氨酸蛋白爾(包括糜蛋白萌、胃促嗾爾、组级蛋白i G) fn 大多数丝氨酸蛋白® ( 0括组级蛋白iB, H, L)•抗木瓜蛋白i ( Antipain ) 制木瓜蛋白爾、胰蛋白酶和纤溶酶。

•氟化钢抑制酸性磷酸菌•正乱酸钠：抑制做性确酸酶和酩氨酸磷酸爾(tyrosine phosphatase ) •焦磷酸钠(sodium pyrophosphate )：抑制丝氨酸■苏氨酸磷戲阳(serine - threonine phosphatase ) o在与蛋白相关的检測中，首先最关鍵的一步便是蛋白质的提取。

全蛋白提取组织裂解液配方

全蛋白提取组织裂解液配方------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxxWestern-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液1.110% Triton X-100Triton X-100 10ml蒸馏水90ml混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混匀1.210% 去氧胆酸纳去氧胆酸纳1g蒸馏水10ml避光保存1.3200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)异丙醇5ml分装，-20℃保存1.4100mmol/L EDTA蒸馏水10ml1.51mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)亮抑酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.61mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)抑蛋白酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.71mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)胃蛋白酶抑制剂2mg甲醇2ml分装，-20℃保存2.工作液2.1Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：Tris-base 605mgNaCl 900mg蒸馏水75ml2.210% Triton X-100 10mL2.32.4100mmol/L EDTA 1mL2.5用前加入：1mg/mL亮抑酶肽100μl1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl200mmol/L PMSF 500μl各成分的终浓度Triton X-100 1%去氧胆酸纳0.25%NaCl 150mmol/L EDTA 1 mmol/L 亮抑酶肽1μg/mL抑蛋白酶肽1μg/mL胃蛋白酶抑制剂1μg/mL PMSF 1mmol/L。