微生物课件第十三章
微生物学第13章厌氧性细菌
生长速度
由于无氧环境的限制，厌氧性细 菌的生长速度通常较慢，需要较 长时间才能达到较高的细胞密度。
02
厌氧性细菌的生态分布与作 用
厌氧性细菌在自然环境中的分布
土壤中
厌氧性细菌在土壤中发挥着分解有机物的作用， 将动植物残体转化为腐殖质和气体。
生殖道中
女性生殖道中的厌氧性细菌参与维持阴道正常菌群平衡，预防感染。
厌氧性细菌在工业生产中的应用
01
02
03
生物制氢
有机废水处理
甲烷发酵
厌氧性细菌可用于生物制氢过程， 通过发酵作用将有机物转化为氢 气。
厌氧性细菌可应用于有机废水处 理，将废水中的有机物转化为沼 气和二氧化碳。
厌氧性细菌可将有机废物转化为 甲烷，用于生产能源或进行沼气 发酵。
水体中
在缺氧的水体中，厌氧性细菌参与水体自净过程， 将有机物转化为氨气、硫化氢等气体。
动物消化道中
许多动物消化道内存在厌氧性细菌，帮助动物消 化食物，合成维生素等。
厌氧性细菌在人体内的分布与作用
肠道中
肠道中的厌氧性细菌帮助消化食物，合成维生素K、维生素B12等 人体必需的营养素。
口腔中
口腔中的厌氧性细菌参与龋齿的形成，某些种类还可能导致牙周病。
对于已经感染的患者，需要进 行彻底的治疗，包括使用敏感 抗生素、清创引流等。
在治疗过程中，患者需要保持 良好的生活方式和饮食习惯， 以提高免疫力，促进康复。
05
厌氧性细菌的培养与鉴定
厌氧性细菌的培养方法
厌氧培养箱
01
厌氧性细菌需要在无氧环境中生长，厌氧培养箱能够提供恒温、
第13章微生物代谢产物解析
第二节 微生物的一般代谢产物的污染与危害
❖ １．一般化合物（氨；硝酸与亚硝酸；氮氧 化物；硫化氢；酸性矿水；甲基汞；羟胺； 亚硝氨类；）
❖ 致病特点： １．主要是食物中毒； ２．发病有季节性和地区性； ３．中毒一般不具有传染性； ４．有较强的抗药性；
黄曲霉毒素
❖ 1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构 划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。黄曲霉毒 素的危害性，毒性为氰化物的１０倍，砒霜的６８倍，靶器 官为肝脏，亦有引起胃，肠，肾病变者．长时间食用含低浓 度黄曲霉毒素的食物被认为是导致肝癌、胃癌、肠癌等疾病 的主要原因。
❖ 在紫外线下，黄曲霉毒素B1、B2发蓝色荧光，黄曲 霉毒素G1、G2发绿色荧光。黄曲霉毒素的相对分 子量为312-346。难溶于水，易溶于油、甲醇、丙 酮和氯仿等有机溶剂黄曲霉毒素B1的分解温度为 268℃。在pH9-10的溶液中分解迅速
致病机理
❖ 黄曲霉毒素能与tRNA结合形成加成物，黄曲 霉毒素-tRNA加成物能抑制tRNA与某些氨基 酸结合的活性，对蛋白质生物合成中的必需 氨基酸，如赖氨酸、亮氨酸、精氨酸和甘氨 酸与tRNA的结合，均有不同的抑制作用，从 而在翻译水平上干扰了蛋白质生物合成，影 响细胞代谢。
四．藻类毒素
❖ 产毒素的甲藻引发赤潮后，产生的毒素会在 贝类内脏积累，人食用后会引起急性中毒．
❖ 如：从石房蛤中分离出来的石房蛤毒素 （saxitoxin），是源于链状膝沟藻 （Conyaulax catenella）,石房蛤毒素毒性与 神经毒气沙林相同，国际条约已将其列为化 学武器．该毒素热稳定性强．
第13章 微生物代谢产物对环境的 污染
❖ 正常生态系统中，代谢产物在自然物质循环 中不断运转，是物质循环的必要环节和重要 组成．
第十三章 化妆品微生物
铜绿假单胞菌检测
-6,7
6. 硝酸盐还原产气试验：挑取被检的纯培养物， 接种在硝酸盐蛋白胨水培养基中，置37℃培 养24h，观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基 内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该 菌能还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮 气。
铜绿假单胞菌检测
-8
7. 明胶液化试验，取绿脓杆菌可疑菌落的纯培 养物，穿刺接种在明胶培养基内，置37℃培 养24h，取出放冰箱10～30min，如仍呈溶解 状时即为明胶液化试验阳性，如凝固不溶者 为阴性。 8. 42℃生长试验：挑取纯培养物，接种在普通 琼脂斜面培养基上，放在41～42℃培养箱中， 培养24～48h，绿脓杆菌能生长，为阳性，而 近似的荧光假单胞菌则不能生长。
第十三章
化妆品微生物
化妆品生境特性 化妆品微生物污染的来源、种类及意义 化妆品微生物检测与卫生标准 化妆品微生物污染及预防 化妆品微生物研究前景
化妆品生境特征
1. 水 2. 蛋白质、淀粉等 3. pH值 (4~7) 4. 油、石蜡等无水的脂类不支持微生物生长。 5. 脂肪酸、醇、酯等可以抑制微生物生长。 6. 防腐剂
4. 化妆品检验的特点
• 样品的前处理：对于一些油性样品，要先加入 液体石蜡混匀，再加入Tween-80使之均质化， 然后加生理盐水稀释；亲水性的样品可以直接 用生理盐水稀释 • 中和防腐剂的抑菌作用：需要加入相应的中和 剂，如使用含酚类防腐剂的化妆品，可在培养 基中加入卵磷脂和Tween-80以消除抑菌作用。 • 培养基的高营养成分：目前推荐的菌落总数测 定和增菌用培养基是卵磷脂、Tween-80、大豆、 及酪蛋白消化培养基（SCDLP）或卵磷脂、 Tween-80营养琼脂培养基。
可将皮肤微生物带入化妆品中。
第十三章 微生物与环境监测 环境微生物学教学课件
2.3
2.3~6.9
4.0
腐生细菌数 （103/mL-1）
波动范围
平均
腐生菌数／ 总菌数（％） 腐生水
0.2~1.9
1.1
0.04
β-腐生带
0.9~3.0
2.0
0.08
β-腐生带
0.2~6.0
2.9
0.11
β-腐生带
9.7~16.5
13.3
0.30
α-腐生带
1.4~6.2
3.0
0.11
β-腐生带
59.2~175.2 116.0
大肠菌群的鉴别
菌种 大肠埃希氏菌
吲哚 试验
+
甲基红 试验
+
VP 试验
柠檬酸 钠利用 试验
氧化酶 试验
运动性 试验
弗氏柠檬酸杆菌
+
+
+
产气肠杆菌
+
+
+
克雷伯氏菌
+
+
15
2020/11/11
为了排除自然环境中原有大肠菌群的干扰，在检测中可 将培养温度提高至44℃。
粪大肠菌群(fecal coliform): 能在44℃生长并发酵乳糖 产酸产气的大肠菌群主要来自粪便，称为粪大肠菌群。
数万
很多， 需氧性
很低
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2020/11/11
细菌数与腐生带的划分
样点号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
9
细菌总数 （106/mL-1）
波动范围
平均
1.7~3.3
2.5
1.6~3.4
2.4
1.9~3.0
2.5
医学微生物-第十三章 分支杆菌属
我国结核病疫情现状
据2000年全国结核病流行病学抽样调 查结果显示，我国结核病疫情现状为： （1）结核病感染率高 （2）结核病患病率高 （3）结核病耐药率高 （4）结核病死亡率高
一、生物学特性
（一）形态染色
G+ ，菌体细长微弯，具有分枝生长现象，抗 酸染色阳性（红色）,菌体排列分散，有荚膜
③能防止有害物质及药物进入； ④能抑制溶酶体与吞噬体融合。
2、脂质：含量越高，致病性越强 • 磷脂：促使单核细胞增生，使巨噬细胞
转变为类上皮细胞，形成结核结节和干 酪样坏死。 • 索状因子：能破坏线粒体膜，抑制粒细 胞游走和吞噬，形成慢性肉芽肿。
• 蜡质D：有佐剂作用，可刺激机体产生迟 发型超敏反应。
药物：利福平、异烟肼、乙胺丁醇、 链霉素
原则：早期、联合、适量、规则
2、培养：人工培养尚未成功 3、主要通过呼吸道、破损的皮肤黏膜和
密切接触传播 4、临床类型：瘤型麻风、结核样型麻风 5、以细胞免疫为主
未治疗：蓝色的天空中悬挂红色的彩虹
已治疗的：菌体呈颗粒状，排列为索状
（二）培养
1、专性需氧，最适生长温度为37℃，最 适PH为6.5—6.8
2、营养要求较高，常用罗氏(Lowenstein) 培养基，其主要成分含土豆、蛋黄、无 机盐、孔雀绿、甘油等
3、生长缓慢,一般需3—4W才见菌落生长， 最慢20W，菌落呈颗粒、结节或菜花状， 乳白色或米黄色，不透明
郭霍现象：细胞免疫与超敏反应同时 存在
（二）结核菌素试验 • 1、原理：将结核菌素注入皮内，如果受试
者已感染结核分枝杆菌，则结核菌素与致 敏淋巴细胞特异性结合，形成迟发型超敏 反应性炎症。
• 试剂 ——旧结核菌素（old tuberculin，OT） ——纯蛋白衍生物（PPD）： 有两种：人结核分枝杆菌制成的PPD—C 和卡介苗制成的BCG—PPD
微生物课件第十三章
一、选择题A 型题1.与细菌致病性无关的结构是下列哪A.异染颗粒B.荚膜C.菌毛D.脂多糖E.鞭毛2.哪项除外，均为细菌产生的侵袭性酶？A.溶菌酶B.透明质酸酶C. 血浆凝固酶D.胶原酶E.链激酶3.细菌代谢产物中,与致病性无关的是A.毒素B.血浆凝固酶C.热原质D.细菌素E.透明质酸酶4.与细菌侵袭力无关的物质是A.荚膜B.菌毛C.血浆凝固酶D.芽胞E.透明质酸酶5.细菌的侵袭力不包括下列哪一种能力？A.粘附能力B. 抗吞噬能力C. 繁殖能力D. 扩散能力E.产生毒素能力6.细菌致病性强弱主要取决于细菌的A.形态B.基本结构和特殊结构C. 侵袭力和毒素D.侵入机体的部位E.分解代谢产物7.具有粘附作用的细菌结构是A. 芽胞B.普通菌毛C.荚膜D.性菌毛E. 鞭毛8.有助于细菌在体内扩散的物质是A.普通菌毛B.细菌素C.脂磷壁酸D. 内毒素E.透明质酸酶9.细菌内毒素即革兰氏阴性菌细胞壁的A.芽孢B.肽聚糖C.O 抗原D.荚膜多糖E.脂多糖10.内毒素不具有的毒性作用是A. DICB.发热C.休克D.食物中毒E. 白细胞反应11.关于内毒素的叙述,下列错误的是A.来源于革兰阴性菌B. 当菌体死亡裂解后释放出来C.其化学成份是脂多糖D.性质稳定,耐热E. 能用甲醛脱毒制成类毒素12.关于外毒素的叙述,下列错误的是A.多由革兰阳性菌产生B.化学成份是蛋白质C.耐热,使用高压蒸汽灭菌法仍不能将其破坏D.经甲醛处理可制备成类毒素E.可刺激机体产生抗毒素13.外毒素的特点之一是A.都是革兰阳性菌产生的B.受甲醛作用可制备成类毒素C.多为细菌裂解后释放D.化学组成是脂多糖E.稳定性好，耐热14.细菌毒素中,毒性最强的是C. 白喉外毒素A.金黄色葡萄球菌肠毒素B.红疹毒素D. 肉毒毒素E. 破伤风痉挛毒素15.以神经毒素致病的细菌是A.大肠杆菌B.霍乱弧菌C. 肉毒梭菌D. 乙型溶血性链球菌E.淋球菌16.类毒素是A.细菌经甲醛处理后的物质B. 内毒素经甲醛处理后脱毒而保持抗原性的物质C.外毒素经甲醛处理后脱毒而保持抗原性的物质D.抗毒素经甲醛处理后的物质E.外毒素经甲醛处理后脱毒并改变了抗原性的物质17.下述细菌中可引起菌血症的是A.破伤风梭菌B.伤寒沙门菌C.大肠杆菌D. 肉毒梭菌E.霍乱弧菌18.带菌者是指A.体内带有正常菌群者B.病原菌潜伏在体内,不向体外排菌者C.体内带有条件致病菌者D.感染后,临床症状明显,并可传染他人者E 感染后,临床症状消失,但体内病原菌未被彻底清除,又不断向体外排菌者19.对机体非特异性免疫叙述,错误的是A.在种系进化过程中逐渐形成B.与生具有,人皆有之C. 发挥作用快D.与机体的组织结构和生理功能密切相关E.针对性强20.不属于正常体液与组织中的抗菌物质是A. 抗生素B.溶菌酶C. 补体D. 乙型溶素E. 白细胞素21.关于抗感染免疫的叙述,下列错误的是A.完整的皮肤与粘膜屏障是抗感染的第一道防线B.吞噬细胞和体液中的杀菌物质是抗感染的第二道防线.C.体液免疫主要针对胞外寄生菌的感染D.细胞免疫主要针对胞内寄生菌的感染E.抗体与细菌结合可直接杀死病原菌22.细菌不侵入血流，惟独毒素侵入血流引起全身症状为A.败血症B. 毒血症C. 菌血症D. 脓毒血症E. 病毒血症23.细菌由局部侵入血流经血流播散至远部组织，但不在血中繁殖为A.败血症B. 毒血症C. 菌血症D. 脓毒血症E. 病毒血症24.细菌侵入血流并在其中大量繁殖，产生毒性代谢产物，引起机体严重损伤和全身中毒症状为A.败血症B. 毒血症C. 菌血症D. 脓毒血症E. 病毒血症25.化脓性细菌侵入血流大量繁殖，又播散到其他组织器官引起转移性化脓性病灶为A.败血症B. 毒血症C. 菌血症D. 脓毒血症E. 病毒血症26 ．SIgA 发挥局部抗感染的作用机制是A.通过免疫调理作用增强免疫力B.可激活补体旁路途径C.直接与病原体结合使之不能进入粘膜D.直接破坏病原体使之失活E. 中和病原体的毒性作用27.下列哪项是人类吞噬细胞杀菌的主要系统？A.MPO 系统B.非MPO 系统C.依氧系统D.非依氧系统E. 以上都不是28.参预调理吞噬作用的受体有A.PHA 受体B.C3b 受体C.PWM 受体D.LPS 受体E.Con A 受体29.和鼻咽癌发生关系密切的病毒是A. CMVB.HIVC.HSVD. EBVE.VZV30.检查内基氏小体可诊断何种病毒感染A.狂犬病病毒B.麻疹病毒C. 乙型脑炎病毒D.人类免疫缺陷病毒E. 甲型肝炎病毒31. 下列哪种病毒不引起病毒血症A.HBV D.流感病毒B.脊髓灰质炎病毒C. 乙型脑炎病毒E.水痘-带状疱疹病32. 下列病毒感染中以隐性感染居多的是A.麻疹B.狂犬病C.流感D.脊髓灰质炎E.汉坦病毒33. 在下列病毒中，能引起潜伏感染的是A.HAVB.VZVC.狂犬病毒D.ECHOVE.汉坦病毒34. 呼吸道感染的病毒是A ．脊髓灰质炎病毒 B.轮状病毒 C.HAVD. 乙型脑炎病毒E.麻疹病毒35. 粪- 口途径传播的病毒是A.HAVB.HBVC.HIVD.流感病毒E.鼻病毒36. 经节肢动物传播的病毒是A.风疹病毒B.腺病毒C. 乙型脑炎病毒D.狂犬病毒E.脊髓灰质炎37. 下列哪种病毒不是经虫媒感染A. 乙型脑炎病毒B.森林脑炎病毒C.登革热病毒D.狂犬病毒E.黄热病病毒38. 下列除哪项外，均是经血液传播的病毒A.HBVB.HIVC.HCVD. 乙型脑炎病毒E.人类嗜T细胞病毒39. 不能经垂直感染的病毒是A.HIVB.HBVC.风疹病毒D.CMVE.脊髓灰质炎病毒40. 中和抗体抗病毒的机理是A ．直接杀伤病毒 B. 阻挠病毒吸附和穿入C.阻挠病毒脱壳D. 阻挠病毒核酸转录E. 阻挠病毒核酸复制41. 干扰素主要作用于病毒的A．吸附 B.穿入 C.脱壳D.生物合成E. 以上都不是42. 下列关于干扰素的论述哪一条不正确A.是一种非常有前途的生物制品B.是一类具有多种调节功能的蛋白质C.抗病毒范围广泛D.受保护细胞产生抗病毒蛋白质E.抗病毒作用无种属特异性43. 病毒免疫因素，下列哪项是错误的A . 中和抗体能阻挠病毒吸附B .分泌型IgA 能阻挠病毒从粘膜侵入C.补体结合抗体能阻挠病毒再感染D.细胞免疫起主要作用E.迟发型变态反应有局限病毒感染的作用44. 关于干扰素的特性，下述哪项是错误的A.有种属特异性B.病毒感染后早期浮现C.广谱抗病毒作用D.有直接杀病毒作用E.属非特异性免疫因素45. 抗体对病毒的中和作用主要是A.抑制病毒生物合成B.诱导干扰素产生C.阻挠病毒与靶细胞相互作用D. 中和病毒毒素E.杀伤细胞内的病毒46. 感染病毒的细胞在胞核或者胞浆内存在可着色的斑块状结构称A.包涵体D.极体B.蚀斑E.异染颗粒C.空斑47. 有关病毒感染的描述正确的是A.病毒在人群体间的相互传播为水平传播,主要经皮肤和粘膜传播B.母亲将病毒传给其子女的感染为垂直传播C.病毒感染细胞造成的免疫病理损伤仅限于Ⅳ型变态反应D.慢发病毒感染就是病毒的慢性感染E. 以上均对48. 病毒的致病因素是A. 内毒素D.表面结构B.外毒素C.侵袭力E. 以上均不对49. 经垂直感染导致畸胎的病毒主要有A.麻疹病毒D. 乙脑病毒B.风疹病毒E. 甲肝病毒C.流感病毒50. 下列病毒哪种易导致潜伏感染A. 出血热病毒B. 乙型肝炎病毒C.流感病毒D. 脊髓灰质炎病毒E. 单纯疱疹病毒51.Shwartzman 现象是一种动物实验反应，以观察细菌某种毒力因子的致病作用。
医学微生物学――第十三章 棒状杆菌
医学微生物学――第十三章棒状杆菌第十三章棒状杆菌棒状杆菌属(Corynebacterium)与分枝杆菌属和诺卡菌属一样，是放线菌中细胞壁含短链分枝菌酸的菌属。
革兰阳性，菌体一端或两端膨大呈棒状的杆菌。
菌体染色不均匀，出现节段浓染或有异染颗粒。
排列不规则，呈栅栏状。
无荚膜、无鞭毛，不产生芽胞。
此属细菌种类较多。
广泛分布于动、植物上。
可定植于人皮肤、上呼吸道和泌尿生殖道粘膜。
大多为条件致病菌，能引起人类致病且具传染性的主要为白喉棒状杆菌。
第一节白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌(C.diphtheriae),俗称白喉杆菌，是白喉的病原菌。
白喉是一种急性呼吸道传染病，患者咽喉部出现灰白色的假膜。
该菌能产生强烈外毒素，进入血液可引起全身中毒症状。
一、生物学性状形态与染色菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状。
细菌常排列呈V、L等文字形。
革兰染色阳性。
用美蓝短时间染色菌体着色不均匀，出现有深染的颗粒。
用Neisser或Albert 等法染色，这些颗粒与菌体着染颜色不同，称为异染颗粒（图13-1）。
颗粒的主要成分是核糖核酸和多磷酸盐，在鉴定时有重要意义。
但当细菌衰老时异染颗粒被消耗而不明显，且细胞壁变薄易被脱色，常造成革兰染色不定，有时在革兰阴性的菌体中见有阳性颗粒或节段。
培养特性需氧或兼性厌氧。
培养过夜在血平板上可见1~3mm菌落。
在含有凝固血清的吕氏血清斜面上生长迅速，涂片染色异染颗粒明显。
分离培养时常用鉴别选择培养基含0.03%～0.04%亚碲酸钾的血平板。
亚碲酸钾能抑制杂菌，且白喉棒状杆菌能吸收亚碲酸盐使其还原为元素碲，菌落呈黑色。
抵抗力白喉棒状杆菌对湿热抵抗力不强，煮沸1min死亡。
但对寒冷和干燥抵抗力强。
在衣服、床单、玩具上可存活数天至数周。
5%石炭酸中１min、3% 来沙尔中10min死亡。
对青霉素、氯霉素、红霉素敏感。
二、致病性致病物质白喉棒状杆菌的致病性与其产生的白喉外毒素有关。
大多白喉棒状杆菌的-噬菌体带有编码外毒素的tox基因，而白喉棒状杆菌本身无此基因。
第十三章-微生物物种的多样性
第十三章微生物物种的多样性生物多样性包括遗传多样性、物种多样性和生态系统多样性等。
它们是由进化而形成的，不仅直接为人类提供了食品、药物、纺织品、燃料、材料等，而且还通过参与物质循环来维持地球上生命所必需的生存环境。
因此，保护生物的多样性，就是保护人类自己。
微生物多样性是生物多样性的重要组成部分，而且有其独特之处，起着不可替代的作用。
前几章已对微生物遗传多样性、生态系统多样性等作了阐述。
本章将阐明其物种的多样性，简要的介绍原核微生物(真细菌、古生菌)和真核微生物(真菌、粘菌、单细胞藻类、原生动物)的多样性。
第一节真细菌的多样性一、真细菌系统发育总观对细菌的系统发育以往的概念是根据类群的表型特征(主要是形态特征和生理生化特征及少量的遗传特征)来判断它们的系统发育和进化途径。
而通过细菌16s rRNA的序列分析已经揭示出，不同细菌本身保守的16SrRNA寡核苷酸序列才是识别系统发育的标记。
据此，细菌的系统发育包括12个独特的类群(图13-1)。
图13-1 细菌的系统发育树类群1. 紫色光合细菌及其有关细菌：目前将类群1称为变形细菌(Proteobacterium)。
是细菌中包括的属最多而且在生理特性上最具有多样性，由α、β、γ、δ、和ε5个亚门组成。
其中能进行光合作用的紫色细菌包括在α、β和γ3个亚门中，但一些有机化能营养的属，如：埃希氏菌属、假单胞菌属、醋单胞菌属和一些无机化能营养的属，如：硝化杆菌属、亚硝化单胞菌属、贝日阿托氏菌属等也包括在这3个亚门中。
δ和ε2个亚门只包括非光合作用的细菌。
尽管所有的肠道细菌、大多数的假单胞菌、自生和共生固氮细菌以及大多数化能无机营养细菌在形态、生理和生态分布的表型上与紫色细菌有明显的区别，但是，在系统发育上却都与紫色细菌有关。
由紫色细菌谱系可以引申出各种各样在生理特性和生态分布上有差异的重要细菌。
16s rRNA 序列分析的结果指明，AAAUUGG序列用以鉴别α亚门的紫色细菌；CYUUACACAUG(Y表示任意一个嘧啶)是β亚门的序列特征；ACUAAAACUCAAAG序列存在于大多数δ亚门紫色细菌的16SrRNA中。
第十三章--抗微生物药
7/6/2020
二、常用术语
7. 耐药性 又称抗药性
§13-1 概述
7/6/2020
第十三章 抗微生物药
第二节 抗生素
7/6/2020
学习内容
1 β-内酰胺类 2 大环内酯类 3 氨基糖苷类 4 四环素类和氯霉素 5 其他类抗生素
§13-2 抗生素
一、β-内酰胺类
§13-2 抗生素
定义：指化学结构中具有β-内酰胺环基团的一类抗生素 包括：
7/6/2020
一、β-内酰胺类
§13-2 抗生素
【耐药性】 金葡菌产生青霉素酶（β-内酰胺酶）
β-内酰胺环被打开，细菌产生耐药性
【临床应用】
1.G+球菌感染：如扁桃体炎、猩红热、心内膜炎、败 血症、大叶性肺炎、骨髓炎等 2.G-球菌感染：如脑膜炎球菌引起的脑膜炎
7/6/2020
流行性脑脊髓膜炎
一、β-内酰胺类
学习目标
掌握β-内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、 喹诺酮类、抗结核病药、甲硝唑的药物作用、 临床应用、不良反应及注意事项 熟悉磺胺类、甲氧苄啶的作用特点及联合应用 的意义，常用消毒防腐药的应用 了解常用抗真菌药、抗病毒药及呋喃类药作用 特点及应用，抗菌药合理使用原则
第十三章 抗微生物药
第一节 抗菌药物、抗生素与化 学治疗的基本概念
7/6/2020
一、β-内酰胺类
§13-2 抗生素
【药物相互作用】
5.双硫仑样反应：又称醉酒样反应、双硫醒样反应。
与乙醇合用时产生。
故用本类药物期间或停药5天内应禁酒。
《药物学基础》（第3版）
第十三章 抗微生物药
第十三章 抗微生物药
目录
❖ 第一节 抗菌药物、抗生素与化学治 疗的基本概念
微生物学：第13章 分枝杆菌属
盲部)
三、免疫性与超敏反应
人体对MTB有相当强的免疫力
(一)免疫性
❖ 结核的免疫为带菌免疫(传染性免疫) ❖ 以细胞免疫为主,免疫力持久 ❖ 机体能产生的抗体中和力弱
(二)免疫与超敏反应 ❖ 免疫防御的同时,引起Ⅳ型超敏反应
❖ 索状因子(分枝菌酸):能破坏宿主细胞线
粒体膜,抑制白细胞游走,引起肉芽肿。
❖ 硫酸脑苷酯:抑制溶菌酶体与吞噬体的结
合,使该菌胞内寄生。 ❖ 蜡质D：佐剂,能引起Ⅳ型超敏反应
Hale Waihona Puke 2. 蛋白质 •菌体内合成,重要的是结核菌素 •单独存在不致病,与蜡质D结合后, 引起较强的迟发型超敏反应。
3.其他(自学)：多糖、核酸、荚膜
(三)免疫与超敏反应
❖ 分别由不同的MTB抗原诱导 细胞免疫:rRNA和十几种分泌蛋白诱导 超敏反应:众多菌体蛋白和蜡质D诱导
❖ 分别由不同的淋巴细胞介导 细胞免疫:Lytl+2- 和Lytl-2-淋巴细胞 超敏反应:Lytl+2+淋巴细胞
(四)结核菌素试验
1.原理:结核菌素+蜡质D→Ⅳ型超敏反应 2.试剂:旧结核菌素(OT)—副作用明显 纯蛋白衍生物(PPDC和BCGPPD)—OT纯化 3.方法:两前臂掌侧各皮内 注射PPDC和BCGPPD 5单 位(目前仍单侧注射PPD), 48～72h后观察结果。
2.原发后感染
(3)开放性TB 浸润型肺结核→干酪样坏死液化 外源性感染→细菌经呼吸道感染 菌体扩散至气管或胸腔→随痰排出→慢 性纤维空洞型肺结核(传染性最强;IV型)
干酪样肺结核 慢性纤维空 洞性肺结核
江汉湖第三版 13第十三章 微生物与食品安全性PPT课件
2019/10/31
35
(1 ) 病原菌特性： 沙门氏菌属
（Salmonella）是一 大群在血清学上相关 的、革兰氏阴性杆菌， 无芽孢、无荚膜，周 身鞭毛，能运动的需 氧或兼性厌氧的短杆 菌。
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2. 沙门氏菌食物中毒
生物学特性：G-，短杆菌，无芽孢和荚膜，周生鞭
毛，兼性厌氧，最适生长温度37℃。
中毒症状：该菌为感染型食物中毒，一般中毒食物
的菌数含量达10-8/ml, g，主要表现为急性肠胃炎症状， 病死率一般是0.5~1%。
中毒源：该菌对热的抵抗力很弱，60℃经20~30分钟
有31种。
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(3) 病原菌的肠毒素
金黄色葡萄球菌致病菌株产生的毒素和酶 主要有：
溶血毒素(staphylolysin) 杀白血球毒素(1eukocidin) 凝固酶(coagulase) 溶纤维蛋白白酶（fibrinolysin） 透明质酸酶（hyalurouidase） 耐热核酸酶（heat stable nuclease） 剥脱性毒素(exfoliative toxin) 肠毒素(enterotoxin) 等
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(5) 化学性食物中毒 摄入化学性有毒食品引起的食物中
毒。季节性、地区性均不明显。发病率、 病死率一般都比较高。如农药、亚硝酸 盐中毒等。
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二、细菌性食物中毒
细菌性的食物中毒是比较常见的一种食物中毒类型，根据 中毒的原因可将其分为感染性食物中毒和毒素性食物中毒。
13细菌的遗传和变异PPT课件
-
27
结果
完全转导
整合
流产转导
未整合
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28
局限性转导restricted transduction
或称特异性转导， 所转导的只限于供体 菌染色体上特定的基因。
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4. 溶原性转换 lysogenic conversion
定义：溶原性细菌因染色体上整合有 前噬菌体而获得新的遗传性状。
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常见的细菌及其所产生的毒素有：
形态结构变异
Variation of morphology and structure
菌落变异 variation of colony 毒力变异virulent variation
卡介苗 Bacillus of Calmette- Guerin,BCG : 卡介二氏 用有毒的牛结核分枝杆菌在含甘油、马铃薯的培养基上， 经13年连续230次传代所获得的一毒力减弱但保留有抗原 性的变异株。是 用于人工免疫以预防结核病的活疫苗。
接合性耐药质粒：
conjugative plasmid of drug resistance
耐药性质粒
非接合性质粒 ：不能通过
接合方式传递, 可通 过转导方式传递.
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9
毒力质粒 virulent plasmid ，Vi plasmid
如致病性大肠埃希菌的ST质粒、 LT质粒 等。
细菌素质粒 、代谢质粒等。
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一、基因突变 gene mutation
突变：突变是细菌遗传物质结构发生 突然而稳定的改变，引起细菌遗传性 变异。 可分为点突变和大突变
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二、基因的转移与重组 gene tranfer and recombination
13_异亮氨酸
第十三章异亮氨酸、亮氨酸与缬氨酸发酵第一节分支链氨基酸的生物合成途径和代谢调节机制在L型异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）和缬氨酸（Val）的分子中，都具有由甲基侧链形成的分枝结构（见表13-1），故称上述三种氨基酸为分枝链氨基酸（branched chain amino acids）。
分枝链氨基酸是合成蛋白质的素材，可以作为生物体的能源，也作为生物体成分的前体。
但是，高等动物不能合成这三种氨基酸，故Ile、Leu、Val称为必需氨基酸。
目前，分枝链氨基酸主要用作氨基酸输液的原料。
表13-1 分枝链氨基酸的结构名称结构式分子式分子量异亮氨酸（Ile）C6H13O2N 131.18亮氨酸（Leu）C6H13O2N 131.18缬氨酸（Val）C5H11O2N 117.15Ile分子内有两个不对称碳原子，因而，Ile存在着D、L、D别、L别四种光异构体（表13-2）。
很难用化学合成法，或用化学合成法与酶法相组合的方法，廉价制造纯度高的L型Ile。
Leu与Val分别只有两个光学异构体，能够用化工合成、酶法分割的方法，较廉价地制造。
要廉价生产高纯度的L型Ile，只有采用发酵法，因此，Ile发酵就成了分枝链氨基酸发酵的中心问题。
然而，从自然界中，只找到了分泌Leu或Val的菌株，却找不到分泌Ile的菌株。
直到20世纪60年代后半期，随着氨基酸生物合成系反馈调节机制的全部搞清，可以通过选育目的氨基酸代谢拮抗物抗性株的方法，从遗传上解除原菌株的反馈调节机制，从而可以利用这种抗性菌株，由糖直接发酵生产Ile（Leu或Val）。
表13-2 Ile的四种光学异构体L-Ile D-Ile D-别Ile L-别Ile 1960年，经过用粗糙链孢霉、大肠杆菌的营养缺陷型突变株，及用放射性同位素标记的前体，进行研究的结果，确定了Ile、Leu及Val的生物合成途径（图13-1）。
出于V aI和Leu的所有碳原子，都来自于丙酮酸，所以，V al及Leu亦称丙酮酸族氨基酸。
第十三章 生物膜法
不同点:
1. 丝状菌的大量繁殖使生物膜具有立体结构，能疏松生物膜， 有利于提高污染物的去除效果；而在活性污泥中则会对系 统构成威胁， 2. 生物膜中原生动物和后生动物比活性污泥数量多，种类更 丰富； 且分层聚居，在水流的下层出现。
二、影响生物膜法污水处理效果的主要因素
进水底物的组分和浓度及其变化规律 营养物质 有机负荷和水力负荷 有机负荷：kgBOD5/[m3(滤料)· d]
蜂窝斜管和蜂窝斜板
浮球填料
陶粒滤料
立体弹性填料
聚丙烯半软性填料
2. 布水系统：要求布水均匀； 有固定式喷嘴布水系统（现基本不用）和旋转式布水 器(图13-3 a)； 布水中心管，布水横管；布水横管的一侧开于小孔， 小孔直径10～15mm；间距不等，愈近池心间距愈 大，保证单位面积的滤池面积接受的水量相等；
水力负荷q高：9～40m3· 2滤料· -1 (m d) 有机负荷高：0.5～1.5gBOD5· 3滤料· -1，在1.1左右 (m d)
BOD5去除率：80～90％；出水BOD5 >30mg· -1; L
卵石或石英石滤料；H＝2～4m； 布水系统：旋转式布水系统；
出水无DO和硝酸盐；二沉池的污泥稳定性差，泥量大；
隙率大、强度高；纤维。
4. 生物膜法：好氧法、厌氧法（厌氧滤池/UASB）
13
13-1 13-2 13-3 13-4 13-5
生物膜法
基本原理 生物滤池 生物转盘 生物接触氧化法 生物膜法的进展
13-1 基本原理
一. 生物膜:
附着生长在滤料上充满微生物的立体网状结构，具有较强的 吸附和生物降解性能。（图13-1 生物膜的基本结构）
第十三章奈瑟菌ppt课件
防治原则
预防淋病应取缔娼妓、防止不正当的两性关系 新生儿1%硝酸银滴眼，或红霉素、四环素眼
药膏 药物首选青霉素，但多有耐药性，应用新型青
霉素族抗生素
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•第二节
• •
脑膜炎奈瑟菌
N. meningitis meningococcus
问题
1．淋病奈瑟菌可引起 A．阴道炎 B．化脓性结膜炎 C．子宫颈炎 D．梅毒 E．尿道炎
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青霉素、磺胺大剂量治疗
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小结
淋病奈瑟菌的生物学性状、致病物质及所致 疾病
脑膜炎奈瑟菌的生物学性状、致病物质及所 致疾病
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教学大纲
掌握内容
淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌形态染色、培养 特性及抵抗力 致病物质及所致疾病
熟悉内容
淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌的防治原则
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脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌
两者关系
相似点：
生物学性状
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一、选择题A型题1.与细菌致病性无关的结构是下列哪A.异染颗粒B.荚膜C.菌毛D.脂多糖E.鞭毛2.哪项除外，均为细菌产生的侵袭性酶？A.溶菌酶B.透明质酸酶C. 血浆凝固酶D.胶原酶E.链激酶3.细菌代谢产物中,与致病性无关的是A.毒素B.血浆凝固酶C.热原质D.细菌素E.透明质酸酶4.与细菌侵袭力无关的物质是A.荚膜B.菌毛C.血浆凝固酶D.芽胞E.透明质酸酶5.细菌的侵袭力不包括下列哪一种能力？A.粘附能力B. 抗吞噬能力C. 繁殖能力D. 扩散能力E.产生毒素能力6.细菌致病性强弱主要取决于细菌的A.形态B.基本结构和特殊结构C. 侵袭力和毒素D.侵入机体的部位E.分解代谢产物7.具有粘附作用的细菌结构是A. 芽胞B.普通菌毛C.荚膜D.性菌毛E. 鞭毛8.有助于细菌在体内扩散的物质是A.普通菌毛B.细菌素C.脂磷壁酸D.内毒素E.透明质酸酶9.细菌内毒素即革兰氏阴性菌细胞壁的A.芽孢B.肽聚糖C.O抗原D.荚膜多糖E.脂多糖10.内毒素不具有的毒性作用是A. DICB.发热C.休克D.食物中毒E.白细胞反应11.关于内毒素的叙述,下列错误的是A.来源于革兰阴性菌B. 当菌体死亡裂解后释放出来C.其化学成分是脂多糖D.性质稳定,耐热E. 能用甲醛脱毒制成类毒素12.关于外毒素的叙述,下列错误的是A.多由革兰阳性菌产生B.化学成分是蛋白质C.耐热,使用高压蒸汽灭菌法仍不能将其破坏D.经甲醛处理可制备成类毒素E.可刺激机体产生抗毒素13.外毒素的特点之一是A.都是革兰阳性菌产生的B.受甲醛作用可制备成类毒素C.多为细菌裂解后释放D.化学组成是脂多糖E.稳定性好，耐热14.细菌毒素中,毒性最强的是A.金黄色葡萄球菌肠毒素B.红疹毒素C.白喉外毒素D.肉毒毒素E. 破伤风痉挛毒素15.以神经毒素致病的细菌是A.大肠杆菌B.霍乱弧菌C.肉毒梭菌D.乙型溶血性链球菌E.淋球菌16.类毒素是A.细菌经甲醛处理后的物质B.内毒素经甲醛处理后脱毒而保持抗原性的物质C.外毒素经甲醛处理后脱毒而保持抗原性的物质D.抗毒素经甲醛处理后的物质E.外毒素经甲醛处理后脱毒并改变了抗原性的物质17.下述细菌中可引起菌血症的是A.破伤风梭菌B.伤寒沙门菌C.大肠杆菌D.肉毒梭菌E.霍乱弧菌18.带菌者是指A.体内带有正常菌群者B.病原菌潜伏在体内,不向体外排菌者C.体内带有条件致病菌者D.感染后,临床症状明显,并可传染他人者E感染后,临床症状消失,但体内病原菌未被彻底清除,又不断向体外排菌者19.对机体非特异性免疫叙述,错误的是A.在种系进化过程中逐渐形成B.与生具有,人皆有之C. 发挥作用快D.与机体的组织结构和生理功能密切相关E.针对性强20.不属于正常体液与组织中的抗菌物质是A. 抗生素B.溶菌酶C. 补体D.乙型溶素E.白细胞素21.关于抗感染免疫的叙述,下列错误的是A.完整的皮肤与粘膜屏障是抗感染的第一道防线B.吞噬细胞和体液中的杀菌物质是抗感染的第二道防线.C.体液免疫主要针对胞外寄生菌的感染D.细胞免疫主要针对胞内寄生菌的感染E.抗体与细菌结合可直接杀死病原菌22.细菌不侵入血流，只有毒素侵入血流引起全身症状为A.败血症B. 毒血症C. 菌血症D. 脓毒血症E. 病毒血症23.细菌由局部侵入血流经血流播散至远部组织，但不在血中繁殖为A.败血症B. 毒血症C. 菌血症D. 脓毒血症E. 病毒血症24.细菌侵入血流并在其中大量繁殖，产生毒性代谢产物，引起机体严重损伤和全身中毒症状为A. 败血症B. 毒血症C. 菌血症D. 脓毒血症E. 病毒血症25.化脓性细菌侵入血流大量繁殖，又播散到其他组织器官引起转移性化脓性病灶为A.败血症B. 毒血症C. 菌血症D. 脓毒血症E. 病毒血症26．SIgA发挥局部抗感染的作用机制是A.通过免疫调理作用增强免疫力B.可激活补体旁路途径C.直接与病原体结合使之不能进入粘膜D.直接破坏病原体使之失活E.中和病原体的毒性作用27.下列哪项是人类吞噬细胞杀菌的主要系统？A.MPO系统B.非MPO系统C.依氧系统D.非依氧系统E.以上都不是28.参与调理吞噬作用的受体有A.PHA受体B.C3b受体C.PWM受体D.LPS受体E.Con A受体29.和鼻咽癌发生关系密切的病毒是A. CMVB.HIVC.HSVD. EBVE.VZV30.检查内基氏小体可诊断何种病毒感染A.狂犬病病毒B.麻疹病毒C.乙型脑炎病毒D.人类免疫缺陷病毒E.甲型肝炎病毒31. 下列哪种病毒不引起病毒血症A.HBVB.脊髓灰质炎病毒C.乙型脑炎病毒D.流感病毒E.水痘-带状疱疹病32. 下列病毒感染中以隐性感染居多的是A.麻疹B.狂犬病C.流感D.脊髓灰质炎E.汉坦病毒33. 在下列病毒中，能引起潜伏感染的是A.HAVB.VZVC.狂犬病毒D.ECHOVE.汉坦病毒34. 呼吸道感染的病毒是A．脊髓灰质炎病毒 B.轮状病毒 C.HAVD.乙型脑炎病毒E.麻疹病毒35. 粪-口途径传播的病毒是A.HAVB.HBVC.HIVD.流感病毒E.鼻病毒36. 经节肢动物传播的病毒是A.风疹病毒B.腺病毒C.乙型脑炎病毒D.狂犬病毒E.脊髓灰质炎37. 下列哪种病毒不是经虫媒感染A.乙型脑炎病毒B.森林脑炎病毒C.登革热病毒D.狂犬病毒E.黄热病病毒38. 下列除哪项外，均是经血液传播的病毒A.HBVB.HIVC.HCVD.乙型脑炎病毒E.人类嗜Ｔ细胞病毒39. 不能经垂直感染的病毒是A.HIVB.HBVC.风疹病毒D.CMVE.脊髓灰质炎病毒40. 中和抗体抗病毒的机理是A．直接杀伤病毒 B.阻止病毒吸附和穿入 C.阻止病毒脱壳D. 阻止病毒核酸转录E. 阻止病毒核酸复制41. 干扰素主要作用于病毒的A．吸附 B.穿入 C.脱壳D.生物合成E. 以上都不是42. 下列关于干扰素的论述哪一条不正确A.是一种非常有前途的生物制品B.是一类具有多种调节功能的蛋白质C.抗病毒范围广泛D.受保护细胞产生抗病毒蛋白质E.抗病毒作用无种属特异性43. 病毒免疫因素，下列哪项是错误的Ａ.中和抗体能阻止病毒吸附Ｂ.分泌型IgA能阻止病毒从粘膜侵入C.补体结合抗体能阻止病毒再感染D.细胞免疫起主要作用E.迟发型变态反应有局限病毒感染的作用44. 关于干扰素的特性，下述哪项是错误的A.有种属特异性B.病毒感染后早期出现C.广谱抗病毒作用D.有直接杀病毒作用E.属非特异性免疫因素45. 抗体对病毒的中和作用主要是A.抑制病毒生物合成B.诱导干扰素产生C.阻止病毒与靶细胞相互作用D.中和病毒毒素E.杀伤细胞内的病毒46. 感染病毒的细胞在胞核或胞浆内存在可着色的斑块状结构称A.包涵体B.蚀斑C.空斑D.极体E.异染颗粒47. 有关病毒感染的描述正确的是A.病毒在人群体间的相互传播为水平传播,主要经皮肤和粘膜传播B.母亲将病毒传给其子女的感染为垂直传播C.病毒感染细胞造成的免疫病理损伤仅限于Ⅳ型变态反应D.慢发病毒感染就是病毒的慢性感染E.以上均对48. 病毒的致病因素是A.内毒素B.外毒素C.侵袭力D.表面结构E.以上均不对49. 经垂直感染导致畸胎的病毒主要有A.麻疹病毒B.风疹病毒C.流感病毒D.乙脑病毒E.甲肝病毒50. 下列病毒哪种易导致潜伏感染A.出血热病毒B.乙型肝炎病毒C.流感病毒D. 脊髓灰质炎病毒E. 单纯疱疹病毒51.Shwartzman现象是一种动物实验反应，以观察细菌某种毒力因子的致病作用。
种毒力因子是A.外毒素B.内毒素C.抗毒素D.类毒素E.细菌素52.黏附的关键机制是A.菌细胞与特定器官黏附B.菌细胞与特定组织黏附C.菌细胞与特定宿主细胞结合D.菌细胞与特定宿主细胞通过静电吸引相结合E.菌细胞的配体与宿主细胞表面受体相结合53. 关于病原菌致病性的构成因素，叙述最全面的是A.毒力+ 侵入部位+ 细菌数量B.毒素+ 侵袭力+ 侵入部位C.侵袭力+ 侵入部位+ 细菌数量D.侵袭酶类+ 毒素+ 细菌数量E.侵入部位+ 毒素+ 细菌表面结构54. 关于病毒与肿瘤发生的关系，哪项组合是错误的A.EB病毒—鼻咽癌B.汉坦病毒—肺癌C.乙型肝炎病毒—原发性肝癌D.人乳头瘤病毒—子宫颈癌E.人嗜T细胞病毒—白血病55. 哪项不是病毒感染对宿主细胞的直接作用A.杀细胞感染B.细胞融合C.整合感染D.形成包涵体E.继发感染56. 关于影响病毒致病作用的因素, 哪项是错误的A.病毒对组织器官的亲嗜性B.病毒对宿主细胞的杀伤作用C.病毒引起的免疫性病理损伤D.机体接受抗生素的剂量与种类E.机体对病毒的免疫力57. 下列细菌属于胞内菌，例外的是A.结核分枝杆菌B.淋病奈瑟菌C.伤寒沙门菌D.布氏杆菌E.嗜肺军团菌58. 抗细胞内寄生菌感染的主要免疫因素是A.补体B.抗体C.NK细胞D.T细胞E.巨噬细胞59. 抗胞外寄生菌感染的主要免疫因素是A.补体B.抗体C. NK细胞D.T细胞E.巨噬细胞60. 对于扰素（IFN）的叙述，正确的是A.是病毒产生的一类分泌性蛋白B.是病毒诱导细胞所产生的一类分泌性蛋白C.淋巴细胞产生IFN不需要被诱导D.T细胞和B细胞均可产生免疫干扰素（IFN-γ）E.IFN-γ抗病毒作用比较强61. IFN-γ的产生细胞主要是A.活化的T细胞B.活化的B细胞C.白细胞D.成纤维细胞E.巨噬细胞62. 病毒中和抗体是指A.能中和毒素毒性作用的抗体B.针对病毒体某些表面抗原的抗体C.针对病毒体内部抗原的抗体D.针对细胞受体的抗体E.针对病毒神经氨酸酶的抗体63. 关于干扰素抗病毒机制的叙述，错误的是A.干扰素必须与细胞表面的受体结合，才能发挥作用B.干扰素必须进入细胞内，才能发挥作用C.细胞内基因需要被激活后才能产生抗病毒蛋白D. 2’-5’A合成酶导致病毒mRNA的降解E.蛋白激酶抑制病毒多肽链的合成64. 促进深部真菌感染性疾病恢复的主要免疫因素是A.IgG抗体B.CD4＋Th1细胞C.补体D.CTLE.中性粒细胞65. 干扰素的作用特点中，不正确的一项是A.对病毒作用无特异性B对使用的机体有种属特异性C.病毒或PolyΙ：可诱导产生D.可受抗原刺激产生E.于扰素的产生晚于抗体的产生66. 关于胎盘球蛋白的叙述，错误的是A.由健康产妇的胎盘和婴儿脐带中提取制备B.主要含IgMC.一般不会引起超敏反应D.主要用于麻疹、甲型肝炎和脊髓灰质炎等病毒性疾病的紧急预防E.免疫效果不如高效价的特异性免疫球蛋白67. 应用干扰素诱生剂治疗病毒性疾病的主要缺点是A.合成困难B.诱生干扰素量少C.具有抗原性D.反复使用可产生耐受及毒性E.不能注射68. 防止病毒血行扩散的最有效的物质是A.IFNB.sIgAC.IgG，IgAD.IgM，IgAE.IgM，IgG参考答案一、选择题A型题：1.A.2.A.3.D.4.D.5.E.6.C.7.B.8.E.9.E.10.D.11.E.12.C.13.B.14.D.15.C.16.C. 17.B. 18.E. 19.E. 20.A. 21.E. 22.B. 23.C. 24.A. 25.D. 26.C. 27.A. 28.B29.D 30.A 31.D 32.D 33.B 34.E 35.A 36.C 37.D 38.D 39.E 40.B 41.D 42.E 43.C 44.D 45.C 46.A 47.A 48.E 49.B 50.D 51. B 52. E 53. A 54.B 55.E 56.D 57.B 58.D 59.B 60.B 61.A 62.B 63.B 64.B 65.E 66.B 67. D 68.E。