牡丹籽粕中提取芍药苷方法的资料

三、研究内容
牡丹籽粕中芍药苷类成分的分离 纯化和结构鉴定
牡丹籽粕中芍药苷类的含量分析
牡丹籽粕中提取芍药苷的工艺研究
芍药苷提取液的纯化研究
三-1、牡丹籽粕中芍药苷类成分 的分离纯化和结构鉴定
取1 Kg牡丹饼粕过40目筛，用30%乙醇冷浸 提取3次，合并提取液，减压浓缩，再用高 浓度乙醇沉淀，取上清液浓缩回收溶剂， 得到480 mL混悬液。过HPD-200A型大孔吸 附树脂柱，用50%乙醇洗脱。流出液合并后， 各洗脱馏分用半制备型高效液相色谱分离 纯化。
三-3、牡丹籽粕中提取芍药苷 的工艺研究
通过对表2各因素的综合评 价，由表2中极差大小可以 看出，影响提取液芍药苷浓 度的因素主次顺序为B＞C＞ D＞A。随所选水平因素变动， 4种因素的最佳组合为 A3,B3,C2,D3，这与R的大 小排列是一致的，即用10倍 于原料的70 %乙醇溶液在 50℃的超声处理30 min，芍 药苷提取量最高。
三-4、芍药苷提取液的纯化研究
95%乙醇处理后树脂（HPD200A，HPD10 0， D-101，D-101A，AB-8）做吸附 解吸附纯化研究实验，通过静态动力 吸附曲线、动态吸附试验筛选树脂， 并在此基础上考察上样液浓度对吸附 效果的影响和乙醇浓度对洗脱效果的 影响
三-4、芍药苷提取液的纯化研究
三-1、牡丹籽粕中芍药苷类成分 的分离纯化和结构鉴定 各洗脱馏分用半制备型高效液相色谱分离 纯化，分别得到主要的化学成分，包括化 合物1（380 mg）、2（700 mg）、3（100 mg）、4（400 mg）、5（320 mg）和6（14 0 mg）。
图1 饼粕提取物的LC-MS色谱图
三-1、牡丹籽粕中芍药苷类成分 的分离纯化和结构鉴定 • 对提取物进行LC-MS分析，经质谱碎片分析 得出：化合物1和3为同分异构体，相对分 子质量为642，2和4为同分异构体，相对分 子质量为480。 • 对6种化合物进行H-NMR分析（谱图见附 表），结合文献初步确定了这6种化合物的 化学结构，它们分别是：化合物1： 6′-O -D葡萄糖芍药内酯苷；2：芍药内酯苷； 3： β -gentiobiosylpaeoniflorin；4： 芍药苷；5： 苯甲酸；6：芍药苷元。
牡丹籽粕中 提取芍药苷方法的研究
菏泽尧舜牡丹生物科技有限公司
主要内容
一 课题选择的背景
二 研究的意义 三 研究的内容 四 经济效益分析
五 专利及查新报告
一、课题选择的背景
• 本项目研究目的是开发油用牡丹籽粕的附加值。 首先对牡丹籽粕中生物活性成分进行分析评估， 探索开发利用的方法。从而延长牡丹产品的产业 链，以高新技术促进牡丹生物产业发展。 • 本课题以本公司生产牡丹籽油后的牡丹籽粕为原 料，对其水醇提取液进行了高效液相、质谱分析 首先确定了含有芍药苷成分，进一步确认了芍药 总苷含量约在2.65mg/g。后续研究了从牡丹籽提 取芍药苷的提取工艺及纯化工艺。
三-2、牡丹籽饼粕中芍药苷类 的含量分析
经与标准品定量分析得出芍药苷的含量大约为15.6 mg /g。芍药苷同族物总含量大约为26.6 mg/g（以芍药苷 计，1号峰为2.05 mg/g牡丹籽粕，2号峰为6.95 mg/g 牡丹籽粕）。图中成分：1，2：可能是芍药苷同系物； 3：未知多酚成分；4：芍药苷。
二、研究的意义
• 芍药苷是来源于赤芍白芍的一种药物，是一种单萜类糖。国内外研 究其药理作用广泛： 具有扩张血管、扩张冠脉血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板 凝聚等多方面作用， 镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、 利尿、抗应激性溃疡病。 市场产品有芍药苷胶囊，主治类风湿性疾病，疗效非常显著。 • 芍药苷传统的主要来源是毛茛科植物芍药的根，含量以赤芍为高， 含量约3%。以植物根部为主，一次性利用，且植物生长周期为5-6 年，生产周期长。本课题以牡丹籽粕为芍药苷的来源，每年都可以 收获种子，且种子产量高，有明显的经济效益和社会效益。 • 我国是世界上最大的牡丹种植国家，研究表明，牡丹籽亩均产籽30 0-400公斤，目前产量高达5万吨左右，居世界第一位。目前牡丹产 业化利用报到较少，主要集中于牡丹籽油的生产工艺、质控和用途 研究方面。而牡丹籽油生产过程中产生的籽粕的开发利用未见详细 的研究报到。
重结晶
晶体
粗品
四、经济效益分析
• 本项目总投资为1168万元，其中建设投资7 68万元，流动资金400万元。销售价格90% 含量的1.35万元/KG，按年生产6吨计算， 本项目生产期年销售收入为8100万元，年 平均利税6617万元，年平均税后利润为 2835万元。 • 从财务分析数据可见，本项目投资利润率 218.60%，盈亏平衡点13.53%，具有较强的 抗风险能力，表明该项目在经济上是可行 的。
三-2、牡丹籽饼粕中芍药苷类 的含量分析
结果显示，用该方法对饼粕中的芍药苷类成分进 行分析，各成分具有较好的分离度，相对标准偏 差在1.91%～2.72% 之间，线性范围在20 ng～500 0 ng之间，最低检出限为3.6 ng～16.1 ng之间， 回归方程的相关系数r介于0.9992～0.9999，6种 成分可以在16 min之内实现良好分离。HPLC色谱 图如图2所示。
6种化合物H-NMR图
1、 6′-O-D葡萄糖芍药内酯苷
2芍药内酯苷
3： β-gentiobiosylpaeoniflorin
4： 芍药苷
5： 苯甲酸
6：芍药苷元
三-2、牡丹籽饼粕中芍药苷类 的含量分析
• 以上述试验中制备出的6种成分的纯品为对照品， 建立了一种直接测定牡丹籽饼粕中芍药苷类成分 的HPLC分析方法，其色谱条件如下： 流动相：A：500 µL/L甲酸水溶液； B：甲醇含500 µL/L的甲酸； 梯度洗脱程序：（min/B%）0/40，4/40， 8/60，15/60，16/40，20/40； DAD检测器，检测波长：230 nm； 流速：0.8 mL/min； 温度：30℃； 进样量：5 µL；峰面积外标法定量。
三-4、芍药苷提取液的纯化研究
如图可以看出20%乙醇不能充分洗脱目 标物，40%、50%和60%都可将目标物 较完全洗出，出于节省试剂和时间以及 提高产品纯度的考虑，选用50%乙醇， 3.5BV进行洗脱目标物最合适。此条件 下芍药苷收率为61.6%，芍药苷纯度为 50.26%，芍药苷同族物总含量占 84.2%（HPLC法）。
由表3选用吸附率和解吸 率都较高的HPD-200A、 D101A和HPD100三种树 脂，以吸附时间为横坐标， 吸附量为纵坐标作图，进 行树脂的静态吸附动力曲 线分析，结果如图4所示。 三种树脂都在1h左右即可 达到吸附平衡，但 HPD200A吸附量较另两 种更高些，所以选用 HPD200A进行试验。
五、专利及查新报告 • 已受理专利一篇：一种从牡丹籽粕中 提取芍药苷的方法，申请号20131004 4907.3 • 查新结论 国内外有从牡丹根、茎、叶中提取芍 药苷的报道，除本项目委托单位外， 未见与本项目研究内容完全相同的牡 丹籽粕中提取芍药苷方法的报道。
五、专利及查新报告
谢
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上样浓度为8 mg/ml时泄 漏点出现较早且上样量为 5倍柱体积时吸附量最大， 为88.07 mg/g。由图可以 看出为了使泄露点更早些 上样量还可以再大些。
牡丹籽粕中提取芍药苷工艺流程
70%乙醇超 声逆流提取 真空浓缩 （T≤60℃） 用水溶解后 石油醚萃取三次
牡丹 籽粕
糖浆状 浸膏
膏状物
水相真空浓缩 （T≤60℃） 用洗脱剂（50%提取芍药苷 的工艺研究
称取一定质量牡丹籽粕，考察不同温度、料液比、 乙醇浓度，超声提取时间等因素，以测得样品芍 药总苷含量为考察指标，选用L9(34)正交试验。抽 滤，残渣按上述条件重复提取一次，抽滤，合并 提取液，50℃真空水浴浓缩，直至无醇味，4000 r/min离心15 min除去上层悬浮物，备用。
三-2、牡丹籽饼粕中芍药苷类 的含量分析 • 精确称取1、2、3、4、5、6号物质的对照 品溶于40%甲醇中，配制成一定浓度的混合 对照品贮备液，取上述对照品贮备液，用4 0%甲醇稀释合适的倍数，按上述的色谱条 件重复进样分析（n = 5），以评价方法的 精密度。 • 取上述对照品贮备液，用40%甲醇稀释，配 制不同浓度的系列标准溶液，按上述的色 谱条件分析，以进样质量为自变量（X，μ g），峰面积为因变量（Y，mv•s），分别 求出各成分的线性回归方程、相关系数及 线性范围。以3倍信噪比（S/N）所对应的 进样质量求得最低检出限。