芍药苷提取分离研究报告

芍药苷提取分离研究报告

————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期：

【前言】

芍药苷主要来源于毛茛科植物芍药根,牡丹根,紫牡丹根。关于芍药的使用,我国很早就有书面记载,始载于《神农本草经》,“主邪气腹痛，除血痹，破坚积,寒热疝瘕，止痛利小便,意气”。我国明间用于治疗胸腹腰肋疼痛,自汗盗汗,阴虚发热，月经不调，崩漏带下。现代研究表明其主要有效部位为芍药总苷，赤芍提取物含芍药甙(Paｅonifｌoｒin）、芍药内酯甙（Albｉfloｒin)、氧化芍药甙(Ox ｙpａｅo－ niｆloｒｉn)、苯甲酰芍药甙(Benzoyｌpａｅonｉfｌｏrin)、芍药吉酮（Paｅoｎifloｒｉｇenone）、芍药新甙（Ｌactifloｒ- ｉn)、胡萝卜甙（Dauc ｏsterol）,赤芍精(d-儿茶精，d-Catechin）及没食子鞣质（Ｇalloｔanｎｉｎ),苯甲酸（Bｅnzoic acｉd)，挥发油、脂肪油、树脂、糖、淀粉、黏液质、蛋白质等,主要成分为芍药苷,其具有镇静、解痉、抗炎、抗应激性溃疡病、扩张冠脉血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板凝聚等多方面的作用,而且毒性小。临床上已试用于治疗冠心病,老年性疾病，增强体质与免疫功能、抗炎止咳、祛痰平喘等方面,尤其是老年慢性呼吸道疾病的治疗中可作辅助药物。

【理化性质】

芍药苷（Paeoniｆlorｉn）又名芍药甙,化学名为：β－D－Glｕｃｏpyranoside，5,6-［（beｎzoｙloｘy)mｅthyl ].tｄtrahydro－5-hydroxｙ-２-ｍeｔhｙl-２,5-ｍｅtｈａｎo-1Ｈ－3，4－ｄioxacycｌoｂuｔａ[cd]pｅtａl ｅn-1a(2Ｈ)-ｙl,[laR-（1aα,2β,3aα,5a,５aα，5ｂα）]- 分子式C２3H２8O１1，分子量4８０.45，熔点１9６℃。本品为吸湿性无定形粉末,四醋酸酯为无色针状结晶,属蒎烷单萜苷,极性较大。药典记载，芍药苷遇香草醛会显现蓝紫色。

本次试验的意义在于通过改进分离工艺来提高芍药苷的分离效果，以便应用

于工业化大生产。

【仪器试剂】

材料：赤芍干燥根切片 500g。（由实验室提供)

仪器:

名称规格或型号数量备注圆底烧瓶５0０、１000、2000mL／２

各1只

4mm

球形冷凝管400mL／24mm×2 １支

烧杯1０0、10００ｍL 各1只

锥形瓶250、１000ｍL 各1只

铁架台１副带铁夹

玻璃棒一根

克氏蒸馏头24mｍ×2 一只

尾接管２４mm×2 1支

数字恒温水浴锅HH-２型4孔1台国华电器有限公司

SＨB－3循环水式真空泵、2孔１台郑州长城科工贸有限公司

布式漏斗4０0mＬ１只

旋转蒸发仪１台

展开缸1个

蒸发皿１个

玻璃板５cm×10cm 25块

三角瓶50mＬ20个

层析柱8×１00cｍ1根

钢盆1只

胶头滴管1支

吸耳球２个

量筒10mL 1支

移液管0.50mＬ１支

具支试管50mＬ１支

钉子漏斗1个

烘箱一台

试剂

厂家及批号用量

名称规

格

乙酸乙酯CP 天津市东丽区天大化学试剂厂 2 mL

98%乙醇4００0ｍ

L

甲醇CP 洛阳昊华化学试剂有限公司 060403 50０mL 三氯甲烷ＣP 天津市富宇精细化工有限公司 804２3 500mL

活性炭CＰ35０g

硅胶G CP 青岛海浪硅胶干燥剂厂310g

有关芍药苷的提取常用水提、醇提以及超声三种方法。由于水提率不如醇提,而超声又会影响芍药苷结构的稳定性,所以采用醇提。分离采用活性炭吸附及硅胶柱层析。具体操作流程如下:

【流程图】:

赤芍粉末（500g）

70％乙醇回流3次，１ｈ／次,合并提取液

过滤

药渣滤液

减压浓缩(T≤60℃）

浓缩液乙醇水溶液(回收）

1５00mｌ水溶解300g活性炭吸附

过滤

滤液活性炭

水洗至无色(过滤）

活性炭滤液

３0%醇洗

醇水溶液 (回收）活性炭

80%醇洗直到TLＣ鉴定没有芍药苷

滤液活性炭

减压浓缩(T≤6０℃)

乙醇溶液（回收) 浸膏

硅胶柱层析（干法) 纯乙酸乙酯洗脱

洗脱液

减压浓缩至

干

芍药苷

【具体操作】

醇水溶液回流提取赤芍干燥根切片5０0g,用粉碎机粉碎成细粉。取250g加入２0０0ｍL圆底烧瓶中,分别以8倍、6倍、４倍量70%乙醇提取３次,每次提取 1ｈ。每提取一次便浓缩一次，回收乙醇便可循环利用,合并３次的浓缩液。另一半药材以同样的方式处理,合并所有的浓缩液。

活性炭吸附分离取部分浓缩液稀释，加入活性炭吸附，过滤，将滤液和原液进行硅胶薄层点样，喷以显色剂，观察活性炭是否能将芍药苷吸附住,TLC鉴别如下:

展开剂——氯仿:乙酸乙酯:甲醇:甲酸

40：

5：10:0．2(药典）。显色剂——香草醛：甲醇:

硫酸 5：８0:１５。配置方法：取0.1g香草醛,

以10ｍL浓盐酸溶解,取其2.5ｍL溶液于显色喷

瓶中，加甲醇40mL,再加浓硫酸7.５mL,摇匀

即得。药典记载,芍药苷遇香草醛会显现蓝紫

色斑点。

右边为吸附后滤液点样点，左边为吸附前样液样点。箭头所指为蓝紫色斑点。

由TLC鉴别可知，芍药苷可以被活性炭吸附。取9份2mＬ浓缩液,都稀释到1０mL，加入等量的活性炭3g，分别以１0%、20%、30%、４0%、5０%、60%、70%、80%、90%乙醇溶液洗脱，经ＴLC检测，40%及以上浓度的乙醇都能将芍药苷洗脱,而之前的都不能洗脱，部分点样如下:

从