核桃外植体的组织培养
美国山核桃组织培养研究
美国山核桃组织培养研究作者：张文学印迈续晨贲爱玲蔡小宁来源：《安徽农学通报》2019年第11期摘; 要：以美国薄壳山核桃嫩茎为外植体，研究了硝态氮和不同外源激素组合对其芽诱导和生长的影响。
结果表明，硝态氮为美国薄壳山核桃组织培养所必需的，较高含量的细胞分裂素有利于芽的诱导和生长，硝态氮和细胞分裂素BA可增加愈伤组织的数量;适合的芽诱导培养基配方为1/2 B5+NAA 0.1mg/L+BA 2.0mg/L。
关键词：美国山核桃;组织培养;基本培养基;硝态氮中图分类号; S79 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2019）11-0022-2美国山核桃（Carya illinoensis），又名薄壳山核桃、美国薄壳山核桃、碧根果，其果实是一种老少咸宜的坚果食品，深受消费者的欢迎;因其木质坚硬，在家具制作和军工等方面也有一定的应用。
开展组织培养技术的研究，可以加快繁殖，更快地推广应用，同时也可以为育种研究提供新的途径。
当前，国内外有一些对美国山核桃组织培养的报道[1-4]，但仍然存在诸多问题，需要从更多方面开展研究。
为此，笔者开展了基本培养基的硝态氮和外源生长素、细胞分裂素组合对美国薄壳山核桃芽的诱导和生长的影响研究。
1 材料与方法1.1 材料美国薄壳山核桃嫩茎。
1.2 培育种子苗选取大小相对一致的碧根果种子，用37℃自来水浸泡7d左右。
待种壳裂开移至沙盆，在28℃恒温培养箱中催芽，在较湿润的条件下培养14d左右，待裂口处伸出白色小芽，然后在装有田间土壤的花盆里播种，3～4d左右小芽出土。
1.3 消毒灭菌从野外大树上摘取嫩枝，修剪至适当大小后放进烧杯，在自来水下冲洗干净，备用。
消毒时先用70%的酒精浸泡20s，倒掉酒精，立即加入灭菌剂。
共设置4个处理，分别为：0.1%升汞灭菌5min;0.1%升汞灭菌10min;0.1%升汞灭菌15min;84消毒液灭菌10min。
灭菌时间到了后，倒掉灭菌剂，用无菌水冲洗4次，接种于改良WPM添加BA0.5mg/L的培养基上，置25℃，光照时间12h，黑暗时间12h周期下培养。
核桃外植体褐化影响因素及增殖培养研究
核桃外植体褐化影响因素及增殖培养研究核桃（Juglans regia L.）是一种重要的经济作物，其果实富含营养，具有很高的经济和医疗价值。
然而，在核桃栽培和贮藏过程中，不可避免地会出现外植体褐化的现象，极大地降低了其品质和商业价值。
因此，研究核桃外植体褐化的影响因素及其增殖培养技术对于促进核桃产业的发展具有重要意义。
核桃外植体褐化是指在离体培养过程中，外植体的组织和细胞发生不可逆的氧化酶介导的褐化反应，导致外植体组织变色，细胞死亡，并最终导致外植体失去再生和生长能力。
目前，有关核桃外植体褐化的影响因素的研究还相对较少。
根据目前的研究成果和实践经验，本文将从以下几个方面进行分析和讨论。
首先，外植体来源是影响核桃外植体褐化的重要因素之一。
核桃外植体通常采用幼嫩的离体子叶、叶片或幼苗作为外植体材料。
这些外植体在采集和处理过程中很容易受到伤害和污染，进而引发褐化反应。
因此，在采集和处理外植体材料时，应注意采用无菌操作，并尽可能缩短材料与外界接触的时间，减少伤害和污染的发生。
其次，外植体的培养基成分也对核桃外植体褐化起着重要的影响。
适宜的培养基成分可以提供必要的营养物质，调节植物内部激素平衡，促进外植体的生长和分化。
在核桃外植体培养中，常用的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐和维生素等。
合理调节这些成分的浓度和比例，既能够满足外植体正常的生长需求，又能够降低外植体组织的褐化程度。
另外，外植体培养条件也是影响核桃外植体褐化的重要因素之一。
温度、光照和湿度等环境因素对外植体的生长和分化具有直接影响。
在核桃外植体培养过程中，适宜的温度和光照条件可以促进外植体的生长和分化，同时降低外植体组织的褐化程度。
此外，适当控制培养基的pH值、添加有效抗氧化剂和调节外植体的培养周期等措施，也对核桃外植体的褐化有一定的抑制作用。
最后，外植体的处理和转运也可能对核桃外植体褐化产生影响。
因为在采集、处理和转运过程中，外植体会受到细胞损伤、氧化酶的激活等因素的影响，进而引发褐化反应。
核桃组织培养技术研究综述
影 响核 桃 组 织 培 养 成 功 的 关键 ， 过 查 阅大 量 相 关文 献 ， 以 上 几 个 方 面 做 了较 为 全 面 的概 述 ， 通 对 并提 出 了相 关 问 题 的 讨 论 ， 以
期 为 以 后 的 核 桃 组 培 工 作 开展 提 供 借 鉴 和依 据 。
关 键 词 ： 桃 ； 织培 养 ； 究 进展 核 组 研 中 图 分 类 号 ：６ ４ １ ￥ ６ ． 文献标识码 ： Ａ
ａ ｄ ｔ ｅｒ ｓａ ｃ ｎｔ ｅｒｏ ｉｇｔｃ ｎｑ ｅｏ ｉｓ ｅｃ ｌ ｒｄ ｓｅ ｌ ｇａ ｅａｌ ｈ ｊ ｒｆｃｏ ｓｉ ｉｓ ｅｃ ｌｕｅｒｓ ａｃ ｆ ｕ ｌｎ ｎ ｈ ｅｅ ｒｈ ｏ ｈ ｏ ｔ ｅ ｈ ｉｕ ｆ ｓｕ ｕｔ ｅ ｅ ｄｉ ｒ ｌ ｔｅｍａｏ ａ ｔｒ ｔｓｕ ｕｔ ｒ ｅ ｅ ｒｈｏ ｇａ ｓ ｎ ｔ ｕ ｎ ｎ Ｊ
核桃 系胡 桃科 核桃 属 落 叶乔 木 ， 重 要 的 坚 果 和木 是
本 油料 树种 ， 世 界 四大 干 果 之 一 ， 是 以其 很 高 的 经 济、 生态 和社 会效 益 而被 广泛 栽培 ， 其潜 在 的营养 价
值 和 医疗 保 健功 能也 日益 受 到 国内外专 家学 者 的关 注， 深受 消 费 者 喜 爱 。 目前 ， 桃 在 我 国被 广 泛 栽 核
培， 种质 资 源也极 为 丰富 。
年 Ｃ ａｕ ａ １次 报 道 了核 桃 完 整 植 株 的形 成 过 ｈ ｌｐ 第 程， 该研 究 以黑核 桃实 生苗 茎段 为外植 体 ， 改 良的 在
ＭＳ培 养基 上 获 得 了 完整 植 株 ， 转 移 到 泥 沙 中培 并
养 ［ 。１ ８ ５ ９ ４年 ， 国加 州 大学 的 Ｄｒ ｅ 首 次 培养 出 ］ 美 ｉｒ ｖ 奇 异核 桃 （ ｒｇ ａ ． ｉｄ ｉ） 管 生根 苗 。１ ８ ． ｅ ｉ ｘＪ ｈ ｎ ｓｉ试 ９７ 年 ，ｒ ｅ Ｄ ｉ ｒ等 利 用 ＤＫｗ 培 养 基 ， 过 器 官 发 生 途 ｖ 通 径， 经过 一整 套生 根 驯化技术 ， 功 的繁殖 出奇异 核 成 桃 生根试 管 苗并定 植 于大 田Ｌ 。核 桃组 织培 养 的进 ６ ］ 展， 使得 利用 基 因工 程 技术 培 育 出抗性 良种 成 为 可 能 。１ ８ ９ ７年 ， 着 核 桃 生 物 技 术 研 究 逐 步 深 入 ， 随 Ｄ ｎ ｅ ｅ 等 首次 报道 利用 基 因工程 技 术 ， 功地 将 ａ ｄｋｒ 成 外 源基 因导 人 核 桃 细胞 ， ］ 取得 了 预期 的效 果 。与 国外相 比 ， 内核 桃组 织培 养研究 起 步较 晚 ， 国 进展 也 较 缓慢 。北 京农业 大 学于 ２ Ｏ世 纪 ８ Ｏ年代 最早 开始 进 行核桃 组 织培 养 研 究 。刘 淑 兰 、 碧 文等 以核 桃 韩 茎尖、 叶柄 和 叶 脉 等 作 为 外 植 体 ， 导 出 了 愈 伤 组 诱
美国山核桃组织培养研究
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2.2 硝态氮和不同外源激素组合对芽诱导和生长的影 响 设计了4种不同的培养基配方，1号培养基为1/2B5基 本成分+NAA0.1mg/L+BA2.0mg/L；2号培养基为1/2B5基 本成分减去硝酸钾+NAA0.1mg/L+BA2.0mg/L；3号培养基 为1/2B5基本成分+NAA0.1mg/L；4号培养基（下转 43 页）
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［6］吴鹤敏，张仙美，李志辉，等 . 芝麻新品种漯芝 19 号的特征特性及 栽培要点［J］. 农业科技通讯，2012（8）：234-235.
［7］吴鹤敏，张仙美，郑磊，等 . 芝麻新品种漯芝 21 号的选育［J］. 中国 种业，2015（8）：74-75.
［8］吴鹤敏，张仙美，郑磊，等 . 芝麻新品种漯芝 22 号的选育［J］. 中国
表 2 不同培养基配方对薄壳山核桃芽诱导的影响
1 材料与方法
1.1 材料 美国薄壳山核桃嫩茎。 1.2 培育种子苗 选取大小相对一致的碧根果种子，用 37℃自来水浸泡7d左右。待种壳裂开移至沙盆，在28℃恒 温培养箱中催芽，在较湿润的条件下培养14d左右，待裂 口处伸出白色小芽，然后在装有田间土壤的花盆里播种， 3～4d左右小芽出土。 1.3 消毒灭菌 从野外大树上摘取嫩枝，修剪至适当大 小后放进烧杯，在自来水下冲洗干净，备用。消毒时先用 70%的酒精浸泡20s，倒掉酒精，立即加入灭菌剂。共设置 4 个 处 理 ，分 别 为 ：0.1% 升 汞 灭 菌 5min；0.1% 升 汞 灭 菌 10min；0.1%升汞灭菌15min；84消毒液灭菌10min。灭菌 时间到了后，倒掉灭菌剂，用无菌水冲洗4次，接种于改良 WPM添加BA0.5mg/L的培养基上，置25℃，光照时间12h， 黑暗时间12h周期下培养。7d后统计外植体污染发生的 情况，并将未受动污染的外植体转接到新鲜的培养基上， 14d后观察嫩枝外植体存活的情况。 1.4 培养基 基本培养基成分为改良WPM、1/2B5和增 减硝态氮，添加不同数量的生长素和细胞分裂素。以上 培养基均添加30g/L的蔗糖，用5.6g/L的琼脂粉固化培养 基，在灭菌前调整pH至5.9左右，培养基配好后在高压蒸
‘金薄香’核桃组织培养及试管外嫁接体系的建立
‘金薄香’核桃组织培养及试管外嫁接体系的建立本研究以‘金薄香’核桃的茎段为材料,进行了本品种组织培养及试管外嫁接体系的建立。
结果表明：(1)‘金薄香’核桃茎段初培最佳取材时间为每年的5-6月,此时采集的外植体材料生活力强,对外源激素敏感,分化能力也较强。
(2)‘金薄香’核桃初培最佳培养基为MS培养基,其中添加了1.0mg·L-16-BA,0.3mg·L-1IBA及30g·L-1蔗糖。
(3)以核桃专用培养基DKW 为基本培养基,添加1.0mg·L-16-BA和0.01mg·L-1IBA,获得了‘金薄香’核桃试管嫩茎的最高增殖系数和生长系数。
(4)‘金薄香’核桃试管嫩茎在1/2MS(即大量元素减半,硝铵是DKW培养基中的一半)培养基中,添加2.0mg·L-1IBA,暗处理7d,然后光照培养,获得了‘金薄香’核桃组培苗的最高生根率,达65.56%。
(5)‘金薄香’核桃试管嫩茎在培养基1/2MS中,添加10mg·L-1IBA,暗培养6d,然后直接扦插在育苗基质上,生根率最高达86.7%。
(6)试管内生根苗在自然光下,以不打开瓶膜炼苗1周再打开瓶膜炼苗1周,移栽成活率最高,成活率达到70%。
(7)试管内生根苗移栽在蛭石和珍珠岩混合的基质中,最有利于‘金薄香’核桃试管苗的移栽,成活率可达72%。
(8)试管外嫁接所用砧木种子的处理,以沙藏种子处理效果最好,萌发率达到80%,且出苗整齐。
(9)试管外嫁接时,砧木苗出土5-7d嫁接成活率最高,达77.5%,此时真叶尚未展开,幼苗嫩茎呈红色。
(10)试管外嫁接所用试管嫩茎在太阳散射光照射下炼苗1周再进行嫁接,成活率高达82.5%。
(11)试管外嫁接时,用新鲜柳树皮包裹嫁接口,嫁接成活率可达86.7%。
(12)试管外嫁接时,保留核桃种子和完整根系,嫁接成活率可达72.7%。
(13)试管外嫁接过程中,在砧木上劈接时,嫁接口长度在1.5-2.0cm时,成活率最高,达到71.1%。
美国黑核桃组织培养技术
Ξ美国黑核桃组织培养技术宋锋惠,史彦江,卡德尔(新疆林业科学研究院,新疆乌鲁木齐830002)[摘 要]采用组织培养方法对美国黑核桃进行组织培养研究。
结果表明:获得外植体的最佳方法是用新鲜且经层积处理的种子育苗,再用其实生苗的顶芽或茎段;适合黑核桃茎尖(段)培养的培养基为1 2M S (其中大量元素用量减半,微量元素用量不变),且培养基中其他物质的含量为,VB 15m g L ,VB 62m g L ,烟酸2m g L ,腺素2m g L ,肌醇按1 2M S 量,62BA 1.5m g L ,NAA 0.05m g L ;外植体接种用流水冲洗,适当缩短转瓶周期(每10～15d 转瓶一次),可减轻褐变现象。
[关键词]美国黑核桃;组织培养;新疆[中图分类号]S 664.1;S 604+.3 [文献标识码]A [文章编号]1003-8981(2004)01-0022-03T issue Culture Techn ique i n Am er ican Black W a lnutS ONG Feng -Hu i ,SH IYan -J i ang ,KA D e -Er(Fo restry A cadem y of X injiang A utonomous R egi on ,U rum uqi 830002,X injiang ,Ch ina )Abstract :T he asexual culture of Am erican black w alnut w as studied by tissue culture .R esults indicated that the op ti m al m ethod of obtaining the exp lantlet is to use the ti p bud o r stem fragm ents of the seedlings raised w ith stratified fresh seeds .T he selected m edium fo r bud differentiati on w as 1 2M S ,trace VB 15m g L ,VB 62m g L ,nico tinic acid 2m g L ,gland 2m g L ,ino sito l w ith the sam e amount as the 1 2M S ,p lus 62BA 1.5m g L +NAA 0.05m g L .A fter the exp lant w as rinsed w ith w ater ,and the ro tating peri od sho rtened to once per 10215h ,brow ning w ill be m uch lessened .Key words :Am erican black w alnut ;tissue culture ;X injiang A utonomous R egi on黑核桃既是优良的干果树种,又是很好的用材树种,采用常规嫁接、播种方法繁殖黑核桃,易使其发生遗传变异,不能保持品种的优良性状。
新疆野生核桃的组织培养和植株再生
新疆野生核桃的组织培养和植株再生曾斌;何天明;吴玉霞;王新;童莉【摘要】[目的]采用植物离体组织培养快繁技术繁殖新疆野生核桃,为野生核桃资源的进一步保护、开发和利用提供可行途径.[方法]以生长在新疆天山西部伊犁谷地巩留县南部的凯特明山中的野生核桃沟当年结的野生核桃种子为试材,进行催芽处理并播种于营养基质中成苗后,选取茎段进行诱导芽分化、生长和生根成苗试验.[结果]筛选出茎段离体初代培养基为DKW+ BA 1.0 mg/L；继代培养和壮苗培养基为DKW+BA 1.0mg/L+IBA 0.01 mg/L;野生核桃在离体繁殖条件下较难生根,实验采用间接诱导生根法,即用50 mg/L IBA 浸渍处理试管苗基部60 min,然后转至不含生长调节物质的1/2 DKW培养基,先黑暗诱导2周后,再在16 h/d 光照下培养,可诱导试管苗生根率达96％以上.而后生根的试管苗在珍珠岩基质中培养,进行有效的移栽驯化管理,获得了较理想的移栽成活率.[结论]成功地进行了新疆野生核桃离体组织培养及植株再生,为新疆野生核桃的快速繁殖和细胞水平的遗传改良提供了一条有效的途径.%[Objective] The purpose of this study was to reproduce J. faUax Dode in Xinjiang by using Plant Tissue Culture in vitro to provide a viable means of further protection, development and use of it in Xinjiang. [Method] The precious seeds of /. Fallax Dode in Xinjiang were used to establish a feasible and practicable micropropagation system in vitro, and the stem fragments were used for bud differentiation, bud growth, and plantlet rooting. [Result] Explantlets were initiated on basal DKW with hormone (BA 1.0 mg/L) . The new shoots that had emerged from the primary buds were successively transferred to DKW with hormones ( BA 1.0 mg/L and BA 0. 01 mg/L) . Several measures to promote in vitro rootingwere studied for micropropagated shoots of walnut. It was found that successful rooting was closely related to inducing method, and indirect rooting method, which was firstly dipped in IB A solution SO mg/L for 60 min, then transferred to the 1/2 DKW medium without any growth regulators and incubated two weeks under dark condition and subsequently transferred to light culture at 16 h photoperiod. The rooting rates of more than 96% were achieved. Transplant was done in the same time, and humidity was reduced gradually. In this way the survival rate was higher. [Conclusion]The study of J. Fallax Dode in Xiniang was carried out successfully in vitro tissue culture and plant regeneration to provide an effective way for the rapid propagation of genetic improvement and cell level of J. Fallax Dode in Xinjiang.【期刊名称】《新疆农业科学》【年(卷),期】2011(048)007【总页数】4页(P1227-1230)【关键词】新疆野生核桃;离体繁殖;植株再生【作者】曾斌;何天明;吴玉霞;王新;童莉【作者单位】新疆农业大学林学与园艺学院,校级重点植物组织培养实验室乌鲁木齐830052;新疆农业大学林学与园艺学院,校级重点植物组织培养实验室乌鲁木齐830052;新疆农业大学林学与园艺学院,校级重点植物组织培养实验室乌鲁木齐830052;中国科学院新疆生态与地理研究所生物多样性研究室,乌鲁木齐830011;中国科学院新疆生态与地理研究所生物多样性研究室,乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】S58;S664.10 引言【研究意义】新疆野生核桃(J.fallax Dode)属核桃科(Juglandaceae),核桃属(Juglans L.),野生于新疆伊犁的巩留和霍城,成果林状态,属于国家二级保护级别的野生植物。
美国山核桃的组织培养
1 引言美国山核桃(Carya illinoensisK·Koch)又名薄壳山核桃、长山核桃，为胡桃科山核桃属落叶乔木。
原产美国南部和墨西哥北部,树高可达20～70m,其海拔要求在800～1600m;年平均气温15～20℃,冬季平均气温1～10℃;生长季4～10月份降雨量至少5000mm,无霜期250天以上;要求土层深厚(2m以上)潮湿且排水良好,土壤的PH值为5.8～7.0的砂质土和沙壤土以及粘土。
美国山核桃壳薄,仁饱满,并具有特别香润而爽口的食味,是世界上著名的油料干果树种。
美国山核桃于1900年左右引入我国,先后在江苏的江阴、南京,浙江的杭州,福建的莆田等地栽植。
引种范围较广,北到北京,南至海南岛,但以江苏、浙江、福建和安徽等地引种较多。
美国山核桃树形高大,树姿优美,树冠开展,根系发达,少病虫害,生长速度快,是良好的行道树和庭园绿化树种。
7年生树平均胸径为16.95cm,平均冠幅为36.32㎡,10年生树平均胸径为21.67cm,平均冠幅为82.1㎡。
木材坚韧,纹理致密,不易伸缩和翘裂,可作雕刻、家具等用材。
树体寿命长,可达百年以上,盛果期持续时间长,果实采收容易,坚果耐贮藏。
坚果外壳薄而光滑美观,取仁容易,仁肥大,出仁率高达50%以上,仁香略带甜味,口感好。
果仁营养丰富,含油量高,含脂肪高,是高档的营养保健品。
美国山核桃的经济效益高，在试验基地内通过连续几年调查其产量,10年生树产量可达18～40kg,15～25年生树产量可达25～60kg,以市场价60元/kg计算,株产产值可达1080～3600元,以目前按美国山核桃丰产栽培技术规范每667㎡最少栽10株,单产值可达10800～36000元。
若大规模推广后,价格下降为20元/kg,产值也可达10000元/667㎡以上。
美国山核桃壳薄,仁饱满,并具有特别香润而爽口的食味,是世界上著名的油料干果树种。
目前,全球美国山核桃年产量为12万t,其中美国年产量为10万t,年销售量达9万t,每1t约1.7万美元,是干果中价格最高的,但仅能出口约700t。
核桃组织培养研究综述
初代培养中的问题
核桃的初代培养是组织培养中最关键的一步，核桃枝条长期 暴露在田间，容易滋生各种各样的细菌，有的细菌甚至长入 组织内部。外植体即使经过细致的表面灭菌，仍然会发生污 染。另外，核桃树体内富含酚类物质，克服污染和褐化这两 大难题，是核桃初代培养成功的关键 。
继代培养中的问题
这一阶段的主要任务是繁殖大量有效芽苗，用芽增殖的方法 比通过愈伤组织分化，更有利于保持遗传稳定性和旺盛增殖， 较少出现再生能力丧失等问题，植物生长调节剂在试管苗增 殖中起着决定性的作用。但在植物体内，内源激素难以测定。 因此，外源激素加入的种类及用量还要通过试验来确定。
生根培养中的问题
外植体选择与消毒研究
核桃的不同品种，其外植体分化与再生的能力差异很大。 早实核桃、山核桃、黑核桃、“薄皮香“、“汾阳核桃 ”、等
都有培养成功的报道。而其他品种则很少见到。 国外学者在 M S培养基上培养核桃分生组织、茎尖、顶芽
时发现：2～ 3 mm长的茎尖、带 1～ 2个顶芽的茎段为最 适培养材料 ;分生组织则不适合于作培养材料。 李颖等利用青霉素和多菌灵来控制污染得到：多菌灵能有 效地杀灭真菌，而青霉素在初代培养时只能起抑制细菌作 用。 傅玉兰等试验得出了美国山核桃的最佳灭菌方法：外植体 在 70% 酒精中浸 30 s，再将其用 0. 2%升汞液 (加数滴吐 温 80)浸 15 min，无菌水冲洗 10次，最后接种。培养基中 添加适量活性炭，前期暗培养。
外植体褐化问题
核桃组织培养研究
核桃组织培养研究核桃是我国重要的经济林树种。
近几年国内外研究人员在核桃离体培养方面取得了一定的进展,但初代培养污染率高、离体培养褐变严重、芽增殖系数低、器官再生难等问题一直未能得到很好解决。
本文以核桃叶片、叶柄、茎段为外植体,对其离体培养涉及的多种影响因素进行了研究。
主要研究结果如下:1.带腋芽茎段以0.1%HgCl2+吐温80消毒2次5min效果较好,存活率75.27%,污染率5.38%;叶片外植体以0.1%HgCl2消毒8min 效果最佳,存活率79.87%,污染率3.23%。
2.茎段初代培养的最佳褐变抑制步骤为:1)茎段外植体采集后立即保存在灭菌的抗氧化溶液(50mg/LAC+200mg/LVC+100mg/LPVP)中;2)外植体经冲洗消毒后浸泡在该抗氧化溶液中待用;3)外植体经切割后接种到含有100mg/LPVP-40的DKW培养基中,外植体褐变率为7.29%。
3.不同基本培养基对腋芽萌发及芽苗生长的效果不同,以DKW为诱导腋芽萌发的最佳培养基,腋芽启动率92.54%,有效芽率72.06%。
4.细胞分裂素和生长素单独使用或组合使用都对腋芽增殖有显著效果,DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L为腋芽增殖的最佳增殖培养基,增殖倍数5.07,平均芽高 1cm。
5.蔗糖含量和NAA含量对壮苗培养均有极显著影响,最佳壮苗培养基为DKW+NAA2mg/L+蔗糖40g/L,高生长量达2.27cm,平均茎粗0.28cm。
6.采用二步生根法,首先用1/4DKW+IBA5.0mg/L暗培养12d,然后转至不含生长调节剂的1/2DKW培养基中,光下培养,20d后个别植株产生了不定根。
7.愈伤组织诱导以叶柄作为外植体效果最佳。
三种生长调节剂对愈伤组织诱导率的作用从大到小依次为:NAA>TDZ>6-BA。
当培养基为DKW+NAA0.5mg/L+TDZ1.0mg/L+6-BA0.5mg/L时,叶片和叶柄诱导率达到70%以上,愈伤组织为黄绿色的疏松颗粒。
核桃组织培养
0 1培养基种类
种类;目前核桃培养基种类主 要有WPM,DKW,MS改良等，但 效果最好的应是WPM的茎 段放入一组培养基中，培养 20天以后长出丛生芽，丛生 芽长到3cm后，分株移到新的 一组培养基中。在培养室中 进行培养做后续试验核桃试 管 苗的诱导和分化，培养室 的温度在28℃左右。湿度为 80%土2%，光照时间为12 小 时/天。
激素
Chinese companies will no longer remain in the hard stage and they are also promoting a culture Chinese companies will no longer remain
in the hard stage and they are also wang ling yan a culture
01 外植体消毒
消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用 自来水冲洗。外植体消毒时在超净台上操作，先用70%酒精 浸泡10至30s，以无菌水冲洗2到3次，然后按材料的老、嫩 和枝条的坚实程度，分别采用2%次氯酸钠浸泡10至15分钟或 用0.1%升汞浸5到10分钟。消毒时要不断搅动，使植物材料 与消毒剂充分地接触，最后用无菌水冲洗3至5次。
03 激素的作用
hormone
激素在核桃组培中有着重要作用。组织 培养基中激素主要用于刺激腋芽不断分 化、生长和诱导不定芽的产生，IBA主 要促进腋芽生长。许多研究表明，高浓 度的细胞分裂素和低浓度的生长素配合 使用，有利于核桃愈伤组织的形成。激 素对核桃组培苗的生长有促进作用，可 以提高瓶苗转化酶、超氧化物歧化酶等 的活性，增强呼吸速率和叶片数，提高 苗的繁殖系数。
培养基种类及成分对核桃叶片组织培养褐变的影响
培养基种类及成分对核桃叶片组织培养褐变的影响王法章;张春梅【摘要】以核桃叶片为试材，探讨了不同培养基种类和某些培养基成分对其离体培养褐变的影响。
结果表明：核桃叶片外植体在 MS纸桥培养基上培养10天发生褐变率较低，1/2MS次之，MS、B5和N6培养基外植体褐变率最高。
添加200～500毫克/升柠檬酸可有效减轻外植体褐变；添加2000～2500毫克/升活性炭对褐变有作用但没有柠檬酸效果好；而抗坏血酸对减轻外植体褐变无显著作用。
【期刊名称】《吉林农业》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】2页(P87-88)【关键词】核桃;外植体;褐变;培养基【作者】王法章;张春梅【作者单位】河西学院农业与生物技术学院，甘肃张掖 734000;河西学院农业与生物技术学院，甘肃张掖 734000【正文语种】中文【中图分类】S664.1核桃（Juglans regia）是世界四大干果之一。
目前世界核桃年产量92万吨，我国年产30万吨，占世界三分之一[1]。
核桃味甘、性温，可补肾、固精强腰、温肺定喘、破血祛瘀、润燥滑肠、补虚强体，提供营养、消炎杀菌，养护皮肤、防癌抗癌、补脑。
植物组织培养技术在众多植物良种繁育上的成功应用为核桃良种的快速繁殖提供了一条有效途径[2，3]。
王娟[4]等认为适当缩短转瓶周期可抑制金薄香核桃茎段外植体褐变的发生。
章铁[5]等采用褐变抑制剂能明显抑制大别山山核桃不同树龄及不同部位的茎尖褐变。
张小红[6]等在培养基中加入核桃硫代硫酸钠能防止褐变，并提高该种基因型核桃外植体萌芽率和新梢率。
许传俊[7]等认为不同类型培养基对外植体的分化会产生不同的影响。
尚旭岚[8]等认为采用液体培养基可有效克服鹤望兰外植体褐变。
梅兴国[9]认为培养基中无机盐含量越低，外植体发生褐变程度越低，培养基中无机盐浓度过高，可导致细胞褐变。
利用组织快繁技术，加速良种及其砧木无性苗的繁育，具有很高的商业价值。
然而在核桃组织培养中，外植体一般在接种后就出现褐变，最后导致外植体褐变死亡，因此难以建立无性繁殖体系[10，11]。
核桃茎段器官离体再生培养
核桃茎段器官离体再生培养Chen Xiaoming;Wei Luyang;Cai Ling;Liang Wenhui;He Jiajun;Chen Daixi 【摘要】以核桃(Juglans regia)茎段为外植体,对核桃茎段器官离体再生培养技术进行研究.结果表明:4—5月采集的核桃茎段,通过系列表面消毒后,0.1％升汞灭菌10 min,效果最佳.在附加1.0 mg/L 6-BA的DKW诱导培养基中,萌芽率为60％以上.通过SH+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L IBA进行增殖培养,芽增值系数为4.32.以1/2 SH+8.0 mg/L IBA进行不定根诱导,生根率为63.18％,根数2～3条.【期刊名称】《广西林业科学》【年(卷),期】2019(048)002【总页数】5页(P235-239)【关键词】核桃;茎段;离体再生【作者】Chen Xiaoming;Wei Luyang;Cai Ling;Liang Wenhui;He Jiajun;Chen Daixi【作者单位】;;;;;【正文语种】中文【中图分类】S664中国是核桃（Juglans regia）栽培起源地之一，在我国已有2000多年的人工栽培历史。
虽然核桃起源于北温带地区，但对气候适应性强，在我国亚热带和热带地区的27个省、市、自治区均有广泛分布和大面积栽培，是我国重要的阔叶经济木本树种之一[1-2]。
核桃营养丰富，富含人体所需的18种氨基酸、有益脂肪酸、多种矿质营养、维生素和丰富的卵磷脂[3]。
当前，全国各地大力发展核桃产业，然而大规模栽培核桃，培养大量具有优良性状的种苗是前提。
在长期栽培和人为选择过程中，我们获得了很多核桃优良品种和类型，但是不完善的繁殖技术阻碍了核桃优良品种的推广。
传统的核桃苗木繁殖，一般采用嫁接的方法，存在繁殖系数低、速度慢、成活率不稳定、受穗条数量限制等不利因素[4]。
应用组织培养技术，核桃组培苗遗传稳定性好，生产周期大大缩短，为核桃的良种苗木规模化生产提供巨大的潜力。
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18 18 18 18 18 18 18 18 18
无菌数 No bacillus number
个
7 8 10 11 12 11 12 13 11
无菌率 No bacillus efficiency
%
38． 9 44． 4 55． 6 61． 1 66． 7 61． 1 66． 7 72． 2 61． 1
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39（28） ：17156 － 17157
责任编辑 宋平 责任校对 况玲玲
核桃外植体的组织培养
杨海波1 ，王 娟1 ，周鹏程1 ，孟利峰1 ，高 涛2
（ 1． 山西省农业科学院果树研究所，山西太谷 030815； 2． 山西农业大学园艺学院，山西太谷 030801）
时间 Time min
3 4 6 3 4 6 3 4 6
表 2 不同浓度 HgCl2 处理对外植体 b 灭菌效果的影响 Table 2 Effect of different concentration HgCl2 on explant b sterilization
接种数 Inoculation number
摘要 ［目的］研究核桃组织培养与快速繁殖的方法。［方法］以“金薄香”1 号带腋芽的茎段为外植体进行试管繁殖。［结果］腋芽萌生 最佳培养基： DKW + BA 1． 5 mg / L； 分化及继代最佳培养基： DKW + BA 0． 4 mg / L + IBA 0． 01 mg / L； 生根最佳培养基： 1 /2DKW + IBA 1． 0 mg /L，不过生根率只有 23． 3% ，效果不太理想； 二步生根法效果不错，生根率可达到 36． 7%。［结论］该研究筛选获得适宜“金薄香”1 号 核桃快繁的最佳培养条件，为建立核桃快繁体系、扩大核桃苗繁育规模奠定基础。 关键词 核桃； 外植体； 组织培养 中图分类号 S 664． 1 文献标识码 A 文章编号 0517 － 6611（ 2011） 28 － 17156 － 02
褐化数 Browning number
个
2 3 3 5 4 4 5 5 6
褐变率 Browning efficiency
%
28． 6 37． 5 30． 0 45． 5 33． 3 36． 4 41． 7 33． 3 54． 5
2． 2 继代、增殖培养 将诱导产生的芽苗转接到 9 种增殖 培养基上培养 25 d，结果表明，试管苗在增殖培养基①上的 增殖效果最好，芽苗生长健壮，增殖系数高。在随后的几代 培养过程中，有些试管苗出现了玻璃化现象。针对此现象， 将 BA 浓度由 0． 5 mg / L 调整成 0． 4 mg / L。结果，该增殖培养 基对克服玻璃苗有明显的效果，玻璃苗逐渐减少至完全消 失，且增殖效果更好。因此，对“金薄香”1 号核桃进行增殖 培养的最佳方案为 DKW + BA 0． 4 mg / L + IBA 0． 01 mg / L。 2． 3 生根培养 2． 3． 1 一步生根法。由表 3 可知，试管苗在生根培养基② 上的生根效果最佳，10 d 开始生根，25 d 后根系发育良好，地 上部分生长正常，生根率为 23． 3% 。
Tissue Culture of Walnut Explant YANG Hai-bo et al （ Pomology Institute，Shanxi Academy of Agricultural Sciences，Taigu，Shanxi 030815） Abstract ［Objective］The aim was to study the method of tissue culture and rapid propagation of walnut． ［Method］The explants were collected from stem with axillary buds，the tube propagation of Jinboxiang1 was studied． ［Result］ The optimum culture medium for germination of the axillary buds： DKW + BA 1． 5 mg / L； for differentiation and subculture： DKW + BA 0． 4 mg / L + IBA 0． 01 mg / L； for rooting： 1 /2 DKW + IBA 1． 0 mg / L，however，rooting efficiency was only 23． 3% ，this result was not satisfied． The method of taking root with two steps was ideal，and taking root efficiency reached to 36． 7% ． ［Conclusion］ The optimal culture conditions of rapid propagation of Jinboxiang 1 walnut were selected，which laid the foundation for constructing rapid propagation and amplifying walnut planting scale． Key words Walnut； Explant； Tissue culture
表 1 不同浓度 HgCl2 处理对外植体 a 灭菌效果的影响 Table 1 Effect of different concentration HgCl2 on explant a sterilization
HgCl2 浓度 HgCl2 concentration % 0． 050
0． 075
0． 100
核桃（ Juglans regia L． ） 古称胡桃，属胡桃科胡桃属，原产 于欧洲东南部及亚洲西部，我国是核桃原产地之一［1 －2］。由 于核桃是重要的坚果和木本油料树种，具有很高的经济价 值，且位居世界四大干果（ 核桃、扁桃、腰果、榛子） 之首，以其 很高的经济、生态及社会效益在世界各地广泛栽培。我国核 桃栽培历史悠久，分布广泛，种质资源极为丰富［3］。但由于 核桃扦插不易生根，嫁接又因接口处易发生氧化褐变而难以 成活，从而限制了核桃苗木的生产和推广。植物组织培养技 术在众多植物良种繁育上的成功应用为核桃良种的快速繁 殖提供了一条有效途径。近几年，中外研究人员在核桃离体 培养及试管苗生根等方面虽取得了一定的进展，但初接种污 染高，外植体分化较难，离体培养物褐化、退化严重，增殖系 数低等问题一直未能得到很好解决［4］。试验以“金薄香”1 号核桃当年生带腋芽的茎段为材料，研究了从初培、继代增 殖到生根各阶段的培养基成分及培养条件，试图建立一套较 完整的核桃无菌培养体系。这套体系的建立对“金薄香”1 号核桃苗的繁殖具有重大的现实意义。 1 材料与方法 1． 1 材料 1． 1． 1 外植体采集与处理。外植体采集从腋芽萌动到枝条停 止生长均可，一般以本地 5 月初 ～ 7 月初为宜。外植体材料取 自山西省农科院果树研究所核桃园，供试品种为“金薄香”1 号。取材的时间多在晴天中午进行。因枝条暴露在强烈阳光 下，有利于杀菌［5］。选取当年生半木质化新梢，特别注意枝上 有饱满的芽子，去掉顶部的嫩枝及枝上的叶子，将枝条剪成 3 ～ 4 cm 带芽的茎段。先用洗洁精水漂洗 10 min 左右，再用自 来水冲洗至将洗洁精基本清除，然后泡在无菌水中备用。 1． 1． 2 培养基。基本培养基为 DKW［6］。初培、继代培养
褐化数 Browning number
个
4 3 4 6 5 5 7 5
褐变率 Browning efficiency
%
36． 4 33． 3 40． 0 50． 0 38． 5 35． 7 77． 8 62． 5
HgCl2 浓度 HgCl2 concentratio100
作者简介 杨海波（ 1978 － ） ，男，山西太谷人，助理研究员，硕士，从事 果树育种及栽培生理研究，E-mail： gssjstgb@ 163． com。
收稿日期 2011-07-04
基： DKW 基本培养基中加入 3． 0% 白糖、0． 5% 琼脂，再附加 不同浓度的 6-BA（ 6-苄基氨基嘌呤） 和 IBA（ 吲哚丁酸） 。其 中，初培培养基： DKW + BA 1． 5 mg / L。增殖培养基中，6-BA 分 3 个浓度梯度： 0． 5、1． 0、1． 5 mg / L； IBA 分 3 个浓度梯度： 0． 01、0． 03、0． 05 mg / L，组合成 9 种培养基： ①DKW + BA 0． 5 mg / L + IBA 0． 01 mg / L； ②1 /2DKW + BA 0． 5 mg / L + IBA 0． 03 mg / L； ③1 /2DKW + BA 0． 5 mg / L + IBA 0． 05 mg / L； ④DKW + BA 1． 0 mg / L + IBA 0． 01 mg / L； ⑤DKW + BA 1． 0 mg / L + IBA 0． 03 mg / L； ⑥DKW + BA 1． 0 mg / L + IBA 0． 05 mg / L； ⑦DKW + BA 1． 5 mg / L + IBA 0． 01 mg / L； ⑧DKW + BA 1． 5 mg / L + IBA 0． 03 mg / L； ⑨DKW + BA 1． 5 mg / L + IBA 0． 05 mg / L。生根培 养基： 1 /2DKW（ 只有大量元素减半） 培养基中加入 2． 0% 白糖、 0． 5% 琼脂，再加入不同浓度的 IBA。一步生根法有 3 种生根 培养基类型： ①1 /2DKW + IBA 0． 5 mg / L； ②1 /2DKW + IBA 1． 0 mg / L； ③1 /2DKW + IBA 1． 5 mg / L。二步生根法 IBA 溶 液有 2 个浓度： 50、100 mg / L，浸泡时间分别为 15、30 min，然 后接种在 1 /2DKW 无激素培养基上。 1． 2 方法 在超净工作台上，先用无菌水冲洗 2 次，70% 酒精处 理 1 次，时间为 30 s。然后分别用 0． 050% 、0． 075% 、0． 100% HgCl2 浸泡 3、4、6 min。外植体的粗度用 a、b 表示（ a 表示直径≤0． 5 cm 的茎段； b 表示直径 ＞0． 5 cm 的茎段） 。最后用无菌水清洗 4 ～ 5 次，剪掉茎段下方一小截，避免 HgCl2 渗入而影响营养吸收，然后 接种在初培培养基上，生长 20 d 后观察其灭菌效果。将在初培 培养基上萌发的芽苗转接到 9 种增殖培养基上培养 25 d，观察芽 的增殖情况。选取生长健壮、苗高 2 ～ 4 cm 的增殖苗，转接到 3 种生根培养基上诱导生根（ 一步生根法） ，或分别用 50 和 100 mg / L的 IBA 溶液浸泡15 和30 min，然后接种到1/2DKW 无激素 培养基上（ 二步生根法） 。培养温度 22 ～ 26 ℃ ，每天光照时 间为 10 ～ 14 h。培养 25 d 后观察其生根情况。 2 结果与分析 2． 1 初代培养 无菌体系的建立对于整个试验是非常重要