细胞培养的必备设施、常用器材
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制
20ug/ml内皮生长因子，
注意事项：
1.配制溶液时必须用新鲜的蒸馏水。
2.安装蔡式滤器时通常使用孔径0.45微米和0.22微米滤膜各一张，放置位置为0.45的位于0.22微米的滤膜上方，并且要特别注意滤膜光面朝上。
4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：
1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋
3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：
1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面
2.靠近酒精灯火焰操作。
5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。
6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。
7.高压消毒后烘干
(2)旧的玻璃器皿的洗消：
1．刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。
一般培养液中谷氨酰胺的含量为1～4mmol/L。可以配制200mmol/L谷氨酰胺液贮存，用时加入培养液。配制方法为，谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。
(9).肝素溶液的配制：
0.1％Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。注意：因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。分装入10ml小瓶-20℃保存。
细胞培养常用设备及实验技巧
细胞培养常用设备及实验技巧常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
细胞工程实验总结
实验一、细胞培养实验器材和试剂的准备1、哪些物品适合于高压灭菌，并说明理由。
①材料：微孔滤膜(直径25 cm)：孔径为0.22μm、微孔滤膜(直径90 cm)：孔径为0.22 μm、过滤器(直径25 cm)。
②仪器和器材：眼科剪刀和镊子、长镊子、培养皿、培养瓶、试剂瓶（或盐水瓶）、移液枪、10毫升试管、10毫升离心管、巴氏吸管、5毫升（或10毫升）吸量管、不锈钢过滤器、塑料过滤器、注射器、超净工作台、干燥箱、高压灭菌锅、正压泵。
理由：适合于高压灭菌是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些耐高温的塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks液、PBS等)。
2、细胞培养常用液体如何配制和灭菌？1）PBS ：8.0g NaCl、0.2gKCl、2.2gNa2HPO4、0.12gKH2PO4溶于1000 mL双蒸水，高压灭菌，4℃保存。
（准备试剂瓶）灭菌方法：高压灭菌。
2）干粉培养基过滤除菌（先准备好不锈钢过滤器及滤膜，安装后高压灭菌，适度烘干；铝盒4个，三角瓶2个，容量瓶，不锈钢过滤器一套，酒精灯，酒精棉球3瓶，吸耳球3个，吸量管10毫升和5毫升各5根，分装用瓶，血清，超纯水，抗生素）认真阅读说明书。
说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。
这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。
配制方法（1L）：1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入大约500mL双蒸水。
2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基。
3）水洗袋内残留培养基，全部转移到容器内，轻轻搅拌，不要加热。
4）完全溶解之后，1袋1L粉状DMEM加3.7g NaHCO3，1mmoL∕L丙酮酸钠，即0.11g/L，添加双抗。
5）用双蒸水定容到1L，搅拌溶解。
注意不要过分搅拌。
6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值培养基在过滤前要保持密封。
细胞培养常用器材与试剂
器材与试剂干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等具体步骤1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
用HCl或NaOH调PH到7.4。
移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
3. 胰蛋白酶溶液：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
4. 0.05％胰蛋白酶－0.02%EDTA溶液称取胰蛋白酶粉末（1：250）0.05g，EDTA 0.02g，加入PBSA 100ml，0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装，于－20℃保存。
细胞培养所需耗材有哪些
细胞培养的路上，有多虐心就有多少需要值得注意的地方。
小小的平皿之中，细胞点点，引无数英雄竞挂东南枝。
正所谓“万事开头难”，即便是细胞复苏与保存这两件看似简单的事情，也能造成实验汪内心无比巨大的阴影面积。
下面就给各位实验室新手介绍一下细胞培养具体需要哪些耗材。
一、细胞培养基础试剂1、培养基：一般是用不完全培养基+10% FBS（胎牛血清）自己配的，有时也添加双抗预防细胞感染。
具体培养基类型根据你养的细胞类型去选择。
2、胰蛋白酶：简称是胰酶，消化细胞用的。
一般消化1-2 min，时间太短，细胞消化不完全，时间太长，会消化过度损伤细胞。
3、常用试剂：酒精，PBS 缓冲液。
二、细胞培养基础耗材1、细胞培养容器。
（1）培养瓶：如果你们是实验室小规模一般选50ML 100ML 250ML。
（2）玻璃瓶：培养基可以买胰酶的配置需要的成本很低所以准备两三个150ML的瓶子自己配就行了。
配置胰酶需要购买一种过滤器。
（3）细胞4102培养1653板（我们自己常用的有96空、24孔、6孔，当然还有其他的规格，可以根据需回要选择）。
（4）培养基：如果自己配置的话要买一些蓝盖的瓶子，一般规格会有1000ml、500ml、250ml、100ml的，也要买一些装血清的血清瓶，10ml的玻璃试管也要买一些。
2、耗材。
吸管、移液管、各种枪和枪头、离心管、封口膜等。
（1）玻璃吸管：长25-30CM 玻璃器2113皿总是摔5261断所以稍稍长一点比较好。
（2）EP管：4ML的塑料管、冻存管、这些塑料的管子是必须的。
（3）移液枪：（各种型号都要一把吧）这个不算是耗材但是枪头是耗材。
三、细胞冻存试剂和耗材1、冻存液：一般用10% DMSO+FBS+培养基组成，FBS 和培养基的比例依细胞类型决定，比较珍贵的细胞一般用90% FBS，一般的细胞可以用50% FBS+40% 培养基来配制。
2、胰蛋白酶等用于细胞培养的一般试剂。
3、冻存管、离心管、离心机、吸管、枪头、显微镜、冻存盒、冰箱、液氮罐等。
细胞培养的准备工作
细胞培养的准备工作细胞培养是生物医学研究中常见的实验技术，它是通过在培养基中提供适当的营养物质和环境条件，使体外培养的细胞可以持续生长和繁殖。
为了保证细胞培养实验的成功进行，准备工作是至关重要的。
在这篇文章中，我们将详细介绍细胞培养的准备工作，包括实验室设备准备、培养基配制以及无菌操作等关键步骤。
希望本文能够对你有所帮助。
一、实验室设备准备在进行细胞培养实验之前，首先需要准备实验室必备的设备，包括无菌工作台、培养箱、显微镜、培养皿、移液器、离心机等。
这些设备能够提供无菌、恒温、湿度适宜的环境，为细胞的生长提供良好的条件。
1. 无菌工作台：无菌工作台是进行细胞培养实验的重要设备之一，它能够为实验人员提供洁净的操作环境，防止外源微生物对培养细胞的污染。
2. 培养箱：培养箱提供了恒温和适宜的CO2浓度环境，使细胞在体外也能够保持正常的生长状态。
3. 显微镜：显微镜用于观察培养的细胞形态和数量，帮助实验人员了解细胞培养的情况。
4. 移液器：移液器用于在无菌条件下向培养皿中加入培养基、溶液和细胞悬液，是进行细胞培养实验中必备的工具。
5. 离心机：离心机用于离心培养皿中的细胞悬液，帮助实验人员收集和分离细胞。
以上设备的准备是细胞培养实验进行的基础，它们能够帮助实验人员进行规范的细胞培养操作，保证实验结果的准确性和可靠性。
二、培养基配制培养基是支持细胞生长和增殖所必需的营养物质和生长因子的混合物，其配制的质量和无菌性直接影响着细胞培养实验的成败。
通常来说，培养基包括基本培养基和添加剂两部分。
1. 基本培养基：基本培养基是细胞培养实验中不可或缺的组成部分，它提供了细胞生长所需的营养物质和生长因子，如含有丰富氧气和CO2的DMEM培养基、含有丰富营养物质的RPMI-1640培养基等。
在配制基本培养基时，需要严格按照配方比例将粉末溶解于无菌水中，再经过滤灭菌或高压灭菌处理，最终得到无菌的培养基液体。
2. 添加剂：培养基中常加入的添加剂包括胎牛血清、青霉素/链霉素、L-谷氨酸、非必需氨基酸等，这些添加剂可以增进细胞的生长和增殖，提高细胞培养的成功率。
细胞培养实验室的设备配置及用途
细胞培养实验室的设备配置及用途以下是一个典型细胞培养实验室的设备配置及其用途：1.生物安全柜：生物安全柜是细胞培养实验室的核心设备，用于提供无菌和安全的实验环境。
生物安全柜分为三个级别，根据需求可以选择不同级别的生物安全柜。
2.培养箱：培养箱是用于维持细胞培养所需的适宜环境条件，例如恒定温度（通常在37摄氏度），适宜的湿度和二氧化碳浓度。
培养箱通常配备有温度、湿度和CO2的控制器，以确保细胞在适宜的培养环境中生长。
3.倒置显微镜：倒置显微镜是观察和检测细胞培养过程中的细胞形态、生长状态和细胞染色等的重要设备。
4.细胞培养罐：细胞培养罐是用来培养细胞的容器，通常分为培养瓶和培养皿两种。
培养罐通常由无菌塑料材料制成，能够提供适宜的培养条件和保护细胞。
5.离心机：离心机用于离心培养细胞和沉淀物，以便进行培养基的更换、细胞分离和沉淀物的收集等操作。
6.显微镜：显微镜用于观察细胞培养的细胞形态、细胞分裂和细胞染色等。
7.细胞离心机：细胞离心机是用于从细胞培养物中分离细胞、细胞沉淀和细胞富集的设备。
8.培养箱温度计和湿度计：用于监测培养箱中的温度和湿度，以保持适宜的培养环境。
9.细菌培养箱：用于细胞培养实验室中的细菌菌种的保存和培养。
10.无菌工作台：无菌工作台是一个封闭的工作空间，提供无菌环境，用于处理无菌操作和培养物的分装、传递和传染性较强的试样的操作。
11.水培养装置：水培养装置用于提供无菌水用于培养细胞。
12.酶消化仪：酶消化仪用于将培养物中的细胞分离成单个细胞，以便后续的实验操作。
13.细胞计数仪：细胞计数仪用于计算培养物中细胞的数量。
14.PCR仪器：PCR仪器用于进行细胞培养实验中的基因表达、基因检测和基因定量等相关实验。
15.洗鼓机：洗鼓机用于将细胞从细胞培养物中剥离，以便后续操作。
动物细胞培养的基本技术
使用前半小时先开紫外线灯灭菌，再关灭菌灯启动风机 ，然后进行操作。使用后用75％的酒精擦洗台面。 切记：不要用有机溶剂擦拭挡风玻璃。
恒温培养箱
变通电热恒温培养箱 CO2培养箱
细胞培养总原则
1
2 3 4
无菌无毒害的环境 支持生长增殖的营养 其它类似体内的环境
维持细胞性状
(一) 细胞培养无菌无毒环境
实验室设计合理 常用设施及设备 培养器皿： 透明度好、无毒、利于细胞贴附和生长的 材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中 性硬度玻璃制品。
细胞培养无菌操作基本技术
工作环境及表面的处理 细胞培养所用玻璃及塑料制品的处理 培养液与培养细胞的处理
单蒸水冲洗3次
121℃高压蒸汽灭菌20min
塑料器材
常用的塑料器材有多孔培养板（4孔、6孔、 12孔、24孔、96孔）、培养皿、培养瓶及吸 头。 重复使用的处理步骤： 自来水刷洗 3％HCl或2％NaOH溶液浸泡过夜 双蒸水冲洗3次
自来水充分冲洗
紫外线直接照射或辐照灭菌
橡皮器材
首次使用： 自来水刷洗 5％ NaOH溶液煮沸15min 4％HCl盐酸煮沸15min 单蒸水冲洗3次 自来水冲洗8次
37℃，饱和湿度，5％CO2
其他设备
酶标仪
二、细胞培养常用器材及处理方法
玻璃器材 塑料器材 橡皮器材 金属器材 其他用品
玻璃器材
常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养 皿、吸管、离心管。 首次使用：
自来水刷洗 0.1％稀盐酸浸泡过夜 自来水冲洗
重复使用的处理步骤：
自来水刷洗 硫酸－重铬酸钾浸泡过夜 双蒸水冲洗2次 自来水冲洗10次 晾干、包装
细胞培养实验室常用仪器设备
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4
▪ 净化台使用注意事项
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自动双重纯水蒸馏器
▪ 纯水蒸馏器使用方法
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自动双重纯水蒸馏器
▪ 纯水蒸馏器使用方法
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自动双重纯水 蒸馏器
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8
自动双重纯水蒸馏器
▪ 纯水蒸馏器使用注意事项
细胞培养实验室常用的仪器设备
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1
实验目的
▪ 了解细胞培养中常用仪器设备的使用方法、 注意事项和保养方法。
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2
实验用品
▪ 净化台 ▪ 自动双重纯水蒸馏器 ▪ 培养箱 ▪ 抽气泵 ▪ 压力蒸汽消毒器 ▪ 电热干燥箱 ▪ 电热恒温培养箱 ▪ 电动吸引器 ▪ 液氮罐
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3
净化台
▪ 净化台的工作原理
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9
压力蒸汽消毒器
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10
电热恒温培养箱
▪ 适合细菌培养和封闭式细胞培养 ▪ 培养箱温度变化不要超过0.5℃ ▪ 箱内物品不宜过挤．保持热空气畅通流动和
箱内平均受热 ▪ 箱内底板因接近电热器，不宜放置实验物品
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电热恒温干操箱
▪ 主要用于烘干和干热消毒玻璃器皿
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12
液氮生物容器
▪ 主要用于冻存细胞、组织块等活性材料
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CO2培养箱
▪ 通常使用条件为37 ℃，5％ CO2
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CO2供气凋节方法
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冰箱
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一、细胞培养的必备设施
（一）无菌实验室 防止微生物污染和有害因素的影响 工作环境清洁、空气清新、干燥和
无烟尘。
（二）超净工作台
（三）恒温培养箱 变通电热恒温培养箱 CO2培养箱
(四)其他设备 倒置显微镜 电热鼓风干燥箱 电子天平 恒温水浴箱 离心机 压力蒸汽消毒器 液氮储存罐
（三）血清
血清必须贮存于–20 ～ -70℃，若存放于4℃， 请勿超过一个月。
一般厂商提供之血清为无菌，不需再无菌过滤。 若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养 基内一起过滤，勿直接过滤血清。
瓶装(500ml) 血清解冻步骤(逐步解冻法): 20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室温下全溶 后再分装，一般以50 ml 无菌离心管可分装40～ 45 ml。勿直接由–20℃直接至37℃解冻，因温度 改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。
二、 灭菌
实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖， 高压蒸汽灭菌121℃, 15 lb, 20 分钟，置 于oven 中烘干。
实验用玻璃pasteur pipet 以干热灭菌 170℃, 4 小时。
吸管、培养瓶、手术器械等置饭盒内高 压蒸汽灭菌121℃, 15 lb, 20 分钟，置于 oven 中烘干。
（3）使用液（1×）配法
取母液甲和母液乙各一份，加双蒸水18份，以 115℃高压灭菌25分钟(以免葡萄糖破坏)，置 室温后4℃保存
（二）培养基（维持液、营养液）
目前常用的基础培养液均已商品化，如 RPMI1640，MEM，DMEM，F12等，可 根据培养需求合理选择，主要成分是氨 基酸、维生素、碳水化合物、无机离子 及其他一些辅助物质。
（三）橡皮器材（各种瓶或试管的塞子、 盖子）
5%NaOH煮，水洗，4%盐酸煮，水洗 8~10次，单蒸水洗三次、二蒸水洗一次。
（四）金属器材（剪刀、镊子、手术刀、 解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各 种型号针头等）
纸擦去表面的油脂，洗衣粉煮沸，或用 1%碳酸氢钠煮沸15分钟，水洗， 95% 酒精纱布擦干，包装灭菌������
8.77g
加去离子水或双蒸水至1000mL 乙液：0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液
磷酸二氢钠(无水) 2.4g 氯化钠 8.77g
加去离子水或双蒸水至1000mL 甲、乙液于4℃保存，使用时按比例配制
成所需pH浓度，高压灭菌后室温保存。
Hanks液 (1)母液甲(20x)配法 ① NaCl(A.R) 160g
对细胞附壁有利
保护作用解除毒性物质对细胞的毒性作 用；免受冻存，搅拌，损伤
其他：利于染色体分布良好
（二）其他溶液 pH调节液: 消化液: trypsin-EDTA （0.25%） 抗生素溶液 0.5%台盼兰(Trypan blue)液
司徒镇强
灭活（heat-inactivation）
是指56℃, 30 分钟加热已完全解冻之 血清。加热过程中须规则摇晃均匀。此 热处理之目的是使血清中之补体成份 (complement) 去活化。除非必须，一般 不建议作此热处理。
血清对细胞的作用
提供细胞增殖所必须的生长因子（A因 子促进；B、C因子对细胞有抑制生长作 用；D因子促进细胞粘连）
（一）玻璃器材的消毒处理方法 清洁液（或用2%磷酸三钠或用洁消精）
浸泡 自来水冲数次，洗净，烤干 烤干干净玻璃器皿在酸缸 (洗液:浓硫酸+
高锰酸钾)浸泡24h以上 自来水冲数次，洗净后分别用一次与二次
去离子水冲洗干净 烤干，包装
（二）塑料器材的消毒处理方法
用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜（单 用或交叉处理），水洗，单蒸水，三蒸 水浸泡过夜，凉干，紫外线或辐射灭菌
粉末培养基配制(以1 升为例)：
取粉末培养基溶于800 ml milli-Q 水中，搅拌使其溶 解。
称取适量之NaHCO3 粉末溶于水中，搅拌使其溶 解
混后溶液之pH 应为7.2-7.4，pH 试纸检测。若为太 碱，可再通入CO2 气体调整pH。（培养基以真空 帮浦通过过滤膜时，pH 会升高0.1-0.2）补水至900 ml。
酶标仪
第三节 细胞培养常用器材 和培养基
一、பைடு நூலகம்用器材
（一）玻璃器材 培养皿 滴流瓶 刻度吸管、离心管等 培养瓶 烧杯、量筒等 三角烧瓶
普通螺口瓶
螺口刻度血清瓶
中间螺口刻度离心管
（二）金属器材
二、细胞培养常用器材清洗方法
液体用10 % 蒸汽高压灭菌121 ℃, 15 lb, 20 分钟处理。
三、常用溶液、培养液及其配制
（一）平衡盐溶液 称量要准确 物质的纯度 物质的可溶性 物质的不稳定性 贮存液
磷酸盐缓冲液（PBS）
甲液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 磷酸氢二钠(无水) 28.4g 氯化钠
细胞培养器械、用液的配制和消毒
本次课内容
掌握无菌操作 细胞培养常用实验器材（玻璃器皿、橡胶制品、
正负压除菌滤器、塑料制品）的清洗要领、清洗 步骤和注意事项。 掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求 了解灭菌方法，掌握高压湿热灭菌方法及操作注 意事项。 掌握培养液的灭菌方法操作注意事项。
KCl(A.R) 8g MgSO4.7H2O（A.R) 2g
MgCl.6H2O(A.R) 2g 依次溶于800mL双蒸水中，前一物质溶后再 加后一种。 ②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL双蒸水中，溶时 不断搅拌（此液应单配，单溶）。 混合上述两溶液双蒸水补至1000mL，向其中 加2mL氯仿作为防腐剂，置4℃保存。
以0.1 或0.2 mm 无菌过滤膜过滤灭菌，同时分装至 无菌容器中，标示培养基种类、日期、瓶号等，贮 存于4℃。(血清亦可加入培养基中一起过滤)
液体培养基贮存于4℃ 冰箱，避免光照， 实验进行前放在37℃ 水槽中温热。
液体培养基(加血清) 存放期为六个月， 期间glutamine 可能会分解，若细胞生长 不佳，可以再添加适量glutamine。
(2)母液乙(20×)配法
① Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g
KH2PO4(A.R) 1.20g
葡萄糖(A.R) 20.0g
溶于800ml双蒸水中。
②0.4%酚红液0.4g酚红放在玻璃研钵后加 0.01 N NaOH 11.28mL，加水至100mL，过滤
用双蒸水补至1000mL,其中加氯仿2mL作防腐 剂，置4℃保存。