微生物分子生物学

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微生物遗传学与分子生物学研究

微生物遗传学与分子生物学研究

微生物遗传学与分子生物学研究是现代生物学领域中最重要的研究领域之一。

微生物在生态环境、生物医药、农业等方面的应用,都离不开微生物遗传学和分子生物学的研究成果。

微生物遗传学是研究微生物遗传变异、基因表达、遗传重组等规律的学科。

微生物遗传学领域中最重要的研究技术是基因工程技术,也是微生物遗传学研究的基石。

利用基因工程技术对微生物的遗传物质进行修改和调控,可以加速微生物菌株研究的进程。

分子生物学是研究生物分子结构、功能和调节机制的学科。

分子生物学中最常用的方法是 DNA 聚合酶链式反应 (PCR) 技术,它可以放大微生物菌株DNA的特定片段,使之可以进行测序和分析。

除此之外,分子生物学还可以使用抗生素筛选方法、南方杂交检测方法、原位杂交和转化技术等方法来研究微生物的遗传特性。

微生物学中最常见的研究对象是细菌和真菌。

对细菌和真菌进行遗传学和分子生物学研究的目的,是为了了解微生物菌株的生长环境、代谢途径以及病原性等特性。

此外,微生物菌株的基因功能和表达机制,也是微生物遗传学和分子生物学的研究重点。

在微生物学领域中,有许多微生物遗传学和分子生物学的研究成果已经被应用于生产、医疗、农业等领域。

例如,厌氧菌领域的基因工程技术和微生物代谢途径研究,可以应用于生产发酵酸奶和沙门氏菌类等产品;医疗领域的微生物遗传学和分子生物学研究,可以应用于抗生素研发和微生物感染的诊断和治疗。

微生物遗传学和分子生物学研究的主要问题之一是微生物的基因多样性。

不同的微生物菌株可能具有不同的基因组成和代谢途径。

微生物基因的多样性和代谢途径的差异,导致了微生物在不同的环境和生态系统中繁殖和生长的差异。

针对微生物菌株的遗传多样性和代谢途径差异,需要对不同的微生物菌株进行比较分析,以更好地理解微生物的生长特征和生态环境要求。

微生物遗传学和分子生物学研究也需要解决一些难题,如微生物功能基因的组合和转化、基因表达的调控机制以及代谢途径的改进等问题。

微生物生态学研究中的分子生物学方法

微生物生态学研究中的分子生物学方法

微生物生态学研究中的分子生物学方法微生物是地球上最为丰富、多样且广泛分布的生物,有着重要的生态功能。

在微生物生态学研究中,许多问题需要考虑微生物的多样性、生态学分布及其作用和适应性。

传统的微生物学研究通常依赖于纯培养和形态学特征进行分类和鉴定,但存在着很大的缺陷,许多微生物无法进行纯培养,而且在分布及功能上存在巨大的多样性和复杂性。

因此,利用分子生物学方法,在微生物生态学研究中推进更为深入的探索和解决问题尤为重要。

分子生物学方法已经成为微生物学研究中的常规手段。

其中,分子生态学作为微生物生态学研究的一个重要分支,是利用微生物群落的DNA序列来描述微生物的多样性和结构、分布模式、演化规律以及生态功能。

分子生态学是利用分子生物学技术,以微生物群落DNA为物质基础,分析微生物群落的结构及其变化和生态功能的研究领域。

常见的分子生态学方法有PCR-DGGE、PCR-SSCP、PCR-RFLP 等。

PCR-DGGE技术是一种评价微生物群落构成的分子生物学方法,也是分子生态学研究中最常采用的一种方法。

此技术通过扩增轮廓分析电泳,能够在不进行序列测定的情况下,迅速知道样品中微生物群落的构成情况。

DGGE是一种革命性的电泳技术,可以使得同样长度、不同序列的DNA分子发生不同程度的变性而达到不同的电泳迁移率,因此,能够从PCR扩增产物中分离出不同种群、不同数量的DNA序列,可用于分析种群的构成和动态变化。

PCR-SSCP技术是用来研究微生物群落中小亚基的分子生物学方法。

它可以通过分析不同峰的数量及大小,评估群落的多样性和结构。

其原理是在一定条件下,所有长度相同的PCR产物的突变体将由于核酸热变性、缺陷组态和电泳带电性质等不同而形成不同的电泳迁移率,从而显示在聚丙烯酰胺凝胶上。

PCR-RFLP技术是将PCR扩增的外显子或内含子序列用限制酶切法切开后,根据限制酶切后DNA片段的数目、大小、分布等特征,依据电泳迁移率或其他方式进行分离鉴定。

微生物分子生物学及其应用

微生物分子生物学及其应用

微生物分子生物学及其应用微生物是世界上最小的生命体,但却具有强大的生命力和不容忽视的影响力。

传统的微生物学主要研究微生物的形态、生长特性、代谢、分类等基础性问题,但微生物的真正奥秘则隐藏在其微小的分子世界中。

微生物分子生物学是以分子为研究对象的微生物学分支,它深入研究微生物的基因、蛋白质和代谢产物等分子机制,揭示微生物的生命活动及其调控规律,对于全面认识微生物的生命特征和功能、发掘微生物资源和应用微生物技术具有重要意义。

一、微生物分子生物学研究的内容1.基因结构与调控微生物的基因组比较简单,一般只包含一个或几个小片段的DNA,它们的基因组结构具有重要的信息学特征,如基因密度和排列方式等。

微生物基因组中的基因数量很少,但它们占据了大部分的基因空间,这表明微生物中的基因编码和调控非常紧密,并且具有重要的生物学功能。

微生物的基因调控是控制其生命活动的重要机制,包括生长、代谢、适应、转录和翻译等。

微生物的基因调控是多层次的,包括转录因子、信使RNA和全局调控等多种调控机制。

通过研究这些调控机制,可以深入了解微生物的生命活动过程及其调控规律。

2.蛋白质组学微生物蛋白质组学是鉴定和分析微生物蛋白质的一种手段。

微生物蛋白质组学的研究对象包括细胞膜蛋白、代谢酶、蛋白激酶等。

通过对微生物蛋白质的鉴定与分析,可以深入了解微生物的代谢、调控与适应等生物学规律。

3.代谢组学微生物代谢组学是研究微生物代谢产物及其调控的科学体系。

其中,主要研究微生物细胞内代谢物的组成、分布和途径,并且通过分析相关代谢产物的调控,研究其逐渐建立的代谢途径与调节机制。

通过代谢组学的研究,可以了解微生物的代谢特性和功能,并探究微生物的发掘和应用。

二、微生物分子生物学在应用中的作用1.微生物资源发掘微生物资源发掘是微生物分子生物学取得重要应用的一种方式。

近年来,随着分子生物学技术的快速发展,人们开始对微生物的分子生物学特性进行了深入的研究。

例如,通过鉴定和分析微生物蛋白质和代谢产物,可以深入了解微生物的异质性及其功能,并将其应用于微生物资源的开发和利用。

大学生物易考知识点分子生物学遗传学生物化学微生物学生态学

大学生物易考知识点分子生物学遗传学生物化学微生物学生态学

大学生物易考知识点分子生物学遗传学生物化学微生物学生态学大学生物易考知识点一、分子生物学:分子生物学是研究生物体的生命活动过程中分子层面的规律和机制的学科。

以下是大学生物易考的分子生物学知识点:1. DNA结构与功能在分子生物学中,DNA是核酸的一种,是基因遗传的物质基础。

它由磷酸、糖和含有氮的有机碱组成。

DNA的结构是一个双螺旋状,由两条互补的链组成。

DNA能够在遗传信息传递中起到重要的作用。

2. RNA的种类与功能RNA是一类核酸,主要参与蛋白质的合成过程。

常见的RNA有信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)和核糖体RNA(rRNA)等。

mRNA负责将DNA中的遗传信息转录到蛋白质合成过程中,而tRNA 和rRNA则参与具体的蛋白质合成。

3. 蛋白质的合成与折叠蛋白质是生物体中功能最为多样的大分子,参与生物体内许多生理过程。

蛋白质合成包括转录和翻译两个过程。

在翻译过程中,蛋白质的折叠是一个关键步骤,决定了蛋白质的功能。

4. 基因调控基因调控是指细胞根据需求调节基因的表达水平。

在基因调控中,转录因子和激活子是非常重要的调节元件。

它们可以与DNA中的启动子结合,促进或抑制基因的转录过程。

二、遗传学:遗传学是研究物种遗传特征和变异规律的学科。

以下是大学生物易考的遗传学知识点:1. 孟德尔遗传定律孟德尔遗传定律是遗传学的基础,描述了物种遗传性状的传递规律。

根据孟德尔的定律,个体的某一性状受到两个因子的控制,这两个因子来自于父母,分别称为等位基因。

而且在基因的表现中,存在一种显性和隐性的关系。

2. 遗传距离和基因连锁遗传距离是遗传距离的一个指标,描述了两个基因在染色体上的相对位置。

而基因连锁则是指在染色体上相邻的两个基因在遗传过程中往往一起传递给子代,这称为连锁。

3. 染色体异常和基因突变染色体异常和基因突变是造成遗传变异的重要原因。

染色体异常包括染色体数目异常和结构异常,如染色体缺失、重复、倒位等。

微生物遗传与分子生物学

微生物遗传与分子生物学

微生物遗传与分子生物学(5*15+1*25=100分)本课程主要涉及到微生物中主要的模式菌株:原核微生物: 放线菌(链霉菌),大肠杆菌,芽孢杆菌,乳酸菌,古菌等。

真核微生物:汉逊酵母,酿酒酵母,白念珠菌等。

第一章概论基因的符号:每个基因:如色氨酸基因trp;同一表型的不同基因:如trpA或trpB等。

当染色体上发生缺失时可用Δ表示(如ΔtrpA或ΔtrpA);基因突变:如亮氨酸缺陷型leu-;抗药性基因:r表示抗性,加s表示敏感如链霉素抗性基因表示为strr,敏感基因表示为strs。

1、微生物基因突变一般分几种类型,突变有什么生物学意义?(谭老师)基因突变可从突变发生方式和突变引起的表型改变和遗传物质改变等方面进行分类。

按突变体表型特征的不同,可把突变分为以下4个类型:1). 形态突变型2). 生化突变型3). 致死突变型:按突变所引起的遗传信息的改变,又可把突变分为:1). 错义突变2). 同义突变3). 无义突变根据遗传物质的结构改变,可分为碱基置换、移码、DNA片段插入和缺失。

根据突变发生的方式,可分为自发突变和诱发突变。

突变的生物学意义:基因突变导致了基因表达出来的性状发生了改变,对突变个体本身来讲,绝大多数是有害的,因为现有的生物基本上都适应了现在的环境。

但是环境是可变的,如果生物不变,那就很可能被淘汰。

所以,对整个生物群体来说,突变使群体不会灭亡。

环境不断改变,生物通过不断突变而适应, 也就使其被保存下来。

最终,物种的面貌特征与祖先不同,所以说,突变是生物进化的内因,是进化的主要动力。

无数事实说明了一个真理,即宇宙间的所有物种变是绝对的,不变则是相对的。

2、应用于链霉菌基因组编辑与大片段DNA克隆的技术都有哪些?能否用在你们今后的实验中?(刘钢老师)基因组编辑是指在基因组水平上对DNA序列进行改造的遗传操作技术。

原理是构建一个人工内切酶,在预定的基因组位置切断DNA,切断的DNA在被细胞内的DNA修复系统修复过程中会产生突变,从而达到改造基因组的目的。

微生物分子生物学及其应用前景

微生物分子生物学及其应用前景

微生物分子生物学及其应用前景微生物是一类古老的生命形式,它们如一只只微小的军队,在自然界中承担着重要的生物功能。

随着科学技术的不断发展,微生物分子生物学逐渐崭露头角,并在医学、环保、工业等方面展现出广泛的应用前景。

一、微生物分子生物学的研究对象微生物分子生物学是研究微生物分子结构与功能的学科,其研究对象包括微生物基因组学、蛋白质组学、代谢组学等。

微生物基因组学主要研究微生物基因组序列,从而探寻微生物生物学结构、功能和适应性等问题。

蛋白质组学则以分析微生物中所有蛋白质的相互作用和代谢途径为研究对象。

代谢组学则关注微生物代谢系统,通过新型的技术手段,解析微生物代谢通路,揭示微生物生命活动机理。

二、微生物分子生物学在医学领域的应用微生物分子生物学的研究使我们对微生物的机理与结构有更深的认识,同时也为微生物在医学领域的应用提供了理论支持。

微生物分子生物学与临床医学的结合,可以大幅度地改善医学诊断、治疗的效率和精度。

特别是在诊断技术的发展方面,微生物分子生物学为高通量测序和微生物分子检测技术的开发提供了极为重要的基础。

三、微生物分子生物学在环保领域的应用环保领域的目标是降低环境污染,增强生态系统的稳定与适应能力,并推进重要的生物技术的发展。

微生物分子生物学在环保领域有广泛的应用,包括生物酶的制备、生物之间的互作与相互作用、微生物的分离与鉴定、生物复合膜等。

其中,微生物分离与鉴定是环境监测中不可或缺的研究领域。

四、微生物分子生物学在工业领域的应用微生物分子生物学在工业领域的应用主要集中在微生物发酵过程的改进,包括发酵条件的优化、代谢通路的改良以及生物转化的研究等。

此外,微生物代谢产物的分离、提纯、鉴定和改良,也是微生物分子生物学在工业领域中的一项重要应用。

五、微生物分子生物学的应用前景随着基因工程技术的不断进步和新一代测序平台的出现,微生物分子生物学在医学、环保、工业等领域的应用前景愈加光明。

随着生物技术的不断革新,微生物分子生物学研究的工作范围也在不断扩大,未来肯定会有更广泛的应用空间和市场。

分子生物学方法鉴定微生物

分子生物学方法鉴定微生物

分子生物学方法鉴定微生物分子生物学是分子水平上研究生物学的一门学科,可以应用于微生物的鉴定和研究。

在分子生物学中,通过分析微生物的DNA、RNA和蛋白质,可以确定微生物的物种、进化关系和功能特性。

以下将介绍一些常用的分子生物学方法来鉴定微生物。

首先,核酸提取是分子生物学研究的基础步骤。

通过核酸提取可以获得微生物样本中的DNA或RNA。

一般常用的提取方法包括酚-氯仿法、离心法、磁珠法等。

提取得到的核酸可以用于后续的PCR扩增、测序、芯片分析等。

其次,PCR扩增技术是分子生物学中最常用的方法之一、通过PCR扩增可以在微生物样本中放大特定的基因片段,并进行进一步的分析。

PCR扩增主要包括两个步骤:变性和退火,其中变性是将DNA双链解开,退火是将引物与靶序列互补结合。

通过PCR扩增可以获得大量的特定基因片段,用于进一步的测序和鉴定。

PCR扩增得到的目标基因片段可以进行多种分析方法。

其中,序列测定是一种常用的方法。

通过测定PCR扩增得到的基因片段的序列,可以确定该基因片段在数据库中的匹配度,并据此确定微生物的物种。

此外,序列测定还可以通过比对进化树的构建,研究微生物的进化关系。

此外,还可以利用PCR扩增得到的基因片段进行限制性酶切分析。

限制性酶切分析可以将PCR扩增得到的基因片段在特定的酶切位点上切割成片段,并通过凝胶电泳进行分离和检测。

通过比较不同微生物基因片段的切割模式,可以确定微生物的物种和进化关系。

除了PCR技术外,还可以利用酶切多态性(RFLP)分析来鉴定微生物。

RFLP是一种对PCR扩增得到的基因片段进行限制酶切,并通过凝胶电泳对切割产物进行分离检测的方法。

不同微生物在特定限制酶切位点的序列差异可以通过RFLP分析来鉴定。

最后,还可以使用引物扩增反应-随机扩增的多态性DNA(RAPD)技术来鉴定微生物。

RAPD技术是一种利用随机引物扩增基因组DNA的特定区域,通过凝胶电泳分析扩增产物,根据扩增产物的差异进行微生物的鉴定。

分子生物学方法鉴定微生物

分子生物学方法鉴定微生物
3. 蛋白质水平:氨基酸序列分析、凝胶电泳和血清学反应 等
4. 基因或DNA水平:核酸分子杂交、(G+C)mol%、转 化和转导、16SrRNA寡核苷酸族分分析、DNA或RNA 核苷酸序列分析等
类别
随着分子生物学的迅速发展,细菌的分类鉴定从传统的 表型、生理生化分类进入到各种基因型分类水平
DNA碱基比例的测定

G+C
▪ (G+C)mol%= A+T+G+C
X100%
通过核酸分析鉴定微生物遗传型
生物GC比的特点
• ①亲缘关系相近的种,其GC比也相近;反之,GC比相近的
两个种,它们的亲缘关系则不一定都很接近。
• ②GC比差距很大的两个种,其亲缘关系必然较远。 • ③GC比是建立新分类单元时的可靠指标
▪ GC比相差<2%时,没有分类学上的意义; ▪ GC比相差在2.5%~4.0%时,为同一种的不同菌株; ▪ GC比相差>5%时,为不同种;
分稳定的 ; 5. rRNA某些核苷酸序列非常保守,历经进化仍能保持原初 6. 相对分子量适中 原核生物rRNA:23S(2900)、16S(1540)和5S(120) 真核生物rRNA:28S(4000)、18S(2300)和5.8S(160)
核糖体构造和组分模式图
原核生物
小亚基 (30S)
大亚基 (50S)
PCR扩增步骤如下:(1)双链DNA(模板)加热变性为单链; (2)引物与模板DNA单链结合; ( 3) 引物延伸(扩增)。
通过 16S rRNA基因片段分析对微生物进行分类鉴定
▪ 16S rRNA基因片段的分析方法主要包括以下4种: ▪ 一是将 PCR扩增后微生物16SrDNA序列,提交到GeneBank采用BLAST

微生物生物学和分子生物学研究进展

微生物生物学和分子生物学研究进展

微生物生物学和分子生物学研究进展近年来,微生物生物学和分子生物学研究发展迅速,这两个学科的相互交叉和融合不断推动着研究的进展,为生命科学的发展和应用提供了深厚的理论和实践基础。

1. 微生物生物学的研究进展微生物是一类具有单细胞或多细胞体,体积通常微小,可以生存于广泛的环境中的生物体, 是地球上最古老和最适应各种恶劣生境的一群生物。

在生态系统中,微生物居于重要地位,参与几乎所有的生物和化学过程,对环境的物质转化、能量流转与维持、维持地球生态平衡等方面都起着重要的作用。

近年来,随着技术的发展,微生物生物学的研究进展突飞猛进。

从微生物分布、分类与演化途径的研究,到微生物代谢、生长、传递、致病等研究,各个方面都取得了重大的进展。

比如,对微生物的新种类的发现和分类研究,为微生物系统发展提供了更加精准和科学的基础; 利用元基因组学将不同环境中的微生物DNA进行高通量测序,从而能够揭示微生物基因组结构和功能,加快了微生物生命活动研究的速度。

同时,利用化学、动物细胞、基因修饰技术等手段研究微生物代谢通路,对抗生素、激素、酶等的生产和应用具有重要的意义。

还有关于微生物源性物质在医学和生物工程中的应用等课题的不断研究,以及疾病微生物学和微生物的环境污染等方面的研究也取得了突破性的进展。

2. 分子生物学的研究进展分子生物学是生物学中最活跃和最有前途的分支之一, 是研究生命现象和规律的一门综合性科学。

分子生物学的发展已经深刻影响了生命科学的各个方面,包括基础科学、医学和农业等。

与此同时,分子生物学作为一门革命性学科,也正在经历着快速的变化,各种前沿技术和新方法相继涌现,不断推动着分子生物学的研究进展。

在分子生物学领域,基因信号通路的研究是当前的热点之一。

基因信号通路是指基因与环境之间的作用机制,包括很多种的细胞生物化学信号转导途径。

对于特定环境下基因信号通路的分子机制的研究已经在肿瘤、高血压、人类免疫缺陷病毒等许多疾病的治疗方面产生了实际应用。

微生物分子生物学技术

微生物分子生物学技术

一、质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳(一)碱变性法提取质粒DNA质粒(Plasmid) 是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。

带有遗传信息,可赋予细菌某些新的表型。

将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。

质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。

分离和纯化质粒DNA的方法很多,但这些方法基本包括三个步骤:即细菌的培养和质粒DNA的扩增,细菌菌体的裂解; 质粒DNA的提取与纯化。

本实验学习用碱变性方法提取质粒DNA。

【原理】细菌培养物加入SDS和NaOH 碱性溶液处理后,菌体裂解,可使细菌的质粒DNA、染色体DNA和RNA 一起从细胞内释放出来,经琼脂糖凝胶电泳,因各种核酸分子的迁移率不同将上述核酸分成不同的带。

用溴化乙锭(EB)染色后,在紫外线灯下可看到各种核酸带发出的荧光。

根据荧光的位置,可区分不同的核酸带。

【材料】1.菌株E.coli JM109(pUC19),E.coli RRI(pBR322)2.试剂溶液Ⅰ( 50 mM葡萄糖, 25 mM Tris.Hcl PH 8.0, 10 mM EDTA)溶液II ( 0.2 N NaOH,1%SDS) 用前新配制溶液III ( 5 mM KAc溶液PH4.8)TE缓冲液(10mMTris.Hcl ,1mMEDTA PH8.0)LB液体培养基( 胰蛋白胨10g,,酵母粉5g, Nacl 10g. 加蒸馏水溶解,用NaOH调PH 至7.5,加水至1000 ml,15磅高压灭菌15分钟)。

【方法】1.接种细菌于5ml LB液体培养基中,370C培养过夜。

2.3000 rpm/min,离心15min,弃上清。

加入100ul 溶液1悬起细菌沉淀。

3.加入200ul前新配制的溶液II ,颠倒EP管5次混合均匀,置冰浴2min。

4.加入150ul溶液III温和地混匀,12000 rpm/min,离心5min。

分子生物学技术在微生物检测中的应用

分子生物学技术在微生物检测中的应用

分子生物学技术在微生物检测中的应用随着科学技术的不断进步,人们对于微生物的研究也越来越深入。

微生物是指生物体中最小的生物单位,包括细菌、真菌、病毒、寄生虫等。

微生物在生命体系中扮演着至关重要的角色,对于人类的生产和生活都有着非常重要的影响。

同时,各种疾病的发生也与微生物的种类和数量密切相关。

为了探究微生物的特性以及准确地检测出微生物所带来的风险,分子生物学技术已经开始广泛应用于微生物检测中,而其应用也为微生物学的研究带来了巨大的推动。

一、分子生物学技术的基本原理分子生物学技术(Molecular Biology Techniques)是指对于生物分子结构和功能进行的研究和操作。

由于分子生物学技术能让科学家对生物分子进行精细的操作和分析,从而更好地研究和掌握生命体系。

而在微生物学领域中,分子生物学技术也成为一种非常有用的工具。

具体而言,分子生物学技术包括多种方法,其中最常见的就是PCR扩增(polymerase chain reaction)和基因测序(gene sequencing)。

PCR扩增是一种利用DNA聚合酶对DNA进行增量复制的方法,可以让微生物的DNA样本得以在体外大量扩增,从而在检测和分析时能够提高检出率。

而基因测序则是对于DNA分子进行精细扫描的方法,能够让科学家知晓微生物的基因组结构和功能等特征。

二、1. 污染环境中微生物的检测在环境控制和保护方面,对于微生物的检测至关重要。

例如,在我们的饮用水、食品和药物中,都需要完成对于微生物的检测,以保障其安全性。

而分子生物学技术则可以为这些领域提供非常有用的技术手段。

例如,PCR扩增技术可以为环境检测等领域提供非常高的敏感度和特异性。

如果检测样本中存在目标微生物的DNA,则利用PCR扩增可以扩大目标DNA的数量,从而更容易被检测到。

同时,由于PCR扩增技术中的反应链式反应过程可以被多次迭代,因此也能够实现迅速的检测效果。

2. 食品安全领域中微生物的检测除了环境领域之外,分子生物学技术还可以应用于食品和药品等领域中。

微生物的分子生物学和代谢途径

微生物的分子生物学和代谢途径

微生物的分子生物学和代谢途径微生物是指我们肉眼无法看到的微小生物,包括细菌、真菌、病毒以及许多单细胞生物等。

微生物在生态学、医学、食品工业、能源产业和生物技术等领域都有着广泛应用。

微生物的分子生物学和代谢途径是微生物学的重要研究领域之一。

一、微生物的分子生物学微生物的分子生物学主要是研究微生物的DNA、RNA和蛋白质等分子的结构、功能、调控和相互作用等方面。

这些分子是微生物生命活动的基础和条件,也是微生物产生所需要的细胞器官和产物的基础材料。

1. DNADNA 是微生物内部最重要的分子之一,它携带了微生物的遗传信息。

微生物的DNA 结构非常特殊,它们有许多种不同的DNA 分子,例如双链 DNA、环状 DNA、线性 DNA、超螺旋DNA 等,每种 DNA 分子都有不同的特点和应用领域。

2. RNARNA 是由 DNA 转录出来的分子,它将 DNA 存储的遗传信息转化成蛋白质。

在微生物体内,RNA 还有许多其他功能。

例如,一部分 RNA 负责调控其他 RNA 和蛋白质的合成,而另一部分RNA 可以充当酶的角色,催化微生物的各种化学反应。

3. 蛋白质蛋白质是微生物体内最重要的分子之一,它们被认为是微生物体内功能最复杂的分子。

蛋白质的结构非常复杂,它们由不同的氨基酸组成,每个氨基酸都有不同的性质。

微生物的生命活动需要各种不同类型和功能的蛋白质,例如酶、抗体、激素等。

蛋白质还可以互相作用,形成复杂的蛋白质网络。

二、微生物的代谢途径微生物的代谢途径是指微生物体内各种化学反应和代谢途径的总称。

微生物的代谢活动是它们能够适应各种环境和生存的关键之一,也是它们用来制造各种物质和产生能量的途径。

1. 细胞呼吸细胞呼吸是微生物体内最重要的代谢途径之一,它将有机物氧化成二氧化碳和水,同时释放出能量。

细胞呼吸可以分为三个阶段:糖酵解、三羧酸循环和氧化磷酸化。

这些反应通过一系列的酶及蛋白质网络完成。

2. 发酵微生物的发酵代谢途径是不需要氧气参与的代谢途径,通过这种途径,微生物可以将有机物转化成乳酸、酒精、乙酸、丙酮酸等物质,同时产生能量。

微生物分子生态学研究

微生物分子生态学研究

微生物分子生态学研究随着科技的发展和生态学的兴起,微生物分子生态学作为一门新兴学科,引起了广泛的关注。

微生物分子生态学主要研究微生物群落结构和动态的变化以及微生物与环境之间的相互作用关系,是一种综合了生态学、分子生物学、生物信息学等多个学科的交叉学科。

本文将从微生物分子生态学的研究内容、研究方法、研究进展、未来发展方向等方面进行探讨和分析。

一、研究内容微生物分子生态学的研究内容主要包括微生物群落的特征、结构和功能以及环境因素和微生物之间的相互作用关系。

微生物群落的特征包括物种组成、丰度、多样性等方面,微生物群落结构主要是指不同物种之间的相对丰度,而微生物群落功能则是指微生物在环境中的作用和功能。

环境因素对微生物群落的影响主要包括温度、湿度、pH值、氧气浓度等因素。

此外,微生物之间的相互作用关系也是微生物分子生态学的一个重要研究内容,包括共生、竞争、贡献等方面。

二、研究方法微生物分子生态学主要采用分子生物学技术和生物信息学技术进行研究。

分子生物学技术包括PCR扩增、多样性分析、基因克隆、荧光原位杂交等。

其中,PCR扩增技术可以在微生物群落中快速检测出微生物基因序列的多样性。

多样性分析技术则可以根据微生物样品的DNA或RNA序列,研究微生物群落中不同物种的相对丰度。

基因克隆技术可用于扩增和纯化微生物样品的特定基因片段。

荧光原位杂交技术可以通过标记特定核酸序列的荧光探针,检测微生物在环境中的分布情况。

生物信息学技术则包括元基因组学、拟合模型、网络分析等。

通过元基因组学技术,可以对微生物群落进行全基因组测序,进而研究微生物在环境中的代谢途径和功能特征。

拟合模型技术可以用于对微生物群落结构和功能的预测和模拟。

网络分析则可以通过构建微生物功能和微生物之间相互作用的网络,深入研究微生物群落结构和作用机理。

三、研究进展近年来,微生物分子生态学取得了许多重要的研究成果,得到学术界和人们的广泛关注。

例如,研究人员利用分子生物学技术发现了一些微生物为植物提供重要营养素所起的作用,从而促进了植物的生长和发育。

微生物分子生物学及其应用

微生物分子生物学及其应用

微生物分子生物学及其应用微生物是指细菌、真菌、病毒等微小生物,它们广泛存在于各种环境中,包括水土、空气、人和动物体内等,而微生物的研究则是微生物学。

随着科学技术的发展和基因测序技术的出现,微生物分子生物学迅速发展,进一步帮助我们了解微生物及其对生态系统的调节作用,并促进人类生产生活的进步。

微生物分子生物学主要研究微生物的分子结构、代谢途径、遗传变异等方面,其中最重要的是微生物遗传学。

微生物遗传学探究微生物基因的分布、组成、表达、调控及功能,包括基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学等领域。

而微生物遗传学的研究不仅能加深对微生物的认识,还可为微生物的生产利用、疾病防治、环境修复等提供有效支持。

微生物分子生物学的应用广泛,可以应用于微生物的基础研究、微生物资源开发利用、生态修复、疾病防控、食品加工等领域。

下面是具体的例子:1. 微生物基因工程微生物基因工程技术可以将有用的基因或基因簇组装入细胞中,改善或加强细胞的性能,提高微生物生产所需的产品的数量和质量。

例如,利用微生物基因工程技术,可以大量生产抗生素、酶类等生物活性物质,为医学、工业等领域提供重要支持。

2. 微生物药物开发微生物中有很多天然产物可以作为药物的候选物,例如大黄素、链霉素等。

微生物分子生物学技术可以加速微生物药物的发现和开发,同时也可以使药物的纯度更高、毒性更小。

3. 微生物鉴定和检测微生物鉴定和检测是那些带来风险的微生物如病原微生物、致病毒等的识别和验证。

微生物分子生物学技术可以帮助快速地鉴别微生物的种类,同时也可以快速检测出某些病原微生物,如食物中的沙门氏菌、出血性大肠杆菌等。

4. 环境修复微生物分子生物学技术可以帮助快速地鉴定和分析菌类在生态环境中的代谢和微生物群体组成,同时也可以加速微生物的生长和分解分解出有害物质,达到环境修复的效果。

例如,环境中的硝化细菌、硫化细菌、甲烷化细菌等在废弃物降解和污染物的修复方面发挥了重要作用。

分子生物学和遗传学方法鉴定菌株微生物多样性

分子生物学和遗传学方法鉴定菌株微生物多样性

分子生物学和遗传学方法鉴定菌株微生物多样性在生物学领域里,微生物多样性一直是个备受关注的话题。

微生物多样性对于环境保育、健康管理等方面都具有重要意义。

而要真正掌握微生物多样性,就需要用到分子生物学和遗传学方法来鉴定菌株。

本文将为您介绍这些方法的具体过程和应用场景。

一、分子生物学方法1.基因测序基因测序是用于鉴定微生物多样性的一种分子生物学方法。

通过对微生物的基因进行测序分析,可以更精确地确定不同微生物间的基因差异,并通过这些差异来识别不同的菌株。

同时,基因测序还可以用于分析微生物基因变异与突变的模式和机制,为微生物演化提供参考依据。

2.扩增子测序扩增子测序是最常用的鉴定菌株微生物多样性的方法之一。

它基于特定的PCR 扩增子,通过对微生物基因组DNA进行扩增,然后进行高通量测序来分析微生物结构的多样性。

该方法的优点是可以同时研究多种微生物,快速、准确地识别高丰度及低丰度的微生物,有利于探索微生物群落的组成和演变规律。

扩增子测序目前已成为研究社会、生态以及医学微生物领域的重要工具之一。

3.荧光原位杂交(FISH)荧光原位杂交是一种通过碱基互补结合、检测微生物群落DNA序列的技术。

在该技术中,使用荧光探针特异性识别微生物的16S rRNA来标记不同的微生物类型,从而达到高灵敏度、高分辨率、准确无误地检测微生物的目的。

此技术可广泛应用于环境微生物、食品微生物学研究以及临床诊断领域,为分子分类和建立微生物分类学提供了巨大的潜力。

二、遗传学方法1.重复序列多态性(REP-PCR)REP-PCR是一种无需PCR扩增的方法,可用于描述微生物基础级别多样性和微生物群落结构的快速和可重复性技术。

该技术基于特定长度的DNA序列重复系列,通过PCR扩增特异性的DNA序列,然后通过凝胶电泳及图像分析来判断微生物基因与菌株的距离。

REP-PCR具有高通量、可自动化、灵敏度高等特点,可以在短时间内扩增大量基因。

2.随机扩增微卫星DNA(RAPD)RAPD是一种无需确定序列的多态性分析方法,用于检测微生物的变异情况。

微生物的分子生物学及其应用研究

微生物的分子生物学及其应用研究

微生物的分子生物学及其应用研究微生物在自然界中具有广泛的分布和多样性,它们是生态系统中不可缺少的组成部分。

微生物分子生物学是研究微生物遗传信息、代谢途径和分子机制等方面的学科,对于理解微生物的结构和功能具有重要意义。

同时,微生物分子生物学的发展也为微生物的工业生产、医学治疗和环境监测等领域提供了新的思路和方法。

1.微生物分子生物学研究的进展自20世纪60年代以来,微生物分子生物学的研究逐渐得到发展。

首先是微生物遗传学的进展,我们逐渐认识到微生物基因的转移和表达机制,研究了大量的质粒和细菌基因组,包括多重抗药性、生物合成和降解等基因。

另外,在微生物代谢途径的研究方面,我们也有了更深入的了解。

主要是从分子水平来探究微生物代谢途径,未来将重点关注于扩展系统的代谢和使用微生物酶功能。

2.微生物分子生物学的应用领域微生物分子生物学的应用领域非常广泛,涉及农业、食品、医学、环保领域等多个领域。

(1)农业微生物在农业中发挥着巨大的作用,如农业生物技术在提高植物转基因技术,寻找农作物抗性,保护环境及促进农作物改良方面有广泛的应用。

农业微生物进一步促进了环保和食品生产。

未来,我们将探索更多的农业生物技术应用,以改善食品卫生和质量。

(2)医学应用微生物的分子生物学对医学具有重要的意义。

如治疗传染病,探究微生物感染机制,开发新的抗微生物药物等。

未来还需更深入的研究微生物与人体的相互作用,为疾病诊断和治疗提供更好的方法。

(3)环境监测微生物在环境监测中发挥着重要作用,如污染检测、生物防治等。

未来,我们将探索更多的水质和大气污染物的生物检测方法。

同时,微生物在植物、土地、水等领域的生态作用研究也将受到重视,以打击生态灾难并保护生态系统。

3.微生物分子生物学的未来未来微生物分子生物学研究还将继续向更加深入和细致的方向发展。

我们将更注重拓展数据的规模,增加微生物结构和功能的研究,并探索新的技术以突破技术瓶颈。

未来,微生物的分子生物学研究还将广泛应用于食品科学、化学等领域,并促进微生物在面向全球化的大环境下的绿色可持续发展。

微生物分子生物学

微生物分子生物学
§3.2细菌DNA复制
§3.3细菌DNA的损伤和修复
§3.4细菌mRNA的转录机制
§3.5细菌蛋白质翻译机制
第四章放线菌的分子生物学
§4.1链霉菌属的染色体
§4.2链霉菌中的质粒、转座因子和噬菌体
§4.3链霉菌发育与分化的分子生物学研究
§4.4链霉菌抗生素生物合成的分子生物学研究
第五章丝状真菌的分子生物学
讲授该课程的目标在于不仅仅使学生能够学习和掌握微生物分子生物学的基本知识和基本理论,而且更能够把握本学科的研究前沿和发展趋势,领会科学研究的精髓,掌握科学研究的基本方法,提高学生的科学素养和创新性的思维能力。
教学大纲:
第一章绪论
第二章微生物分子生物学研究技术方法的原理及其应用
第三章细菌的分子生物学
§3.1细菌的基因组
注:每门课程都须填写此表。本表不够可加页
总学时/讲授学时:32/32
学分:2
先修课程要求:微生物学,分子生物学,生物化学
课程组教师姓名
职称
专业
年龄
学术专长
杨洋
副教授
微生物学
38
微生物分子生物学
徐莉
副教授
微生物学
39
微生物分子生物学
课程教学目标:
微生物分子生物学是研究微生物核酸、蛋白质等生物大分子的结构与功能的关系及其对生命活动影响的学科,它又是一门实验性、逻辑性和研究性非常强的学科,它是以各类微生物为材料的分子生物学研究,试图揭示所有生命类型的普遍规律和共性,同时也会发现微生物特有的生命特征和现象。本课程主要从分子水平上阐述微生物基因表达及其调控机理的知识体系,使学生在分子水平上对微生物生命现象尤其是微生物基因表达及其调控的研究前沿和研究进展有一个全面系统的了解和认识。

微生物的分子生物学检测方法

微生物的分子生物学检测方法
同菌株基因组的dna特点从而对他们进行分型添加标题重复序列pcr技术重复序列pcr技术reppcr是利用细菌基因组中广泛分布的短重复序列为引物靶序列进行pcr扩增通过对pcr产物电泳结果的比较分析菌株间基因组存在的差异优点已成功地用于分型的细菌重复dna序列有肠道菌重复基因间共有eric序列重复基因外回纹序列rep和box序列的分析与其他分类技术相比这种技术有更高的分辨力缺点reppcr分辨力稍低添加标题免疫pcr它的基本原理是用一段已知dna分子标记抗体作为探针用此探针与待测抗原反应用pcr扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段dna分子电泳定性根据特异性pcr产物的有无来判断待测抗原是否存在

长期以来,人们试图找到一种既简便又快速、又有足够分辨力的技术 来鉴别和区分各种病原微生物,各种新方法和新技术不断涌现,但每一 种方法都有其局限性,为了弥补各自的不足,使用一种以上的技术即采 用多种方法联合使用的策略,一种技术的缺点会被其他技术的优点所代替。 选择检测方法应考虑到自身所拥有的条件,检测所要求达到的灵敏度,而 提高灵敏度和去除假阳性是检测方法发展的趋势。近年来,随着计算机技 术的不断发展,临床病原菌检测将向着简便、快速、高通量、自动化的方 向发展。分子生物学技术通过自动化仪器的使用,将在病原菌诊断、鉴定 和耐药基因检测方面越来越广泛地应用于临床。
微生物的分子生物学检测方法
1
2 3
PCR核酸技术 核酸分子技术 结语
目录
简介
PCR核酸 技术
聚合酶链反应( PCR)技术自1985年发明以来,各种各样以 PCR 为基础的DNA序列的扩增和检测方法得到了迅猛发展。 各种衍生技术如反转录PCR ( RTR) 、多重PCR 、巢式PCR、 PCR单链构象多态性(PCRSSCP)、限制性片段长度多态性 (RFLP)、随机扩增的多态性DNA 技术(RAPD)和重复序列 PCR技术(Rep - PCR)、荧光定量PCR等。其中定量PCR 既可 以用于临床感染性疾病的诊断,又可用于监测其疗效,PCR 及其衍生的技术近年来在病原微生物分型研究上得到了广 泛应用。

微生物相互作用的分子生物学机制

微生物相互作用的分子生物学机制

微生物相互作用的分子生物学机制微生物是地球生命的基石,其多样性和复杂性越来越引起科学家们的关注。

微生物之间的相互作用是微观世界中一个重要的生态过程,可以影响到土壤、水环境和人类健康等方面。

而微生物的相互作用是由分子水平的反应所驱动的,分子生物学机制也在逐步揭示其中的奥秘。

微生物之间的相互作用可以分为合作和竞争两种,而这种相互作用背后的分子机制却非常复杂。

其中,环境信号分子在微生物相互作用中起着重要的作用。

环境信号分子是细菌等微生物分泌出的低分子化合物,它们可以通过扩散或信号传递通道在环境中传播,并在它们的目标菌种中引起特定生理反应。

1. 环境信号分子的分泌环境信号分子的生成、存储和释放都是微生物相互作用中的关键步骤。

这些信号分子是通过前体物质的合成和活性分子的修饰来产生的。

例如,自溶酵母菌可以合成α-乳酸和β-乳酸,它们可以分别转化为α-acetolactate和β-acetolactate,这些物质在经过NOTCH信号通路的控制后可以被转化成2,3-丁二醇和丙二醇,从而产生多种环境信号分子。

另外,细菌中的quorum sensing(感受群体)机制也是一种重要的信号传递途径,它通过自动产生、释放和感受一系列分子信号,协调细菌种群的基因表达和生长发育。

2. 环境信号分子的识别和响应微生物在环境信号分子的识别和响应过程中,涉及到信号传导途径中的多种分子,包括感受器、信号传导分子和响应调节器等。

感受器是一种具有特定受体的蛋白,当它与信号分子结合后会引起感受器的共轭构象改变,从而触发下游的信号传导途径。

信号传导分子就是负责信号传递的介质,它们可以是蛋白、脂类、核酸或钙离子等。

响应调节器是一种通过硫键、磷酸化和酰化等修饰方式调节目标基因表达的蛋白。

环境信号分子可以在微生物间实现群体行为,并调节微生物生长、发育、代谢和毒力等方面的生理状态。

例如,细胞因子β-氨基丙酸可以通过信号传递途径活化细胞壁催化酶,从而促进菌体的细胞壁水解和分裂。

分子生物学和微生物学的区别

分子生物学和微生物学的区别

分子生物学和微生物学的区别嘿,朋友们!今天咱来唠唠分子生物学和微生物学,这俩可都是生物学里的大宝贝呀!分子生物学呢,就像是一个超级侦探,专门去研究生物大分子,比如DNA、RNA 和蛋白质这些微观世界里的神秘家伙。

它要弄清楚这些分子是怎么工作的,怎么相互作用的,就好像侦探在破解一个超级复杂的案件一样。

你说神奇不神奇?分子生物学就像在微观世界里开疆拓土,一点点揭示生命的奥秘。

再看看微生物学,那可就像是一个微生物的大舞台!微生物学研究的就是那些小小的微生物呀,细菌、病毒、真菌啥的。

这些小家伙们虽然个头小,但是能量可大着呢!它们在我们生活中无处不在,有的能让我们生病,有的却能帮我们做好多事情。

微生物学就是要搞清楚这些小家伙们的脾气、习性,怎么和它们打交道。

咱举个例子吧,就好比分子生物学是在研究一个机器的每一个零件是怎么制造的、怎么运行的,而微生物学呢,就是在研究这个机器整体的功能和它在不同环境下的表现。

一个关注微观细节,一个关注整体表现,这差别不就出来啦?你想想看,要是没有分子生物学,我们怎么能知道基因是怎么遗传的呀?怎么能研究出那些厉害的基因疗法呢?而要是没有微生物学,我们怎么能对付那些致病的微生物呀?怎么能利用微生物来制造好吃的食物、有用的药品呢?这俩可都是生物学的重要分支,缺了谁都不行呢!分子生物学就像是一个神秘的魔法师,用它的魔法棒在微观世界里创造奇迹;微生物学呢,则像一个勤劳的小工匠,和那些微生物们打交道,让它们为我们服务。

它们虽然不一样,但都是为了让我们更好地了解生命、保护生命呀!所以说呀,分子生物学和微生物学,一个都不能少!它们各自有着独特的魅力和重要的作用,就像我们生活中的左右手一样,共同为生物学的发展贡献力量。

咱可得好好认识它们、了解它们,这样才能更好地享受它们给我们带来的好处呀!你们说是不是这个理儿呢?。

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He Lab主要试验技术
一. western blot 及其相关操作
接mat材料: EF管蓝,黄枪头50ml离心管2%GLu培养基(非灭菌) 9或12cm平皿超
净工作台
步骤1.在每个平皿中加2%glu培养基,9cm加20ml,12cm加50ml .EP管标清菌种名称,加1ml. 2挑菌:根据斜面上孢子生长情况,从弱到强,越弱挑的越多,约黄豆大小,votex振荡.同时开超净台紫外灯.
3设置不同孢子浓度梯度.在平皿上标明菌种与浓度.
4.接菌将孢子接入相应的平皿
5.25°培养1-2d
切mat 材料2%Glu培养基,灭过的三角瓶,2个50ml离心管.泡沫靠垫(用于放离心管),
打孔器长镊子,工业酒精(用于给镊子等器材消毒),恒温摇床,卫生纸(防止培养基洒落)
1.点燃酒精灯,先烧镊子,再烧瓶口,打孔器等,放在枪头盒子上.
2.将菌液分装在100ml三角瓶,每个分50ml.用50离心管量取.注意打开三角瓶封口膜时要轻轻将膜摁下,尽量减少与手的接触,每接一瓶烧一次培养基瓶口,菌与平皿不能同时拿.
3.用打孔器(适当规格)在mat上打孔,右手拿打孔器,拇指摁住孔,来回转几圈.
4.将打孔器甩几下,泡在工业酒精,注意不要对着自己,倒放枪头盒上,用镊子夹取菌片到三角瓶中.
5.取下一个菌的平皿,打孔(重复2,3,4步)结束后记得清理卫生纸等垃圾,镊子打孔器使用顺序:甩培养基-泡酒精-灼烧-晾
收mat材料:EP 管孔板,滤纸,吸水纸,,镊子,液氮,dd水,卫生纸,真空泵,暗室,mat孢子
步骤1.根据样品数目准备EP管,并做好标记,放孔板上
2.从液氮桶取液氮.
3.准备若干30x30cm的吸水纸,对折,裁成10cm宽
4.将上述材料拿到暗室,打开真空泵,铺上一层滤纸,用dd水湿润.
5.用镊子将样品夹出,孢子过小可倒出,放漏斗上数秒,同时再对折吸水纸.
6.将样品夹出,放在吸水纸上,用力按压,使之充分干燥.
7.将样品加到标记好的EP管,放入液氮冷冻,准备下一个样品.
8.所有样品收集完毕后放入自封袋,放-80冰箱待用.
蛋白的提取
材料:冰盒(含冰),extration buffer,SDS,Triton,蛋白酶抑制剂(三种),三种移液器,离心机,votex,起子.研钵药匙, 杵标记好的EP 管 1.量取50ml extration buffer ,加入500ulpvsf抑制剂,另外两种抑制剂各50ul,混匀.
2.取出待提取的样品,放冰上(注意下面操作都不能离开冰面时间过长!)检查是否完好.
3.准备预冷的研钵,药匙,杵用起子把装有样品的EP管打开,倒出,用杵将样品磨成粉末状(向一个点用力,来回摆动,再向别处用力)聚成一条线,用药匙盛放到EP管(再液氮预冷后的)放液氮冷冻.或者放-80冰箱待用.
4.从液氮罐取出样品,根据样品多少加入与之等高的extration buffer.
5.放在votex 上振荡几秒,在4°10000rpm离心机离心15分钟.
6.取上清,注意不要吸到液面上层悬浮物和下面的沉淀,加到另一组做好标记的新EP管中.
7.放入自封袋,做好标记,放入-80冰箱或者直接测定浓度.
测定蛋白浓度
1材料:分光光度计,比色皿,考马斯亮蓝,EP管,50离心管。

2取考马斯亮蓝于50离心管,分装每个EP管各1ml,并分别加入2ul蛋白样。

(枪头插入液面下打二挡)上下颠倒反应5min
3准备2管只加考马斯亮蓝,,分别用于清洗比色皿和分光光度计调零。

调分光光度计至OD595nm处。

4用吸水纸将比色皿吸干,将样品倒入,盖上盖子,置于通光孔,待读数稳定记录下来,整理成Excel数表。

(读数超过0.8要稀释)
5.用70%酒精清洗比色皿。

二大提质粒
转化
1.材料:JM109大肠杆菌,灭过的三角瓶黄枪头和LB液体培养基,含氨苄LB培养基的平皿,氨苄青霉素,水浴锅,冰盒,50ml离心管,恒温摇床
2.将构建好的载体(1ul)与感受态大肠杆菌(80ul)混合,冰浴30min
3.在42°水浴锅热击90s,冰浴3min。

4.在超净工作台加入LB培养基(倒瓶盖内,拿在左手,右手拿枪分装)复苏细胞30-60min,准备含氨苄的平板。

5.将菌液(50-200ul)涂到平板上,培养12h以上。

6.用离心管量取40-50mlLB培养基,并按1:1000加入氨苄溶液,倒入三角瓶。

(酒精灯旁)
7.在培养好的平皿上用黄枪头挑去单菌落,丢入三角瓶内。

8.37°220rpm 培养12h以上。

小提
1.材料:孔板,EP管,离心机,votex,无水乙醇,70%乙醇,solution1,2,3,RNase水,ddH20恒温培养箱,酚,氯仿,异戊醇(25:24:1),乙酸钠,液氮。

2.将EP管摆放到孔板第一批和最后一排,自左至右,先摆第一排,每管分装1.5ml菌液
3.13000rpm常温离心30s。

4.用真空泵,左手开管(不要让管一次性弹开),右手拿吸管,插一个黄枪尖。

吸去上清液。

5.取solution1,倒瓶盖上(左手拿着)每个管分装150ul。

Votex数秒(中指拇指拿管,一定使管底液体翻上来)。

自右至左盖上盖子,现盖最后一排。

6.同样方法每管加150ml solution2(NaOH与SDS等体积混合,现用现配),上下颠倒(借助手腕翻转)8次以上混匀。

7.每管加solution3 150 ml混匀。

8.13000rpm常温离心6min以上。

9.将上清液加入新EP管,(在沉淀的对侧管壁,可以直接将枪插到管底)每管加900ul无水乙醇,(加液体使枪头应悬空,不能污染管内液体,否则换枪头)上下混匀,至出现沉淀。

10.13000rpm常温离心6-10min,倒掉上清液。

11.每管加800ul70%乙醇清洗沉淀,可以13000rpm离心2min,倒掉上清,吸水纸擦去管口short(按离心机short键至6000转松开,速度下降后再按一次)真空泵吸干。

12.37°恒温烘干
13.每管加30-50ulRNAse水,37°恒温孵育30min以上,用手指轻轻弹管底,short。

大提
1.每12管合并成1管(左手拿管,右手拿枪,注意吹打混匀)
2.每管加600ul酚氯仿异戊醇,votex。

3.13000常温离心3min。

4.吸取上清液(不要吸沉淀)至新管,加600ul氯仿异戊醇,votex,13000rpm常温离心3min。

重复3次。

5.取上清液到新EP管中,加入管内液体体积1/10的乙酸钠(注意看管内液体到哪个刻度线),加入2.5倍体积无水乙醇,放液氮中冷冻3min。

6.颠倒混匀,13000rpm离心6min,short,真空泵小心烘干(37°下20min)。

7.根据质粒的量,加入适量ddH20,37度恒温20min以上,轻弹管底,short,合并成一管
8.取出1-2ul管内液体,加入总体积20%的loading buffer,用ddh20 补齐(如100ul体系=1ul质粒+20ulLD+79ulddH2O,即100倍稀释)
9.配胶将0.8g琼脂糖溶于100ml1xTAE,用微波炉溶解,带PE手套,(右手不能触摸无污染的物品)待胶冷却(不要凝固),用胶带粘好胶盘,插上合适的梳子,放胶架上。

加5ulEB 左手拿专用的枪,右手拿试剂瓶,不要插到瓶底以免污染枪。

轻轻摇匀,倒胶。

10.胶凝固后扯下胶带,将胶孔放到靠近阴极一侧,每孔点5-10ul,赶走气泡,竖直插入孔内,不要戳破胶,点6ulmarker,打开开关,30min
11.利用成像系统照胶,注意及时保存图像。

对比条带与marker相对位置与亮度估算质粒浓度。

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