基因工程制药复习
基因工程制药复习提纲 答案
名词解释1.基因工程基因工程是值在体外合成或重组特定的DNA，再与载体连接，最后导入到宿主细胞内表达、扩增出人们需要的蛋白质，而且使这种性状可遗传给后代的技术。
包含上游技术和下游技术。
2.基因工程制药基因工程制药是通过基因工程的方法生产药物，具体包含获得目的基因、构建重组质粒、构建基因工程菌、培养工程菌、产物别离纯化、产品加工检验等步骤。
3.逆转录逆转录〔reverse transcription〕是某些RNA病毒由逆转录酶直接利用RNA为模板合成DNA的过程。
4.CDNA以生物细胞的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，然后在合成双链DNA，并将合成的cDNA双链重组到质粒载体或噬菌体载体上，倒入宿主细胞进行增殖。
在这个过程中合成的双链DNA叫做cDNA。
5.引物引物是人工合成的单链DNA小片段，碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的5’端相同。
是PCR的起始点。
6.表达载体所谓表达载体〔expression vector〕是指具有宿主细胞基因表达所需的调节操作序列，能使外源基因在宿主细胞内转录和翻译的载体。
7.克隆载体克隆载体〔cloning vector)是把一个有用的制药DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中进行繁殖的工具。
8.载体载体〔vector〕，指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段〔目的基因〕转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。
9.汇报基因载体分子上有一种特别意义的基因序列，它们表达的目的是为了证明载体已经进入宿主细胞，并将含有外源基因的宿主细胞从其他细胞中区分并挑选出来。
这种基因就是汇报基因。
10.启动子启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能被RNA聚合酶识别并结合，具有转录起始的特异性11.PCR聚合酶链式反响是一种体外放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它主要包含变性、退火、延伸三个过程，并且屡次循环。
12.包涵体包涵体〔inclusion body〕是存在于细胞质中的一种不可溶的蛋白质聚集折叠而形成的晶体结构物。
生物技术制药复习知识点
生物技术制药复习知识点第一章绪论1.生物制药的研究内容包括基因工程制药, 细胞工程制药, 酶工程制药和发酵工程制药。
2.生物技术制药, 是采用现代生物技术人为地创造一些条件, 借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品。
3.生物技术药物, 是采用DNA 重组技术、单克隆抗体技术或其它生物新技术研制的蛋白质、治疗性抗体或核酸类药物。
4.生物药物, 指包括生物制品在内的生物体的初级和次级代谢产物或生物体的某一组成部分, 甚至整个生物体用作诊断和治疗的医药品。
5.现代生物药物四种类型: ①应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂。
②基因药物, 如基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等。
③来自动植物和微生物的天然生物药物。
④合成与部分合成的生物药物。
6.生物药物按功能用途分为三类: 治疗药物, 预防药物和诊断药物。
7.生物技术药物的特性：分子结构复杂, 具种属特异性, 治疗针对性强、疗效高, 稳定性差, 基因稳定性, 免疫原性、重复给药会产生抗体, 体内半衰期短, 受体效应, 多效性和网络效应, 质量控制的特殊性, 生产系统的复杂性。
8.生物技术制药特征：高技术, 高投入, 长周期, 高风险, 高收益。
9.基因诊断: 指采用分子生物学的方法在DNA水平或RNA水平对基因的结构和功能进行分析从而对特定的疾病进行诊断。
第二章基因工程制药1.利用基因工程技术生产药品的优点: （1）可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等）, 为临床使用提供有效的保障；（2）可以提供足够数量的生理活性物质, 以便对其生理、生化和结构进行深入的研究, 从而扩大这些物质的应用范围；（3）利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；（4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处, 可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；（5）利用基因工程技术可获得新型化合物, 扩大药物筛选来源。
(整理)基因工程制药-复习.
一、名词解释1.杂交核酸分子杂交技术：具一定同源性的两条（DNA或RNA）单链在适宜的温度及离子强度等条件下，可按碱基互补配对原则特异性地复性，形成双链。
2.探针：一段序列已知的单链核酸片段，通过互补的方式检测单链核苷酸序列。
3.粘粒粘粒载体（cos质粒载体）：Cos质粒是一类人工构建的含有λ-DNA cos序列和质粒复制子的特殊类型的载体。
4.同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。
如BamH I、BglⅡ、Bcl I、XhoⅡ等。
5.同裂酶：来源不同的内切酶，识别和切割的是同样的核苷酸靶序列的酶。
不同同裂酶对位点的甲基化敏感性有差别，用来研究甲基化作用。
6.cDNA文库：某生物mRNA反转录产生cDNA片段分别与合适的克隆载体相连，通过转化贮存在一种受体菌的群体之中，把这种包含某生物基因组全部基因cDNA的受体菌群体，称为该生物cDNA文库。
7.基因工程药物：指利用基因工程技术研制和生产的药物，主要包括重组蛋白（多肽）药物、反义核酸药物、DNA药物和基因工程抗体等。
8.盐析盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。
9.星活性星号（*）活性：高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值等，会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特异性，即所谓的“星活性”现象。
Eco RI*代表Eco RI的星号活力。
星活性的特点：限制酶识别序列特异性降低例如：EcoRI（高pH值或低盐离子强度）5’G AATTC3’变成5’N AA TTN3’，另有一种情况是对AATT中的A、T分辨不严格。
二、简答题1.如何克隆微生物的纤溶酶基因？PCR法分离目的基因：根据核酸序列的相关信息，设计简并引物，通过对mRNA进行反转录得到cDNA，以cDNA为模板，然后将目的基因通过PCR方法扩增，或者直接从基因组DNA扩增的方法。
根据已知探针克隆基因：首先将探针作放射性或非放射性标记，再将其与用不同内切酶处理的基因组DNA杂交，最后将所识别的片段从胶中切下来，克隆到特定的载体（质粒、噬菌体或病毒）中作序列测定或功能分析。
基因工程制药
第三章基因工程制药第一节：基因工程制药基本环节基因工程技术六个基本过程：分离→酶切→连接→转化→筛选→验证。
（一）基因工程中常用的工具酶：ⅰ：核酸限制性内切酶：是一类能够识别双链DNA分子上特定核苷酸序列，并进行切割的水解酶，简称内切酶。
主要存在于原核微生物中。
（1）限制和修饰系统：原核微生物中存在限制性内切酶及甲基化酶，它们对DNA底物有相同的识别序列，但有相反的生物功能。
而甲基化酶具有宿主专一性，可识别宿主双链DNA分子的特定序列进行甲基化修饰，而不修饰外源性DNA分子，从而避免了限制酶对宿主DNA的降解。
（2）限制性内切酶的分类：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型。
其中Ⅱ型限制性内切酶识别和切割产物是特异性的。
（3）Ⅱ型核酸限制性内切酶：1．酶切方式有两种：①断裂位置交错，形成粘性末端，又可分为从5′粘性末端和3′粘性末端；②对称轴处断裂形成平头末端。
2．同裂酶：是指来源不同，识别序列相同的酶，其切割位点同，产生平头或粘性末端。
3．同尾酶：来源和识别序列都不同，但切割后产生相同的粘性末端的酶。
4．限制性内切酶产生的末端的连接方式有三种：①匹配粘性末端的连接②平端连接③不匹配粘性末端的连接（有两种：67）5．限制性内切酶反应的影响因素：DNA的纯度、反应速度、反应体系的缓冲液、酶量、体积、时间、DNA甲基化程度、DNA的分子构型等。
ⅱ：DNA连接酶：是指催化两条分别具有5′-磷酰基末端与3′-羟基末端的DNA单链连接形成磷酸二酯键的酶。
目前使用的DNA连接酶:T4噬菌体DNA 连接酶、大肠杆菌（E.coli）DNA连接酶。
特点1．T4-连接酶：能够连接含粘性末端或平头末端连接的DNA片段或双链DNA 的切口。
连接反应中 ATP+作能源辅助因子。
2．大肠杆菌：只能连接粘性末端DNA片段或双链DNA的切口，不能连接平头末端DNA片段。
在连接反应中用NAD+作能源辅助因子。
ⅲ：聚合酶：（68）（二）载体：概念：（1）载体：是指凡来源于质粒或噬菌体的ＤＮＡ分子，可以供插入或克隆目的基因ＤＮＡ并具有运载外源ＤＮＡ导入宿主细胞能力的片段。
生物技术制药复习题
生物技术制药复习题第一章绪论第一节生物技术的发展史1、生物技术：以生命科学为基础，利用生物体的特性和功能，设计构建具有与其性状的新物种或新品系，并与工程结合，利用这样的新物种进行加工生产，为社会提供商品服务的一个综合性技术体系。
它的范畴：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、生化工程。
基因工程是生物技术的核心。
P12、蛋白质工程----第二代基因工程；海洋生物技术-----第三代生物技术P13、生物技术发展史：传统、近代（抗生素、发酵罐）、现代（DNA重组）P31974年，Boyer和Cohen建立了DNA重组技术1975年，Koher 和Milstein 建立了单克隆抗体技术1982年，第一个基因工程药物重组人胰岛素被批准上市1989年，我国第一个基因工程药物干扰素批准上市2003年，中国的重组腺病毒-p53注射液成为石阶上第一个正式批准的基因治疗药物。
第二节生物技术药物1、生物技术制药：生物技术制药：采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品。
P42、生物技术药物：采用DNA重组技术活其他生物技术研制的蛋白质或核酸类药物。
它与天然生化药物、微生物药物、海洋药物和生物制品共同归为生物药物。
3、现代生物药物分为4类：重组DNA技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂；基因药物；天然药物；合成与部分合成药物。
4、生物药物按用途分为：治疗药物；预防药物；诊断药物。
5、生物技术药物的特征：（1）分子结构复杂；（2）具有种属特异性；（3）治疗针对性强、疗效高；（4）稳定性差（5）基因稳定性；（6）免疫原性；（7）体内半衰期短；（8）受体效应；（9）多效性和网络性效应；（10）检验的特殊性。
第三节生物技术制药1、生物技术制药的特征：高技术、高投入、长周期、高风险、高收益。
P52、生物技术在制药中的应用有哪些？P7（1）基因工程制药：① 开发基因工程药物，如干扰素（IFN）、红细胞生成素（EPO）等②基因工程疫苗，如乙肝基因工程疫苗③基因工程抗体，它可以作为导向药物的载体④基因诊断与基因治疗⑤应用基因工程技术建立新药的筛选模型⑥应用极影工程激活素改良菌种，产生新的微生物药物⑦改进药物生产工艺⑧利用转基因动、植物生产蛋白质类药物。
生物技术制药复习知识点
生物技术制药复习知识点第一章绪论1.生物制药的研究内容包括基因工程制药，细胞工程制药，酶工程制药和发酵工程制药。
2.生物技术制药，是采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品。
3.生物技术药物，是采用DNA 重组技术、单克隆抗体技术或其它生物新技术研制的蛋白质、治疗性抗体或核酸类药物。
4.生物药物，指包括生物制品在内的生物体的初级和次级代谢产物或生物体的某一组成部分，甚至整个生物体用作诊断和治疗的医药品。
5.现代生物药物四种类型：①应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂。
②基因药物，如基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等。
③来自动植物和微生物的天然生物药物。
④合成与部分合成的生物药物。
6.生物药物按功能用途分为三类：治疗药物，预防药物和诊断药物。
7.生物技术药物的特性：分子结构复杂，具种属特异性，治疗针对性强、疗效高，稳定性差，基因稳定性，免疫原性、重复给药会产生抗体，体内半衰期短，受体效应，多效性和网络效应，质量控制的特殊性，生产系统的复杂性。
8.生物技术制药特征：高技术，高投入，长周期，高风险，高收益。
9.基因诊断：指采用分子生物学的方法在DNA水平或RNA水平对基因的结构和功能进行分析从而对特定的疾病进行诊断。
第二章基因工程制药1.利用基因工程技术生产药品的优点：（1）可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用提供有效的保障；（2）可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围；（3）利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；（4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；（5）利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。
2.基因工程技术就是将目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。
《基因工程制药》期终考试试卷
《基因工程制药》期终考试试卷一、选择题（每小题只有一个正确的答案，每小题1分，共30分）1．天然限制性内切酶BamH I的来源是：( ) A．Bacillus amyloliquefaciens B．Escherichia coliC．Haemophilus influenzae D．Providencia stuartii2．天然限制性内切酶EcoR I的来源是：( ) A．Bacillus amyloliquefaciens B．Escherichia coliC．Haemophilus influenzae D．Providencia stuartii3．大肠杆菌连接酶需要的辅助因子分别是：( ) A．NAD B．ATP C．ADP D．NADH4．一限制性内切酶识别6个核苷酸的序列，该识别序列的出现概率为：( ) A．1/64 B．1/66C．1/46D．1/ 445．两平滑末端DNA片段间的连接可用以下哪种连接酶：( ) A．大肠杆菌DNA连接酶或T4 DNA连接酶B．大肠杆菌DNA连接酶C．T4 DNA连接酶D．两者都不能用6．某一线性DNA含有n个限制性核酸内切酶Hind III的识别序列，用Hind III 完全酶切该双链环状DNA后，产生的片段数为：( ) A．n B．n+1 C．n-1D．n+27．PCR反应中，在最优条件下，经过n次循环后，待扩增的特异性DNA片段基本上达到多少个拷贝数：( )A．2 n B．2n C．n D．2 n-18．Western印迹杂交作用的对象是：( ) A．DNA B．RNA C．蛋白质D．以上都不对9．DNA分子在电场作用下，可在凝胶中向正极方向移动，对其迁移率描述正确的是：( ) A．迁移率与DNA分子的构型和大小相关，而与DNA分子中的碱基组成和顺序无关B．迁移率与DNA分子的构型和大小以及DNA分子中的碱基组成和顺序都相关C．迁移率与DNA分子的构型和大小无关，而与DNA分子中的碱基组成和顺序相关D．迁移率与DNA分子的构型和大小以及DNA分子中的碱基组成和顺序都无关10．以下哪种细胞不是原核生物受体菌：( ) A．大肠杆菌B．枯草杆菌C．蓝细菌D．酵母菌11．限制性核酸内切酶以双链DNA为底物，在合适的反应条件下，识别一定的核苷酸序列，使两条核苷酸链上特定位置的什么键断开，产生具有3’-OH基团和5’-P基团的片段：( ) A．氢键B．磷酸二酯键C．磷酸三酯键D．其他化学键12．PCR延伸的温度是多少：( ) A．37℃B．42℃C．56℃D．72℃13．下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是：( ) A．质粒是共价环状的双链DNA 分子B．天然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列C．质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA 自主复制D．质粒并非其宿主细胞生长所必需14．下列五个DNA 片段中含有回文结构的是：( ) A．GAAACTGCTTTGAC B．GAAACTGGAAACTG C．GAAACTGGTCAAAG D．GAAACTGCAGTTTC15．基因工程操作的三大基本元件是：( ) I 供体II 受体III 载体IV 抗体V 配体A．I + II + III B．I + III + IVC．II + III + IV D．II + IV + V16．SDS-PAGE中的染色剂是：( ) A．EB B．考马斯亮蓝C．溴酚蓝D．二甲苯青17．T4-DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是：( ) A．2' -OH 和5' -P B．2' -OH 和3' -PC．3' -OH 和2' -P D．3' -OH 和5' –P18．蓝白斑筛选，重组菌呈现：( ) A．蓝色B．白色C．红色D．无色19．RNA在多少波长处有最大吸收峰：( ) A．260nm B．280nm C．560nm D．600nm20．限制性内切酶切割方式有：( ) A．切成平头B．切成5′端突出黏性末端C．切成3′端突出黏性末端D．以上都对21．下列五个DNA 片段，最可能含有EcoRⅠ酶切位点的是：( ) A．GAAACTGCTTTGAC B．GAAAAGATCTACTG C．GAAACTGGTCAAAG D．GAAAGAATTCTTTC22．下列哪一个不是II型限制性内切酶的特点：( ) A．通常识别4-8个相连的核苷酸B．识别序列为旋转对称C．序列内通常富含GC D．切割位点一定在识别序列内23．关于PCR说法错误的是：( ) A．变性温度是95℃B．需要镁离子的参与C．退火温度是55℃D．循环次数一般是3024．下列哪些是重组子的筛选鉴定方法：( ) A．电泳鉴定B．PCRC．核酸印迹D．以上都行25．蛋白质分子量的测定可以用哪个方法：( )A．琼脂糖凝胶电泳B．SDS-PAGEC．PCR D．Northern blot26．组成核酸分子的核苷酸有多少种：( ) A．5 B．6 C．8 D．1227．限制性核酸内切酶作用的底物是()。
基因工程复习资料含复习资料
基因工程复习资料含复习资料基因工程复习题一、名词解释：（10～20%）基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶的Star活性PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交：将细胞或组织的核酸固定保持在原来的位置上，然后用探针与之杂交的一种核酸分子杂交技术，该方法可较好地反映目的基因在细胞或组织中的分布和表达变化。
粘性末端：双链DNA被限制性内切酶切割后，形成的两条链错开几个碱基，而不是平齐的末端。
Northern印迹杂交：将RNA进行变性电泳后，再转移到固相支持物上与探针杂交的一种核酸分子杂交技术，可用于检测目的基因的转录水平。
转位：一个或一组基因片段从基因组的一个位置转移到另一个位置的现象。
基因工程：在体外，用酶学方法将各种来源的DNA与载体DNA 连接成为重组DNA，继而通过转化和筛选得到含有目的基因的宿主细胞，最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子的过程称为基因工程，又称基因克隆、DNA克隆和重组DNA等。
目的基因：基因工程中，那些被感兴趣的、被选作研究对象的基因就叫作目的基因。
连接器：人工合成的一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段，连接到目的基因的两端，便于基因重组中的切割和连接。
转化：受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变的过程。
停滞效应：PCR中后期，随着目的DNA扩展产物逐渐积累，酶的催化反应趋于饱和，DNA 扩增产物的增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。
逆转录PCR：以mRNA为原始模板进行的PCR反应。
PCR: 即聚合酶链式反应。
在模板，引物，4种dNTP和耐热DNA 聚合酶存在的条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。
α-互补（α-complementation）：指在M13噬菌体DNA或PUC 质粒序列中，插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸的核苷酸序列（又称α-肽），该序列不能产生有活性的β-半乳糖苷酶。
生物制药技术-第二章-基因工程制药(10,11小节)
2.化学破碎法
化学破碎细胞的方法主要有渗透冲击、增溶法和脂溶 法等，是-类利用化学试剂改变细胞壁 或细胞膜的结 构或完全破除细胞壁形成原牛质体后，在渗透压作用 下使细胞膜破裂而释放胞内 物质的方法。它们的作用 机制因所用化学试剂不同而异。化学渗透法比机械破 碎的选择性高， 胞内产物的总释放率低.特别是可有 效地抑制核酸的释放，料液数度小，有利于后处理过 程。但是，化学渗透法比机械破碎法速度低，效率差， 并且化学试剂的添加形成新的污染，给进一步的分 离 纯化增添麻烦。
(2)增溶法
增溶法是利用表面活性剂等化学试剂的增i在作用，增加细胞壁和 膜的通透性使细胞破碎的 方法。表面活性剂有阴离子型、阳离子 型和非离子型三种，均为两性分子，含有亲水基团和疏水 基团， 因此既能与水作用又能与脂作用.溶解细胞壁和膜上的脂蛋白，使 细胞的通透性增加，释放 出胞内物质。常用的表面活性剂有阴离 子型的SDS(十二烧基硫酸钠)、非离子型的Triton X→100等。有 些有机溶剂如乙醇、异丙醇、尿素和盐酸服等也能作用于膜蛋白， 削弱其疏水相互作用，而改变细胞壁和膜的通透性。如异丙醇广 泛应用于从胶木分离蛋白酶的细胞破碎工艺中。 EDTA作为金属 螯合剂，可用来处理革兰氏阴性菌(如大肠杆菌).对其细胞的外层 膜有破坏作 用。革兰氏阴性菌的外层膜结构通常靠2价阳离子 Ca2+或Mg2+结合脂多糖和蛋白质来维持，一旦EDTA将Ca2+或 Mg2+螯合，大量脂多糖分子将脱落，使外层膜出现洞穴。这些区 域由内 层膜的磷脂来填补导致该区域通透性增强。
4.产品质量要求
产品质量要求主要包括产品质量
指标.产品用途，对纯度、生物活 性、比活的要求。允许的杂 质种 类和最大允许含量.特殊杂质的种 类和最大允许茧，以及对使用的 影响。产品剂型、贮存稳定性。
基因工程复习资料-精心整理
第一章绪论1.基因工程的定义：在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA），转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。
2.基因工程理论上的三大发现和技术上的三大发现3。
基因工程的基本步骤（1)目的基因的获取：从复杂的生物基因组中,经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片断.（2）重组体的制备：将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记(抗菌素抗性）的载体分子上。
(3）重组体的转化：将重组体(载体）转入适当的受体细胞中.(4)克隆鉴定：挑选转化成功的细胞克隆（含有目的基因）。
(5）目的基因表达：使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。
4.基因工程的意义（1)基因工程在农业生产中的应用:提高植物的光合作用率；提高豆科植物的固氮效率；转基因植物；转基因动物。
（2）基因工程在工业中的应用:1）纤维素的开发利用:克隆各种参与纤维素降解的酶的基因,导入酿酒酵母,就可能利用廉价的纤维素来生产葡萄糖，发酵成酒。
2）酿酒工业：用外源基因改造酿酒酵母，产生优质的啤酒。
或用酿酒酵母生产蛋白质等。
（3）基因工程在医药上的应用：用微生物生产药物; 用转基因植物或动物生产药物；设计高效高特异性的生物制剂——疫苗；制造新型疫苗；基因诊断；法医鉴定；基因治疗。
(4)基因工程在环境保护中的作用：1）检测水污染：用重组细菌或转基因鱼等检测水污染2）生物降解：用带有重组质粒的“超级菌”分解油（烷烃类）、有机农药污染。
（5）基因工程商业化的发展第二章基因工程主要技术原理1．质粒和基因组DNA的提取方法与纯化步骤,主要试剂是什么质粒的提取和纯化方法最常用的为碱抽提法：原理：闭合环状的质粒DNA，在变性后不会分离,复性快。
染色体线性DNA和或有缺口的质粒DNA变性后双链分离，难以复性而形成缠绕的结构，与蛋白质—SDS复合物结合在一起，在离心的时候沉淀下去。
3. 基因工程制药
6、从阳性杂交分子中回收mRNA，在无细胞蛋白合成 系统中翻译；
7、分别测定各组体外翻译混合物中IFN的活性； 8、将活性最高的克隆组的512个转化子再随机分成8 组、每组64个；
9、重复3-6步操作，最终获得含有人α-IFN完整 cDNA序列的重组克隆。
参见：人白细胞干扰素基因的克隆化及其在大肠杆 菌中的表达，侯云德等，中国医学科学院学报， 1982.12，Vol.4，No.8
Байду номын сангаас
杂交
放射自显影法
目的基因的获得
1、hIFNα、β的基因都位于第9号染色体； 氨基酸组成有29％以上的同源性； 结构和功能相似，结合同一种受体，临床 作用也彼此接近。 2、IFN Y的基因位于第12号染色体，主要 作用是参与免疫调节，并与IFNα、β有协 同作用。
α-IFN的cDNA 克隆
细菌质粒pUC18
1．该质粒比较小，可以插入一段较长的DNA片段。 2．进入宿主细菌细胞后，pUC18在每个细胞中可复制 形成大约500个拷贝。 3．在pUC18中有一小段人为设计和插入的具有多种限 制性酶切位点的序列，即多克隆位点
4、利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒
pUC118质粒的多克隆位 点整合在lacZ基因中，该位点如 果没有插入外源目的基因，lacZ 基因便可表达出半乳糖苷酶，如 果平板培养基中含有IPTG和X-gal， X-gal便会被半乳糖苷酶水解成 兰色，大肠杆菌形成蓝色克隆。 在多克隆位点插入外源目的基 因，破坏了lacZ基因的结构，大 肠杆菌形成白色的克隆
基因工程技术生产药物的优点
1、可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白质和多 肽，为临床使用提供有效保障； 2、可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生 理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物 质的应用范围； 3、可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质； 4、内源生理活性物质作为药物使用时存在的不足之 处，可以通过基因工程进行改造和去除; 5、利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物 筛选来源。
生物制药技术-第二章-基因工程制药(1,2,3,4小节)
Richard Young和Ronald Davis设计的λgtl0和 λgtDNA便十 分有效地产生许多克隆，每纳克cDNA可产生 5000个克隆，另方面可容纳较大相对分子质量 的外源DNA片段。由于噬菌斑的筛选和操作较 筛选细菌主中，λgtl0载体对于未携带cDNA的噬菌体的 裂解生长有很强的生物学选择作用。cDNA 插 入到λgtl0可使噬菌体阻遏物基因(c 1)失活。
1. MRNA的纯化
反转录法的前提是必须首先得到该目的基因的mRNA，而要 分离纯化目的基因的mRNA，其难度几乎不亚于分离目的基 因。细胞内含有3种以上RNA，mRNA占细胞内RNA总量的 2%~5%，相对分子质量大小很不一致，由几百到几千个核苷 酸组成。在真核细胞中mRNA的3'末端常含有一多聚腺苷酸 （polyA)组 成的末端，长达20~250个腺苷酸，足以吸附于寡 聚脱氧腺苷酸Oligo(dt)-纤维素上，可以用亲和层析法将mRNA 从细胞总RNA中分离出来。利用mRNA的3'末端含有polyA的 特点，在RNA流经寡聚（dt）纤维素柱时，在高盐缓冲液的 作用下，mRNA被特异地结合在柱上，当逐渐降低盐的浓度 洗脱时或在低盐溶液和蒸馏水的情况下，mRNA被i洗脱下来， 经过两次寡聚(dt)纤维素往后，可得到较高纯度的mRNA。
我国基因工程药物研究和开发起步较晚，基础较差。 20 世纪70年代末以来，开始应用 DNA重组技术、淋 巴细胞杂交瘤技术、细胞培养、克隆表达等技术开 发新产品和改造传统制药工艺。几十年来，在国家 汁划，特别是国家"863"高技术计划的优先支持下， 使这一领域迅速发展，缩短了我国与世界先进国家 的差距。"863"高技术计划在生物技术领域内研究的 三个主题之一是新型药物、疫苗与基因治疗，重点 是利用现代生物技术手段，开发化学合成法难以生 产的医药产品，如肝炎、肿瘤、传染病和心脑血管 疾病预防、诊断和治疗的生物技术医药产品。