微生物量(1)

土壤微生物生物量碳、氮的测定-氯仿熏蒸浸提法

熏蒸：

称鲜土（10目）7.5g于培养皿（或烧杯）中，将培养皿（或烧杯）置于可抽负压的真空干燥器中，分别内置装有50ml无乙醇氯仿及蒸馏水的小烧杯。用真空泵抽至氯仿沸腾并保持2min，关紧干燥器气阀，将其放入28℃恒温室（或恒温箱）中熏蒸24h。干燥器移出，放空干燥器，把装氯仿的烧杯移走，干燥器清理干净后，反复抽气除去氯仿直至无气味。待氯仿去除干净后：

1.在0.01的天平上称熏蒸土壤5g加30ml 0.5M K2SO4溶液，在往复式震荡机上震荡

提取30min，离心、过滤于100ml带盖塑料瓶中。滤液保存在4℃冰箱中备用，最

好保存不超过一周。

2.剩余土壤2.5g先称重，然后置于烘箱105℃烘 6h，取出称重。

同时做不熏蒸样品的提取：

3.称未熏蒸鲜土2.5g于离心管中，加30ml 0.5M K2SO4溶液，在往复式震荡机上震荡

提取30min，离心、过滤。滤液保存在4℃冰箱中备用，最好保存不超过一周。

4.同时称未熏蒸土壤2.5g，置于烘箱105℃烘 6-8h，取出称重。

试验方法：

微生物碳：吸浸提液5ml至消煮瓶，加入重铬酸钾标准溶液5ml（称经130度烘干2-3h 的重铬酸钾19.622g，溶于水，定容至1L）、浓硫酸10ml，消煮30min，加入蒸馏水10-20ml 冷却。加入1-3滴邻菲罗琳指示剂，用硫酸亚铁滴定剩余的重铬酸钾。（硫酸亚铁的配制及标定见p232）。

微生物氮：吸浸提液5ml于25ml具塞比色管，加入过硫酸钾氧化剂溶液12.5ml，用水定容至25ml，塞紧瓶塞，纱布包好扎紧，放入高压蒸汽灭菌器，加热至120度保持30min，冷却后直接在紫外分光光度计上用波长220和275nm测定。

工作曲线：吸取氮标准溶液（25mg/L）0、0.5、1、2、3、4、5ml分别于25ml比色管中，各加入12.5ml氧化剂溶液，用水定容至刻度，得到氮的标准系列溶液0、0.5、1、2、3、4、

5mg/L，与样品同样消煮测定A220和A275。

1.基本方法：滤液用重铬酸钾—容量法测定有机碳（p231）

2.TOC仪法：前两步所得滤液用TOC仪测定微生物生物量碳、氮；称取熏蒸及不熏

蒸处理土样各3-5g测定水分，用于结果计算。

微生物碳=（熏蒸碳-未熏蒸碳）×2.64

微生物氮=（熏蒸氮-未熏蒸氮）×1.85