微生物量(1)

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高中生物第1章微生物培养技术第3节测定微生物的数量学案中图版选修1

第三节测定微生物的数量一、测定微生物数量的方法测定微生物数量的方法可分为两类：直接计数法和间接计数法.前者常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。

该方法适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。

后者最常用的是稀释平板计数法，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液并使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后统计培养基中出现的菌落数，从而推算出样品中的活菌数。

利用血球计数板测出的菌体数与平板计数法相比哪个多些？【提示】血球计数板测出的是全部菌体数,而平板计数法只能测出活菌数，而且比实际数偏少。

二、间接计数法的实验设计1．制备土壤稀释液取土壤表层5~10 cm处的土样.准确称取1 g土样，放入盛有99 mL无菌水的锥形瓶中，振荡20 min后制成102倍的稀释液.然后进行系列稀释,得到103、104、105、106倍的系列稀释菌液。

2．取样及倒平板3．培养4．观察记录（1）计数时对于细菌、放线菌以每个培养皿内有30～300个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有10～100个菌落为宜。

（2）计算每克样品菌数公式为：每克土壤样品菌数＝错误!×稀释倍数.预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1问题2问题3问题4一、微生物生长量的测定1.测重量法干重法：将单位体积待测的培养液离心后，用清水洗涤1～5次，放入干燥器中加热干燥，加热温度一般在100～105 ℃之间,再称重。

以细菌为例,一个细胞一般重约10－12～10－13g，也可在较低温度（如40 ℃)下进行真空干燥。

湿重法：将一定量的菌悬液离心或过滤，得到菌体，反复洗涤后称湿重，干重一般为湿重的20%~25％。

2．计数法(1)直接计数法这种方法是利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。

此法的缺点是不能区分死菌与活菌。

计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高0。

沉降法检测空气中微生物数量

广东工业大学实验报告实验二题目：沉降法检测空气中微生物数量第16周星期三第 10-12 节（一）实验目的1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物2．了解空气中微生物的分布状况（二）实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。

空气中也不例外。

虽然空气不是微生物栖息的良好环境。

但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。

当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。

观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。

（三)实验器材1、试剂牛肉蛋白胨培养基配方：牛肉膏 1.0g, 蛋白胨 2g ，NaCl 1g, 琼脂粉 4g 水200mL ，pH 7.2~7.42、仪器及其他用品高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等（四）实验方法1、倒平板：按常法配置上述培养基，装于500mL 三角瓶中，高压灭菌备用。

冷却至45-47℃左右，在超净工作台，倒8个平板备用。

2、暴露取样在指定的地点各放2皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min 和10min,时间一到，立即合上皿盖。

3、培养观察：细菌置于37℃培养，培养48h 计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。

4、计算1m 3空气中微生物的数目奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L 空气中的细菌数。

X=2100100r N π⨯⨯ X ：每m 3空气中的细菌数N ：平板暴露5分钟，置37℃培养24小时后生长的菌落数r ：平皿底半径（㎝）（五）实验结果1、列表比较不同放置地点空气菌落种类以及数量的差异？X=01001002=π⨯⨯rN （六）思考题1．对沉降测定法的结果，进行分析。

微生物大小测定及计数

答：放大倍数不相同，目镜测微尺每格代表的长度不同。
2、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一菌体大小时，其测定结果是否相同，为什么？
答：测定结果不相同。因为在不同倍数的目镜下，细菌大小发生变化，而目镜测微尺每格大小不变，所以测定结果不同。
四、仪器和其他用品：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、接种环、血球计数板、显微测微尺、滴管、酒精灯
五、操作步骤：
1、微生物大小的测定
（1）取下显微镜右目镜，将目镜测微尺放在目镜镜筒内的隔板上，然后放上目镜透镜，将目镜装回镜筒。
（2）校正目镜测微尺：在低倍镜下调节焦距，当清晰看到镜台测微尺的刻度后，用推进器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别输出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。
（2）将血球计数板盖上盖玻片，用无菌毛细管吸取少量摇匀的酿酒酵母菌液，滴在盖玻片的一个顶点，待菌液从盖玻片另一对角流出为满。
（3）先在低倍镜下找到计数室，再用高倍镜计数。每小格内的菌数不能超过8个为宜。当每小格内的菌数过多时，适当稀释。
（4）任选5个中格计数（5个中格不可以挨着；酵母菌出芽计1个菌体；计数时，位于边线上的细胞，记上不记下，计左不计右）
（3）用同样的方法在高倍镜下和油镜下进行校正。并计算目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
（4）制酵母菌玻片：用接种环取菌在蒸馏水中涂抹，加热干燥，用美兰染色1’30”，流水脱色，自然干燥。
（5）先在低倍镜和高倍镜下找到菌株，再在油镜下测出酵母菌的长度和宽度。重复3次并记下平均值。
2、酵母菌的显微计数
（1）将血球计数板洗净，再用95%乙醇棉球擦洗，自然干燥。
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微生物大小及数量测定
一、实验目的：

细菌大小通用的计量单位

细菌大小通用的计量单位细菌是一类微生物，其尺寸非常微小，通常以微米（μm）作为计量单位。

微米是国际单位制中的长度单位，1微米等于千分之一毫米，也等于百万分之一米。

对于细菌的大小而言，它们通常处于纳米级别，即10^-9米。

细菌的大小可以有很大的变化，根据不同种类的细菌，其尺寸可能有所差异。

一般来说，典型的细菌大小在0.5至5微米之间。

其中，最常见的细菌大小在1至3微米之间。

例如，大肠杆菌（Escherichia coli）的大小通常在1至2微米之间。

大肠杆菌是人体肠道中普遍存在的一种细菌，它起着消化食物、合成维生素等重要作用。

另外一种常见的细菌，金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的大小一般为0.5至1微米之间。

金黄色葡萄球菌是一种常见的导致皮肤感染和食物中毒的细菌。

与其他微生物相比，细菌的尺寸相对较小。

例如，真菌的尺寸一般在2至200微米之间，比细菌要大得多。

而病毒的尺寸更小，通常在20至300纳米之间，这意味着细菌的大小是病毒的几倍。

为了更好地理解细菌的微小尺寸，我们可以举一个比喻。

假设我们以1微米为单位，那么10微米将相当于一个沙砾粒子的尺寸。

而人的头发直径约为80微米，所以细菌的尺寸远远小于人的头发的直径。

细菌之所以如此微小，是因为它们的细胞结构相对简单。

细菌细胞主要由细胞膜、细胞壁、质粒、核糖体等组成。

与人类细胞相比，细菌的细胞结构更简单，相应地它们的大小也较小。

虽然细菌非常微小，但它们的存在对地球上的生态系统和人类健康都起着重要作用。

有些细菌是有益的，例如帮助分解有机物质、合成维生素等，而另一些细菌是病原微生物，可以引起疾病。

对细菌进行准确的大小测量和研究，是了解其多样性和生物学特征的重要一步。

综上所述，微米是衡量细菌大小的通用计量单位。

细菌一般处于0.5至5微米之间，其中大肠杆菌和金黄色葡萄球菌是常见的细菌种类，其尺寸分别在1至2微米和0.5至1微米之间。

细菌的微小尺寸使得它们能够在不同的环境中生存和繁殖，对地球上的生态系统和人类健康产生重要影响。

微生物限度检查法名词解释(一)

微生物限度检查法名词解释(一)微生物限度检查法1. 介绍微生物限度检查法（Microbiological Limit Test）是用于评价药品、食品和化妆品等产品中微生物质量的检验方法。

它能够确定样品中是否存在对人体有害的微生物，并对其数量进行定量评估。

2. 相关名词以下是与微生物限度检查法相关的一些常见名词：•微生物限度：指产品中允许存在的微生物或菌群的数量上限。

不同产品类型有不同的微生物限度标准，例如菌落数、霉菌数和大肠菌群数等。

–例如，某药品的微生物限度为每克不超过10个细菌。

•菌落总数：指在特定培养基上，某一样品中培养出的微生物菌落的总数。

–例如，通过菌落总数检验，发现某食品样品中每克菌落总数为100个。

•霉菌数：指在特定培养基上，某一样品中培养出的霉菌菌落的数量。

–例如，某化妆品样品中每克霉菌数为5个。

•大肠菌群数：指在特定培养基上，某一样品中培养出的大肠菌群的数量。

–例如，某食品样品中每克大肠菌群数为0。

3. 检验流程微生物限度检查法的具体流程包括以下几个步骤：1.样品准备：从被检测产品中取样，按照一定的方法进行样品的准备和处理，以便进行后续分析。

2.菌落计数：将样品分别接种在适当的培养基上，并在一定的条件下孵育。

孵育结束后，利用显微镜和计数板等设备，对培养出的微生物菌落进行计数和记录。

3.菌种鉴定：根据菌落的形态、生理特性和生化反应等，对菌落进行鉴定，以确定菌落的种类和数量。

4.结果评价：根据相关的微生物限度标准，将检测结果与标准进行比较，评价样品是否符合质量要求。

5.结果记录：将检测数据和结果进行记录，并生成相应的报告。

4. 应用领域微生物限度检查法广泛应用于以下领域：•药品：验证药品是否符合微生物限度，确保药品的安全和有效性。

•食品：检测食品中是否存在致病菌乃至变质微生物，保障食品的卫生和质量。

•化妆品：评价化妆品中的细菌、霉菌等微生物是否超过限度，确保产品的质量和安全性。

以上就是关于微生物限度检查法的相关名词和解释，以及检验流程和应用领域的简要介绍。

菌落总数cfu计算方法例子(一)

菌落总数cfu计算方法例子(一)菌落总数CFU计算方法菌落总数是微生物学实验中常用的一个指标，用于评估样品中微生物的数量。

通常使用菌落形成单位（Colony Forming Units，CFU）来表示菌落总数。

以下是一些菌落总数CFU计算方法的例子：1. 理论计算法理论计算法是利用该菌落的预期数量，通过稀释法计算得到的菌液浓度来推算菌落总数。

具体步骤如下：1.从样品中取一定容量的菌液，通常在10-100微升之间。

2.将菌液分别进行一系列的稀释，并在每个稀释液上培养菌落。

3.等待适当的培养时间，通常是24-48小时。

4.在培养平板上，选择合适的稀释液，使得菌落数量在30-300之间。

5.计算选择稀释液的菌落数量，并乘以相应的稀释比例，得到菌落总数CFU。

2. 直接计数法直接计数法是将样品中的菌落直接数出，用于菌落数量较少或者时间有限的情况。

具体步骤如下：1.准备一片固体培养基，并将样品均匀涂抹于培养基表面。

2.等待适当的培养时间，通常是24-48小时。

3.使用显微镜观察培养基上的菌落，通过目测或者计数器进行计数。

4.将计数结果作为菌落总数CFU。

3. 浓度计算法浓度计算法是通过计算一定体积的菌液中的菌落总数CFU来推算样品中的菌落总数。

具体步骤如下：1.从样品中取一定体积的菌液，通常在1-10毫升之间。

2.将菌液进行一系列的稀释，并在每个稀释液上培养菌落。

3.等待适当的培养时间，通常是24-48小时。

4.在培养平板上，选择合适的稀释液，使得菌落数量在30-300之间。

5.计算选择稀释液的菌落数量，并乘以相应的稀释比例和体积，得到菌落总数CFU。

以上是菌落总数CFU计算方法的一些例子，不同方法适用于不同情况。

在进行菌落总数测定时，应选择适当的方法，并按照规定的步骤进行操作，以获得准确可靠的结果。

当然，接下来我将继续介绍更多关于菌落总数CFU计算方法的例子：4. 颜色变化计算法某些微生物在培养基上产生特定的颜色变化，可以通过颜色密度与菌落数量之间的关系来推算菌落总数CFU。

高中生物第1章微生物技术第3课时微生物数量的测定同步备课教学案北师大版选修

⾼中⽣物第1章微⽣物技术第3课时微⽣物数量的测定同步备课教学案北师⼤版选修第3课时微⽣物数量的测定[学习导航] 1.阅读教材P17内容，概述测定某种微⽣物数量的⽅法和步骤。

2.结合教材P15～17“测定⼟壤中微⽣物的数量”实验，掌握使⽤平板菌落计数法测定⼟壤中微⽣物的数量。

[重难点击] 1.掌握测定某种微⽣物数量的⽅法和步骤。

2.学会使⽤平板菌落计数法测定⼟壤中微⽣物的数量。

⼀、微⽣物数量测定的⽅法和原理微⽣物数量的测定也是重要的微⽣物技术之⼀，平板菌落计数法是⼀种应⽤⼴泛的微⽣物数量测定⽅法。

1.平板菌落计数法的原理：根据微⽣物在⾼度稀释的条件下，固体培养基上所形成的单个菌落，是由⼀个单细胞繁殖⽽成的，即⼀个菌落代表⼀个单细胞。

2.计算⽅法：从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算⽅法是：同⼀稀释度的菌落平均数÷0.2÷稀释度×10。

3.优缺点(1)优点：能测出样品的活菌数，可⽤于微⽣物的选种与育种、分离纯化及其他⽅⾯的测定。

(2)缺点：操作烦琐、时间较长、测定值常受各种因素的影响。

4.该⽅法统计的菌落数⽐活菌的实际数⽬低，这是因为当两个或多个细胞在⼀起时，平板上观察到的只是⼀个菌落。

1.为什么分离不同的微⽣物要采⽤不同的稀释度？答案⼟壤中各种微⽣物的数量是不同的，为获得不同类型的微⽣物，就需要按不同的稀释度进⾏分离。

2.平板菌落计数法(1)平板菌落计数法根据操作步骤的不同可分为哪两种？答案①涂布平板法：⽤灭过菌的涂布器将⼀定量(⼀般为0.1 mL)的适当稀释过的菌液涂布在琼脂培养基的表⾯，然后保温培养直到菌落的出现。

记录菌落的数⽬并换算成每毫升样品中的活细胞的数量。

②倒平板法：将已知体积(0.1～1 mL)的适当稀释过的菌液加到灭过菌的培养⽫内，然后倒⼊溶化后冷却⾄45 ℃的琼脂培养基，⽔平晃动混匀，待凝固后保温培养到出现菌落，然后与涂布平板法同样计数。

(2)平板菌落计数法中换算样品的含菌数依据什么数据换算？答案依据稀释倍数、取样接种量和菌落数。

普通微生物学普通微生物学1

原核微生物（prokaryotes）
指一类细胞核无核膜包裹，只存在核区的单细胞生物。
✓ 细胞核外无核膜包裹，只有核区，称为原核； ✓ 核糖体位于细胞质内，是70S粒子； ✓ 细胞内不含任何由单位膜包裹的细胞器。
包括细菌、放线菌、蓝细菌、衣原体、支原体等。
细菌（bacteria）
是一类结构简单、细胞壁坚韧、主要以二分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生物。细菌的基本形态：球、杆、螺旋
螺旋体菌
菌体柔软，用于运动的类似鞭毛的轴丝位于细胞外鞘内。
4. 特殊形态
柄细菌
方形细菌
星形细菌
鞘细菌
二、细菌的大小
细菌的大小测量单位是μm。 ✓ 球菌大小以直径表示，如1 μm ✓ 杆菌大小以其宽度与长度表示，如1 × 6 μm
✓ 螺旋菌大小以其宽度与长度表示，长度指菌体两端间弯曲形的长度，如1 × 5 μm
链球菌
沿一个平面进行多次分裂，分裂后细胞呈链状排列。如：溶血链球菌 (Streptococcus Hemolyticus)
四联球菌
细胞分裂沿两个垂直的平面进行，分裂后每4个细胞特征性地连在一起，呈田字形。
如：四联小球菌(Micrococcus tetragenus)
八球菌
细胞按三个相互垂直的平面进行分裂后，每八个球菌特征性地连在一起成立方体形。
如：尿素八叠球菌 (Sarcina ureae)
葡萄球菌
细胞无定向分裂，多个新个体形成一个不规则的群体，犹如一串葡萄。
如：金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)
一、细菌的形态 2. 杆菌（bacillus）
杆菌是细菌中种类最多的类型，因菌种不同，菌体细胞的长短有所差异。 ✓ 短杆状、长杆状等； ✓ 排列方式有链状、栅状、“八”字状等。大芽肠孢杆杆菌菌

1-5级洁净度环境要求标准

1-5级洁净度环境要求标准一、尘埃数量1级：洁净室内每立方米空气中直径大于0.5µm的尘埃粒子数不超过3500000个。

2级：洁净室内每立方米空气中直径大于0.5µm的尘埃粒子数不超过3500000个。

3级：洁净室内每立方米空气中直径大于0.5µm的尘埃粒子数不超过1800000个。

4级：洁净室内每立方米空气中直径大于0.5µm的尘埃粒子数不超过1800000个。

5级：洁净室内每立方米空气中直径大于0.5µm的尘埃粒子数不超过900000个。

二、微生物含量1级：洁净室内微生物（包括细菌、霉菌和酵母菌）含量不得超过国家规定标准。

2级：洁净室内微生物（包括细菌、霉菌和酵母菌）含量不得超过国家规定标准。

3级：洁净室内微生物（包括细菌、霉菌和酵母菌）含量不得超过国家规定标准。

4级：洁净室内微生物（包括细菌、霉菌和酵母菌）含量不得超过国家规定标准。

5级：洁净室内微生物（包括细菌、霉菌和酵母菌）含量不得超过国家规定标准。

三、空气流速1级：洁净室内空气流速应保持稳定，无明显的涡流和死角，流速控制在0.2-0.5m/s之间。

2级：洁净室内空气流速应保持稳定，无明显的涡流和死角，流速控制在0.2-0.5m/s之间。

3级：洁净室内空气流速应保持稳定，无明显的涡流和死角，流速控制在0.3-0.6m/s之间。

4级：洁净室内空气流速应保持稳定，无明显的涡流和死角，流速控制在0.4-0.7m/s之间。

5级：洁净室内空气流速应保持稳定，无明显的涡流和死角，流速控制在0.5-1.0m/s之间。

四、压差1级：洁净室内应保持一定的压差，一般应在10-30Pa之间。

相邻不同级别洁净室之间，高级别洁净室的压力高于低级别洁净室的压力。

对于同一洁净度级别的不同功能区域，通常应保持相同的压力，或至少相差不应超过5Pa。

在有特殊要求的情况下，如制药行业，不同洁净室之间的压差可能会更大。

同时，要确保门的密封性能良好，以维持洁净室的压差稳定。

微生物1

B、分为普通菌毛和性菌毛
C、是细菌的运动器官
D、用普通光学显微镜不能观察
E、普通菌毛与细菌的致病力有关
答案： C
52、诊断急性乙型肝炎的最主要的血清学指标是
A、 HBeAg
B、 HBc总抗体
C、 HBsAg
D、抗-HBc IgG
E、抗-HBc IgM
答案： E
53、IMViC试验常用于鉴别
C、解脲脲原体
D、淋病奈瑟菌
E、梅毒螺旋体
答案： B
6、深部感染的真菌最适生长温度是
A、 25℃
B、 28℃
C、 30℃
D、 32℃
E、37℃
答案： E
7、具有多种繁殖方式的微生物是
A、衣原体
B、螺旋体
C、真菌
D、细菌
E、立克次体
答案： C
8、双链DNA病毒在生物合成过程中翻译成的早期蛋白主要是
A、双链DNA
B、单股DNA
C、单股负链RNA
D、两条相同的单股正链RNA
E、单股正链RNA
答案： D
50、长期使用抗生素易引起
A、无芽胞厌氧菌感染
B、厌氧芽胞杆菌感染
C、病毒感染
D、缺陷病毒感染
E、梅毒螺旋体感染
答案： A
51、关于菌毛的叙述,下列哪一项是错误的
A、多见于革兰氏阴性菌
A、葡萄糖发酵试验
B、乳糖发酵试验
C、菊糖发酵试验
D、甘露醇糖发酵试验
E、吲哚试验
答案： B
14、肺炎衣原体只有1个血清型,其代表株是
A、 TWAR株
B、 TAWR株
C、 TMAR株

土壤微生物量测定方法

土壤微生物量测定方法一、土壤微生物生物量碳（氯仿熏蒸－K2SO4提取-碳分析仪器法）1、试剂（1）去乙醇氯仿制备：在通风橱中，将分析纯氯仿与蒸馏水按1 2（v : v）加入分液漏斗中，充分摇动1 min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。

得到的无乙醇氯仿中加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。

纯化后的氯仿置于试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存。

（2）氢氧化钠溶液[c（NaOH）= 1 mol L-1]：通常分析纯固体氢氧化钠中含有碳酸钠，与酸作用时生成二氧化碳，从而影响滴定终点判断和测定的准确度。

配制时应先除去碳酸钠，根据碳酸钠不溶于浓碱，可先将氢氧化钠配成50%（w : v）的浓氧溶液，密闭放置3～4 d。

待碳酸钠沉降后，取56 ml 50%氢氧化钠上清液（约19 mol L-1），用新煮沸冷却的除去二氧化碳的蒸馏水释稀到1 L，即为浓度1 mol L-1 NaOH溶液，用橡皮塞密闭保存。

（3）硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= 0.5 mol L-1]：取1742.5 g分析纯硫酸钾，用研钵磨成粉末状，倒于25 L塑料桶中，加蒸馏水至20 L，盖紧螺旋盖置于摇床（150 r min-1）上溶解24 h即可。

（4）六偏磷酸钠溶液[ρ（Na）= 5 g 100 ml-1，pH 2.0]：称取50.0 g分析纯六偏磷酸钠溶于800 ml高纯度去离子水中，用分析纯浓磷酸调节至pH 2.0，用高纯度去离子水定容至1 L。

要注意的是六偏磷酸钠溶解速度很慢应提前配制；由于其易粘于烧杯底部，若加热常因受热不均使烧杯破裂。

（5）过硫酸钾溶液[ρ（K2S2O8）= 2 g 100 ml-1]：称取20.0 g分析纯过硫酸钾，溶于高纯度去离子水中，定容至1 L。

值得注意过硫酸钾溶液易被氧化，应避光存放且最多使用7 d。

（6）磷酸溶液[ρ（H3PO4）= 21 g 100 ml-1]：量取37 ml 分析纯浓磷酸（85%），慢慢加入到188 ml高纯度去离子水中即可。

微生物学第一章

细胞膜（ membrane）细胞膜（cell membrane）
或称胞质膜细胞壁内侧，包绕细胞质结构：磷脂、蛋白质，不含胆固醇功能：物质转运、生物合成、分泌和呼吸、信号转导等
中介体（mesosome）中介体（mesosome）
是部分细胞膜内陷、折叠、卷曲形成的囊状物，多见于革兰阳性细菌。
最外层，由数个至数十个低聚糖重复单位所构成的多糖链。菌体抗原（O抗原），种特异性缺失，细菌变为粗糙型
革兰阳性菌
革兰阴性菌
G+ 菌与G- 菌细胞壁的比较细胞壁强度厚度肽聚糖层数肽聚糖含量磷壁酸外膜革兰阳性菌较坚韧 20～80nm 可多达50层 50%～80% 有无革兰阴性菌较疏松 10～15nm 1～2层 5%～10% 无有
I
大肠埃希菌产气杆菌 + -
M
+ -
Vi
+
C试验 C试验
+
（二）合成代谢产物
热原质（pyrogen）热原质（pyrogen） –细菌合成的一种注入人体或动物体内能引起发热反应的物质。本质：LPS –耐高温 –去除方法：250℃干烤、蒸馏、吸附剂等 –制备和使用注射药品过程无菌操作毒素与侵袭性酶色素抗生素某些微生物代谢过程中产生的一类能抑制或杀死某些微生物或肿瘤细胞的物质细菌素维生素
（二）细菌的特殊结构荚膜（capsule）荚膜（capsule）
概念：某些细菌在其细胞壁外包绕一层黏液性物质，为疏水性多糖或蛋白质的多聚体，用理化方法去除后并不影响菌细胞的生命活动。化学组成：多糖/多肽。形成条件：营养丰富。染色：不易着色，负染（墨汁）。
光学显微镜下荚膜
电子显微镜下荚膜

2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌

2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌2020版本药典(1)菌液制备取白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。

(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，35℃条件下培养4天；接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，25℃条件下培养4天。

每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。

同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。

2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。

所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。

1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。

2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。

3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。

3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。

每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。

胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。

同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。

微生物计数方法

微⽣物计数⽅法1．操作⽅法：以⽆菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌⽣理盐⽔或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制成1：10的均匀稀释液。

固体检样在加⼊稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。

⽤1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注⼊含有9ml灭菌⽣理盐⽔或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。

另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释⼀次即换⽤1⽀1ml灭菌吸管。

2．⽆菌操作：操作中必须有“⽆菌操作”的概念，所⽤玻璃器⽫必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。

所⽤剪⼑、镊⼦等器具也必须进⾏消毒处理。

样品如果有包装，应⽤75%⼄醇在包装开⼝处擦拭后取样。

操作应当在超净⼯作台或经过消毒处理的⽆菌室进⾏。

琼脂平板在⼯作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。

3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中⼀点，宜多采⼏个部位。

固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。

4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每⼀稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每⼀稀释度应更换⼀⽀吸管。

在进⾏连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流⼊，勿使吸管尖端伸⼊稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。

为减少稀释误差，SN标准采⽤取10mL稀释液，注⼊90mL缓冲液中。

5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌⽣理盐⽔，有的采⽤磷酸盐缓冲液（或0.1%蛋⽩胨⽔），后者对⾷品中已受损伤的细菌细胞有⼀定的保护作⽤。

如对含盐量较⾼的⾷品（如酱油）进⾏稀释，可以采⽤灭菌蒸馏⽔。

倾注培养1．操作⽅法：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平⽫中，每个稀释度做两个平⽫。

生活饮用水标准检验方法-微生物指标[1]

修订后
微生物指标限值微生物指标
限值
-
肠球菌/（CFU/100mL）
0
-
产气荚膜梭状芽胞杆/（CFU/100mL）
0
一、菌落总数
修订前
修订后
细菌总数
菌落总数
原理：细菌总数是指水样在一定定义：水样在营养琼脂上有氧条条件下培养后（培养基成分、培件下37℃培养48h后，所得1ml水养温度和时间、pH、需氧性质等）样所含菌落的总数。所得1ml水样所含菌落的总数。按本规范规定所得结果只包括一群
酶底物法定义：总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生β半乳糖苷酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法。培养基：MMO-MUG培养基（Minimal Medium ONPG-MUG）。本方法可分为定性和定量。定量法：10管法、51孔定量法培养条件： 36±1℃ 24h
在滤膜上,将滤膜贴在选择培养上, 膜过滤水样, 将滤膜贴在添加乳
经培养后,计数生长在滤膜上的典糖的选择培养上, 37℃ 培养24h，Fra bibliotek型大肠菌群菌落数。
能形成特征菌落的需氧和兼性厌
培养条件：37℃ 18-24h
氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检测水中总大肠菌群的方法。
培养条件：37℃ 24±2h
酶底物法
能产生β-半乳糖苷酶的细菌群组分解ONPG使培养基呈黄色酶底物法的主要特点：优点：可同时判断水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌检测时间较短，只需18-24h，最长需要28h 无需确证试验操作简单，对试验条件和人员要求低缺点：检测成本高
总大肠菌群三种方法的比较
时间验证试验步骤特殊设备价格

微生物数量测定

微生物数量测定在生物学和医学领域，微生物的数量测定是一个重要的实验技术。

通过对微生物数量的测定，我们可以了解生物体在不同环境中的适应性和生存能力，评估环境的健康状态，以及监测和治疗疾病等。

微生物数量测定的基本原理是利用单位体积或单位面积上的微生物细胞数，通过统计和计算得到微生物的数量。

常用的方法包括显微镜计数法、比浊法、平板计数法等。

显微镜计数法是一种直接计数法，通过显微镜观察并计数样品中的微生物数量。

该方法需要将样品均匀涂布在载玻片上，干燥后进行染色和固定，然后使用显微镜观察并计数。

该方法的优点是简单易行，适用于微生物数量较少的样品，但不适用于大量样品。

比浊法是一种通过测量样品的浊度来测定微生物数量的方法。

该方法是通过将样品与标准曲线进行比较，得出微生物的数量。

该方法的优点是快速、简便、准确度高，适用于大量样品的测定。

但是，该方法需要使用标准曲线，对于某些微生物可能不太准确。

平板计数法是一种通过培养微生物并计数菌落数量来测定微生物数量的方法。

该方法是将样品稀释后涂布在培养基上，培养一定时间后统计菌落数量，然后计算出微生物的数量。

该方法的优点是准确度高，适用于各种微生物的测定，但需要一定的培养时间和人力。

微生物数量测定的应用领域非常广泛，包括环境科学、医学、食品科学、农业科学等。

例如，在环境科学中，微生物数量测定可以用来评估污染物的毒性对生态环境的影响；在医学中，微生物数量测定可以用来监测和治疗疾病；在食品科学中，微生物数量测定可以用来控制食品的质量和安全；在农业科学中，微生物数量测定可以用来了解土壤的健康状况和作物的生长情况等。

微生物数量测定是一种重要的实验技术，广泛应用于生物学和医学等领域。

通过对微生物数量的测定，我们可以更好地了解生物体的适应性和生存能力，评估环境的健康状态，监测和治疗疾病等。

未来随着科技的不断进步和应用领域的不断拓展，微生物数量测定的方法和应用将更加多样化和精准化。

在生物学和医学领域，微生物的大小和数量的测定对于研究生命过程、疾病诊断和治疗等方面都具有重要的意义。

实验1微生物细胞大小测定及显微镜直接计数法

• 定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长l0μm，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。
• 例如目镜测微尺5小格正好与镜台测微尺5小格重叠，已知镜台测微尺每小格为l0μm，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/5＝ 10μm。 • 用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
• 计数区由400个小方格组成。
• 每个大方格边长为1mm，其面积为lmm2，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3。
• 使用血球计数板计数时，通常测定五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以25或16，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。 • 因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个中方格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d）
• 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。 • 计数区的刻度有两种： • 一种是计数区（大方格）分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格； • 另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
• 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即 0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上。 • 由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺葡萄球菌
大肠杆菌

微生物计数修约要求

微生物计数修约要求
微生物计数修约呢，就像是给微生物数量来个“整理打扮”。

如果是那种小于100CFU（菌落形成单位）的计数，你就按四舍五入来。

比如说，你数出来是42.3个，那就约成42个；要是42.6个呢，就约成43个。

当计数在100到1000CFU之间的时候，你就把后面的零头看情况舍或者入，不过要让它变成整十的数。

就像123个，你可以约成120个；要是128个，那就约成130个。

要是超过1000CFU了，那就以百位为单位来修约。

比如1532个，你就约成1500个；要是1589个，就约成1600个。

还有哦，如果你的计数特别小，像那种小于10CFU，而且又不是整数的时候，那你就别瞎约了，保留一位小数。

比如说3.2个就写3.2个，可别约成3个，毕竟微生物少的时候，每一个都很“金贵”呢。

这微生物计数修约啊，就是为了让这个计数既准确又好看，就像把微生物的数量世界整理得井井有条一样。

微生物量碳氮

微生物量碳方法一每个土样称取相当于 20g 烘干土重的 6 份新鲜湿土于100ml 烧杯中，其中三份作为对照，直接用 100ml 0.5 mol·L -1 K 2SO 4（87.13g 定容到1L ）浸提。

另三份放入干燥器中熏蒸，干燥器底部放适量水（保湿）和三个 50ml 小烧杯，一个烧杯盛 25ml 1% NaOH 溶液（1g NaOH 加入99ml 水），另两个各盛 25ml 无醇氯仿（投入少量沸石）。

盖严干燥器盖，将干燥器置于通风橱内，抽真空，直至氯仿沸腾约 2min ，而后置于25℃暗室中 24h ，取出盛氯仿的小烧杯，盖严干燥器盖，反复抽真空以除去残余的氯仿。

采用灭菌－提取法，从干燥器中取出土样，同对照一样放入150ml 三角瓶中，分别加入100ml 0.5 mol·L -1 K 2SO 4溶液，25℃下在往复式震荡机上振荡30min ，过滤。

滤液用德国产TOC 仪测定土壤提取液全碳含量，以熏蒸和未熏蒸土壤提取液全碳含量的差值Fc 乘以系数2.64得到土壤微生物碳的含量，计算公式为：mic C F K F 2.64=⨯=⨯C CF K F 2.64=⨯=⨯方法二一、基本原理熏蒸提取法测定微生物碳的基本原理是：氯仿熏蒸土壤时由于微生物的细胞膜被氯仿破坏而杀死，微生物中部分组分成分特别是细胞质在酶的作用下自溶和转化为K 2SO 4溶液可提取成分（Joergensen,1996）。

采用重铬酸钾氧化法或碳-自动分析仪器法测定提取液中的碳含量，以熏蒸与不熏蒸土壤中提取碳增量除以转换系数KEC 来估计土壤微生物碳。

二、试剂配制（1）硫酸钾提取剂（0.5 mol•L -1）：取871.25 g 分析纯硫酸钾溶解于蒸馏水中，定溶至10 L 。

（2）0.2 mol•L -1（1/6 K 2Cr 2O 7）标准溶液：称取130℃烘2-3小时的K 2Cr 2O 7（分析纯）9.806 g 于1 L 大烧杯中，加去离子水使其溶解，定溶至1 L 。