【精品】PPT课件 实验一 紫外-可见分光光度计的性能检验共62页
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紫外-可见分光光度计的性能检验
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三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 5% NaNO2溶液 10% Al(NO3)3溶液 NaOH试液 芦丁对照品 槐花药材 其余试剂均为分析纯；
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四、实验内容及操作步骤
1、对照品溶液的制
备
芦丁对照品 置 25ml量瓶 加甲醇，水浴使溶解
置 100ml量瓶 加水至刻度，摇匀 中
即得
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4、样品的测定
置
精密吸取供试品溶液3ml
25ml量瓶中
照标准曲线制备项下的方法
自“加水至5ml” 起
依法测定吸光度
从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得
槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计， 不得少于8.0%。
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五、注意事项
1、对照品和样品应同时显色 2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确
六、思考题
1.分光光度法有哪些影响因素？ 2.试述标准曲线法的优点。
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实验四、薄层板的制备
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一、实验目的
掌握薄层板的制板方法。
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二、仪器与试剂
▪ 天平（0.1g） 研钵 ▪ 玻璃板 10 cm×20cm ▪ CMC-Na水溶液 （3‰） ▪ 蒸馏水 ▪ 薄 洋层 化层 工析 厂用）硅胶GF254（青岛海
50mg
中
放冷，加甲醇至刻度，摇匀
精密吸取 置 100ml量瓶 加水至刻度，摇匀
10ml
中
即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）
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紫外可见分光光度计课件ppt
/moban
3、朗伯-比尔定律 比吸光系数
比吸光系数是指百分含量为1%， l为1cm时的 吸光度值，用 E
1% 1cm表示。
0.1M r E
1% 1cm
/moban
3、朗伯-比尔定律
四 偏离朗伯-比耳定律的因素
（1）入射光为非单色光
（2）溶液的不均性。
实际样品的混浊，加入的保护胶体，蒸 馏水中的微生物，存在散射以及共振发射等， 均可吸光质点的吸光特性变化大。 （3）光程的不一致性。 光源不是点光源，比色皿光径长度不一 致，光学元件的缺陷引起的多次反射等，均造 成光径不一致，从而与定律偏离。
/moban
4、紫外-可见分光光度计
一
主要部件的性能与作用
基本结构:
光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统 样品
/moban
4、紫外-可见分光光度计 1 光源
在紫外可见分光光度计中，常用的光源有 两类：热辐射光源和气体放电光源 热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨 灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和 氘灯。
pH值
3、朗伯-比尔定律 一 吸光度和透光度
设入射光强度为I0，吸收光强度为Ia,透射光 强度为 It，反射光强度为Ir，则 I 0= I a+ I t+ I r
由于反射光强度很弱，其影响很小，上式可简化 为：
I 0= I a+ I t
/moban
3、朗伯-比尔定律
吸光度: 为透光度倒数的对数，用A表示， 即 A=lg1/T=ห้องสมุดไป่ตู้gI0/It
生物化学，医学卫生，临床检验，食品卫生，药品
检验，农业化学等领域的生产。
恳请各位老师批评指正
/moban
紫外-可见分光光度法 PPT课件
若化合物在某波长处有强的吸收峰，而所含杂质在该波长处 无吸收或吸收很弱，则化合物的吸光系数将降低，若杂质在
该波长有比此化合物更强的吸收，将会使化合物的吸光系数
增大，且会使化合物的吸收光谱变形。（举一个间接的例子
吧，前一段时间快检车抽到一批吗叮啉，红外快检认定是假
药，送到所里以后，我们用薄层法做了一下，发现样品也显
百分吸收系数 377
吸收度值 277nm 0.461
0.461×0.2609×100.00×200.00
含量=-----------------------------------×100%=96.97%
377×0.0658×5.00×0.2×100
二、多组分定量测定 解线性方程组法 等吸收双波长消去法 系数倍率法 导数光谱法
面神经麻痹的病理变化早期主要为面神经水肿髓鞘和轴突有不同程度的变性以在茎乳突孔和面神经管内的部分尤为显著w五测定时除另有规定外应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照测定吸光度实际上是透光率而在测定光强弱时不只是由于被测物质的吸收所致还有溶剂和容器的吸收光的色散和界面反射等因素都可使透射光减弱用空白对照可排除这些因素的干扰
由上图可以看出吸收光谱的特征： ⑴曲线上“A”处称最大吸收峰，它所对应的波长称 最大吸收波长，以λmax表示。 ⑵曲线上“B”处有一谷，称最小吸收，所对应的波 长，称最小吸收波长，以λmin 表示。 ⑶曲线上在最大吸收峰旁边有一小峰“C”，形状像 肩的部位，称肩峰，以λsh表示。
⑷在吸收曲线的波长最短的一端，曲线上“D”处， 吸收相当强，但不成峰形，此处称为末端吸收。
利用物质的吸收光谱进行定量、定性及结构 分析的方法称为吸收光谱分析法。紫外－可 见吸收光谱是一种分子吸收光谱，它是由于 分子中原子的外层电子跃迁而产生的。
紫外——可见分光光度法教学课件PPT
KMnO4
530nm
AB 2
B 2
cBL
B 2cA B B 2 L 1 1 0 0 .4 2 4 1 4 2 0 0 L m o l 1c m 1
在 T = 36.8%(A=0.434)时，浓 度测定的相对误差最小。 在 实际测定时，常将吸光度控 制在0.2 ~ 0.7(T=20% ~65%) 之间。
测定相对误差与透光率的关系
3、参比溶液的选择
样
未考虑吸收池和溶剂对光
品
子的作用
参
I0
比
原则:使试液的吸光度能真正反映待测物的浓度。
利用空白试验来消除因溶剂或器皿对入射光反射和吸收带 来的误差。
例：用光程为1cm的吸收池，在两个测定波长处测定含有
K2Cr2O7和KMnO4两种物质溶液的吸光度。混合物在 450nm处的吸光度为0.38，在530nm处的吸光度为0.71，求 混合物的组成。已知1.010-3 mol/L的K2Cr2O7 在450nm处 吸光度为0.20，而在530nm处为0.05； 1.0 10-4mol/L的 KMnO4在450nm处无吸收，在530nm处吸光度为0.42。
c5 2..0 0 0 5 1 1 6 3 0 0 L g5 .0 0 1 （ 4 0gL 1)
则根据朗伯—比尔定律 A=abc，
a b A c 2 .0 c m 5 .0 0 .3 1 0 0 4 g 0 0 L 1 3 .1 0 -2 L 0 0 - 1 .c .g 1 m
Fe(SCN)3
Fe3+ + 3SCN－
溶液稀释时一倍时，上述平衡向右，离解度增大。所以
Fe(SCN)3的浓度不止降低一半，故吸光度降低一半以上，导致 偏离朗伯—比尔定律。
紫外分光光度计分析PPT课件
④重复打开样品盖调“0”和盖上样品盖 “100%”，直至仪器稳定。
⑤ 盖上样品盖，拉动拉杆，测量待测液并记录 读数。
⑥ 测量完毕后，取出吸收池，洗净后倒置晾干， 各旋钮归位，关闭电源。
（2）754型紫外-可见分光光度计 ① 开机 打开样品室暗箱盖，接通电源，仪器
进入自检状态，预热20min后，仪器进入工 作状态。
写在最后
成功的基础在于好的学习习惯
The foundation of success lies in good habits
42
谢谢聆听
·学习就是为了达到一定目的而努力去干, 是为一个目标去 战胜各种困难的过程,这个过程会充满压力、痛苦和挫折
Learning Is To Achieve A Certain Goal And Work Hard, Is A Process To Overcome Various Difficulties For A Goal
2）在吸收池中装入相同的溶剂，吸光度相同 即可成套，若不同可求出修正值后使用。
分光光度计的使用
（1）721型可见分光光度计 ① 检查各调节钮处于起始位置，接通电源，打
开样品室暗箱盖，预热20min。
② 选择调节至所需用波长，并调节相关波长的 灵敏档。
③ 用调“0”电位器调整电表于T=0%，安放 参比溶液（第一格）和待测液，盖上样品 室盖，拉动拉杆，使参比溶液在光路上时 调节“100%”电位器，使电表指针在 T=100%
第二节 紫外-可见分光光度计
1 仪器的基本组件
五大部件：
光源 单色器
样品装置钨丝灯：最常用的可见光光源，发射波长：
325nm～2500nm；
使用范围：320nm～1000nm。
⑤ 盖上样品盖，拉动拉杆，测量待测液并记录 读数。
⑥ 测量完毕后，取出吸收池，洗净后倒置晾干， 各旋钮归位，关闭电源。
（2）754型紫外-可见分光光度计 ① 开机 打开样品室暗箱盖，接通电源，仪器
进入自检状态，预热20min后，仪器进入工 作状态。
写在最后
成功的基础在于好的学习习惯
The foundation of success lies in good habits
42
谢谢聆听
·学习就是为了达到一定目的而努力去干, 是为一个目标去 战胜各种困难的过程,这个过程会充满压力、痛苦和挫折
Learning Is To Achieve A Certain Goal And Work Hard, Is A Process To Overcome Various Difficulties For A Goal
2）在吸收池中装入相同的溶剂，吸光度相同 即可成套，若不同可求出修正值后使用。
分光光度计的使用
（1）721型可见分光光度计 ① 检查各调节钮处于起始位置，接通电源，打
开样品室暗箱盖，预热20min。
② 选择调节至所需用波长，并调节相关波长的 灵敏档。
③ 用调“0”电位器调整电表于T=0%，安放 参比溶液（第一格）和待测液，盖上样品 室盖，拉动拉杆，使参比溶液在光路上时 调节“100%”电位器，使电表指针在 T=100%
第二节 紫外-可见分光光度计
1 仪器的基本组件
五大部件：
光源 单色器
样品装置钨丝灯：最常用的可见光光源，发射波长：
325nm～2500nm；
使用范围：320nm～1000nm。
紫外可见分光光度PPT(完整版)课件
因此，可能的跃迁为σ → σ*、π→ π*、n→ σ* n→ π*等。
2023/10/14
10
Wavelength
2023/10/14
11
て
~104 10～100 100～300
k
~200 200～800
<200 ~150(<200)
Amax(nm)
<U<M<M<xD<U<*0<1<*1<0<*0<0
(red shift 或bathochromic
shift) 指取代基或溶剂效应引起吸收带 向长波方向的移动；
蓝移 ( blue shift 或 hypsochron sh ift) 或紫移： 吸收带向短
波方向移动
2023/10/14
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常见助色团及其助色效应(红移)λ
-F<-Cl<-Br<-OH<-OCH₃<-N NHCH₃<-N(CH₃)₂<-NHC₆H₅<
6
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
2023/10/14
不是任一波长的 光都可以被某一物质 所吸收，由于不同物 质的分子其组成结构 不同，它们所具有的 特征能级也不同，故 能级差不同，而各物 质只能吸收与它们内 部能级差相当的光辐 射，所以，不同物质 对不同波长的光吸收 具有选择性。
7
物质颜色与光吸收的关系
2023/10/14
29
四、 无机化合物的吸收光谱
金属离子 金属离子
配位体
d-d配位场跃迁
配位体
配位体π- π*
金属离子
配位体
电荷转移
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て
~104 10～100 100～300
k
~200 200～800
<200 ~150(<200)
Amax(nm)
<U<M<M<xD<U<*0<1<*1<0<*0<0
(red shift 或bathochromic
shift) 指取代基或溶剂效应引起吸收带 向长波方向的移动；
蓝移 ( blue shift 或 hypsochron sh ift) 或紫移： 吸收带向短
波方向移动
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常见助色团及其助色效应(红移)λ
-F<-Cl<-Br<-OH<-OCH₃<-N NHCH₃<-N(CH₃)₂<-NHC₆H₅<
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分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
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不是任一波长的 光都可以被某一物质 所吸收，由于不同物 质的分子其组成结构 不同，它们所具有的 特征能级也不同，故 能级差不同，而各物 质只能吸收与它们内 部能级差相当的光辐 射，所以，不同物质 对不同波长的光吸收 具有选择性。
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物质颜色与光吸收的关系
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四、 无机化合物的吸收光谱
金属离子 金属离子
配位体
d-d配位场跃迁
配位体
配位体π- π*
金属离子
配位体
电荷转移
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紫外-可见分光光度计 ppt课件
kx 1
kx 2
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Cs(x)
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（二）双波长分光光度法
不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束
单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为
参比，来消除干扰。
对于多组分混合物、浑浊试样分析及存在背景干扰 或共存组分吸收干扰的情况，利用双波长分光光度法灵 敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提 高。
6
（5）同一物质在不同波长下的 k 值是不同的。在 最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数，常以 kmax 表示。K max表明了该吸收物质最大限度的吸光能
力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵 敏度。
（6）kmax越大表明该物质的吸光能力越强，用光度
法测定该物质的灵敏度越高。
（7）k在数值上等于浓度为1mol/L、液层厚度为1cm
（2）200-400nm；近紫外光区
（3）400-800nm；可见光区
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4
二、光的吸收定律：
1.朗伯——比尔定律：A＝kbc。
表明：一定温度下，一定波长的单色光通过均匀的、非散射的溶液 时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。
入射光 I0
透射光 It
A＝kbc 式中: A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度； k：摩尔吸光系数，单位 L·mol－１·cm－１； b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位 mol·L－１；
度的精度等对分析结果都有影响。
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4. 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用
的有光电管、光电倍增管、光电二极管、光电摄像管等。 要求灵敏度高、响应时间短、噪声水平低、稳定性好的优点。