医学免疫学实验课件-实验七_生化反应与血清学鉴定(黄小凤)
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实验七 生化反应与血清学实验
一、生化反应
实验目的
1. 掌握细菌生化反应的原理和临 床意义。
2. 熟悉鉴别细菌常用的生化试验 原理、方法和结果判断。
生化实验原理
由于各种细菌含有的酶系统不同，对各 种营养物质的分解能力和分解产物亦不同， 据此可在培养基中加入底物和指示剂，通 过颜色的变化来区别和鉴定细菌。
细菌产生的酶
含硫的 氨基酸
硫化氢
硫化铁
或硫化铅
黑褐色
（2）方法：利用接种针将大肠埃希菌或沙门 氏菌穿刺接种于硫生化反应管内，37℃孵育 18～24h后观察结果。
3.硫化氢试验
• （3）结果判断：变黑色为阳性反应，不变 色为阴性。
+
二、血清学鉴定
实验目的
掌握细菌血清学鉴定法
实验原理
根据抗原抗体反应高度特异性的特点， 在疾病诊断中可用抗原、抗体任何一方作为 已知条件来检测另一未知方。
每组1人专门接种大肠杆菌，另1人专门接种 沙门氏菌
37℃培养18～24h后观察并比较其结果。
血清学实验进程
分为4小组，每组领取一盒诊断血清，4支沙门菌种，每人鉴定 一种。先鉴定A－F和Vi，根据结果再进行其他鉴定。
A－F群多价O
Vi
鉴定结果 鉴定结果
-
-
+
-
-
+
实验进程
判断为非沙门氏菌属，不再继续 鉴定其他抗原成分。 初步判断为沙门氏菌属，继续鉴 定其他抗原成分。
c:1,5
d:e,h:1,6
i:1,2
注意事项
• 1．生理盐水中不出现凝集颗粒，诊断血清中 的颗粒凝集才有阳性意义。
• 2．沙门菌Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应 抗体发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意， 需事先加热破坏Vi抗原，O抗原才得以与相 应的O诊断血清发生凝集。
生化实验试验进程
2人1组，每组领取两种菌种，每人领取7种生 化反应管
• Vi Ag：抗原性弱，不稳定,可阻止O抗原与其相
应的抗体起凝集反应.
沙门氏（11种）血清一览表
O2
O4
O7
O9
Ha
Hb
Hc
Hd
Hi
Vi
A-F群多 A-F群多
价O
价O
实验方法
50微升血清+沙门菌 50微升NS+沙门菌
结果判断
• 阳性：可见颗粒状凝集物 • 阴性： 均匀混浊
沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表
实验材料
1. 菌种 沙门菌 2. 试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3. 其他 无菌载玻片
沙门菌的主要抗原组成
• 主要有O、H、Vi Ag • O Ag：至少58种,以1、2、3等阿拉伯数字顺序排
列。凡含相同抗原组分归为一个组，引起人类疾 病的沙门菌大多数在A~F组 • H Ag：分为第Ⅰ和第Ⅱ相两种，第Ⅰ相以a、b、 c等小写字母表示，第Ⅱ相以1、2、3等阿拉伯数 字表示
实验原理
细菌产生的酶
底物
产物
鉴定产物
实验材料
1．菌种： 大肠埃希菌、沙门氏菌 2．微量生化反应管： 葡萄糖、乳糖、蔗糖、
麦芽糖、甘露醇、蛋白胨水（靛基质）、硫 化氢。 3．试剂： 吲哚试剂
实验方法
用接种针分别将大肠埃希菌、沙 门氏菌穿刺接种于各生化反应管内， 37℃培养18～24h观察结果。
1.单糖发酵试验
群别 A
B
C D E F
Baidu Nhomakorabea
菌型
甲型副伤寒沙门菌 乙性副伤寒沙门菌 德比沙门菌 鼠伤寒沙门菌 猪霍乱（或丙型副伤寒） 沙门菌
伤寒沙门氏菌 鸭沙门氏菌 阿伯丁沙门氏菌
抗 o 1,2,12 1,4,5,12 1,4,12 1,4,5,12
6,7,(Vi)
9,12,Vi 3,10 11
原 H
a:b:1,2 f,g:i:1,2
（1）原理：
细菌产生的酶
糖
酸
（酸碱指示剂）
气体
（2）方法：利用接种针将大肠埃希菌、沙门氏菌分 别穿刺接种于5种糖生化反应管内，37℃孵育18～ 24h后观察结果。
1.单糖发酵试验
（3）结果判断： 本次用的酸碱指示剂为溴甲酚紫（中性或
碱性呈紫色，酸性条件下呈黄色）首先观 察细菌是否生长，细菌生长后，培养基呈 混浊.可能出现3种结果
初步判断为沙门氏菌属，但需去 除菌体Vi荚膜后再继续鉴定其他 抗原成分。
＋－ ＋
2.靛基质试验
（1）原理：
色氨酸
细菌产生的 色氨酸酶
靛基质试剂
吲哚
玫瑰吲哚
（无色）
（红色）
（2）方法：利用接种针将菌种接种于靛生化 反应管内，37℃孵育18～24h后加入靛基质 试剂，最后观察结果。
2.靛基质试验
（3）结果判断：上层呈红色为阳性，不变色为 阴性
阳性
3.硫化氢试验
（1）原理：
一、生化反应
实验目的
1. 掌握细菌生化反应的原理和临 床意义。
2. 熟悉鉴别细菌常用的生化试验 原理、方法和结果判断。
生化实验原理
由于各种细菌含有的酶系统不同，对各 种营养物质的分解能力和分解产物亦不同， 据此可在培养基中加入底物和指示剂，通 过颜色的变化来区别和鉴定细菌。
细菌产生的酶
含硫的 氨基酸
硫化氢
硫化铁
或硫化铅
黑褐色
（2）方法：利用接种针将大肠埃希菌或沙门 氏菌穿刺接种于硫生化反应管内，37℃孵育 18～24h后观察结果。
3.硫化氢试验
• （3）结果判断：变黑色为阳性反应，不变 色为阴性。
+
二、血清学鉴定
实验目的
掌握细菌血清学鉴定法
实验原理
根据抗原抗体反应高度特异性的特点， 在疾病诊断中可用抗原、抗体任何一方作为 已知条件来检测另一未知方。
每组1人专门接种大肠杆菌，另1人专门接种 沙门氏菌
37℃培养18～24h后观察并比较其结果。
血清学实验进程
分为4小组，每组领取一盒诊断血清，4支沙门菌种，每人鉴定 一种。先鉴定A－F和Vi，根据结果再进行其他鉴定。
A－F群多价O
Vi
鉴定结果 鉴定结果
-
-
+
-
-
+
实验进程
判断为非沙门氏菌属，不再继续 鉴定其他抗原成分。 初步判断为沙门氏菌属，继续鉴 定其他抗原成分。
c:1,5
d:e,h:1,6
i:1,2
注意事项
• 1．生理盐水中不出现凝集颗粒，诊断血清中 的颗粒凝集才有阳性意义。
• 2．沙门菌Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应 抗体发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意， 需事先加热破坏Vi抗原，O抗原才得以与相 应的O诊断血清发生凝集。
生化实验试验进程
2人1组，每组领取两种菌种，每人领取7种生 化反应管
• Vi Ag：抗原性弱，不稳定,可阻止O抗原与其相
应的抗体起凝集反应.
沙门氏（11种）血清一览表
O2
O4
O7
O9
Ha
Hb
Hc
Hd
Hi
Vi
A-F群多 A-F群多
价O
价O
实验方法
50微升血清+沙门菌 50微升NS+沙门菌
结果判断
• 阳性：可见颗粒状凝集物 • 阴性： 均匀混浊
沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表
实验材料
1. 菌种 沙门菌 2. 试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3. 其他 无菌载玻片
沙门菌的主要抗原组成
• 主要有O、H、Vi Ag • O Ag：至少58种,以1、2、3等阿拉伯数字顺序排
列。凡含相同抗原组分归为一个组，引起人类疾 病的沙门菌大多数在A~F组 • H Ag：分为第Ⅰ和第Ⅱ相两种，第Ⅰ相以a、b、 c等小写字母表示，第Ⅱ相以1、2、3等阿拉伯数 字表示
实验原理
细菌产生的酶
底物
产物
鉴定产物
实验材料
1．菌种： 大肠埃希菌、沙门氏菌 2．微量生化反应管： 葡萄糖、乳糖、蔗糖、
麦芽糖、甘露醇、蛋白胨水（靛基质）、硫 化氢。 3．试剂： 吲哚试剂
实验方法
用接种针分别将大肠埃希菌、沙 门氏菌穿刺接种于各生化反应管内， 37℃培养18～24h观察结果。
1.单糖发酵试验
群别 A
B
C D E F
Baidu Nhomakorabea
菌型
甲型副伤寒沙门菌 乙性副伤寒沙门菌 德比沙门菌 鼠伤寒沙门菌 猪霍乱（或丙型副伤寒） 沙门菌
伤寒沙门氏菌 鸭沙门氏菌 阿伯丁沙门氏菌
抗 o 1,2,12 1,4,5,12 1,4,12 1,4,5,12
6,7,(Vi)
9,12,Vi 3,10 11
原 H
a:b:1,2 f,g:i:1,2
（1）原理：
细菌产生的酶
糖
酸
（酸碱指示剂）
气体
（2）方法：利用接种针将大肠埃希菌、沙门氏菌分 别穿刺接种于5种糖生化反应管内，37℃孵育18～ 24h后观察结果。
1.单糖发酵试验
（3）结果判断： 本次用的酸碱指示剂为溴甲酚紫（中性或
碱性呈紫色，酸性条件下呈黄色）首先观 察细菌是否生长，细菌生长后，培养基呈 混浊.可能出现3种结果
初步判断为沙门氏菌属，但需去 除菌体Vi荚膜后再继续鉴定其他 抗原成分。
＋－ ＋
2.靛基质试验
（1）原理：
色氨酸
细菌产生的 色氨酸酶
靛基质试剂
吲哚
玫瑰吲哚
（无色）
（红色）
（2）方法：利用接种针将菌种接种于靛生化 反应管内，37℃孵育18～24h后加入靛基质 试剂，最后观察结果。
2.靛基质试验
（3）结果判断：上层呈红色为阳性，不变色为 阴性
阳性
3.硫化氢试验
（1）原理：