活肿瘤组织冻存技术介绍-ppt
肿瘤标本储存条件
肿瘤标本储存条件全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：随着现代医学的发展，肿瘤标本在肿瘤研究中扮演着非常重要的角色。
肿瘤标本的质量和保存条件对于后续的研究工作至关重要。
良好的标本储存条件可以保证标本的原始形态和信息不被破坏，并为后续的实验研究提供可靠的数据支持。
下面将介绍一下肿瘤标本储存条件的相关知识。
一、采集标本肿瘤标本的采集是整个储存过程中非常重要的一环，采集得当将直接影响标本的质量。
在进行肿瘤标本采集时，应遵循一定的操作规范，减少对标本的伤害，尽可能保持标本的完整性。
一般来说，采集的标本应尽快送到实验室进行处理，以保证标本的原始形态不被破坏。
二、处理标本在采集完标本后，应尽快进行处理，避免标本的变性和降解。
处理标本的步骤包括固定、埋藏、切片等操作。
固定是指将采集到的组织标本浸泡在适当的固定液中，以固定组织细胞的结构和形态。
固定液的选择应根据不同的实验目的进行确定。
埋藏是指将固定好的组织标本埋藏在蜡块中，切片则是将埋藏好的标本切成薄片，以便后续的染色和观察。
三、储存条件1. 温度肿瘤标本的储存温度是影响标本质量的重要因素之一。
一般来说，标本的储存温度应保持在4℃至-80℃之间。
较低的温度有利于延缓标本的降解过程，保持标本的原始形态。
对于一些易氧化和易降解的标本，应储存在-80℃以下的超低温环境中，以确保标本的质量不受影响。
2. 湿度3. 光照光照是另一个影响标本保存状态的重要因素。
过强的光照会促使标本的降解，影响标本的质量。
在储存标本时，应避免强光照射，选择阴暗的环境进行储存。
4. 安全在进行肿瘤标本储存时，还要注意标本的安全问题。
标本应储存在安全的地方，避免受到外界物质的污染和破坏。
应建立完善的标本管理制度，对标本的存储、借阅和处理等过程进行严格管理，确保标本的安全。
肿瘤标本的储存是肿瘤研究中非常重要的一环，良好的储存条件可以保证标本的质量和完整性。
只有做好标本的采集、处理和储存等工作，才能为后续的研究工作提供可靠的数据支持。
肿瘤细胞培养技术
EGF FGF NGF
5ng/ml 5ng/ml 5ng/ml
肿瘤细胞的培养
与常规细胞培养技术相同 一个细胞群体，存在多种亚群，复杂性 建株细胞较正常细胞易于培养
细胞分裂增殖的调控 （细胞周期）
多种基因的协同作用 调控因子：
基因：Cdc2、 cyclin 蛋白磷酸化 蛋白激酶的调控 胸苷激酶的调控 负调：DNA损伤与DNA修复：抑制抗性
体内：裸鼠或免疫功能抑制鼠，成瘤率、抑瘤 生长率、转移率、生存时间及死亡率
作用机理的研究：基因、蛋白、酶、标志、受体
肿瘤细胞培养的应用
肿瘤细胞的遗传特性：各种癌基因及抑 癌基因的分析、染色体定位（FISH法）
肿瘤细胞的生物学行为：细胞周期 （FACS)、信号传递
肿瘤细胞的标志与激素、受体变化（免 疫细胞化学、放射自显影、酶免疫、荧 光免疫、放射免疫、免疫印迹）
建株：生长半年以上，病理诊断、光镜及电 镜观察、生长特征、染色体分析、肿瘤标志、 致瘤及转移情况
注意：不是每一肿瘤组织都能建株
应用- 肿瘤治疗的研究
治疗药物敏感性的鉴定与筛选 肿瘤的多药耐药性的鉴定 各种新药治疗的实验研究
体外：肿瘤的生长（3HTdr掺入） 肿瘤的杀伤率（MTT、51Cr释放）
增生、吞噬碎片；第4~5天可见小堆 杂交瘤细胞生长。记录。 2. 融合后5~7天确认骨髓瘤细胞全部死亡， 毛细吸管吸出0.1ml ~ 0.15ml HAT， 换成同量HT培基。
单克隆抗体制备
七. 杂交瘤抗体检测： 培基变黄，杂交瘤细胞占孔底面积1/4、状
态好，可测上清液抗体（非分泌性比分泌性杂 交瘤长速快），及时测抗体及时克隆化，以免 目的杂交瘤丢失。
可溶性抗原：2~10g
细胞抗原：1 105
细胞的冻存及复苏PPT课件
冷冻保存方法
1．非玻璃化冷冻 非玻璃化冻存是利用各种温级的冰箱分阶段降
温至-70 ℃ ～-80 ℃ ，然后直接投入液氮进行保 存；或者是利用电子计算机程控降温仪以及利用 液氮的气、液，按一定的降温速率从室温降至1000C以下，再直接投入液氮保存的方法 该种方法冻结的细胞悬液或多或少都有冰晶的形 成
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细胞冻存与复苏的关键因素
复苏速率
复苏速率：在细胞复苏时温度升高的速度。复温 速率不当也会降低冻存细胞存活率。一般来说， 复温速度越快越好，速度过慢，细胞内往往重新 形成较大冰晶而造成细胞损伤。复温时造成的细 胞损伤非常快，往往在极短的时间内发生。
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细胞冻存与复苏的关键因素 冷冻保护剂
冷冻保护剂：可以保护细胞免受冷冻损伤的物质 分为渗透性和非渗透性两类。 不同的冷冻保护剂有不同的优、缺点。目前一般 多联合使用两种以上冷冻保护剂组成保护液。
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细胞冻存与复苏的关键因素
保存温度
冷冻保存温度：能长期保存细胞的超低温度，在 此温度下，细胞生化反应极其缓慢甚至停止，但 经过长期保存，在复苏后仍能保持正常的结构和 功能。 液氮温度（-196℃）是 目前最佳的冷冻保存温度。
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冷冻速率：慢冻 复苏速率：快融 冷冻保护剂：渗透性和非渗透性 冷冻保存温度：－196 ℃（液氮）
细胞冻存与复苏
1
细胞的冻存和复苏
1.细胞冻存
细胞冻存与细胞传代保存相比优势在于：一，可以减少 人力、经费投入，减少污染，减少细胞生物学特性变化； 二，有利于保存那些不立即使用的细胞系或者将细胞系 转给其他使用者。
2
细胞的冻存和复苏 1.细胞冻存
目前，动物细胞一般保存于液氮（-196℃）。
3
冷冻疗法及护理PPT课件
冷冻疗法及护理
三峡医专附二院皮肤科 张昆梅
1
冷冻疗法的概念
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冷冻治疗的护理
3. 治疗后的护理 ① 术后需口头或通过病历向患者交代注意
事项。 ② 局部保持清洁、干燥，创面痂皮任其自
愈脱落（1-2周），不宜强行过早撕脱， 以防感染遗留色素、瘢痕或损容。
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冷冻治疗的护理
③ 冷冻后局部引起的疼痛，一般能耐受， 1-2天后可自行缓解，若个别疼痛剧烈 不能忍受者，可口服镇静止痛药。
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影响治疗效果的因素
选择适应症是成功或失败的关键之一。 治愈率的高低除与疾病种类有关外， 还与患者年龄、性别、病变部位、大小、 厚薄、深浅、冷冻的时间、次数、方法 和剂量大小，以及操作者的水平等多种 因素有关。
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冷冻疗法的禁忌症
1. 对患有其它炎症及发热反应者、肢体麻 痹、皮肤感觉或局部循环功能障碍者， 月经期、阴囊部病变未明确诊断者，均 应暂缓或慎用冷冻治疗。
是生产氧气的副产品，为无色透明、 无味、无毒之液体，不导热导电，不自 然助燃，化学性质稳定。不易燃烧及爆 炸，其沸点（-196℃）
1单位体积的液氮可产生约650倍体 积的氮气。
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冷冻治疗的方法
接触法 喷射法 棉签法
刺入法 倾注法 浸入法 冻切法 冷刀法
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冷冻疗法适用范围（一）
1. 常规适应症 疗效显著，治愈率在90%以上 寻常疣、扁平疣、传染性软疣、雀斑、
冷冻疗法ppt课件
由于冷冻疗法可能会引起一些不良反应，如过敏 反应、皮肤破损等，因此并不适合所有人群。对 于一些特殊人群，如孕妇、儿童、老年人等，需 要在医生的指导下进行治疗。
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冷冻疗法的效果与风险
效果
疼痛缓解
冷冻疗法可以有效地缓解疼痛，特别是对于关节炎、肌肉疼痛和扭伤 等。通过降低组织的新陈代谢和减少炎症，疼痛可以得到缓解。
形的效果。
其他领域的应用
01
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农业领域
在农业领域，冷冻疗法可 以用于保存种子、花卉等 植物材料，延长保存时间 。
食品工业
在食品工业中，冷冻疗法 可以用于保存食品、延长 食品保质期等。
文物保护
在文物保护领域，冷冻疗 法可以用于保护文物，延 长文物保存时间。
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冷冻疗法的优缺点
优点
快速有效
非侵入性
缺点
治疗过程可能有些痛苦
虽然冷冻疗法通常不需要麻醉，但对于一些敏感 的患者来说，治疗过程中可能会感到疼痛或不适 。
可能引起皮肤反应
冷冻疗法可能会引起皮肤反应，如红肿、水泡等 ，但这些反应通常会在几天内自行消失。
可能需要多次治疗
由于冷冻疗法通常不能一次性治愈所有问题，因 此可能需要多次治疗才能达到理想的效果。
随着技术的普及和规模化生产，冷 冻疗法的成本有望降低，使其更加 普及和可及。
研究方向
冷冻机制研究
深入探讨冷冻疗法的作用机制，为进 一步优化治疗提供理论支持。
冷冻剂研究
临床应用研究
加强临床试验和应用研究，验证冷冻 疗法的安全性和有效性，为推广应用 提供依据。
研究新型冷冻剂的特性和效果，寻找 更加安全、环保、高效的替代品。
进伤口愈合。
肿瘤细胞的冻存与复苏
肿瘤细胞的冻存与复苏体外培养的肿瘤细胞系的传代及日常维持过程中，在培养容器、培养液及各种预备工作方面都需大量的耗费；而且肿瘤细胞一旦离开活体开头体外培养，它的各种生物学特性都将逐渐发生变幻，并随着传代次数的增强和体外环境条件的转变而不断有新的变幻。
因此准时举行肿瘤细胞冻存非常须要。
现在，肿瘤细胞低温冷冻储存已成为细胞培养室的常规工作和通用技术。
细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时光是无限的。
肿瘤细胞冻存及复苏的基本原则与常规细胞一样，是慢冻快融，试验证实这样可以最大限度地保存细胞活力。
（一）肿瘤细胞的冻存冻存肿瘤细胞时要缓慢冷冻。
由于细胞在不加任何庇护剂的状况下挺直冷冻时，细胞内外的水分都会很快形成冰晶，冰晶的形成将引起一系列的不良反应。
首先细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH转变，部分蛋白质因为上述因素而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，细胞内冰晶的形成和细胞膜系统上蛋白质、酶的变性，引起溶酶体膜的损伤使溶解酶释放造成细胞内结构成分的破坏，线粒体肿胀、功能丧失并造成细胞能量代谢的障碍。
胞膜上的类脂蛋白复合体在冷冻中易发生破坏引起胞膜通透性的转变、使细胞内容物丧失。
细胞核内DNA也是冷冻时细胞易受损伤部分。
如细胞内冰晶形成较多，随冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成DNA的空间构型发生不行逆的损伤性变幻而引起细胞的死亡。
在细胞冻存时要尽可能的匀称地削减细胞内水分，削减细胞内冰晶的形成是削减细胞损伤的关键。
目前多采纳甘油或(DMSO）作庇护剂。
这两种物质在深低温冷冻后对细胞无显然毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高胞膜对水的通透性；加上缓慢冷冻办法可使细胞内的水分渗出细胞外，在胞形状成冰晶，削减细胞内冰晶的形成，从而削减因为冰晶形成所造成的细胞损伤。
【材料】 (1)待冻存的肿瘤细胞。
(2）含10％～20％血清培养液、0.25％。
(3) DMSO（分析纯）或无色新奇甘油（高压蒸气消毒后用法）。
常用肿瘤细胞株的培养
常用肿瘤细胞株的培养常用肿瘤细胞株的培养是细胞试验室的日常工作之一，常用的肿瘤细胞株无数，各试验室所用法和保存的细胞株种类各异，培养的办法和习惯也不尽相同。
本节介绍了五种常用的肿瘤细胞株的培养和复苏、冻存的办法。
一、乳腺癌细胞株的培养乳腺癌细胞系的种类无数，而且功能各异，下面介绍几种常用的乳腺癌细胞系的培养的办法。
（一）MCF 一细胞株的培养 MCF-7是一种易于培养的人乳腺癌细胞，来源于乳腺腺癌组织，贴壁生长，形态不规章。
普通培养基采纳DMEM，含10％的。
贴壁生长后，2～3天即可传代。
【材料】 1．冻存的MCF-7细胞株。
2．培养基（DMEM）含10％、含EDTA终浓度为0.25％的,75％。
3．培养瓶、无菌的玻璃吸管或自立包装的塑料吸管、离心管。
【办法】 1．培养细胞的换液 (1)预备好超净工作台，将试剂及材料用75％杀菌后置于超净台，开头试验。
(2）从孵箱中取出培养瓶首先要认真观看培养基有无污染或衰退迹象。
(3)观看培养．基的pH和细胞密度及浓度，如培养基从红色变成橙色，或变成黄色，解释培养基的pH已变酸，需要更换培养基；如培养基从红变为紫色，解释培养基的pH已变碱，可能细胞已死亡，需拣出丢弃。
(4）将细胞培养瓶置于无菌工作区域，无菌操作打开培养瓶瓶盖，倒掉培养液。
(5）用PBS反复冲洗细胞2～3遍，细胞培养条件要求苛刻的，可用细胞培养液冲洗细胞。
(6)加入预热的培养基，倒置显微镜下观看，放入培养箱中培养。
2．细胞的传代 (1)预备超净工作台，将试剂及材料用75％杀菌后置于超净台，开头试验。
(2)认真检查培养基DMEM有无污染或衰退迹象。
(3)在镜下观看MCF-7细胞是否需要传代（主要看细胞密度是否长至彼此汇集，铺满培养瓶即可传代），若需要传代，举行如下操作。
(4）将MCF-7细胞置于超净台无菌工作区中，弃去原培养基。
(5)加入无血清培养液并轻轻晃动培养瓶，用培养液清洗细胞，然后弃去清洗液。
冷冻消融技术原理
冷冻消融技术原理冷冻消融技术，是一种目前广泛应用于治疗各种部位恶性或良性肿瘤的方法，其原理是通过应用低温将肿瘤组织冷冻，最终达到摧毁和消除肿瘤的效果。
本文将详细介绍冷冻消融技术的原理和相关技术。
冷冻消融技术的基本原理是利用温度的变化来消融病变组织。
人体内的所有组织都有一定的温度范围，当体内某处的温度超出了生理范围时，该组织就会出现病变或死亡。
冷冻消融技术利用这一原理，通过应用低温进而摧毁病变组织。
一些冷冻消融技术采用的是“间隔冷冻”原理，在此原理中，首先将组织冷冻，随后再将其加热至略高于原始温度，达到周期性的冻融过程。
这种方法可以在尽可能短的时间内迅速消融组织，同时减少非目标组织的受损程度。
2. 冷冻消融技术的实施冷冻消融技术的实施一般需要使用具有冷却功能的工具或设备。
最常用的工具之一是“冷冻探针”，它可以在患者的皮肤或扩张孔中插入，进而到达某个特定的病变组织。
当冷冻探针与病变组织接触时，其内部的冷却液（常用的是氩、氦、氢等气体）会输送至探针的末端处，并在那里扩大成一个低温区域，最终达到破坏病变组织的目的。
一个重要的考虑因素是，冷冻探针放置的位置必须精确，探针的直径要尽可能小，以减少非目标组织的受损。
为达到这一目的，常常使用图像学技术进行相关操作，如超声、计算机断层扫描等。
尽管冷冻消融技术被广泛用于医疗领域，但它也存在一些严重的副作用和风险。
其中最常见的问题是在冷冻治疗过程中扰乱了诸如肝动脉和门静脉等正常的血流，这可能导致一系列严重的并发症。
当消融探针位于肝脏的一侧时，可能会对邻近的肝动脉造成损伤，从而引发肝区缺血性坏死。
在一些情况下，消融处理时也可能会对邻近的病理组织造成伤害，如外围的胰腺。
在对一位病人进行消融治疗时，必须小心谨慎并措施得当，以尽可能减少不良反应的风险。
目前，冷冻消融技术广泛应用于各种病理学领域，如肿瘤治疗、实验室细胞冻存、以及其他一些生物学研究方面等。
它已成为一种安全、有效的非手术治疗选择，能够在很大程度上减少治疗的时间和病人受到的痛苦。
肿瘤基础知识ppt课件
放疗 化疗
优：局部减少肿瘤负荷；见效快； 缺：不敏感细胞，复发根源；
造成免疫损伤； 优：全身减轻肿瘤负荷；见效快； 缺：不敏感细胞，复发根源；
毒副作用大，造成免疫损伤；
药物
阿霉素 博来霉素 卡氮芥 环磷酰胺 氮烯咪胺 鬼臼乙叉甙
立即毒性
近期毒性
恶心 呕吐
其他
骨髓抑制
其他
＋ ＋ 局部刺激
＋＋＋ 脱发、粘膜炎、口炎、心脏毒性*
良性肿瘤与恶性肿瘤比较生物 Nhomakorabea性生长方式
良性肿瘤
膨胀性或外生性
恶性肿瘤
侵袭性
生长速度
缓慢
迅速
边界、包膜
清楚/有包膜
不清楚/无包膜
侵袭性
无，少数局部浸润 侵袭、蔓延
转移
不转移
转移
复发
完整切除不复发
易复发
肿瘤发生发展的5个阶段
癌前阶段：细胞已发生一定改变，但仍然不是癌，可以双 向发展；
原位癌(一般称为0期)：细胞刚刚发生恶变； 浸润癌(一般用T代表)：细胞已由发生的部位向深处浸润； 局部或区域性淋巴结转移(一般用N代表)：细胞由发生的组
＋ － 发热、过敏反应
－ 皮肤色素沉着、皮硬、脱发、肺纤维化**
＋＋ ＋
＋＋＋ 肝损伤、肺纤维化***
＋＋ ＋
＋＋ 药物性膀胱炎、脱发
＋＋
＋＋
＋ ＋ 体位性低血压、局部刺激 ＋＋ 脱发
氟尿嘧啶
＋ － 腹泻
环已亚硝脲
＋＋
米尔法兰
＋－
氨甲蝶呤
＋－
丝裂霉素
＋＋ ＋ 局部刺激
顺铂
＋＋ ＋＋
甲基环已亚硝脲 ＋ ＋
半衰期
细胞的冻存及复苏ppt课件
细胞的冻存和复苏
1.细胞冻存
细胞冻存与细胞传代保存相比优势在于：一，可以减少 人力、经费投入，减少污染，减少细胞生物学特性变化； 二，有利于保存那些不立即使用的细胞系或者将细胞系 转给其他使用者。
要获得好的冻存与复苏效果，必须了解如下几 个问题：冷冻速率、复苏速率、冷冻保护剂，冷 冻保存温度。
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
细胞冻存与复苏的关键因素 冷冻速率
冷冻速率：降温的速度，直接关系到冷冻效果， 对一种细胞进行冷冻保存之前，首先需要测定其 最适冷冻速率，以保证获得最高的冷冻存活率。
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
谢谢！
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
冷冻速率：慢冻 复苏速率：快融 冷冻保护剂：渗透性和非渗透性 冷冻保存温度：－196 ℃（液氮）
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
细胞冻存与复苏的关键因素 复苏速率
复苏速率：在细胞复苏时温度升高的速度。复温 速率不当也会降低冻存细胞存活率。一般来说， 复温速度越快越好，速度过慢，细胞内往往重新 形成较大冰晶而造成细胞损伤。复温时造成的细 胞损伤非常快，往往在极短的时间内发生。
PDX模型的建立、分析和应用 ppt课件
新
PPT课件
1
传统模型：肿瘤细胞系
• 可以很方便的在体外进行培养和实验 • 缺点：
– 在培养和传代过程中进行“筛选”，肿瘤细胞 逐渐适应体外培养环境而失去原有特性
– 缺乏肿瘤相关的生长环境
• 支持性的非肿瘤基质 • 血液细胞，免疫系统的交互 • 其他肿瘤微环境因子
PPT课件
2
肿瘤研究模型
• 使用传统的肿瘤研究模型没能取得临床上 的成功！
PPT课件
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分析内容 – 分子水平
• DNA
– 基因序列
• 第二代测序平台：Illumina HiSeq等
– 基因突变
• Sequenom OncoCarta™ Panels V1-3
– V1：涵盖19个常规癌基因的238个突变位点 – V2：涵盖18个癌基因或癌抑制基因的152 个突变位点 – V3:：涵盖22个癌基因的105个突变位点
Nude
T淋巴细胞严重缺失
SCID
Severe Combined Immunodeficiency
T淋巴细胞和B淋巴细胞缺失
NOD-SCID
Non-obese Diabetic SCID
与普通SCID相比NK细胞活性低， 更低的免疫恢复几率
NSG
NOD-SCID-IL2Rγ-/-
缺失T淋巴细胞，B淋巴细胞和NK 细胞
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分析内容 – 常规
• 临床背景
– 患者年龄/性别； – 肿瘤类别，原位瘤/转移瘤； – 治疗史
• 移植瘤分析
– 生长曲线； – 药理学特性
• 针对特定药物处理的反应
• 组织学和分子生物学分析
– 原瘤 vs. 移植瘤
PPT课件
生物医学中的低温冷冻技术
生物医学中的低温冷冻技术低温冷冻技术作为一项较为成熟的生物医学技术，已经应用于众多领域，如生物学、医学、食品加工等。
低温冷冻技术的应用基于生物学和物理学的知识，通过将细胞或组织存储在极低的温度下，使其保持活性，从而实现细胞或组织的保存和利用。
低温冷冻技术的原理是基于细胞或组织的生理学特点。
细胞和组织都含有水分，当温度下降时，水会形成晶体，造成细胞和组织的损伤，因此需要将温度控制在适宜的范围内。
低温冷冻技术就是将细胞或组织暂停其生命活动，将其置于极低温度下保存，从而保持其完整性和功能性。
低温冷冻技术的应用非常广泛。
在医学方面，对于许多疾病的治疗仍然无法完全解决，因此低温冷冻技术成为保存治疗所需的细胞和组织的关键技术。
例如，在癌症和造血干细胞治疗中，移植自体造血干细胞医治一些疾病已成为常规治疗方式之一。
当患者的骨髓中存在恶性肿瘤细胞时，采用化疗或放疗会对骨髓造血功能造成严重破坏。
此时，需要通过干细胞移植来重建患者体内的造血系统。
而低温冷冻技术可以将自体造血干细胞冻存起来，用于后续的治疗。
此外，低温冷冻技术还可以应用于器官移植领域，如肝脏、心脏、肾脏等多个器官。
此外，低温冷冻技术还被应用于动物和植物保育和研究领域。
例如，在动物保育中，人类通过冷冻保存各种珍稀濒危动物的生殖细胞，以防止它们从地球上灭绝。
在植物保育中，低温冷冻技术也被广泛应用于种子、幼苗、花粉等细胞和组织的冷冻保存。
虽然低温冷冻技术的应用范围非常广泛，但要想将其应用于临床和保育领域，依然需要克服很多困难。
首先，对于不同的细胞和组织，需要进行不同的处理，如选择合适的保护剂、控制冷冻速率等。
其次，在冻存过程中，细胞和组织可能会遭受机械损伤或冻伤，所以在冻存过程中要进行严密的控制。
最后，冻存后的细胞或组织可能会受到环境或其它因素的威胁，如细菌感染、氧气不足等。
总之，低温冷冻技术是一项非常关键的生物医学技术，其应用将对生命科学和医药领域产生深远的影响。
组织库标本的处理与保存
病理科 60578721
2021/5/9
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组织库概念
组织库（Tissue Bank)是系统收集和储 存手术切除的人体各种正常和病理组织、 血样样品以及病理类型、临床分期、治疗 效果、预防等方面的信息平台。
2021/5/9
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组织库特点：
收ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ和保存外科手术切除或活检、尸检得到的正 常组织、肿瘤组织（良性、恶性）和患者血清。
提供患者与肿瘤治疗有关常规资料。 按照使用者的特殊要求进行标本采集和处理。 提供常用研究技术平台，包括常规和特殊组织的
免疫组化实验等。 收集、保存、提供包括原代和传代的肿瘤细胞株。
2021/5/9
4
组织库基础设施
耗材：离心管、吸管、冻存管 细胞分离设备：离心机 组织分离：手术刀片、剪刀、镊子 移液装置：微量移液器 液氮罐、冰箱、恒温干燥箱、生物安全柜等
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2021/5/9
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结束语
若有不当之处，请指正，谢谢！
2021/5/9
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标本收集
对于血清和血细胞样本的收集，术前由 医生填写标本入库登记表，留取患者血样 10 ml以上，分离血浆和血清。
手术中切下的肿瘤组织部分留做病理检 查标本，将剩余肿瘤组织、留取癌旁组织 和正常组织标本切成2 mm×5 mm，放入 冻存管中，转移至液氮罐冻存。
2021/5/9
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血清、血浆的提取
2021/5/9
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标本信息录入
包括入库编号、入库类别、病变部位、 组织部位、保存方式、预处理、收集人、 收集方式、入库时间、送样单位、送样医 生等。
2021/5/9
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标本使用管理
包括使用登记、出库编号、出库日期、 入库号、标本原始位置、使用单位、使用 人、经手人等。
实体肿瘤冷冻治疗医学PPT课件
案
mm 布
5m 19 m
目录
1 氩氦冷冻系统简介及治疗原理 2 氩氦冷冻系统影响因素 3 氩氦冷冻系统与手术、热消融对比 4 氩氦冷冻系统实际操作
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一、冷冻与手术的比较
Allen 等给实验组鼠肝包膜下植入肝肿瘤片，制造实验 性肝肿瘤。两周后，将实验动物分为两组：一组给予肿 瘤冷消融，一组给予30%肝切除。
二次循环
二次循环治疗进一步导致残存细胞死亡
微血管栓塞导致缺血、缺氧，肿瘤细胞死亡
血管破坏
肿瘤细胞死亡后调控机体免疫力
免疫作用
肿瘤组织 坏死
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目录
1 氩氦冷冻系统简介及治疗原理 2 氩氦冷冻系统影响因素 3 氩氦冷冻系统与手术、热消融对比 4 氩氦冷冻系统实际操作
13
冷冻有效的组织损伤取决于以下因素: 1)良好的冷冻过程（影像）监测系统; 2)快速冷冻、缓慢升温; 3)重复冻融循环（2~3次）; 4)消融针头的布针。
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五、创伤修复
当肿瘤细胞坏死之后，首先是在病灶的边缘发 生一种炎性反应；早期中性粒子、单核细胞浸 润,受到炎症介质的刺激，浸润细胞会帮助建立 新的血管循环,同时修复受损的组织，慢慢的进 行术后愈合。
McDonald JH, Taylor CB, Heckel NJ. J Urol 1950;64:326–337. [PubMed: 15429198] 27
2、良好的图像引导：图像边界清晰、2次冷冻—复 温循环、合理的布针是保证细胞死亡的关键。
3、相比手术、热消融有一定优势：出血少、止痛、大 血管附近操作安全、消融过程中影像清晰、不完全坏死 区小、创伤修复。
4、操作简单，适应症广，全身上下各种实体肿瘤。
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医学冻存
活活
什么是医学冻存
主要产品类别
●新鲜肿瘤组织●传代肿瘤组织
为什么需要活肿瘤组织
静态动态
“死”的肿瘤组织
“活”的肿瘤组织肿瘤精准医学发展的必要条件
如何保存活肿瘤组织
传代
新鲜PDX模型
主要难题：肿瘤组织冻存复苏后存活率低
LiveTissue TM 活肿瘤组织冻存、复苏试剂盒
创新产品
长期保存活性肿瘤组织，维持与新鲜肿瘤组
织几乎相同的形态特征和功能
独立包装：
大包装：LiveTissue活肿瘤组织试剂盒组成
使用效果
已试用肿瘤：胆管癌和肝癌，冻存复苏后与新鲜肿瘤组织保持几乎相同的组织形态学和成瘤能力。
活肿瘤组织保存技术比较 PDX模型<5000例/年
中国肿瘤患者1500万/年 肿瘤手术>1000万台次/年
PDX模型LiveTissue冻存常规冻存
构建方法免疫缺陷小鼠移植玻璃化液氮冻存直接-80ºC或液氮冻存
操作要求新鲜组织
需要立即接种
新鲜组织冻存
可随时复苏接种
新鲜组织冻存
无法复苏
原始突变多次传代后明显变异保持原始突变状态保持原始突变状态肿瘤异质性传代后基因表达改变基因表达不变基因表达不变组织形态学传代后改变保持原有组织形态组织形态破坏肿瘤增殖能力/与新鲜组织相同无
复苏组织活性/>80%无
其它应用/一体化实现DNA、RNA
和蛋白永久保存
替代冰冻、石蜡组织无法替代冰冻和石蜡组织
使用成本第0代6000元
接种1只小鼠
第0代<1000元
可用于5-10只小鼠接种
/
产品特点
应用领域
创新价值
样本库服务
提供活肿瘤组织个性化样本库一站式服务 联合开展项目合作
样本库应用
活肿瘤
样本库
合作个性化精准医疗医学研究论文
通用型细胞冻存液。