植物组织中硝态氮的测定植物伤流液中无机磷含量的测定

植物组织中硝态氮的测定

【实验目的】伤流是植物根系主动吸水的证明，不同植物或同一种植物在不同季节的伤流强度均不同，伤流强度反应根系生理活动强弱和根系又吸收面积大小。伤流除含有大量水分外，还含有各种无机盐及根部合成有机物包括植物激素。硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

【原理】硝态氮与硝酸试粉作用，生成粉红色的偶氮化合物，其颜色深浅与硝态氮的浓度成正相关，将样品显示的颜色与标准比色阶进行比较，可快速求得硝态氮的浓度。硝酸试粉主要是由锌粉、柠檬酸、ɑ-萘胺、对氨基苯磺酸混合而成，硝态氮与硝酸试粉反应如下：

NO 3-+H +

NO 2-+Zn 2++H 2O

SO 3H NH 2+2H SO 3H

N +N +2H 2O

对氨基苯磺酸重氮化合物NH 2

SO 3H

N +N +

N NH 2 ɑ-萘胺重氮化合物对-苯磺酸-偶氮-萘胺

【实验材料】接骨木伤流液

【实验试剂】硝酸试粉、50%醋酸、50mg/L 氮流液

【实验步骤】在比色盘的五个孔中加入如表所示溶液：

5min 后即成5个不同浓度20、40、60、80、100 mg/mL 硝态氮的比色阶。再用6号孔中加入伤流液5滴及硝酸试粉1勺，搅拌，5min 后，将其所显粉红色与标准比色阶比较确定样品液中硝态氮的浓度。

【实验结果及处理】

1.经过比色样品溶液的颜色介于2~3之间。

2.根据结果，伤流液中硝态氮的浓约为(10/5+20/10)/2=2mg/mL

【讨论】

1. 如若伤流液浓度过高，超过容量范围可先将伤流液稀释一定倍数后在进行滴加。

2.本实验中所测的硝化氮的含量不准确，因为其原因又一下几点，首先是由于

方法的原因导致的，由于进行比色来测定伤流液的浓度，因实验者不同，对色差的辨别不同，很可能导致偶人误差。其次是由于伤流液在被收集后是没有进行密封的，里面的水分可能会一定的散失，导致所测定的值偏高。

方法的改进：植物样品经硫酸+过氧化氢凯氏法消煮后,用直接吸光光度法获得硝态氮[1](包括亚硝态氮).

原理及方法如下：

硝态氮在经过硫酸2过氧化氢消煮的植物消煮液中, 硝态氮和亚硝态氮以硝酸根离子(NO3-) 存在, 利用NO3-在紫外光区220 nm处有特征吸收峰, 可以直接测定试液的吸光度来定量硝态氮。测定时, 吸取5 mL 消煮液于50 mL 比色管中, 无氨水稀释至刻度, 摇匀, 在波长210 nm处, 用1 cm石英比色皿, 以无氨水作参比, 在紫外分光光度计进行硝态氮测定。

3.通过伤流法测定植物中硝态氮含量中，伤流法需要收集伤流液，此环节消费

时间长。

[1] 吕伟仙,葛滢，吴建之,常杰.植物中硝态氮、氨态氮、总氮测定方法的比较研究.光谱学与光谱分析.V ol124 ,No12 ,pp2042206

植物中伤流液中氨基酸总量的测定—茚三酮比色法

【实验目的】根系是植物吸收水分和矿质元素的主要器官，也是许多有机物的合成和储存器官，在伤流液中除含有矿质离子外，还含有氨基酸、激素、糖、等有机物。测定伤流液中氨基酸含量，可以了解根系活力强弱。

【实验原理】氨基酸与茚三酮乙醇溶液可发生显色反应，生成紫红色化合物，颜色深浅与氨基酸含量成正比。除脯氨酸与羟胺酸外，其他各种氨基酸显色的色调与深浅相差不大，因此利用此反应可定量测定伤流液中氨基酸的总量。

【实验材料】接骨木伤流液

【实验试剂】3%茚三酮乙醇溶液

【操作方法】

1.去两只试管按照下面编号，并按照下（表二）进行加液，在沸水浴中加热两份钟，取出观察颜色是否变化。

3%茚三酮溶液 5 5

【实验结果】一号管中颜色不变，2号管中加热后由无色变成蓝紫色。伤流液中含有有理的氨基酸。

【结果讨论】

1. 本实验只是鉴定了伤流液中存在游离氨基酸，但不能确定其含量，应该在确定伤流液中含有游离氨基酸后用分光光度法测定其中氨基酸的含量。

2.通过本实验确定了一种简单鉴定伤流液中游离氨基酸的方法。

植物伤流液中无机磷含量的测定

【实验目的】磷参与植物体内多种代谢，促进碳水化合物的合成，转化和运输，施磷对提高作物产量和品质有明显的效果。通过本实验掌握植物体内磷含量的测定方法及其原理。

【实验原理】测定磷含量的方法主要有磷钼蓝比色法，可用于直接测定植物组织中可溶性磷含量。

磷钼蓝比色法：在适宜的酸性条件下，磷酸能与钼酸作用形成磷钼酸铵，并被抗坏血酸或氯化亚锡等还原剂还原，生成蓝色的磷钼蓝，并在650nm处又最大吸收峰，其颜色深浅与含磷量成正比，可直接比色测定。

【实验材料】接骨木伤流液

【实验试剂】10mg/L磷林液、订磷试剂

【实验方法】

1. 标准曲线的制作

取6支试管，分别编号0~5，按下表加入磷标准溶液及其他试剂，以制作标准曲线。另取1支试管编号6，作为样品管，按照下表加入各试剂。并将各管充分摇匀，在45℃水浴中保温25分钟，以空白为对照，在分光光计650nm处测定吸光度。。以吸光度值为纵坐标，磷含量为横坐标，绘制标准曲线。并根据6号试管的吸光度值，从标准曲线上查出伤流液中德可溶性磷的含量。

表三

项目

管号

0 1 2 3 4 5 6

各管含磷量(ug)

10ug/L磷标准溶液(mL) 蒸馏水（mL）

定磷试液（mL）

吸光度（A650）0 2 4 6 8 10X

0 0.2 0.40.6 0.8 1.0 样品0.2

3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 2.8 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0

0 0.103 0.180 0.285 0.392 0.490 0.025

【实验结果】

1.根据实验结果得出标准曲线

表四标准曲线

因为R2越接近1其偏差越小，本实验可得到R2=0.9982很趋近于1，故标准曲线线性相关性良好。

2. 实验结果

由Y=0.0485x 可知：6号管中的可溶性磷含量=0.250/0.0485=5.88ug.

【结果讨论】

1.本实验由于所取的接骨木伤流液中水分可能会有一定的损失，导致所测的结果偏大。