白芍中芍药总苷类化合物的提取与分离工艺研究

表 １ 不同溶剂提取芍药苷含量的比较（ ｎ＝３）
提取溶剂
芍药苷平均含量（ ％）
Ｒ ＳＤ（ ％）
水
０．９２
２．８７
５０％乙 醇
１．０７
２．７６
９０％乙 醇
０．７８
３．０４
水平 １ ２ ３
表 ２ 因素水平表
乙醇浓度 Ａ（ ％） 乙醇用量 Ｂ（ 倍）
８０
６
７０
８
６０
１０
提取时间 Ｃ（ ｈ） １．０ １．５ ２．０
病例 ４．眭某， 男， ４８ 岁。２００４ 年 ２ 月 １２ 日初诊。 患者右上腹疼痛反复发作半年， 发作 １ｄ。半年前 因胆囊结石行胆囊切除术， 术后仍有反复的右上腹 疼痛， 时作时止， 止时如常， 食油腻荤腥易作。今腹痛 阵发性加剧， 大便 ３ｄ 未行。血常规： ＷＢＣ ８．３×１０９／Ｌ， Ｎ ０．８５， Ｌ ０．１５； Ｂ 超、胃镜等检查未见异常。考虑为 术后肠粘连。观其舌红苔黄厚腻， 脉弦滑。此属湿热 燥屎内结， 治以清化湿热， 通腑化瘀止痛。处方： 醋柴胡 １０ｇ， 黄芩 １０ｇ， 枳实 １０ｇ， 厚朴 １０ｇ， 白芍 １０ｇ， 法半夏 １０ｇ， 制香附 １０ｇ， 广郁金 １０ｇ， 川芎 １０ｇ， 生大黄 ６ｇ， 生甘草 ３ｇ。常法煎服。 服药 ２ 剂即大便通畅， 腹痛缓解。本方服用 ７ 剂 后去大黄加桃仁、红花各 １０ｇ， 共服 ２１ 剂。随访半年 未发。 作者简介： 马朝群（ １９６４－ ） ， 男， 副主任医师， 在 读博士研究生， 主要从事普外科疾病的诊治工作。
甲酰芍药苷等单萜苷类化合物， 简称芍药总苷， 还含有部分三萜 化合物以及鞣质等。现代研究表 明 ， 白 芍 具 有 抗 炎 、镇 痛 作 用 ， 芍 药苷等单萜类化合物是其抗炎、
镇 痛 的 主 要 物 质 基 础 ［１］。 本 实 验 选取 ＡＢ－ ８ 型大孔吸 附 树 脂 分 离 芍药总苷， 并对树脂的上样工艺 及洗脱工艺进行了较为详细的 考察。
Ｋ３
３．１９
３．２９
３．２２
３．２３
ＳＳｉ
０．３９１４ ０．０５８０７ ０．０１４４７ ０．００４８６７
５６ ２００６ 年第 ２７ 卷第 １２ 期
治法方药
取 Ｄ１０１ 型、ＨＰＤ１００ 型及 ＡＢ－ ８ 型树脂各适量， 以 ９５％乙醇浸泡 ２４ｈ， 蒸 馏 水 洗 净 乙 醇 ， 用 ２ 倍 树 脂体积的 ５％ ＨＣｌ 溶液以 ４～６ 倍 体积／ｈ 的流速通过树脂柱， 并浸 泡 ２～４ｈ， 而后用蒸馏水洗至出水 中 性 ， 再 用 ２ 倍 树 脂 体 积 的 ２％ ＮａＯＨ 溶 液 按 照 ５％ ＨＣｌ 溶 液 处 理法洗至出水中性。 ２．３．１．２ 大 孔 吸 附 树 脂 种 类 的 筛 选 取上述预处理的 ３ 种树脂各适 量（ 相当于 ５ｇ 干树脂） ， 置具塞烧瓶 中， 各加含生药量 ０．５０ｇ／ｍｌ 的 上 样液 ２０ｍｌ， 置 ２５℃恒温摇床 １２ｈ， 取样测定， 以芍药苷为指标， 计算 各树脂对指标性成分的比吸附量
附量， 各平行 ３ 份。结果如表 ６ 所示， 动态反复上样， 比吸附量 大于静态上样， 故选择动态上样 方式。 ２．３．３ 上样量的考察 ２．３．３．１ 上 样 量 考 察 预 准 备 称 取 ＡＢ－ ８ 型大孔树脂 ４ 份， 每份 ５ｇ， 装入层析柱， 分别以含生药量 ０．１０ｇ／ｍｌ、０．２５ｇ／ｍｌ、０．５０ｇ／ｍｌ、０．７５ｇ／ｍｌ 的上样液 ２０ｍｌ 缓缓上样， 反复 ４ 次。 ２．３．３．２ 不 同 上 样 量 的 比 吸 附 量 测定 吸附液和水洗液按照 ２．１．１ 色谱条件进行测定， 以芍药苷为指 标计算比吸附量， 从而考察出最佳
制川乌 ３ｇ， 制草乌 ３ｇ， 小茴香 ６ｇ， 甘草 ６ｇ， 桂枝 １０ｇ， 当归 １０ｇ， 乌药 １０ｇ， 延胡索 １０ｇ， 川楝子 １０ｇ， 白 芍 ２０ｇ。常法煎服。
本方服用 ５ 剂后见效， 加减调整共服 ２０ 剂症状 消失， 半年未发。 ４ 清化湿热法
许多肠粘连患者往往伴有感染或燥屎内结或 肠内湿热内蕴等等， 常有腹痛伴便秘或腹泻， 泻 下粘滞臭秽， 伴口臭， 舌红或焦燥起刺， 苔黄燥或 黄腻， 脉弦滑。证属湿热蕴结， 经脉气血受阻， 治 当 清 化 湿 热 、通 腑 逐 瘀 。 常 用 方 有 泻 心 汤 合 小 承 气 汤 。常 用 药 有 ： 生 大 黄 、黄 芩 、黄 连 、黄 柏 、红 藤 、 败 酱 草 、厚 朴 等 。也 可 配 入 行 血 逐 瘀 之 品 ， 以 求 标 本兼治。
治法方药
白芍中芍药总苷类化合物的提取与分离工艺研究
薛建国 狄留庆 赵晓莉 （ 南京中医药大学， 江苏南京 ２１００４６）
提 要 目的： 研究白芍中芍药苷类化合物的提取工艺以及大孔树脂对此类化合物的分离、富
集工艺。方法： 以芍药苷含量为指标， 确定提取工艺； 以芍药苷的比吸附量为指标， 选择适合分离的大
基金项目： 江苏省教育厅自然科学研究项目（ ０２ＫＪＢ３６０００７）
诊。３ 月前曾行妇科卵巢囊肿剥离术， 术后 １ 月开始 出现小腹痛， 每遇受凉或饮食生冷诱发。经妇科检 查， Ｂ 超， 血、尿检查均未见异常。考虑为妇科手术后 肠粘连。患者舌淡紫气， 脉沉迟。证属寒凝腹中， 经脉 瘀滞， 治以祛寒温经、化瘀止痛。处方：
佳。结论： 用 ＡＢ－ ８ 型大孔树脂来分离、富集白芍中芍药总苷工艺可行。
关键词 白芍 芍药苷 提取与分离 ＡＢ－ ８ 大孔树脂 上样 洗脱
中图分类号 Ｒ ２８４．２
文献标识码 Ａ
文章编号 １６７２－ ３９７Ｘ（ ２００６） １２－ ００５５－ ０４
白芍为毛茛科植物芍药 Ｐａｅｏｎｉａ Ｌａｃｔｌｆｌｏｒａ Ｐａｌｌ． 的 干 燥 根 ， 具 有 养 血 敛 阴 、平 抑 肝 阳 之 功效。白芍的主要有效成分为芍 药 苷 、白 芍 苷 、氧 化 芍 药 苷 和 苯
为考察的 ３ 个因素， 各取 ３ 个水 平， 制定因素水平表， 见表 ２。每 份样品提取 ３ 次， 合并提取液， 以 提取液中芍药苷含量为指标， 选 用 Ｌ９（ ３４） 正交试验表进行实验。 ２．２．２．２ 供 试 液 的 制 备 取 白 芍 粉末 ２０ｇ， 共 ９ 份， 按 照 ２．２．２．１ 实 验安排进行实验， 各份提取液减 压回收溶剂近干， 以流动相溶解 并定容至 ５００ｍｌ， 备用。 ２．２．２．３ 供 试 品 含 量 测 定 按 ２．２．１．２ 方法进行， 由方差分析结果 表明， Ａ 因素不同水平间有显著性 差异， 结合各因素不同水平的 Ｋｉ 值， 确定最佳工艺条件为 Ａ２Ｂ２Ｃ２， 即药材加 ８ 倍量 ７０％乙醇回流提 取 ３ 次， 每次 １．５ｈ。见表 ３、表 ４。 ２．３ 芍药总苷的分离工艺研究 ２．３．１ 大孔吸附树脂类型的选择 ２．３．１．１ 大孔吸附树脂的预处理
方差来源
表 ４ 方差分析表
离均差平方和
自由度
均方
Ａ
０．３９１４
２
Ｂ
０．０５８０７
２
Ｃ
０．０１４４７
２
误差（ Ｄ）
０．００４８６７
２
注： Ｆ０．０１（ ２， ２） ＝９９， Ｆ０．０５（ ２， ２） ＝１９， ＊Ｐ＜０．０５。
Ａ（ｍｇ／ｇ） 。Ａ＝（Ｍ上－ Ｍ残－ Ｍ水洗）／Ｍ ， 树脂重 选取对指标成分比吸附量最大的
树脂。由表 ５ 可见， ＡＢ－ ８ 型大孔 吸附树脂对芍药苷的比吸附量最 大， 故选择 ＡＢ－ ８ 型大孔树脂来分 离芍药苷。 ２．３．２ 上样方式的比较 取 ＡＢ－ ８ 型树脂 ５ｇ， 装入层析柱（ ２×２５ｃｍ） ， 缓 缓 加 入 含 生 药 量 ０．５０ｇ／ｍｌ 的 上 样 液 ２０ｍｌ， 以 ３０ 滴／ｍｉｎ 的 速 度 流出， 流出液再同法上样 ３ 次； 另 取 ＡＢ－ ８ 型 树 脂 ５ｇ， 置 具 塞 锥 形 瓶 中 ， 加 含 生 药 量 ０．５０ｇ／ｍｌ 的 上 样 液 ２０ｍｌ， 静 置 １２ｈ 后 装 入层析柱， 流出残留液， 以适量 水 洗 。 分 别 计 算 动 、静 态 两 种 上 样方式下树脂对芍药苷的比吸
表 ３ Ｌ９（ ３４） 正交试验结果表
编号
Ａ
Ｂ
Байду номын сангаас
Ｃ
Ｄ
芍药苷含量（ ％）
１
１
１
１
１
０．６１
２
１
２
２
２
０．８５
３
１
３
３
３
０．８９
４
２
１
２
３
１．２４
５
２
２
３
１
１．３８
６
２
３
１
２
１．２６
７
３
１
３
２
０．９５
８
３
２
１
３
１．１０
９
３
３
２
１
１．１４
Ｋ１
２．３５
２．８０
２．９７
３．３１
Ｋ２
３．８８
３．３３
３．２３
３．０６
孔树脂类型； 以芍药苷的比吸附量为指标， 考察上样工艺； 以芍药苷的比洗脱量为指标， 考察洗脱工
艺。结果： 芍药苷的最佳提取工艺为药材加 ８ 倍量 ７０％乙醇回流提取 ３ 次， 每次 １．５ｈ。以 ＡＢ－ ８ 型大孔
树脂来分离芍药苷， 采用 动 态 上 样 方 式 ， 以 １０ 倍 量 ２０％乙 醇 洗 脱 ， 滴 速 ２．０ｍｌ／（ ｍｉｎ·ｃｍ２） 分 离 效 果 最
为溶剂， 加热回流提取 ３ 次， 每次 １ｈ， 各份提取液减压回收溶剂尽 干， 以流动相溶解并定容至 ２５０ｍｌ， 备用， 各平行 ３ 份。 ２．２．１．２ 供 试 液 的 含 量 测 定 取 上 述 各 份 样 品 溶 液 １ｍｌ 至 １０ｍｌ 量瓶中， 以流动相稀释至刻度， 摇 匀 ， 取 １０μｌ 注 入 高 效 液 相 色 谱仪， 按照 ２．１．１ 色谱条件进行 测定， 以标线计算含量。结果如 表 １ 所 示 ， ５０％ 乙 醇 提 取 芍 药 苷 的含量高于水提取， 同时发现醇 浓度越高， 芍药苷含量反而明显 降低， 故拟进一步对芍药苷提取 工艺进行多因素水平考察。 ２．２．２ 正交试验法考察芍药苷的 提取工艺 ２．２．２．１ 实 验 安 排 根 据 影 响 芍 药苷提取得率的相关因素， 选定 乙 醇 浓 度 、乙 醇 用 量 、提 取 时 间 作
收稿日期： ２００６－ ０７－ ０２
编辑： 冯广清
２００６ 年第 ２７ 卷第 １２ 期 ５５
治法方药
１ 仪器、药品与试剂 仪 器 ： Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ 型 高 效 液
相 色 谱 仪 ， ＢＰ２１０ 型 电 子 天 平 ， ＢＥＣＫＭＡＮ Ｊ－ ２５ 型 高 速 离 心 机 。 对 照 品 ： 芍 药 苷 （ 批 号 ： ０７３６ － ２００１１６） ， 购于中国药品生物制品 检定所。药材： 白芍， 购于南京中 医药大学门诊部， 由南京中医药 大学中药鉴定教研室王春根教 授鉴定为毛茛科植物芍药 Ｐａｅｏｎｉａ Ｌａｃｔｌｆｌｏｒａ Ｐａｌｌ． 的 干 燥 根 。 试 剂 及 试 药 ： 甲 醇 （ ＨＰＬＣ 级） ， 亚沸蒸馏水（ 自制） ， 医用酒 精。大孔吸附树脂： Ｄ１０１ 型大孔 吸附树脂 （ 天津南开大学化工 厂 ） ， ＡＢ－ ８ 型 大 孔 吸 附 树 脂 （ 天 津 南 开 大 学 化 工 厂 ） ， ＨＰＤ１００ 型 大孔吸附树脂（ 河北沧州宝恩化 工有限公司） 。 ２ 方法与结果 ２．１ 芍药苷 ＨＰＬＣ 含量测定方法 的建立 ２．１．１ 色 谱 分 析 条 件 色 谱 柱 ： Ｌｉｃｈｒｏｓｐｅｒ－ Ｃ１８ 柱（ ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ， ５μｍ） ； 流 动 相 ： 甲 醇 － 水 （ ３５： ６５， Ｖ／Ｖ） ； 体 积 流 量 ： １．０ｍｌ／ｍｉｎ； 检 测 波长： λ＝２３０ｎｍ； 柱温： ３０℃。 ２．１．２ 标准曲线的制备 精密称 取 芍 药 苷 对 照 品 １０．４０ｍｇ 置 １００ｍｌ 容量瓶中， 加流动相溶解并 稀释至刻度， 摇匀， 得对照品贮备 液。分别精密吸取上述对照品贮 备 液 １．０ｍｌ、２．０ｍｌ、４．０ｍｌ、６．０ｍｌ、 ８．０ｍｌ 至 １０ｍｌ 量瓶中， 加流动相 稀释至刻度， 摇匀， 制得标准溶液 系列。分别进样 ２ 次， 各 １０μｌ。以 对照品浓度对峰面积平均值作 图， 结果经回归分析， 芍药苷在 ０．１０４μｇ～０．８３２μｇ 范 围 内 有 良 好 的 线 性 关 系 ， 回 归 方 程 为 Ｙ＝ １１．６６０９３×Ｃ－ １．５０４６２， ｒ＝０．９９９９。 ２．２ 芍药苷的提取工艺研究 ２．２．１ 不同溶剂对芍药苷提取得 率的影响 ２．２．１．１ 供 试 液 的 制 备 取 白 芍 粉 末 １０ｇ， 置 圆 底 烧 瓶 中 ， 分 别 以 水 、５０％ 乙 醇 、９０％ 乙 醇 各 １００ｍｌ