线性范围验证两种方法比较

合集下载

线性范围及检测限之欧阳法创编

线性与范围 (linearity and range)分析方法的线性是在给定范围内获取与样品中供试物浓度成正比的试验结果的能力。

换句话说，就是供试物浓度的变化与试验结果(或测得的响应信号)成线性关系。

所谓线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的试验结果，而且成线性的供试物浓度的变化范围，其最大量与最小量之间的间隔，可用mg ／L ~ mg／L、 ug／ml ~ ug／ml等表示。

线性与范围的确定可用作图法(响应值Y／浓度X)或计算回归方程(Y＝a+bX)来研究建立。

测定样品时所有生物药物分析方法都必须同时作标准曲线。

每次作标准曲线时，方法应与分析方法考核时完全一致。

标准浓度应包括一定梯度的5-8个浓度(非线性者如免疫分析可适当增加)，每个浓度只需测定一次(免疫分析可测定两次并取均值)；标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围，对于含量测定要求一般浓度上限为样品最高浓度的120％，下限为样品最低浓度的80％ (但应高于LOQ)；目前仍广泛采用相关系数(r)表示标准曲线的线性度、并控制r≥0.9900。

对照品的LOQ必须包括在线性范围。

线性范围是指与检测器响应信号成线性关系的样品的含量范围.一般情况下,标准曲线的最低和最高值是包含在线性范围内的,而且不同人做的标准曲线,他所取的最低和最高值也不会都相同,打个比方来说,A做5个点的标准曲线,所选择的标准样品的浓度分别为:1,5,10,15,20,那么最低最高值分别为1和20,而对于这种要检测的物质来说,它的线性范围可能是10E5,要远大于制作标准曲线所选择的浓度范围.通常在建立一个新方法的时候可以通过文献查到一些物质的线性范围,而实际工作中,要确切知道某种物质的线性范围必要性可能也不大。

S/N=3时的浓度是检测限，也就是峰高约在基线噪音高的3倍，注入液相色谱仪的对照品百分浓度％。

S/N=10是定量限，也就是峰高约在基线噪音高的10倍时，注入液相色谱仪的对照品量。

线性范围试验[要诀]

实验5 线性范围试验在光谱分析中，测定该实验条件下被测物质符合Beer定律的浓度范围(线性范围)，是评价分析方法准确性和实用性的重要工作。

通过线性范围测定，选择线性段作为该方法的分析范围，直线上任何一点的待测物浓度与吸光度的比值均为一常数，其斜率tanθ都相等，即tanθ=，此处的值称为校正常数，可用于计算测定结果。

这样，可使具有临床意义的标本测定值都限定在此范围内，以保证测定结果的可靠。

线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关系，出现正偏离或负偏离的现象。

这种偏离，按Beer定律现象来自两个方面：一是溶液本身不符合Beer定律，这种现象叫做化学偏离；二是仪器本身各种因素的影响，使吸光度与浓度之间不成线性，这种现象叫仪器偏离，如杂光、有限带宽、检测器噪声、环境条件的变化、波长的变动、比色杯的误差、辐射光的非平行性、检测器本身的非线性等。

因此，在做方法学线性范围评价实验时，良好的仪器性能是必须的。

【原理】使用不同浓度的葡萄糖标准溶液，用GOD-POD法试剂测定各自的吸光度，以标准浓度为横坐标，以其对应的吸光度为纵坐标，在方格纸上作图，即可绘制出一条直线，即剂量反应曲线(dose-respones curve)。

一般测定方法的线性范围要求能覆盖临床上的参考值和常见疾病的医学决定水平，以减少标本稀释重测的机会。

【试剂】1．40mmol/L葡萄糖标准溶液称取已干燥恒重的无水葡萄糖0.7208g，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。

2h后方可应用。

2．其它试剂同GOD-POD法试剂。

【操作步骤】按表2-1操作表2-1血糖与GOD-POD试剂剂量反应曲线的制作加入物标准管0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液(μl) 0 2 4 6 8 10 蒸馏水(μl) 10 8 6 4 2 0 GOD-POD试剂(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5下同GOD-POD法，读取各管吸光度。

临床验证线性样本选择

临床验证线性样本选择临床实验室方法学评价包括精密度，正确度，参考区间和线性等。

线性评价是评价某一被测物在某一浓度范围内，其测定值与实际浓度或活性在数学上有明确直线关系的能力。

线性是临床实验室测定方法的重要特性，某种检测方法线性范围的宽窄决定为临床服务能力的大小，例如线性上限的不足就不能很好的对患者病情进行预后评估和监测，线性下限不足会影响患者根治手术的效果评估。

目前，临床常用的方法学线性评估方法分别为目测法，改良doumas法，《临床化学设备线性评价指南》(卫生行业标准)以及美国临床实验室标准化研究所(clsi)ep6-a法。

目测法简单直观，但是不能对线性做出精确的判断，故一般只作为初步评估线性的一种手段。

改良doumas法首先拟合成一条直线，然后基于统计学原理判断斜率(b)是否与1无差异，截距(a)是否与0无差异。

这种判断方法过于严格，得到的线性范围往往较窄，且不能判断具体哪个点偏离了线性。

《临床化学设备线性评价指南》和ep6-a都是采用多项式回归分析，但当出现非线性时，前者不能很好的判断此非线性是否能为临床接受。

ep6则能运用“差值法”直观显示非线性程度和非线性位置。

ep6采用多项式模型，若非线性系数与0比较差异有统计学意义，仅表示检测到了非线性。

若此非线性引入的误差不超过临床允许误差时，则称为临床可接受线性。

ep6法更具有临床实用性。

除了对单个检测系统进行线性评价外，还需要对多系统或多个实验室进行线性验证，如美国病理学会(cap)的能力验证计划(pt)中包含多个线性计划，如ln-2，ln-6，ln-30等。

线性评价的科学性在于样本的配制，传统方法是采用加样枪的方法，但是容易受到吸样量不准的影响，并且没有评估高低值的样本混合之后的混合液体积的变化。

低检测限与线性范围试验

影响因素
仪器噪音
仪器本身的噪音水平会影响检测限，因此需要选择低噪音仪器。
样品基质
样品基质中的其他组分可能会干扰待测物的测量，需进行基质匹配或消除干扰。
测量方法
选择合适的测量方法，如光谱法、色谱法等，以提高检测灵敏度。
环境因素
环境温度、湿度等环境因素可能影响仪器的性能和稳定性，需进行控制。
联用技术
尝试与其他分离、富集技术联用，进一步提高目标组分的检出限和准确性。
标准化与规范化
制定该方法的操作规程和标准，推动其在行业内得到更广泛的应用和认可。
感谢您的观看
THANKS
生态毒理学研究
低检测限与线性范围试验在生态毒理学研究中用于检测环境中的有毒物质对生物体的影响。这些研究有助于了解有毒物质对生态系统的影响，并为环境保护和可持续发展提供科学依据。
放射性核素测量
低检测限与线性范围试验在放射性核素测量中用于精确测量放射性物质的活度和浓度。这些测量有助于核能安全、核废料处理和核医学等领域的研究和管理。
药物分析
01
药物质量控制
低检测限与线性范围试验在药物分析中用于药物质量控制，确保药物的
有效性和安全性。这些试验用于检测药物中的杂质、降解产物和溶剂残
留等，以确保药物的质量和稳定性。
02
药代动力学研究
低检测限与线性范围试验在药代动力学研究中用于测量药物在体内的浓
度。这些研究有助于了解药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程，
验证仪器性能
在确定的线性范围内，对仪器进行验证，确保其性能理
对试验数据进行处理，包括数据清洗、异常值剔除等。
线性关系评估
根据标准曲线的斜率和截距，评估仪器与标准品之间的线性关系。

标准曲线的线性范围

标准曲线的线性范围标准曲线的线性范围是指在一定浓度范围内，检测方法对浓度与响应值之间呈线性关系的范围。

在实际分析中，线性范围的确定对于准确测定样品的浓度至关重要。

本文将详细介绍标准曲线的线性范围的概念、确定方法以及实际应用。

标准曲线的线性范围概念。

标准曲线的线性范围是指在一定浓度范围内，检测方法对浓度与响应值之间呈线性关系的范围。

在该范围内，样品的浓度与检测方法的响应值成正比，可以通过线性方程进行描述。

一般来说，线性范围越宽，检测方法对样品浓度的测定范围也就越广。

确定方法。

确定标准曲线的线性范围的方法有多种，常用的方法包括逐点法、最小二乘法、相关系数法等。

逐点法是最直观的确定方法，即通过一系列标准溶液的浓度与检测方法的响应值进行绘图，观察曲线的线性范围。

最小二乘法则是通过最小化实测值与拟合值之间的误差平方和来确定线性范围。

相关系数法则是通过计算相关系数来确定线性范围，相关系数越接近于1，线性范围越宽。

实际应用。

在实际分析中，确定标准曲线的线性范围对于准确测定样品的浓度至关重要。

首先，确定线性范围可以帮助选择合适的标准溶液浓度范围，避免溶液浓度过高或过低而导致测定结果不准确。

其次，确定线性范围可以帮助评价检测方法的灵敏度和准确性，为方法的优化提供依据。

最后，确定线性范围可以帮助验证检测方法的可靠性，确保在一定浓度范围内测定结果准确可靠。

总结。

标准曲线的线性范围是确定检测方法对浓度与响应值呈线性关系的范围，其确定方法包括逐点法、最小二乘法、相关系数法等。

在实际分析中，确定线性范围对于准确测定样品的浓度至关重要，可以帮助选择合适的标准溶液浓度范围、评价检测方法的灵敏度和准确性，以及验证检测方法的可靠性。

因此，对于每种检测方法，都应该进行严格的线性范围确定，确保测定结果的准确可靠性。

检定或校准结果的验证方法

检定或校准结果的验证方法以检定或校准结果的验证方法为标题，写一篇文章在科学研究和工程领域中，检定和校准是非常重要的步骤，用于验证仪器设备的准确性和可靠性。

然而，仪器设备的检定或校准结果本身也需要进行验证，以确保其准确性和可信度。

本文将介绍一些常用的验证方法，以帮助读者更好地理解和应用这些方法。

一、重复性验证重复性验证是一种常见的验证方法，用于评估同一台仪器设备在相同条件下的重复测量结果的一致性。

在进行重复性验证时，需要选择一组样本，并在相同条件下进行多次测量。

然后，通过计算测量结果的方差或标准差来评估重复性。

如果重复测量结果的方差或标准差较小，则说明仪器设备的重复性较好，结果较为可信。

二、准确度验证准确度验证是用于评估仪器设备测量结果的接近程度的一种验证方法。

在进行准确度验证时，需要选择一组已知浓度或已知值的样本，并使用该仪器设备进行测量。

然后，将测量结果与已知值进行比较，通过计算误差或偏差来评估仪器设备的准确度。

如果测量结果与已知值的误差较小，则说明仪器设备的准确度较高，结果较为可靠。

三、灵敏度验证灵敏度验证是一种用于评估仪器设备对测量目标变化的敏感性的验证方法。

在进行灵敏度验证时，需要选择一组不同浓度或不同值的样本，并使用该仪器设备进行测量。

然后，通过分析测量结果与浓度或值之间的关系，来评估仪器设备的灵敏度。

如果测量结果能够准确地反映浓度或值的变化，且变化越大测量结果的差异越明显，则说明仪器设备的灵敏度较高，结果较为可靠。

四、线性范围验证线性范围验证是一种用于评估仪器设备在一定浓度或值范围内测量结果的一致性的验证方法。

在进行线性范围验证时，需要选择一组不同浓度或不同值的样本，并使用该仪器设备进行测量。

然后，通过分析测量结果与浓度或值之间的线性关系，来评估仪器设备的线性范围。

如果测量结果能够准确地反映浓度或值的变化，并且变化范围越大测量结果的线性关系越好，则说明仪器设备的线性范围较广，结果较为可信。

如何评估体外诊断试剂盒线性范围

如何评估体外诊断试剂盒线性范围线性范围评估资料是评价拟上市试剂盒有效性的重要依据，也是诊断试剂盒注册所需的重要申报资料之一。

目前我国定量体外诊断试剂盒注册检验包括线性范围、准确度、特异性、最低检出限、精密度等指标。

本文根据《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则》（征求意见稿）对体外诊断试剂盒线性范围评估进行分析。

要求：体外诊断试剂盒校准品的浓度应覆盖整个厂家声明的线性范围的系列浓度。

绘制散点图及离群值的发现和处理：散点图的绘制对于线性范围评价非常重要，其作用包括：①初步获得数据的线性关系（直线、抛物线或S型曲线等），以初步核实企业标准中声明的线性回归方程的正确性。

②观察数据的精密性，当与其他浓度相比某个浓度水平精密度较低时，特别是发生在声明的线性范围的两端，应注意线性范围是否过宽的情况；发现离群值，明显的离群值可以通过观察散点图被容易的发现。

若只有一个离群值，则可剔除，不必重复实验，但当离群值多于一个时，应仔细分析，找出问题所在并重复实验，然后使用新数据进行分析。

线性回归分析：使用企业声明的方程，通过适当的软件，对数据进行回归分析，置信水平一般为双侧0.05，计算方程的相关系数r或确定系数R2，应符合企业注册标准中的规定。

根据行业标准，相关系数r的绝对值一般应不小于0.98。

当散点图明显提示拟合的曲线可能过原点时，或数据计算是已扣除零点样本读数时，应注意检验回归方程中的截距项。

利用样本对体外诊断试剂盒线性范围评价要求：定量体外诊断试剂产品注册检验线性评价涉及的样本通常是临床样本、企业内部校准品、国家参考品或国际标准品等。

样本应不少于5个、能覆盖整个厂家声明的线性范围，每个浓度水平样本测定应不少于2次。

各样本可以是绝对浓度或相对值来标识。

理想的情况下，应使用高值和低值临床样本按比例混合得到系列浓度的样本，这主要考虑的是基质效应对检测结果的影响。

绘制散点图及离群值的发现和处理：同校准品的线性范围评价。

标准曲线线性范围

标准曲线线性范围标准曲线线性范围是指在一定的条件下，检测方法所能检测物质浓度的线性范围。

在实际的实验室工作中，我们经常需要对样品中的物质进行定量分析，而标准曲线线性范围的确定对于准确的定量分析至关重要。

因此，本文将就标准曲线线性范围的概念、确定方法以及应用进行详细介绍。

首先，标准曲线线性范围是指在一定的浓度范围内，检测方法所能检测物质浓度的线性范围。

一般来说，线性范围越宽，说明检测方法对于样品中物质浓度的测定范围越广。

而线性范围的确定需要通过实验数据来进行验证，一般来说，线性范围的确定是通过制备一系列不同浓度的标准溶液，进行测定后绘制标准曲线来确定的。

其次，确定标准曲线线性范围的方法一般有两种，一种是直接法，另一种是间接法。

直接法是指通过制备一系列不同浓度的标准溶液，进行测定后绘制标准曲线来确定线性范围。

而间接法则是通过对样品进行稀释，使其浓度适应已知的线性范围，然后进行测定，最后通过反算来确定线性范围。

这两种方法各有优缺点，需要根据实际情况选择合适的方法进行确定。

在实际应用中，确定标准曲线线性范围对于定量分析具有重要意义。

首先，确定了标准曲线线性范围后，可以根据待测样品的浓度选择合适的稀释倍数，使其浓度适应已知的线性范围，从而保证测定结果的准确性。

其次，对于不同的检测方法和仪器，线性范围的确定也有所不同，因此在实际工作中需要根据具体情况进行合理选择。

总之，标准曲线线性范围的确定对于定量分析具有重要意义。

通过实验数据的验证，可以准确地确定检测方法所能检测物质浓度的线性范围，从而保证定量分析结果的准确性和可靠性。

因此，在实际工作中需要重视标准曲线线性范围的确定，并根据实际情况选择合适的确定方法，从而保证实验数据的准确性和可靠性。

体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证

体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证1.血浆血浆样品处理方法主要包括离心、超滤、蛋白沉淀和固相萃取。

首先，通过离心将血清和细胞分离，并将上清液收集。

然后，使用超滤技术去除高分子物质，如蛋白质，以得到更纯净的血浆样品。

接下来，可以使用蛋白沉淀方法去除血浆中的蛋白质，以便进一步分析非蛋白质药物。

最后，固相萃取是常用的药物浓度测定方法，可以通过固相材料吸附目标药物，然后用洗脱液洗脱和浓缩样品，最后定量分析。

2.尿液尿液样品处理方法常采用固相萃取、pH调节、加入稳定剂等技术。

固相萃取可以去除尿液中的杂质，并将药物萃取到固相材料上，然后用洗脱剂将药物洗脱出来。

pH调节可以使药物离子化或去离子化，以提高其固相萃取的效率。

此外，加入稳定剂可以保持样品的稳定性，防止药物分解或降解。

3.组织和细胞组织和细胞样品处理方法包括离心、组织切割、细胞溶解和蛋白沉淀等技术。

首先，通过离心将组织或细胞分离，并收集上清液。

然后，使用组织切割技术将组织样品切成适当的大小。

对于细胞样品，可以使用细胞溶解剂将细胞完全裂解。

最后，蛋白沉淀可以去除样品中的蛋白质，以便进一步分析非蛋白质药物。

方法学验证是为了确保分析方法的准确性和可靠性而进行的步骤和操作流程的验证。

主要包括以下几个方面：1.线性范围验证：验证方法在一定浓度范围内，药物浓度与测定结果之间的关系是否呈线性。

2.灵敏度验证：验证方法的最低检测限、最低定量限和测定范围等指标，以评估方法对药物浓度的敏感度。

3.精密度和准确度验证：通过重复测定和与参考方法比较等方法验证方法的重复性和准确性。

4.选择性验证：验证方法对样品中其他可能存在的干扰物的选择性，以保证药物的测定不受干扰。

5.稳定性验证：验证样品在不同温度、时间、pH条件下的稳定性，以评估样品的保存期限和条件。

综上所述，体内药物分析常用的生物样品处理方法包括血浆的离心、超滤、蛋白沉淀和固相萃取，尿液的固相萃取、pH调节和加入稳定剂，组织和细胞的离心、组织切割、细胞溶解和蛋白沉淀等。

线性范围评价

EP6-A法分析测量范围评价应用举例分析测量范围(线性检测范围)评价采用的方法有目测法、EP6-P法、改良Douma法、CAP-IRC 法和EP6-A法。

EP6-A法操作简便，适合于临床常规实验室人员评价线性，是目前最好评价线性的方法。

EP6-A 法是NCCL在EP6-P和CAP-IRC线性评价方法的基础上，经过不断的实践和不断的改进，于2003年颁发的批准性指南文件。

一、标本要求推荐用高值和低值浓度的样本按比例精确配置等间距的不同浓度样本，低、高值样本分别测定2〜4次取均值，为2个样本的实测值，如低值以 L表示，高值以H表示，分别为第一管和最后一管，各管依照L与H羊品配置的比例，可以计算出实验样品的预期值。

每管的浓度由以下公式来计算，第1管的浓度为C1,体积为V1,以次类推，第5管的浓度和体积分别为C5和 V5计算浓度C= ( C1X V1+ C5X V5) /(V1+V5),注意每管要充分混匀，并防止蒸发或其它改变。

二、结果判断：该法的线性判断过程大致分为四个步骤：(1 )确定不同项目可接受不精密度和线性偏差。

EP6-A强调任何用户有必要确定自己对线性程度的要求，或非线性的允许误差范围，目标的确定应基于实验室客户的需要及所用方法的特性。

设定误差目标所要考虑的因素：线性目标来源于偏倚目标，因而应小于或等于偏倚目标；偏倚目标应应小于或等于测量误差。

(2 )计算不精密度：目测检查无明显离群值，计算不精密度。

重复性用L个样本的所有重复测量结果的集合方差来评价。

用SDr或 CVr表示。

公式I L工【心-心］'SD r2xZ- ” “L为样本数；ri1和ri2分别为两次测量的实际结果，或与均值的百分比。

(3)不精密度符合要求后，作多项式回归分析。

多项式回归分析可以借助多种商业统计软件完成。

例如用SPSS勺话，选“分析” T“回归分析” T“曲线估计” T“因变量”、“自变量”、“模型(线性、平方、三次方)得三个方程。

线性范围评价

EP6-A法分析测量范围评价应用举例分析测量范围（线性检测范围）评价采用的方法有目测法、EP6-P法、改良Doumas法、CAP-IRC 法和EP6-A法。

EP6-A法操作简便，适合于临床常规实验室人员评价线性，是目前最好评价线性的方法。

EP6-A法是NCCLS在EP6-P和CAP-IRC 线性评价方法的基础上，经过不断的实践和不断的改进，于2003年颁发的批准性指南文件。

一、标本要求推荐用高值和低值浓度的样本按比例精确配置等间距的不同浓度样本，低、高值样本分别测定2～4次取均值，为2个样本的实测值，如低值以L表示，高值以H表示，分别为第一管和最后一管，各管依照L与H样品配置的比例，可以计算出实验样品的预期值。

每管的浓度由以下公式来计算，第1管的浓度为C1，体积为V1，以次类推，第5管的浓度和体积分别为C5和V5计算浓度C=（C1×V1+ C5×V5）/(V1+V5) ,注意每管要充分混匀，并防止蒸发或其它改变。

二、结果判断:该法的线性判断过程大致分为四个步骤：（1）确定不同项目可接受不精密度和线性偏差。

EP6-A强调任何用户有必要确定自己对线性程度的要求,或非线性的允许误差范围,目标的确定应基于实验室客户的需要及所用方法的特性。

设定误差目标所要考虑的因素：线性目标来源于偏倚目标，因而应小于或等于偏倚目标；偏倚目标应应小于或等于测量误差。

（2）计算不精密度：目测检查无明显离群值，计算不精密度。

重复性用L个样本的所有重复测量结果的集合方差来评价。

用SDr或CVr表示。

公式………………………………①L为样本数；ri1和ri2分别为两次测量的实际结果,或与均值的百分比。

（3）不精密度符合要求后，作多项式回归分析。

多项式回归分析可以借助多种商业统计软件完成。

例如用SPSS的话，选“分析”→“回归分析”→“曲线估计” →“因变量” 、“自变量” 、“模型（线性、平方、三次方）”→得三个方程。

线性范围试验的原理

线性范围试验的原理线性范围试验是一种用于确定设备或系统线性动态范围的实验方法。

线性动态范围是指设备或系统能够正常工作的最大和最小输入范围。

通过线性范围试验可以确定设备或系统在此范围内的输入输出特性。

下面将详细介绍线性范围试验的基本原理。

1.基本原理-线性范围：在设备或系统的线性范围内，输入和输出之间存在线性关系，即输入的变化会导致相应输出的变化。

-饱和效应：当输入超出设备或系统的线性范围时，输出可能会饱和，即不能进一步增加或减少。

因此，通过逐步逼近设备或系统的极限输入值，可以确定其线性范围。

线性范围试验一般通过逐步增加或减小输入信号的幅度来完成。

2.实验步骤-步骤1：确定输入和输出信号的量化方式和量程。

输入信号可以是电压、电流、光强等，输出信号可以是电压、电流、功率等。

-步骤2：确定试验的最小和最大输入值。

这些值应尽可能接近设备或系统的极限输入。

-步骤3：确定逐步增加或减小输入信号的步长。

这个步长应足够小以确保可以逐步逼近极限输入。

-步骤4：以最小输入值为起点，逐步增加或减小输入信号的幅度，记录每个输入值对应的输出值。

-步骤5：计算输出信号和输入信号的关系。

可以通过绘制输入-输出曲线或计算输入输出比例等方式来确定线性范围。

-步骤6：检查输出信号是否饱和。

如果在试验过程中发现输出信号饱和，则应重新选择更合适的输入范围进行试验。

3.实验要点在线性范围试验中，需要注意以下要点：-输入信号的稳定性：输入信号在试验过程中应保持稳定，避免幅度和频率的变化对试验结果的影响。

-采样频率：选择合适的采样频率，确保采样点足够多，以获取准确的输入输出值。

-数据处理：对于大量数据，需要进行适当的数据处理，如平均值计算、滤波等，以消除噪声和提高结果的可靠性。

-精确度要求：根据设备或系统的敏感度和应用要求，确定试验结果的精确度要求。

4.应用举例-传感器：测量传感器的灵敏度和线性关系，确定其合适的工作范围。

-放大器：测试放大器的放大倍数和线性失真，确定其最大的输入输出范围。

方法学评价-线性范围试验

方法学评价
1
方法学评价
——通过一系列的实验，对某一实验方法作出客观的评价。
2
方法学评价试验
——线性范围试验 ——批内重复试验
——回收试验
——干扰试验
——方法比较试验
——检测能力试验
3
评价对象
——葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）。
4
GOD-POD法评价之线性范围试验
5
光谱分析—Beer定律：
量-反应曲线（dose-responses curve）。
13
GOD-POD法原理：
葡萄糖氧化酶(GOD)
葡萄糖 + O2
葡萄糖酸 + H2O2
过氧化物酶(POD)
H2O2 + 酚 + 4-氨基安替比林
（色原性氧受体）
醌类 + H2O+O2
14
试剂：
40mmol/L葡萄糖标准溶液
GOD-POD法相关试剂
——溶液的吸光度与溶液浓度成正比。
6
吸光度
溶液浓度
A=abc
吸光系数液层厚度吸光度A
0
浓度C
7
A
C
8
仪器偏离
线性误差
偏离
化学偏离
仪器线性检查仪器偏离
——杂光、有限带宽、检测器噪声、环境条件变化、波长的变化、比色杯误差、辐射光的非平行性、检测器本身的非线性等
化学偏离
——有色物质的电离、水解、缔合等原因。
10
线性范围试验目的： ——通过进行线性范围的测定，选择线性段作为该测定方法的分析范围。
11
A
线性段
θ
C
tanθ＝A1/C1＝A2/C2＝A3/C3＝……＝An/Cn＝K

生物样品分析中的方法学验证

生物样品分析中的方法学验证张剑萍*,郭澄#(上海交通大学附属第六人民医院药剂科,上海市200233)中图分类号R927文献标识码C文章编号1001-0408(2008)3.-2469-03摘要目的:介绍在色谱分析方法中方法学验证与质控的内容及其有待发展的方向。

方法:参阅国际上有关方法学验证的指导原则、国家食品药品监督管理局管理规范,结合本实验室的标准操作规程,对方法学验证与质控的内容及存在的问题进行综合分析。

结果:总结了方法学验证和质控的内容,及方法学验证中存在的可能的风险。

结论:已建立的方法学验证和质控内容基本完善,但方法学验证的标准也应该根据实际情况制定。

关键词生物样品分析;方法学验证;方法学质控生物样品分析方法的建立、验证和应用是临床前药动学和Ⅰ期临床试验研究中的重要组成部分,关系到药动学研究和生物等效性试验研究的科学性和正确性。

其中,方法学验证(Met hod validation)是整个试验数据可靠的基本保证,因此其是各个实验室标准操作规程(SOP)的重点内容。

本文根据国际上有关生物分析方法验证的指导原则,参照我国国家食品药品监督管理局的管理规范,结合本实验室研究经验,总结了以色谱分析方法为主的生物样品分析中方法学验证的内容及其标准制定中有待发展的方向,以供同行交流参考。

1意义方法学验证,又称方法学评价、方法学确认等,是整个药动学、生物利用度及生物等效性研究的基础。

这是药动学研究有别于其他药理毒理研究的特殊之处。

所有药动学研究结果都依赖于生物样品的测定,只有可靠的方法才能得出可靠的结果。

在通过特异性、灵敏度、精密度、准确度、稳定性等研究并建立检测方法学,以及得到了标准曲线后,在检测过程中还应进行方法学质控,制备随行标准曲线并对质控样品进行测定,以确保检测方法的可靠性。

2分类及其应用范围按照美国食品与药品管理局(FDA)分类,方法学验证分为全面验证(Fullvalidation)、部分验证(Partial validation)和交叉验证(Cross validation)[1]。

线性范围及检测限

线性与范畴 (linearity and range) 之阳早格格创做分解要领的线性是正在给定范畴内获与与样品中供试物浓度成正比的考查截止的本领.换句话道，便是供试物浓度的变更与考查截止(或者测得的赞同旗号)成线性闭系.所谓线性范畴是指利用一种要领博得粗稀度、准确度均切合央供的考查截止，而且成线性的供试物浓度的变更范畴，其最洪量与最小量之间的隔断，可用mg／L ~ mg／L、 ug／ml ~ ug／ml等表示.线性与范畴的决定可用做图法(赞同值Y／浓度X)或者预计返回圆程(Y＝a+bX)去钻研修坐.测定样品时所有死物药物分解要领皆必须共时做尺度直线.屡屡做尺度直线时，要领应与分解要领考核时真足普遍.尺度浓度应包罗一定梯度的5-8个浓度(非线性者如免疫分解可适合减少)，每个浓度只需测定一次(免疫分解可测定二次并与均值)；尺度直线应覆盖样品大概的浓度范畴，对付于含量测定央供普遍浓度上限为样品最下浓度的120％，下限为样品最矮浓度的80％ (然而应下于LOQ)；暂时仍广大采与相闭系数(r)表示尺度直线的线性度、并统造.对付照品的LOQ必须包罗正在线性范畴.线性范畴是指与检测器赞同旗号成线性闭系的样品的含量范畴.普遍情况下,尺度直线的最矮战最下值是包罗正在线性范畴内的,而且分歧人搞的尺度直线,他所与的最矮战最下值也没有会皆相共,挨个比圆去道,A搞5个面的尺度直线,所采用的尺度样品的浓度分别为:1,5,10,15,20,那么最矮最下值分别为1战20,而对付于那种要检测的物量去道,它的线性范畴大概是10E5,要近大于创造尺度直线所采用的浓度范畴.常常正在修坐一个新要领的时间不妨通过文件查到一些物量的线性范畴,而本量处事中,要确切知讲某种物量的线性范畴需要性大概也没有大.S/N=3时的浓度是检测限，也便是峰下约正在基线噪音下的3倍，注进液相色谱仪的对付照品百分浓度％. S/N=10是定量限，也便是峰下约正在基线噪音下的10倍时，注进液相色谱仪的对付照品量. 最先，配造一个较矮浓度的对付照品溶液，注进液相色谱仪，瞅察其峰下比基线噪音下几倍（假设X倍），将该溶液稀释到X/3倍，基础即为该物量的检测限，将该溶液稀释到X/10倍，基础即为该物量的定量限.简直支配时，便是把一定浓度的溶液没有竭稀释，直到S/N=3.普遍便是用眼去预计了，没有过也不妨预计出去，佳像是用尺度直线预计的，简直公式您不妨查一下书籍. Detection Limit\Limit of Detection\DL\LOD检出限DL是一种比值，用%或者ppm表示，等于最矮检出浓度与样品溶液浓度（常常是一个牢固的极限值）的比值，果此惟有正在谦脚最矮检出浓度战最矮检出量的共时才搞够搞出检出限.它主要适用于纯量测定中的纯量极限查看名手段要领考证，即您通过那个考证道明您的要领不妨检出脚够矮的纯量，便是道，如果您做出的检测限（最矮检测浓度）比极限佳下，那是万万没有成的.检测限没有单要矮于极限，最佳近近小于纯量极限.根据分解要领是采与非仪器分解仍旧仪器分解可用几种要领去决定检测极限，除了底下所列的要领中其余的要领也大概被交受.6． 1 根据直瞅评介直瞅评介不妨用于非仪器分解要领，也可用于仪器分解要领.检测极限的测定是通过对付一系列已知浓度分解物的样品举止分解，并以能准确测得被分解物的最小量去修坐.【通过进样洪量分歧浓度的溶液，道明您所道的检测限是最矮的，常常劳累没有讨佳，然而是却是无奈的情况下最佳的办法.6．2根据疑噪比该要领仪适用于出现基线噪音的分解要领.疑噪比的测定是通过比较含已知矮浓度被分解物的样品与空黑样品的尝试旗号，决定被分解物可被确切天检测的最小浓度，当疑噪比正在3：1或者2：1时的检测极限常常被交受.【此法时常使用：即瞅察图谱，包管图谱中旗号峰强度共一段仄慢的噪音峰强度的仄衡值约为3：1即可.】δ/S δ：赞同值的尺度好 S：矫正直线的斜率斜率S可从被分解物的矫正直线去估算，δ的值可由多种道路估算.如：6．3．1 根据空黑的尺度好通过几份空黑样品的分解，而后预计其赞同值的尺度好，测出分解背景赞同值的大小.6．3．2 根据矫正直线通过对付含有DL范畴内被分解物样品的分解去钻研其尺度直线，返回线的结余标易好或者返回线的y轴截距尺度好皆可动做尺度好.6．4 申报数据必须共时提供检测极限战测定检测极限的要领.如果睹是根据直瞅评估或者疑噪比得去的，应提供相闭的一些色谱图. 如通过预计或者中推法得到检测极限的估算值，可对付一系列交近或者等于检测极限样品的逐个分解去论证那一估算值. 【上述资料引致ICHQ2B，修议诸位阅读英文本文，恐翻译没有到位引起歧义】检测限是一种极限考验效能指标，它既反映要领与仪器的敏捷度战噪音的大小，也标明样品经处理后空黑(本底)值的下矮.要根据采与的要领去决定检测限.当用仪器分解要领时，可用已知浓度的样品与空黑考查对付照，记录测得的被测药物旗号强度S与噪音(或者背景旗号)强度N，以能达到S／N＝2或者S／N＝3时的样品最矮药浓为LOD；也可通过多次空黑考查，供得其背景赞同的尺度好，将三倍空黑尺度好(即3δ空或者3S空)动做检测限的预计值.为使预计得到的LOD值与本量测得的LOD值普遍，可应用矫正系数去矫正，而后依之造备相映检测限浓度的样品，反复尝试去决定LOD.如用非仪器分解要领时，即通过已知浓度的样品分解去决定可检出的最矮火仄动做检测限.其余，本量处事中以下几个观念是时常殽杂的：1，最矮检测浓度2，最矮检出量3，检出限1，最矮检出浓度：谦脚最矮检测限央供时，进样供试品溶液的浓度，罕睹单位：微克/毫降，纳克/毫降，克/毫降【浓度单位】.2，最矮检出量：最矮检出量=最矮检出浓度X 进样量，罕睹单位：微克，纳克【沉量单位】.3，最矮检出限：检出限DL是一种比值，用%或者ppm表示，等于最矮检出浓度与样品溶液浓度（常常是一个牢固的极限值）的比值，果此惟有正在谦脚最矮检出浓度战最矮检出量的共时才搞够搞出检出限.。

液相色谱仪紫外检测器线性范围检定方法比较

液相色谱仪紫外检测器线性范围检定方法比较陈敏1　高雄兵2 / 1.云南省计量测试技术研究院；2.昆明源瑞制药有限公司摘　要　在液相色谱仪首次检定时曾经遇到线性范围检定的困惑，经过对检定规程中紫外检测器线性范围检定过程的研究思考，结合自己的实际操作经验，查阅相关资料，给出一种新的线性范围检定方法供参考，并与文献中给出的检定方法进行比较。

关键词　液相色谱仪；紫外检测器；线性范围；首次检定0　引言液相色谱仪[1]是化学分析中发展最快、应用最广的分析仪器，液相色谱法具有分析速度快、分离效能好和灵敏度高等优点，现已广泛应用于药品检验、产品检测、农残检测等各个方面。

新购买未经过检定的液相色谱仪需要根据JJ G705-2014《液相色谱仪》检定规程的规定进行首次检定，首次检定[2]需要检定的项目有：输液系统的泵耐压、泵流量设定值误差和流量稳定性、梯度误差、柱温箱中温度设定值误差和温度稳定性、检测器中的基线噪声、基线漂移、最小检测浓度、波长示值误差和重复性以及线性范围、整机的定性定量重复性这十二个项目。

本文就液相色谱仪紫外检测器首次检定项目中线性范围的检定，经思考和实践后提出一种新的检定方法，并与文献中的方法进行比较。

1　实验部分根据JJG 705-2014的规定，液相色谱仪首次检定中线性范围是必检项目。

在后续检定中，一些客户也可能存在线性范围检定的需求。

线性范围是仪器检测的准确性指标，仪器线性的好坏直接关系到该仪器定量是否准确，是关乎仪器质量的一项重要指标。

作者查阅了相关文献，文献[3]报道一种检定线性范围的方法是，将用于线性范围检定的不同浓度丙酮-2%异丙醇水溶液作为样品，采用2%异丙醇水溶液作为流动相，进相同体积不同浓度的丙酮-2%异丙醇水溶液，以丙酮的峰面积与浓度作标准曲线。

根据文献方法进行检定得出的具体数据见表1（仪器型号：LC-2030C、编号：L21445403387AE，生产厂家：SHIMADZU），线性图见图1。

线性范围评估的指南

线性范围的评估及数据处理方法
结果报告
线性范围报告的具体格式不要求，但至少应包括以下几方面：
进行线性评价的实验室或生产厂家名称。被评价的方法或试剂名称，批号。测定项目。线性范围（如为二阶线性应包括临床允许误差）。如可能应标出测定项目的医学决定水平及在此水平处
的临床允许误差。
知识回顾 Knowledge Review
临床标准的线性与非线性检验
一般设定ADL小于5%为临床允许误差，即取PctBnd为 5%，通过查表（附录A和B）得到ADL临界值。
如ADL小于临界值，可认为多项式具有临床可接受的非线性，为二阶线性。如ADL大于临界值，则为临床不可接受的非线性
线性范围的评估及数据处理方法
临床标准的线
性与非线性检验
验证标称线性参数：需测定4-6个浓度水平，每个浓度水平重复测定3-4次。
所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定，最好在一天之内完成
线性范围的评估及数据处理方法
数据记录
项目：仪器：操作者：
样本号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
测定1
试剂/批号：审核者：
测定2
跟据以下公式进行判断
线性范围的评估及数据处理方法
对数据组进行精密度检验
不精密度满足判断式时, 说明数据的精密度好可作线性评价。
反之则表示数据的精密度差，不能作线性评价。当PctBnd取5%时, 尚可通过查不精密度和临界值表判
断数据是否精密 (附表A和B), 如此时不精密度对应的临界值显示P, 表明测量数据的精密度不符合作线性判断的要求
线性范围评估指南
郑金来 zhengjinlai@
前言
线性范围评估资料是评价拟上市产品有效

分析方法验证系列：第六节--理化分析方法的线性和范围验证

分析方法验证系列：第六节--理化分析方法的线性和范围验证扫码入群理化分析方法的线性和范围验证1.线性线性系指在设计的范围内，测定响应值与试样中被测物浓度呈比例关系的程度。

线性可以直接用待测物质测定（通过稀释标准贮备液）或分别称取待测品种的各组分后合成混合物。

配制5个以上不同浓度的标准溶液（浓度范围至少在期望浓度的80～120%之间），同时测定空白溶液，用试验结果计算线性。

响应值应与被分析物的浓度成直接的比例关系，或通过定义明确的数学计算形成比例关系。

需要区分的是仪器线性和方法线性。

仪器线性证实从LOQ到仪器上限工作范围内，仪器响应值遵循线性关系，同时证实仪器线性与方法测定范围相匹配。

评价仪器线性时使用涵盖测定浓度范围的一组标准品溶液进行测定。

仪器线性示图见6-1 A；方法线性测定时使用已知目标物质浓度的样品，空白样品也需具备。

方法线性示图见6-1 B。

用于结果计算的线性回归方程其截距不得明显偏离零点。

如果得到一个显著的非零截距，应证明其对方法准确度无影响。

应报告线性曲线的相关系数、y轴截距、回归线斜率和残差平方和。

报告中还应包括线性图。

可接受标准示例如下。

具体可接受标准应根据测定方法性质和测定浓度范围进行调整。

表1线性可接受标准示例检验项目验证方法可接受标准含量测定至少标示量的80%～120%（ICH），推荐包含50%～150%的浓度r＞0.995; │截距│%≤2%*；杂质含量测定至少杂质规定限度的±20%，推荐包含定量限～120%规定限度的浓度；如果含量测定与杂质检查同时进行，用峰面积归一化法进行计算，则线性范围应为杂质规定限度的-20%至含量限度（或上限）的+ 20%r应0.990，│截距│%≤25%** 与100%允许限度（x=100%）时的浓度带入回归曲线中计算出的y值相比2.范围范围系指分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时的高低限浓度或量的区间。

分析方法的范围一般用于检测结果相同的单位表述（例如，百分比）。

关于IVD产品线性范围的建立与验证讨论

简化的方法
生产、质管部：
以预期值为横坐标，测定值为纵坐标，建立回归方程y=bx+a ，将预期浓度代入方程，计算估算值。估算值与实测值平均差值应不大于声明的相对或绝对偏差，否则为不满足线性。
之间其它浓度的反应状态，并可得到连续、可靠的结果的能力。
多项式回归应进行1-3项式的回归
阶次一次
回归方程
回归自由度（Rdf） 2
Y=b0+b1X
二次
三次
Y=b0+b1X+b2X2
Y=b0+b1X+b2X2+b3X3
3
4
4. 数据处理
回归方程的线性检验：对回归方程进行线性检验就是对每个非线性系数（b2、b3）做t检验，判断回归系数与零是否存在显著性差异。
接近预期可报告范围下限浓度的人体样本
水溶液
其它溶剂，有机溶剂可能带来更大的基质效应
2. 样本准备
准备足量的高值（H）样本和低值（L）样本，经不同比例混合配制成中间浓度样本（Xn），比例关系可按等间距或其它确定的比
例。其中有几个重要的浓度水平需要考虑：
1. 最低分析浓度或线性范围下限 2. 不同的医学决定水平值 3. 最高分析浓度或线性范围上限
2. 样本准备
例：等间距稀释5个点
序号比例 1 L 2 3 4 5 H
等比稀释5个点(1/2比例）
序号比例 1 L 2 3 4 5 H
Concentration=(L×VL+H×VH）/（VL+VH）
3. 样本测定
建立线性范围： 9-11 个样本，超出 20%-30% 预期线性范围（上、下限），每样本重复测定2-4次。验证声明线性范围或改良方法： 7-9个样本，覆盖线性范围，每样本重复测定2-3次。实验室内证实线性范围有效性：5-7个样本，每样本重复测定2次。