饥饿和饱食对小鼠肝糖原的影响的实验报告

饥饿和饱食对小鼠肝糖原的影响的实验报告饥饿和饱食对小鼠肝糖原的影响的实验

报告

实验三饱食和饥饿大白鼠肝糖原含量的比较

实验三饱食和饥饿大白鼠肝糖原含量的比较

实验人:刘彦汶学号:20100331024 班级:针外2010七同组人:郑婉碧、伍晓慧、刘恩茂、董摩扬、曲畅、付建平、石嘉恒实验日期:2012年3月29日指导老师:路雪雅

一、实验目的

1(学习肝糖原的测定方法。

2(比较饱食和饥饿大白鼠肝糖原的含量

二、实验原理

许多因素可以影响肝糖原的含量。如饱食后肝糖原含量增加，饥饿时肝糖原逐渐降低。糖原不溶于乙醇但可溶于热水，先用三氯醋酸破坏肝组织的酶和蛋白质，使其沉淀而保留糖原，再用乙醇溶液将糖原从滤液或上清液中沉淀出来，溶于热水中，即为糖原溶液。

糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色，经酸水解可生成还原性的葡萄糖，后者可将碱性铜溶液(班氏试剂)中二价铜还原为氧化亚铜。利用上述性质可以进行饱食与饥饿肝糖原含量的比较。

1. 糖原+碘---棕红色物质

2. 糖原+Hcl(水解)---葡萄糖+班氏试剂(Cu2+)+(OH-)--- Cu2O

三、实验器材

水浴锅(100 oC)、研钵、白磁盘、旋涡混合器、离心机、手术机械、滤纸

四、实验试剂

1、5,三氯乙酸

2、0.3,碘液

3、95,乙醇

4、20,氢氧化钠

5、浓盐酸

6、班氏试剂

五、操作步骤及实验结果

1、糖原溶液的制备

将大白鼠(饥饿)采用拉断脊柱使其窒息死亡的方法将大白鼠杀死，然后剖腹取出肝脏，迅速用滤纸吸去附着的血液，将整块肝脏放入研钵内剪碎、研磨。再加5,三氯醋酸溶液20ml，再研磨到肝组织充分磨碎为止(饱食大白鼠，重复上述操作)。

过滤，每组取饱食和饥饿滤液各2ml于离心管(小试管)中，观察两种滤液并比较(解饿组滤液为淡黄色，饱食组滤液为乳白色)。

分别于滤液中加入等体积95,乙醇，混匀后离心5分钟(3000转/分钟)，比较

两管糖原沉淀量(饥饿组无沉淀，饱食组有白色沉淀)。

小心倾去上清液，于每管各加入蒸馏水1ml，玻璃棒搅起，水浴加热2分钟，

即为糖原溶液

2、糖原溶液的鉴定

3、糖原水解液的比较

取试管两支，各加入饥饿鼠或饱食鼠干糖原溶液2ml，每管各加入浓盐酸10滴，置沸水浴中加热10分钟，取出冷却，然后用20,氢氧化钠中和(约20滴)，此即为肝糖原水解液。

解饿组滤液为淡黄色，饱食组滤液为乳白色，说明糖原溶液呈乳样光泽

在两种滤液中加入等体积95,乙醇，离心后发现饥饿组无沉淀，饱食组有白色

沉淀，而且沉淀加水水浴后溶解，说明糖原不溶于乙醇但可溶于热水。

在糖原溶液的鉴定的试验中，试管1中产生棕红色物质，其他两个试管中均无变化，糖原溶液遇碘产生红棕色物质。

在糖原水解液的比较的实验中，试管1溶液变砖红色，其他两试管无明显变化，说明糖原经酸水解可生成还原性的葡萄糖，还原性的葡萄糖可将碱性铜溶液(班氏试剂)中二价铜还原为氧化亚铜。

上述现象都说明，饥饿大白鼠肝糖原含量明显比饱食大白鼠肝糖原含量少，甚至饥饿大白鼠肝脏中没有肝糖原。

问题分析

1、研磨要充分，否则溶液中糖原可能不足而使实验现象不够明显。

2、在溶液离心前须将对应位置上的溶液平衡，否则可能使离心不完全。

3、在糖原水解液的比较实验中，需加入过量的氢氧化钠溶液再

水浴加热，否则可能使实验现象不够明显。

篇二:饥饿对小鼠肝糖原影响的显微观察设计

饥饿对小鼠肝糖原影响的显微观察

一(实验用品

饲养笼，解剖盘，大头针，棉花，剪刀，镊子，解剖刀，溶蜡箱，切片机，载玻片，盖玻片，恒温箱，染色缸，光学显微镜，各种浓度乙醇，二甲苯，石蜡，苏木精染液，盐酸-乙醇，氨水，伊红液，石炭酸-二甲苯混合液，1%过碘酸，Schiff 试剂，0.5%偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)溶液，醋酸酐-吡啶混合液，0.5%~1%淀粉糖化酶溶液，加拿大树胶，蒸馏水(无菌水)，相同生理状态的健康小白鼠10只雄性小白鼠二(试剂配制

1(Carnoy固定液:(甲醇?冰乙酸=3?1)，每次使用前需临时配制。 2(Schiff试剂:称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中(用三角瓶)，时时振荡，继续煮5min(勿使之沸腾)，充分溶解。然后冷却致50?时用滤纸过滤，滤液中加入

10ml1mol/LHCl，冷却致25?时，加入0.5g偏重硫酸钠，充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h(有时需要2至3天)，使其颜色退至淡黄，然后加入0.5g 活性碳，用力振荡一分钟，最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封瓶塞，外包黑纸。

3(苏木精染液

苏木素1g，无水乙醇10ml，硫酸铝钾20g，蒸馏水200ml，氧化汞0.5g，冰醋酸，8ml，先用无水乙醇溶解苏木素，用蒸馏水加

热溶解硫酸铝钾;然后将该两液合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌溶液至深紫色，随即用冰水冷却，恢复至室温后过滤备用。使用前加入冰醋酸并混匀、过滤。 4( 盐酸,乙醇分化液浓盐酸1 ml，70%乙醇99 ml 5(伊红液伊红0.5 g，蒸馏水100 ml，无水氯化钙0.5 g 6(石炭酸-二甲苯混合液石炭酸:二甲苯=1:3

7(醋酸酐吡啶混合液:醋酸16ml，无水吡啶24ml 三(实验程序

(一)实验材料饥饿处理

取8只健康雄性小白鼠, 体重25g，动物领回后, 正常喂养一天, 室温21?, 普通饲料, 自由进食及饮自来水。然后随机分成两组: 正常组4只, 普通饲料喂养，自由饮自来水; 饥饿组4只, 禁食仅供自来水。一天后，从两组中各随机取出2只小白鼠，进行肝组织切片观察。两天后，将剩下的小白鼠分别进行肝组织切片观察。 (二)肝组织石蜡切片制作与染色 1(实验片处理 (1)固定

取1~2mm 厚的肝组织，用Carnoy 固定液固定，放冰箱2~4 h 。 (2)酒精脱水依次经过95%酒精两次，每次20-30min，100%酒精两

次，分别为30、40min。 (3)二甲苯透明

将组织块置于二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精。 (4)石蜡包埋