芍药苷提取分离研究报告2

【前言】

芍药苷主要来源于毛茛科植物芍药根,牡丹根,紫牡丹根。关于芍药的使用，我国很早就有书面记载，始载于《神农本草经》，“主邪气腹痛，除血痹，破坚积，寒热疝瘕，止痛利小便，意气”。我国明间用于治疗胸腹腰肋疼痛，自汗盗汗，阴虚发热，月经不调，崩漏带下。现代研究表明其主要有效部位为芍药总苷，赤芍提取物含芍药甙(Paeoniflorin)、芍药内酯甙(Albiflorin)、氧化芍药甙(Oxypaeo- niflorin)、苯甲酰芍药甙(Benzoylpaeoniflorin)、芍药吉酮(Paeoniflorigenone)、芍药新甙(Lactiflor- in)、胡萝卜甙（Daucosterol），赤芍精（d-儿茶精，d-Catechin）及没食子鞣质（Gallotannin），苯甲酸（Benzoic acid），挥发油、脂肪油、树脂、糖、淀粉、黏液质、蛋白质等，主要成分为芍药苷，其具有镇静、解痉、抗炎、抗应激性溃疡病、扩张冠脉血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板凝聚等多方面的作用，而且毒性小。临床上已试用于治疗冠心病，老年性疾病，增强体质与免疫功能、抗炎止咳、祛痰平喘等方面，尤其是老年慢性呼吸道疾病的治疗中可作辅助药物。

【理化性质】

芍药苷（Paeoniflorin）又名芍药甙，化学名为：β-D-Glucopyranoside,5,6-[(benzoyloxy)methyl ].tdtrahydro-5-hydroxy-2-m ethyl-2,5-methano-1H-3,4-dioxacyclobuta[cd]petalen-1a(2H)-yl,[laR-(1a α,2β,3aα,5a,5aα,5bα)]- 分子式C23H28O11 ,分子量480.45，熔点196℃。本品为吸湿性无定形粉末，四醋酸酯为无色针状结晶，属蒎烷单萜苷，极性较大。药典记载，芍药苷遇香草醛会显现蓝紫色。

本次试验的意义在于通过改进分离工艺来提高芍药苷的分离效果，以便应用于工业化大生产。

【仪器试剂】

材料：赤芍干燥根切片 500g。（由实验室提供）

有关芍药苷的提取常用水提、醇提以及超声三种方法。由于水提率不如醇提，而超声又会影响芍药苷结构的稳定性，所以采用醇提。分离采用活性炭吸附及硅胶柱层析。具体操作流程如下：

【流程图】：

1h/次，合并提取液

℃)

滤液

醇水溶液

活性炭

℃）

乙醇溶液（回收）浸膏

硅胶柱层析（干法）纯乙酸乙酯洗脱

洗脱液

减压浓缩至干

芍药苷

【具体操作】

醇水溶液回流提取赤芍干燥根切片500g，用粉碎机粉碎成细粉。取250g加入2000mL圆底烧瓶中，分别以8倍、6倍、4倍量70%乙醇提取3次，每次提取 1h。每提取一次便浓缩一次，回收乙醇便可循环利用，合并3次的浓缩液。另一半药材以同样的方式处理，合并所有的浓缩液。

活性炭吸附分离取部分浓缩液稀释，加入活性炭吸附，过滤，将滤液和原液进行硅胶薄层点样，喷以显色剂，观察活性炭是否能将芍药苷吸附住，TLC鉴别如下：

展开剂——氯仿：乙酸乙酯：甲醇：甲酸 40：

5：10：0.2（药典）。显色剂——香草醛：甲醇：

硫酸 5：80：15。配置方法：取0.1g香草醛，

以10mL浓盐酸溶解，取其2.5mL溶液于显色喷

瓶中，加甲醇40mL，再加浓硫酸7.5mL，摇匀

即得。药典记载，芍药苷遇香草醛会显现蓝紫

色斑点。

右边为吸附后滤液点样点，左边为吸附前样液

样点。箭头所指为蓝紫色斑点。

由TLC鉴别可知，芍药苷可以被活性炭吸附。取9份2mL浓缩液，都稀释到10mL，加入等量的活性炭3g,分别以10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇溶液洗脱，经TLC检测，40%及以上浓度的乙醇都能将芍药苷洗脱，而之前的都不能洗脱，部分点样如下:

从右至左分别为20%、30%、40%、50%乙

醇溶液的洗脱液点样点。从上至下分别

为蓝紫色斑点、浅黄色斑点、点样点。

由图可以判断芍药苷不能被30%及更低浓

度的乙醇洗脱下来，但40%及以上浓度的乙醇

都可以洗脱。

将所有浓缩液与以上检测液合并，加1500mL蒸馏水稀释，加入350g经105℃活化1h的活性炭吸附。搅拌，0.5h后过滤。滤液TLC检测没有发现蓝紫色斑点，说明芍药苷完全被活性炭所吸附。滤出的活性炭先以自来水洗至无色，再用80%乙醇溶液进行洗脱，直到洗脱液经TLC检测没有蓝紫色斑点为止，说明被吸附的芍药苷都被洗脱下来。将各次的洗脱液旋转蒸发浓缩，温度应小于60℃。

洗脱剂的选择在进行硅胶柱层析之前应先选择合适的洗脱剂才能得到较纯的分离物，提高分离效率及节约成本。取3mL浓缩液稀释至10mL

作点样液。

展开剂—氯仿：甲醇 8：1

①、②、③、分别为蓝紫色斑点、浅黄色

斑点、点样点。可见芍药苷与另一种物质的R f

太接近，难以分离。

①

②

③

展开剂—氯仿：甲醇 8：2

最右端为浓缩液，其余皆为稀释液。

①、②、③、④、⑤依次为浅红、蓝紫、

棕黄、浅黄、点样点。

①

②

③

④

⑤

①

展开剂—氯仿：甲醇 8：3

①为蓝紫色斑点，但出现严重拖尾现象，作为洗脱

剂是不可取的。

展开剂—纯乙酸乙酯

最右端为浓缩液，其余皆为稀释液。

①①、②、③分别为浅红、蓝紫色、点样斑点，与

氯仿--甲醇 8：2的展开系统相比，既使芍药苷与极

性更大的物质如多糖等分开又与极性小的物质如跑

在前面的红色斑点分开，所以选择纯乙酸

②乙酯作为上柱洗脱剂比较合理。

③

硅胶柱层析分离采用干法上柱。取110g旧硅胶G和200g新硅胶G于烘箱中105℃活化1.5h。用蒸发皿将浓缩液浓缩成浸膏，以适量98%乙醇溶解，与活化好的旧硅胶拌样，自然风干，再放到烘箱中80℃干燥2h。

取8×100cm层析柱，检测不漏水，塞上脱脂棉，松紧适宜。先以新硅胶装柱，以吸耳球敲实整平，垫一张滤纸，再装干燥好的拌样旧硅胶，敲实整平，再垫一张滤纸。以玻璃棒引流加入纯乙酸乙酯，打开活塞，开到最大，使乙酸