氨基酸分析仪实验指导
化合物与酶结合位点实验氨基酸点突变实验方案-概述说明以及解释
化合物与酶结合位点实验氨基酸点突变实验方案-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容：在生物学研究中，化合物与酶结合位点的研究是一个重要的领域。
酶是生物体内极其重要的蛋白质分子，其参与了无数个生物反应的催化过程。
而化合物与酶结合位点的相互作用在酶催化反应中起着至关重要的作用。
化合物与酶结合位点是指一种物质与酶表面的特定区域结合形成的结构。
通过结合位点，化合物能够与酶发生特异性的相互作用，从而影响酶的活性。
这种相互作用可以是氢键、离子键或范德华力等各种非共价力。
研究化合物与酶结合位点的重要性在于，它可以揭示酶的催化机制以及生物反应的调控机理。
通过了解化合物和酶结合位点的相互作用，我们可以探索酶的催化过程中的关键步骤，并进一步理解生物体内各种生物化学反应的发生原理。
此外，研究化合物与酶结合位点还可以为药物研发提供重要的信息。
许多药物的作用机制就是通过与酶的结合位点相互作用，从而达到治疗疾病的目的。
本文的目的是通过氨基酸点突变实验来探究化合物与酶结合位点的相互作用。
氨基酸点突变实验是一种常用的实验手段，通过改变酶结合位点上的特定氨基酸残基，来研究其对结合位点的影响。
通过这种实验，我们可以了解到哪些氨基酸在结合位点中起到重要作用，并进一步明确酶催化反应中的关键步骤。
接下来的正文将详细介绍化合物与酶结合位点的重要性以及氨基酸点突变实验的原理，并设计相应的实验方案和步骤。
最后，结论部分将对实验结果进行分析，并对化合物与酶结合位点的认识和启示进行阐述，同时展望未来进一步研究的方向。
1.2文章结构1.2 文章结构本文主要分为引言、正文和结论三个部分来探讨化合物与酶结合位点实验和氨基酸点突变实验的方案。
在引言部分，首先会进行概述，介绍化合物与酶结合位点的重要性以及氨基酸点突变实验的原理。
接着，会详细阐述本文的结构，并列出各个部分的内容和意义。
最后，明确本文的目的，即为研究化合物与酶结合位点实验中氨基酸点突变的实验方案。
生化实验指导
实验1 氨基酸纸层析一、实验目的通过对氨基酸的分离和鉴定，掌握纸层析的基本原理及操作方法。
二、实验原理层析法又称色谱法。
是一项重要的分离技术。
利用混合物中各组分理化性质的不同，使各组分以不同程度分配在两相中。
层析的种类： 根据原理分为： a 分配层(纸层析) b 吸附层析 c 亲和层析 d 离子交换层析 根据支持物分为： a 纸层析 b 柱层析 c 薄层层析 d 凝胶过滤层析 分配层析的原理：各种物质在两种互不溶解的溶剂中的分配系数不同，从而达到分离的目的。
分配层析用于分离在水和有机溶剂中都可溶的混合物。
一种物质在两相中达到平衡时，在两相中的浓度之比是一个常数。
物质在流动相里的浓度物质在固定相里的浓度 纸层析:分配的过程：一部分溶质随有机相移动离开原点进入无溶质区，并进行重新分配，不断向前移动。
随着有机相不断向前移动，溶质不断地在两相间进行可逆的分配。
由于各种物质的分配系数不同，随展层溶剂移动的速率也不同，从而达到分离的目的。
移动速度可用比移（Rf ）值表示：色斑中心至上样原点中心的距离K D =图1 氨基酸纸层析示意图R f =溶剂前缘至上样原点中心的距离载体：滤纸固定相：滤纸吸附的水流动相：水饱和酚极性：谷氨酸＞丙氨酸＞脯氨酸对于水－饱和酚的溶剂体系，氨基酸极性越小，KD 值越大，Ｒｆ值也越大，一定时间内随流动相迁移的距离远，反之迁移距离小。
三、实验材料仪器⑴层析缸；⑵层析滤纸；⑶电吹风机；⑸喷雾器；⑹毛细管。
试剂⑴氨基酸标准液（6mg/mL）；⑵氨基酸混合液（6mg/mL)⑶展层剂：水饱和苯酚溶液。
⑷显色剂：0.3%茚三酮丙酮溶液四、操作步骤1、层析滤纸的准备用铅笔在层析滤纸上距离一端2-3cm处划线并标记点样位置。
2、点样(少量多次)用毛细管平口端蘸取少量样品溶液，点样于滤纸的相应位置，要求样品斑点直径不超过0.5cm，干燥后再点样，重复3次。
3、展层将滤纸放入层析缸，使滤纸浸入液面以下，但不要使液面没过点样线。
生物化学实验-氨基酸分析实验报告
生物化学实验-氨基酸分析实验报告实验名称(titleofexperimetn)氨基酸薄层层析实验地点(labno.)指导老师(instructor)实验日期(dateofexperiment)合作者(partner)总分(totalscore)xx教师签名(signature)李某某批改日期(date)【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：xx】一、预习报告实验原理：层析（chromatography）：利用混合物各组分物理化学性质的差异，将多组分混合物进行分离及测定的方法。
固定相（stationaryphase）层析体质的一个基质。
能与待分离的化合物进行可逆的吸附、溶解、交换等作用。
流动相（mobilephase）在层析过程中推动固定相上贷分离的物质朝着一个方向运动的液体或气体。
迁移率（rateofflow，rf）一定条件下，在特定时间内某一组份在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值，rf值≤1。
层析原理：层析体系由一个固定相和一个流动相组成。
流动相对固定相做相对运动，从而推动待分离的混合物样品通过固定相向前移动。
样品中各组份物理化学性质不同，与两相发生相互作用的能力不同，被流动相推动前进时受到的阻力和移动速度不同，一定时间后，不同组份就可以在固定相上分离。
根据固定相基质的形式，层析可分为纸层析、薄层层析和柱层析。
薄层层析是在玻璃或塑料等光滑表面铺一层很薄的基质进行层析。
薄层层析（thinlayerchromatography，tlc）：是将吸附剂均匀地在玻璃板上铺成薄层（固定相），再把样品点在薄层板一端，再把板的这端浸入适当的溶剂（流动相）在薄层板上扩展。
并在此过程中通过吸附——解吸附——再吸附——再解吸附的反复进行，而将样品各组份分离出来。
本次实验：具体原理：当流动相在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
氨基酸分析仪的基本分析原理
氨基酸分析仪的基本分析原理
氨基酸分析仪是一种用于定量分析样品中各种氨基酸的仪器。
其基本分析原理是通过将样品中的氨基酸分离、检测和定量，从而确定样品中各种氨基酸的含量。
首先，样品中的氨基酸需要被分离出来。
一种常用的方法是利用离子交换色谱技术。
离子交换色谱是通过样品中氨基酸的酸性基团和碱性基团与固定在色谱柱上的阴、阳离子交换剂之间的离子交换作用进行分离的。
通过调整溶剂和柱温等条件，可以实现对氨基酸的选择性分离。
其次，分离出的氨基酸需要被检测。
最常用的检测方法是紫外吸收检测。
氨基酸在紫外区域有特定的吸收峰，对应着特定的波长。
通过测量样品在不同波长下的吸光度，可以得到吸收峰的强度。
根据吸光度和吸光度与浓度之间的关系，可以计算出样品中各种氨基酸的浓度。
最后，根据样品中氨基酸的浓度，通过一定的计算公式，可以定量地确定样品中各种氨基酸的含量。
通常，会利用标准曲线法，即利用已知浓度的氨基酸标准溶液制备一系列浓度不同的标准曲线。
将样品中各种氨基酸的吸光度值与标准曲线进行比较，就可以得到各种氨基酸的浓度。
综上所述，氨基酸分析仪通过分离、检测和定量的步骤，可以对样品中的氨基酸进行分析，从而确定样品中各种氨基酸的含量。
氨基酸的测定
甲醛滴定法 （以测定氨杞精口服液中的氨基酸含量为例）
计算： 氨基酸态氮=〔 c×（V2-V1）
×0.014×100） 〕/W×100 V1——用中性红为指示剂
时，碱液所消耗的体积 V2——用百里酚酞乙醇液
为指示剂时标液消耗量
应用： 氨杞精口服液是由天然原料提
取的氨基酸粉(含20多种氨基酸)， 加上构祀子、黄精煎煮液配制而 成的口服液。其中氨基酸为主要 有效成份， 采用甲醛滴定法测定 氨基酸的总量做为质量控制方法， 操作简便 。
仪器 附磁力搅拌器的酸度计;25mL酸式 滴定管; 10mL胖肚吸管。
双语例句
电位滴定法 （以测定酱油中的氨基酸含量为例）
操作方法：
（1）样品处理：先测出待测酱油的比重，然后吸取酱油5.00mL于
100mL容量瓶中,加水定容。吸取定容液20.00mL于250mL烧杯中,
加水60mL，放入磁力转子，开动磁力搅拌器使转速适当。用
个别氨基酸的定量测定
a)赖氨酸 b)色氨酸 c)苯丙氨酸 d)酪氨酸 e)脯氨酸 f)羟脯氨酸 g)胱氨酸 h)谷氨酸
氨基酸的分离及测定
a)薄层色谱法 b)氨基酸自动分析仪法 c)气相色谱法 d)高效液相色谱法
茚三酮法 （以测定蜂蜜及果葡糖浆中的氨基酸含量为例）
反应原理
氨基酸在一定pH条件下与茚三酮起反应，生成蓝紫色化合物，可 比色(570nm)定量。 注意：茚三酮受阳光、温度、湿度、空气等影响易被氧化呈淡红或深 红色，使用前要进行纯化,方法如下：
结论
1)采用茚三酮显色法测定的 蜂蜜及果葡糖浆的氨基酸含 量在0~150 μg/mL范围，该 法具有线性好、准确性及精 密度高等特点。
2)蜂蜜与果葡糖浆混合物中 的氨基酸含量和果葡糖浆掺 入量呈良好的负线性关系。 采用茚三酮显色法测定蜂蜜 样品的氨基酸含量，可以快 速判断蜂蜜中是否掺入了果 葡糖浆。
氨基酸分析指导原则
附件：氨基酸分析指导原则草案公示稿氨基酸分析指导原则氨基酸分析系指采用适宜的方法测定蛋白质、多肽或其他药物制剂中氨基酸组成和/或含量。
药品中氨基酸分析通常采用基于高效液相色谱法分离的衍生化法，涉及样品的水解、衍生化反应、分离检测和数据处理等操作。
本指导原则概述了药品中氨基酸分析的基本要求、蛋白质和多肽样品的水解、常用测定方法及其数据分析，为药品中氨基酸的分析提供指导。
1 基本要求1.1仪器氨基酸分析使用的仪器通常是高效液相色谱仪或氨基酸分析仪。
高效液相色谱仪适用于柱前衍生化产物的分离检测；对于柱后衍生化法，由于离子交换分离过程的复杂性和对柱后衍生化反应装置的特殊要求等，一般使用商品化的氨基酸分析仪。
1.2内标物氨基酸分析常采用内标法，内标物应是非天然存在的一级氨基酸，易于获取且价格便宜，在水解过程保持稳定，其色谱响应应与浓度成线性关系，具有独特的保留时间且与待测氨基酸能有效分离。
常用的内标物包括正亮氨酸、α-氨基丁酸、正缬氨酸、肌氨酸和硝基酪氨酸等。
内标物应在水解前或衍生化反应前添加到氨基酸混合物中，以消除由于水解、衍生化、取样、进样、溶液稳定性和色谱条件变化所导致的差异。
1. 3方法验证用于品种项下的氨基酸分析方法，包括样品水解，应参照分析方法验证指导原则（通则9101）进行方法学验证。
1.4水解管的清洗与要求为避免如手套粉末和指纹残留物等对分析结果的影响，水解管应清洗干净。
或使用一次性的水解管。
清洗方法：将水解管用1mol/L盐酸溶液中煮沸1小时，或将其浸泡在浓硝酸或浓盐酸-浓硝酸（1：1）混合液中1小时，再依次用高纯水、HPLC级甲醇冲洗，烘干并密封保存，以免再次污染。
2 蛋白质和多肽样品的水解蛋白质或多肽样品中的氨基酸是以结合形式存在，必须经过水解处理，形成游离氨基酸后才能进行氨基酸分析。
水解方法主要有酸水解，同时辅以碱水解。
酸水解中使用最广泛的是盐酸水解，所得氨基酸不消旋，但该方法引起一些氨基酸的破坏或部分破坏，如色氨酸被破坏，丝氨酸、苏氨酸和半胱氨酸被部分破坏，门冬酰胺和谷氨酰胺脱酰胺分别转化为门冬氨酸和谷氨酸。
L-色氨酸含量和纯度的测定实验指导书
L-色氨酸含量和纯度的测定 实验指导书一、实验目的1.了解对二甲氨基苯甲醛与L-色氨酸的反应机理；2.了解高效液相色谱分析的基本原理；3.掌握L-色氨酸的测定方法。
二、概述和原理L-色氨酸的分析方法主要有氨基酸自动分析仪分析法、高效液相色谱分析法、毛细管电泳法、薄层色谱法和分光光度法等。
本实验主要采用分光光度法进行L-色氨酸含量测定。
分光光度法测定L-色氨酸的基本原理为：在硫酸溶液中，L-色氨酸与对二甲氨基苯甲醛发生缩合反应，生成的希夫碱对二甲氨基苯甲醛缩色氨酸为蓝色，颜色深度在一定范围内与L-色氨酸含量成线性关系，可在分光光度计下定量测定。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，其系统主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，由于该法具有高效、快速和灵敏等特点，不仅可用于L-色氨酸含量的测定，还可用于纯度的测定。
其工作原理为：储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
三、实验试剂及仪器1.试剂浓硫酸；对二甲氨基苯甲醛；亚硝酸钠；L-色氨酸标准品；磷酸二氢钾；冰醋酸；甲醇（液相纯）；纯净水；乙腈（液相纯）。
2.仪器紫外可见分光光度计，Agilent 1200 Series高效液相色谱仪。
四、发酵液中L-色氨酸含量的测定1.对二甲氨基苯甲醛溶液（3 g/L）制备准确称取0.3 g对二甲氨基苯甲醛，溶于100 mL 1:1浓硫酸中。
2.亚硝酸钠溶液（2%）制备准确称取亚硝酸钠0.2 g于10 mL容量瓶中，以蒸馏水定容，新鲜配制。
3.L-色氨酸标准储备液（100 mg/L）制备准确称取25 mg L-色氨酸标准品，用纯水定容于250 mL棕色容量瓶中，制得浓度为100 mg/L的L-色氨酸标准储备液，于4 ℃冰箱保存备用。
氨基酸测定仪测定操作规程
氨基酸测定仪测定操作规程1. 引言本操作规程旨在指导使用氨基酸测定仪进行氨基酸测定的操作流程，并确保准确、可靠地测定样品中氨基酸的含量。
2. 仪器和试剂准备•氨基酸测定仪•相应的试剂盒和标准品•电子天平•移液器和移液枪•显微镜和玻璃片3. 样品处理1.准备样品：选择需要测定氨基酸含量的样品，并记录每个样品的相关信息，如样品编号、来源等。
2.样品预处理：根据样品的特性，选择合适的预处理方法，如样品酶解、样品脱蛋白等，以保证测定结果的准确性。
3.样品稀释：根据测定方法的要求，将样品适当稀释，以确保在仪器检测范围内。
4. 仪器设置1.开启仪器：按照仪器的使用说明，正确开启氨基酸测定仪，并进行初始化操作。
2.设置参数：根据测定方法的要求，设置仪器的相应参数，如测定波长、积分时间等。
3.校准仪器：使用标准品进行仪器的校准，确保仪器的准确性和精确度。
5. 操作步骤1.取样和试剂加入：使用移液器或移液枪，取出预处理好的样品，加入试剂，并记录试剂的加入量。
2.反应和测定：将样品和试剂混合均匀，然后放入氨基酸测定仪中进行反应和测定。
确保每次测定都按照相同的时间进行，以保证结果的可比性。
3.数据记录与分析：根据仪器的测定结果，记录每个样品的氨基酸含量，并进行数据分析，如平均值、标准差等。
6. 结果计算与报告1.结果计算：根据仪器的测定结果和标准品的浓度，计算出样品中每种氨基酸的含量。
这部分可以使用计算软件或者自行编写程序进行计算。
2.报告撰写：根据实验结果，撰写相应的实验报告，并进行结果解释和结论汇总。
7. 安全注意事项•在操作过程中，严格遵守实验室的安全操作规程，佩戴实验室必要的防护用品。
•注意试剂的储存和使用方法，避免接触皮肤和吸入。
•避免样品交叉污染和仪器污染，每次操作后清洗仪器和工作台面。
8. 管理和维护1.仪器管理：定期对仪器进行维护和保养，保持仪器的良好状态。
如清洁仪器外壳、调试仪器等。
2.试剂管理：根据试剂的要求进行存储和保管，防止试剂过期或受污染。
血清中游离氨基酸的测定
血清中游离氨基酸的测定血清中游离氨基酸的测定是一种重要的生化分析方法，可以用来评估人体的营养状况、肝脏功能以及某些代谢疾病的诊断和监测。
本文将介绍游离氨基酸测定的原理、方法和一些相关应用。
一、原理在正常生理状态下，游离氨基酸主要由肠道摄入的蛋白质分解产生，也可由肝脏合成。
血清中游离氨基酸的浓度与体内摄入和代谢的平衡相关。
游离氨基酸的测定常采用高效液相色谱（HPLC）或气相色谱（GC）方法。
HPLC法：该方法利用高效液相色谱技术，将游离氨基酸样品进行分离和定量。
通过样品的前处理、有机溶剂的洗脱和柱温的控制，可以有效地分离血清中的游离氨基酸。
GC法：该方法利用气相色谱技术，将游离氨基酸样品中的氨基酸成分进行分离。
通过取样、衍生化、柱温控制和检测器的选择，可以得到准确的游离氨基酸浓度。
二、方法1. 样品准备首先，需要收集被测者的血清样品。
采集血清样品时应注意避免任何污染，以确保测定的准确性。
2. 样品处理将收集到的血清样品离心，得到澄清液。
然后，使用合适的方法进行样品的前处理，例如蛋白质沉淀、酸水解或衍生化。
3. 色谱条件设置对于HPLC法，需要准备一个合适的色谱柱和流动相。
流动相的pH值和组成应根据实验需要进行优化。
对于GC法，需要选择合适的柱和检测器，同时设置适当的柱温和气体流速。
4. 校准曲线绘制制备一系列已知浓度的游离氨基酸标准溶液，将其进行色谱分析，并记录各峰的相对峰面积。
5. 样品分析将经过前处理的血清样品注入色谱仪中，进行色谱分析。
记录各氨基酸的峰面积，并利用已知浓度标准曲线进行定量计算。
三、应用1. 营养评估游离氨基酸的测定可用于评估人体的蛋白质营养状况。
蛋白质供应不足或消化吸收障碍会导致血清游离氨基酸浓度下降，从而反映出人体的蛋白质代谢情况。
2. 代谢疾病监测某些代谢疾病，如肝功能异常、糖尿病和肾功能损害，会对游离氨基酸的代谢产生影响。
通过监测血清中游离氨基酸的浓度变化，可以帮助医生进行疾病的诊断和监测。
HPLC方法测定甘氨酸的研究方法第三组
HPLC方法测定甘氨酸的研究方法第三组甘氨酸是一种重要的氨基酸，在生物化学和医学研究中有广泛的应用。
为了准确快速地测定甘氨酸的含量，高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析方法。
以下是一种可用于测定甘氨酸含量的HPLC方法的详细步骤。
材料和设备：1.HPLC系统（包括色谱仪、流动相槽、注射器和检测器）2.反相色谱柱（C18柱）3.甘氨酸标准品4.甘氨酸样品5.溶剂：多甲醇、乙腈6.pH2.5磷酸溶液步骤：1.准备样品：将甘氨酸样品溶解在pH2.5的磷酸溶液中，摇匀并过滤以去除杂质。
2.准备标准曲线：取不同浓度的甘氨酸标准品（例如10、20、40、60、80和100μg/mL），分别进行HPLC分析，并绘制标准曲线。
3.准备流动相：将多甲醇和乙腈按照一定比例混合，作为流动相。
4.设置HPLC参数：将色谱柱安装到HPLC系统中，并设置流动相槽的流速和梯度淋洗方案。
典型的梯度方案是以多甲醇和乙腈为流动相，初始时使用多甲醇，然后在一定时间内逐渐增加乙腈的浓度。
5.注射样品：将甘氨酸样品注入HPLC系统的注射器中，设定合适的体积。
6.分析样品：将样品通过色谱柱进行分离和检测，通过检测器测量甘氨酸的峰高度或面积。
7.计算结果：使用标准曲线来计算甘氨酸样品中的含量。
通过峰高度或面积与标准曲线上的相应浓度进行比较，可以计算出甘氨酸的含量。
优化HPLC方法的关键点：1.选择适当的柱：根据需要选择适当的色谱柱，C18柱是常用的反相柱，较好地保留和分离甘氨酸。
2.流动相的选择：根据甘氨酸的性质和溶解度，选择合适的流动相组成。
3.优化分析条件：包括流速、梯度方案和检测器灵敏度等，以获得最佳的分离和检测效果。
4.样品预处理：样品的预处理步骤（如pH调节和过滤）对于获得准确结果至关重要。
总结：HPLC是一种快速、准确、灵敏的方法，可用于测定甘氨酸含量。
根据上述步骤和关键点指导，可以成功地开展甘氨酸的HPLC分析。
同时，建议在进行实验前，对所使用的方法进行验证，以确保方法的准确性和重复性。
食品中氨基酸总量的测定实验报告
食品中氨基酸总量的测定实验报告氨基酸含量的测定氨基酸含量的测定标准曲线绘制准确吸取200ug/ml的氨基酸标准溶液0.0，0.6，0.8，1.0,1.2，1.5，2.0ml，分别置于25ml容量瓶或比色管中，各加水补充至溶剂为4.0ml，然后加入茚三酮和磷酸缓冲溶液各1ml，混合均匀，于水浴上加热15min，取出迅速冷至室温，再摇匀，加水至标线25ml，摇匀。
静置15min后，在570nm波长下，以试剂空白为参比液夨订其余各溶液的吸光度A。
以氨基酸的微克数为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定：将虾研磨冷却过滤后稀释10倍，吸取澄清的样品溶液1.5ml，平行三次，按标准曲线制作步骤，在相同条件下测定吸光度A值，用测得的A值在标准曲线上即可查得氨基酸的微克数。
公式：氨基酸总量（ug/100g）=(c/m*1000)*100*10式中c是指从标准曲线上查得的氨基酸的ug数；M是指测定的样品溶液相当于样品的质量g；PH计酸度计测量ph的方法：(1)拿下笔帽(2)按on/off键，机器显示运作(3)将ph计放入待测液中(4)轻轻晃动ph计，保证内气泡逸出，使之于溶液充分接触，勿碰撞杯壁(5)ph计会立即显示数值，将笔置入待测液待数值稳定，30秒内将显示正确数值，(特：ph计数值上下浮动或不稳定是正常现象) (6)按hold键锁定数值，可在待测溶液外记录读取，继续按hold 键解除锁定(7)按on/off键关闭ph计(8)轻甩PH计测试笔上多于的水，用蒸馏水或脱离子水冲洗，盖上笔帽测量温度方法在测试模式下，温度数值与ph数值同步显示在液晶面板上，但在校准模式下不显示，数值默认为摄氏温度。
（一）挥发性盐基氮（TVB-N）的测定半微量定氮法（1）原理：蛋白质在酶和细菌的作用下分解后产生碱性含氮物质，有氨、伯胺、仲胺等，此类物质具有挥发性，可在碱性溶液中被蒸馏出来，用标准酸滴定，计算含量。
（2）试剂①氧化镁混悬液(10g/L)称取1.0g氧化镁，加100ml水，振摇成混悬液。
生化实验指导
实验一缓冲溶液的配制和氨基酸两性性质测定一、目的要求1．了解缓冲溶液的作用原理及缓冲原理，学习缓冲溶液的设计、配制及酸度计的使用方法。
2．观察甘氨酸的两性性质和缓冲作用。
二、实验原理能抵抗一定量酸或碱的影响，而保持溶液pH值基本不变的溶液称为缓冲液。
缓冲液一般是由弱酸或弱碱与它的盐组成。
如乙酸和乙酸钠组成乙酸缓冲液、硼酸和硼砂组成硼酸缓冲液等。
缓冲液可分为一般缓冲液(或通用缓冲液)和标准缓冲液两类。
标准缓冲液pH值是一定的(与温度有关)，叫做pH标准液，当用酸度计测量溶液的pH值时，就要用pH标准液来校正仪器。
一般缓冲液的pH值可用下式计算：式中的Ca、Cb、Cs分别为弱酸、弱碱、盐的浓度(mol/L)；Ka、Kb分别为弱酸、弱碱的电离常数；Kw为水的离子积。
当温度一定时，pKa(或pKb)为一常数，因此缓冲液pH值就随着盐和酸(或碱)的浓度比值而变化。
如果制备缓冲液时所用的盐和酸的浓度相同，则配制时所取盐和酸的溶液的体积比就等于它们的浓度比，故上式可写为：可见只要按盐和酸溶液的毫升数的不同比值配制就可得到不同pH值的缓冲液。
如加水稀释，其盐和酸的浓度都以相同比例降低，比值不变，因此适量稀释不影响缓冲液的pH值。
缓冲液能抵抗一定量酸或碱的作用称缓冲作用，缓冲作用的大小称为缓冲能力或缓冲容量(β)，可定义为每升缓冲液改变一单位pH值所需加入强碱或强酸的量(摩尔数)。
一种特殊的酸和它相配对的碱在它们浓度相等(即pH值等于酸的pKa)时，缓冲能力最大。
缓冲能力除与其共轭酸碱对的比率有关外，还与总浓度有关，总浓度越大，缓冲能力越强，一般缓冲液浓度在0.05～0.20mol/L，pH=pKa±1的范围内具有满意的缓冲能力。
α－氨基酸是一类两性物质；既可以和酸作用，又可以和碱作用，对酸、碱的加入具有一定的缓冲能力；通过甘氨酸的酸、碱滴定及测量不同浓度的酸、碱条件下甘氨酸溶液的pH值，绘出—条滴定曲线，从中可以看到这种变化。
氨基酸分析报告
氨基酸分析报告
根据您的需求，以下是一份典型的氨基酸分析报告范例：
实验目的：
本实验旨在分析样品中的氨基酸组成，以便了解其营养成分并进行质量控制。
实验方法：
1. 样品制备：将样品溶解在适当的溶液中，并进行蛋白质的水解。
2. 氨基酸分析仪器：使用高效液相色谱仪（HPLC）进行分析。
3. 氨基酸分离：通过柱层析技术将氨基酸分离，并使用适当的检测器检测各氨基酸的峰值。
4. 数据解读：根据标准曲线和峰值面积计算样品中各氨基酸的浓度。
实验结果：
以下是样品中检测到的主要氨基酸及其浓度（单位：mg/g）：
- 脯氨酸：12.5
- 蛋氨酸：8.7
- 苯丙氨酸：5.2
- 赖氨酸：4.1
- 缬氨酸：2.9
- 苏氨酸：1.8
- 酪氨酸：1.5
- 丝氨酸：1.3
- 苏氨酸：1.0
结果分析：
根据实验结果，样品中的脯氨酸、蛋氨酸和苯丙氨酸浓度较高，表明样品可能富含这些氨基酸。
赖氨酸、缬氨酸、苏氨酸、酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸的浓度较低，可能在样品中含量较少。
结论：
根据氨基酸分析报告，样品中含有丰富的脯氨酸、蛋氨酸和苯丙氨酸，而其他氨基酸的含量较低。
这些结果有助于评估样品的营养成分和质量，并提供进一步的质量控制指导。
请注意，以上仅为一份氨基酸分析报告的范例，实际报告可能因实验方法和测试目的的不同而略有差异。
《生物化学》实验指导(8个实验)
《生物化学》实验指导(8个实验)生物化学实验指导吕杰编著新疆大学资源与环境科学学院生态学教研室内容介绍《生物化学实验指导》是新疆大学资源与环境科学学院《生物化学》课程组的教师在参考国内重点院校、科研院所的生物化学实验与实习教材的基础上，结合教师的教学经验汇编而成。
该实习指导围绕教学大纲设计了8个实验内容。
目目录实验一氨基酸纸层析4实验二DNS-CL法测定N末端氨基酸5实验三考马斯亮蓝法测定蛋白质的浓度7实验四酪蛋白的制备8实验五葡萄糖标准曲线的绘制10实验六酵母蔗糖酶的提取及活力测定12实验七酵母RNA的分离及组分鉴定14实验八维生素C的定量测定16 实验一一氨基酸纸层析一、实验目的1、通过氨基酸的纸层析分离，学习纸层析的基本原理和操作方法。
二、实验原理纸层析：是以滤纸作为支持物的分配层析法，是20世纪40年代发展起来的一种生化分离技术。
由于设备简单，操作方便，所需样品量少，分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离，并可进行定性和定量的分析。
缺点是展开时间较长。
分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。
在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的分配系数值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到分离的目的。
三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：标准氨基酸溶液2、仪器:层析缸，层析纸，毛细管，天平，吹风机等。
3、、试剂：（1）氨基酸标准溶液：0.1M丙氨酸和0.1M谷氨酸标准溶液。
（2）溶剂系统：正丁醇：甲酸：水=15：3：2（体积比）摇匀；（3）0.1%的茚三酮丙酮溶液；茚三酮15克，丙酮100毫升四、实验步骤：纸层析(1)取一长方形滤纸，在滤纸纵向对应的两边距边沿2cm处，用铅笔轻轻的各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点样线，在点线上每隔2cm画一个+作为点样位置，共5个点。
氨基酸的纸层析实验报告
氨基酸的纸层析实验报告实验目的，通过纸层析实验，分离和鉴定氨基酸的成分。
实验原理，纸层析法是一种根据物质在固体和液体两相之间的分配系数不同，而在纸上发生分离的方法。
在本实验中，我们将利用纸层析法来分离和鉴定氨基酸的成分。
氨基酸在纸上的分离是通过其在纸和溶液之间的分配系数不同来实现的。
实验步骤：1. 准备纸层析仪器和试剂，取一张纸层析板，将其放入试剂槽中，加入足够的溶剂使其浸没，然后将纸层析板取出，倾斜放置在支架上，使其表面干燥。
2. 样品制备，取少量氨基酸样品，溶解于适量的溶剂中，得到氨基酸的溶液。
3. 样品上样，用吸管或者毛细管在纸层析板的一端滴加氨基酸溶液。
4. 开始分离，将纸层析板放置在密闭的容器中，加入适量的溶剂，使其浸没纸层析板的一端。
5. 观察分离现象，待溶剂上升至纸层析板的上端时，取出纸层析板，用铅笔标记溶剂前沿位置，然后将纸层析板放置在通风处晾干。
6. 结果分析，观察纸层析板上各色斑的形成情况，根据色斑的位置和颜色来判断氨基酸的成分。
实验结果：经过纸层析实验，我们成功地分离和鉴定了氨基酸的成分。
通过观察纸层析板上的色斑，我们可以清晰地看到不同氨基酸在纸上的分离情况。
根据色斑的位置和颜色，我们可以初步判断出氨基酸的成分及其相对含量。
实验结论：通过本次实验，我们深入了解了纸层析法在氨基酸分离和鉴定中的应用。
纸层析法作为一种简便、快速、经济的分离技术，具有广泛的应用前景。
在今后的实验中，我们将进一步探索纸层析法在其他化合物分离和鉴定中的应用，为科学研究和实际应用提供更多的可能性。
参考文献：1. 赵军, 徐宁, 等. 分析化学实验指导[M]. 北京，高等教育出版社, 2007.2. 张三, 李四. 分析化学实验[M]. 上海，上海科学技术出版社, 2010.3. 王五, 赵六. 分析化学实验技术手册[M]. 北京，化学工业出版社, 2015.。
proBNP作业指导书
进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。
·一个月（同一批号试剂）
·7天（放置仪器上的同一试剂盒）
各种分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；根据规定进行多次标定。
5.操作步骤（以COBAS E601为例）
5.1校准操作步骤：
在编缉各项目的参数时，已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入Calibration—Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。
货号12102137，Elecsys反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTipsCombimagazineM)
货号03023150，Elecsys废物盒(wasteliner)
货号03027651，Elecsys系统清洗液支架(SysClean Adapter M)
各种分析仪均适用的材料
1.分析原理
采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。
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氨基酸分析仪实验
测试中心吕雪娟
一、实验目的
了解氨基酸分析仪的主要结构及工作原理，掌握氨基酸分析的过程，前处理方法。
二、原理
氨基酸分析仪的分析原理是基于各种a一氨基酸的酸碱性、极性及分子大小的差异，用阳离子交换树脂在柱上进行层析分离，用几种不同pH值和离子强度的缓冲溶液依次将它们洗脱，从柱子上分离和洗脱下来的各种氨基酸在反应柱中与茚三酮进行加热反应，反应产物用可见光分光光度计进行检测，根据检测信号的大小计算出各种氨基酸的含量。
氨基酸和茚三酮反应
氨基酸分析仪结构示意图
二、操作步骤
1.准备工作
1.1缓冲液和茚三酮溶液的配制及正确放置
1.2氮气压力调整
1.2.1打开氮气钢瓶阀，调节其压力至50－100KPa（0．5－1.0Kgf／cm2）。
1.2.2顺时针轻轻旋转氮气调节器，使压力读数为34-40KPa（0.35－0.4Kgf ／cm2）。
1.2.3脱气瓶中液体的更换
1.3放置自动进样器清洗瓶，向清洗瓶（C-1，1L）中盛上蒸馏水，放置于指定的位置并拧上盖子。
2.开稳压器
3.启动L－8800ASM应用程序
3.1系统初始化，OK
3.2打开Module Operation界面
3.3泵1流速设定----缓冲液的清洗，打开泵1的排液阀；清洗完毕，关闭泵1；
3.4泵2流速设定—一缓冲液的清洗，打开泵2的排液阀；清洗完毕关闭泵2；
3.5自动进样器流路和针头清洗,除气泡，重复此过程三次。
3.6泵的压力归零
4.分析程序
4.1选择应用程序
4.2选择分析方法
4.3输入待测样品的信息，编辑样品表，保存；
4.4打开数据采集监控画面
4.5选择样品表
4.6打开泵1和泵2
4.7按样品表顺序放置样品。
4.8单击监控屏幕下方的Start Series按钮，开始样品测试。
4.9开始结束后，关闭采集监控画面
4.10关闭L－8800ASM应用程序
4.11关电源
三、实验报告要求
1.实验原理及分析条件；
2.实验结果。