培养基的灭菌
培养基的灭菌方法
培养基的灭菌方法培养基的灭菌是微生物实验中非常重要的一步，它直接关系到后续实验结果的准确性和可靠性。
正确的灭菌方法能够有效地杀灭培养基中的细菌、真菌和其它微生物，保证培养基的纯净度。
下面将介绍几种常用的培养基灭菌方法。
一、高压蒸汽灭菌法。
高压蒸汽灭菌法是实验室中常用的一种灭菌方法。
它利用高压蒸汽的热量能够迅速杀灭细菌和真菌，保证培养基的纯净度。
在进行高压蒸汽灭菌时，首先要将培养基装入耐高温的容器中，然后将容器密封好，放入高压灭菌器中进行灭菌处理。
处理时间和温度需要根据不同的培养基种类和容器大小来确定，一般情况下需要在121摄氏度下压力为15磅的条件下进行20分钟的灭菌处理。
高压蒸汽灭菌法能够有效地杀灭培养基中的各种微生物，是一种非常可靠的灭菌方法。
二、紫外线灭菌法。
紫外线灭菌法是一种常见的表面灭菌方法，它适用于一些不耐高温的培养基或器皿。
在进行紫外线灭菌时，首先要将培养基或器皿放置在紫外线灯下，保持一定的距离，然后开启紫外线灯进行照射。
照射时间一般为15-30分钟，可以有效地杀灭表面的细菌和真菌。
但需要注意的是，紫外线灭菌只能杀灭表面的微生物，对于内部较深的微生物可能效果不佳，因此在使用紫外线灭菌法时，需要搭配其它灭菌方法来确保培养基的纯净度。
三、化学灭菌法。
化学灭菌法是利用化学药剂来进行培养基的灭菌处理。
常见的化学灭菌药剂有过氧化氢、乙醛等。
在进行化学灭菌时，首先要将培养基或器皿浸泡在化学药剂中一定时间，然后取出晾干即可。
化学灭菌法能够有效地杀灭各种微生物，并且操作简单，适用于一些不耐高温的培养基或器皿。
但需要注意的是，化学灭菌药剂可能对培养基产生一定的影响，因此在使用时需要根据实际情况选择合适的药剂和浸泡时间。
综上所述，培养基的灭菌是微生物实验中不可或缺的一环，选择合适的灭菌方法能够有效地保证培养基的纯净度，为后续实验结果的准确性提供保障。
在进行培养基灭菌时，需要根据培养基的种类和实验需求选择合适的灭菌方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保实验结果的可靠性。
一般培养基的灭菌条件
一般培养基的灭菌条件在生物学和微生物学实验中，培养基是非常重要的试剂，它提供了微生物生长所需的营养和环境。
培养基的制备是一个非常关键的过程，一旦受到污染就会对实验结果产生影响。
因此，在制备培养基前，必须对培养基进行灭菌处理，以杀死任何可能存在的微生物。
以下是关于灭菌条件的详细介绍和指导意义。
1.高温高压灭菌法高温高压灭菌法通常用于大容量的液体培养基或密封器皿，可以有效地杀灭大部分微生物，并且不会损坏培养基的成分。
这种方法需要使用高压灭菌器，将培养基加入到无菌的容器中，紧密密封并置于灭菌器中。
然后将温度升高到121°C，保持压力大约为15 psi，持续压力下维持 20 - 30 分钟，以确保培养基中微生物的完全灭活。
2.化学灭菌法化学灭菌法的原理是通过添加强效的消毒剂来杀死微生物。
消毒剂可以破坏微生物的细胞壁或膜，使其不能生长和繁殖。
最常用的消毒剂是氯己定、过氧乙酸等。
但是，这种方法可能导致一些残留物对微生物的生长产生影响，所以在使用化学消毒剂时需要注意浓度的控制和多次冲刷。
3.滤过灭菌法滤过灭菌法是利用过滤器将培养基中的微生物进行过滤，以达到灭菌的目的。
过滤器的孔径通常为0.22微米，可以有效地过滤掉绝大部分的微生物。
这种方法对于无菌条件较严格的实验，如病毒培养等非常有用。
但是需要注意的是，需要使用无菌装置将培养基进行滤过，在保证过滤器无菌的情况下进行操作。
在灭菌过程中，需要注意不同材料的适合灭菌方式。
对于易挥发的溶液，可以使用过滤灭菌法或化学法；对于含有糖酵母等易抗菌的成分的物资，可以使用过滤灭菌法或高温高压气炉灭菌；对于固体培养基，可以使用高温高压气炉灭菌或化学灭菌法。
灭菌后应密封保存，在无菌条件下储存。
在制备培养基时一定要注意消毒工作，确保培养基的质量与纯度。
综上所述，不同的培养基灭菌方法适用的条件不同，人们可以选择不同的灭菌方式来确保培养基的质量。
在灭菌过程中一定要注意保证无菌操作，避免污染并保存存储条件，以便取样和使用。
对培养基常用的灭菌方法
对培养基常用的灭菌方法
培养基是实验室中常用的用于培养微生物的营养物质。
为了避免在培养基中引入外源性微生物，需要对培养基进行灭菌处理。
常见的培养基灭菌方法包括物理灭菌和化学灭菌两种。
物理灭菌方法是通过加热来杀灭微生物。
常见的物理灭菌方法有高温热灭法和滤膜灭菌法。
高温热灭法是将培养基装入试管或烧杯中，加盖金属夹，用高压锅或高压灭菌器进行高温高压灭菌。
滤膜灭菌法则是将培养基通过无菌滤膜过滤，滤膜具有微孔大小，能够过滤掉微生物，从而达到灭菌的目的。
化学灭菌方法是利用化学物质杀灭微生物。
最常用的化学灭菌剂是乙醇和过氧化氢。
乙醇的浓度一般为70%以上才能有效杀灭大多数微生物。
过氧化氢对大多数微生物有较强的杀菌作用，但对芽孢和病毒的杀菌效果较差。
此外，还有一些其他的化学灭菌方法，如氯化物、酚类、醛类等，但由于其对培养基的腐蚀性较大，所以使用较为有限。
除了常见的物理和化学灭菌方法，还有一些新兴的灭菌方法，如微波灭菌、紫外线灭菌等。
微波灭菌是利用微波的热效应，将培养基加热到高温，从而实现灭菌的目的。
紫外线灭菌则是利用紫外线的辐射杀灭微生物。
对于选择灭菌方法，需要根据具体的实验要求和培养基的特性来进行选择。
不同的灭菌方法具有不同的优缺点，需要根据实际情况进行权衡。
同时，无论选择哪
种灭菌方法，都需要严格按照操作规程进行操作，保证灭菌效果的同时，不影响培养基的质量和功能。
培养基的灭菌及保存方法
培养基的灭菌及保存方法灭菌方法1、高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。
培养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌工作。
灭菌时一般是在0.105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。
消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。
将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。
灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是彻底的，可以使用。
暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。
含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基最多也不要超过1个月。
2、过滤灭菌：一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。
细菌过滤器与滤膜（孔径0.45微米）使用之前要先进行高压灭菌。
过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。
保存方法已经灭菌完毕的培养基从高压灭菌锅中取出后，立即放在平整的台面上，若大批量生产可用果箱装好并标记好其用选后，送到接种室，让其自然冷却凝固。
灭好的培养基最好经过3d的预培养，以便观察培养基是否彻底灭菌，这样能够使某些因为没有彻底灭菌的培养基，在接种前被检出，可避免杂菌污染而造成不必要的损失，这点对少而重要的材料尤其值得注意。
但是在同等条件下经多次使用无污染后，就没必要再摆3d后才使用，而是冷却凝固后就可使用了。
(1)防尘已经灭好菌的培养基要注意防尘。
如果培养基在卫生条件差的地方贮存，依附在尘埃中的细菌、真菌等会落在培养瓶表面，使用前若不进行表面灭菌处理，在接种时就容易随着气流进入容器，使其受到污染，影响组织培养工作的顺利进行，因此培养基必须放在干净、卫生的接种室内。
培养基用什么方法灭菌
培养基用什么方法灭菌
培养基在微生物实验中起着至关重要的作用，而培养基的灭菌则是确保实验结
果准确性的关键步骤。
那么，培养基用什么方法灭菌呢？接下来，我们将详细介绍几种常用的培养基灭菌方法，以及它们各自的优缺点。
首先，常见的培养基灭菌方法之一是高压蒸汽灭菌。
这是一种常用的灭菌方法，其原理是利用高温高压的蒸汽对培养基进行灭菌。
这种方法的优点是能够灭杀各类微生物，包括芽孢菌和病毒等，灭菌效果好，且操作相对简单。
然而，高压蒸汽灭菌设备价格昂贵，对实验室条件要求较高。
其次，干热灭菌是另一种常用的培养基灭菌方法。
这种方法的原理是利用高温
对培养基进行灭菌，其优点是不会使培养基受潮，灭菌效果好且操作简便。
然而，干热灭菌需要较长时间来达到灭菌效果，且对部分热敏感物质有破坏作用。
另外，化学灭菌也是一种常见的培养基灭菌方法。
这种方法的原理是利用化学
药剂对培养基进行灭菌，其优点是操作简便，不需要高压设备，且能够有效灭杀各类微生物。
然而，化学灭菌对某些化学药剂敏感的微生物可能产生抗药性，且残留的化学药剂可能对实验结果产生影响。
最后，紫外线灭菌是一种常用的表面灭菌方法。
这种方法的原理是利用紫外线
对培养基表面进行灭菌，其优点是操作简便，不会产生化学污染，且灭杀效果明显。
然而，紫外线灭菌只能对表面进行灭菌，对深层微生物的灭杀效果较差。
综上所述，不同的培养基灭菌方法各有优缺点，实验室在选择灭菌方法时需要
根据实际情况进行综合考虑。
在进行培养基灭菌时，要严格按照操作规程进行，确保实验结果的准确性和可靠性。
希望本文对您有所帮助，谢谢阅读！。
培养基常用的灭菌方法
培养基常用的灭菌方法培养基是适于细菌生长繁殖需要的各种营养物质人工配制而成的基质。
按营养成分和用途不同，分为基础、合成、营养、鉴别、选择和厌氧培养基。
按物理形态分为固体、半固体和液体三类。
根据细菌的种类和培养目的不同，可采用不同的培养基。
1、灭菌方法培养基的灭菌方法主要有两种，湿热灭菌及0.22μm微孔滤膜过滤除菌。
与过滤相比，高压蒸汽灭菌的工作强度小，成本较低但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。
大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤除菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。
1.1 湿热灭菌蒸汽在冷凝时释放出大量潜能，并且蒸汽具有强大穿透力，蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键使酶失活，微生物因代谢障碍而死亡。
湿热灭菌的效果取决于致死温度和致死时间。
致死温度是杀灭微生物的极限温度。
致死时间是在致死温度下杀灭全部微生物所需时间。
高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。
灭菌时一般是在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。
为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。
1.2 过滤灭菌可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为聚醚砜（PES）膜、聚偏二氟乙烯（PVDF）膜、聚四氟乙烯（PTFE）膜、醋酸纤维素、硝酸纤维素等等。
一般采用正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有高流速、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。
目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜、一体式过滤器（囊式过滤器）或筒式滤芯除菌。
微孔滤膜需配套不锈钢夹具，中间可夹放0.22um滤膜。
使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。
筒式滤芯亦需配套不锈钢滤壳。
如果是少量过滤(<200ml)可选配针头过滤器。
培养基的灭菌
比较各种微生
物对热的抵抗 能力大小
营养细胞、芽孢、病毒或孢子
6、火焰灭菌法 二、培养基的灭菌
湿热灭菌原理
灭菌条件 灭菌不利方面
火焰 适用范围：接种针、玻璃棒、三角瓶口
酒精灯
由于蒸汽具有很强的穿透能力，而且在冷凝时 会放出大量的冷凝热，很容易使蛋白质凝固而 杀死各种微生物。
121℃， 30min。
同时也会破坏培养基中的营养成分，甚至会产 生不利于菌体生长的物质。因此，在工业培养过程
t 1 ln N 0 2.303 lg N 0 K Nt K Nt
从上述的微生物对数死亡规律和非对数死亡动力学模型方程式可知， 如果要达到彻底灭菌，即灭菌结束时残留的活微生物数等于0，则所 需的时间应为无限长，这在实际中是不可能的。灭菌
10
15
20
25
三、微生物的热死规律和影响灭菌的因素
说说优缺点？
受热时间如何确定？
1、 微生物的死亡速率：对数残留定律
微生物受热死亡的原因，主要是因高温使微生物体内的一些重要蛋白质，如酶等， 发生凝固、变性，从而导致微生物无法生存而死亡。微生物受热而丧失活力，但其物理 性质不变。
在一定温度下，微生物的受热死亡遵照分子反应速度理论。在灭菌过程中，活菌数 逐渐减少，其减少量随残留活菌数的减少而递减，即微生物的死亡速率与任一瞬时残存 的活菌数成正比，
• 3、杂菌会大量繁殖，会改变反应介质的PH值，从而使生 物反应发生异常变化；
• 4、杂菌可能会分解产物，从而使生产过程失败； • 5、发生噬菌体污染，微生物细胞被裂解，而使生产失败，
等等
问题2
1、为防止杂菌的污染，哪些需要灭菌？
培养基、发酵设备、空气、菌种制作
第一章 培养基的灭菌设备课件
6 5
ln
N0 N
= 36.8
第一节 培养基灭菌及灭菌设备
（三）分批灭菌的过程分析
升温
T
N1 保温 N2
降温
N0 0 t1 t2
N t3 t(min)
图2-5 分批灭菌过程典型的升温、保温和冷却曲线
第一节 培养基灭菌及灭菌设备
第一节 培养基灭菌及灭菌设备
一、微生物的热死灭动力学
T对比死亡速率常数 K的影响 (二)灭菌温度 灭菌温度T 对比死亡速率常数K K的影响遵循阿仑尼乌斯定律 1、温度对 、温度对K
∆E − RT
K = A⋅e
(2－4)
A：阿仑尼乌斯常数（min-1）
∆E：活化能（J/mol)
·K) R：气体常数（8.28J/mol 8.28J/mol· T：绝对温度（K）
第一节 培养基灭菌及灭菌设备
一、微生物的热死灭动力学
K的影响： 活化能∆E对比死亡速率常数 对比死亡速率常数K
K = A⋅e
∆E − RT
① 活化能∆E的大小对K的影响较大，其他条 件相同时， 活化能越高，K越小，微生物越 不容易死亡。 ② 不同微生物芽孢的热死灭活化能可能各不 相同，在相同的温度下灭菌，不能确定活化 能低的芽孢的热死灭速率一定比活化能高的 芽孢快。因为 K并不唯一决定于∆E。
N ln N0
第一节 培养基灭菌及灭菌设备
一、微生物的热死灭动力学
关于比死亡速率常数K的几个说明：
3. 不同的微生物，其K各不相同：
121℃，枯草杆菌 FS5230 ，枯草杆菌FS5230 K=0.047 ～0.063 K=0.047～ K=0.03 K=0.013 K=0.0485
培养基灭菌方法
培养基灭菌方法培养基是微生物学实验中常用的一种培养微生物的基质，它的质量直接影响到实验结果的准确性。
而培养基的灭菌工作则是非常重要的一环，只有做好了培养基的灭菌，才能有效地避免外源微生物的污染，确保实验结果的可靠性。
下面将介绍几种常用的培养基灭菌方法。
1. 高压蒸汽灭菌法。
高压蒸汽灭菌法是常见的一种培养基灭菌方法，它利用高温高压的蒸汽对培养基进行灭菌。
操作时，首先将需要灭菌的培养基装入耐高温高压的容器中，然后将容器放入高压蒸汽灭菌器中，设定好时间和温度，进行灭菌处理。
这种方法能够有效地杀灭培养基中的微生物，但是需要专门的设备，且操作相对复杂。
2. 过滤灭菌法。
过滤灭菌法是一种简便易行的培养基灭菌方法，它利用微孔过滤膜对培养基进行灭菌。
操作时，将需要灭菌的培养基通过微孔过滤膜过滤，微生物会被截留在过滤膜上，从而达到灭菌的目的。
这种方法操作简单，不需要特殊设备，但是需要注意过滤膜的选择和更换。
3. 化学灭菌法。
化学灭菌法是利用化学物质对培养基进行灭菌的方法。
常用的化学灭菌剂有乙醛、过氧化氢等。
操作时，将适量的化学灭菌剂加入培养基中，充分混合后放置一段时间，使化学灭菌剂充分发挥作用，达到灭菌的效果。
这种方法操作简单，但需要注意化学灭菌剂的浓度和处理时间，以免对实验产生影响。
4. 紫外线灭菌法。
紫外线灭菌法是利用紫外线对培养基进行灭菌的方法。
操作时，将需要灭菌的培养基暴露在紫外线下一定时间，紫外线能够破坏微生物的核酸，达到灭菌的效果。
这种方法操作简单，但需要注意紫外线的强度和照射时间，以确保灭菌效果。
总结。
在进行微生物学实验时，培养基的灭菌工作至关重要。
选择合适的培养基灭菌方法，严格按照操作规程进行灭菌处理，可以有效地避免培养基受到外源微生物的污染，保证实验结果的准确性。
不同的灭菌方法各有优缺点，实验者应根据实际情况选择合适的灭菌方法，并严格遵守操作规程，确保培养基的灭菌效果。
培养基的灭菌经典实用
培养基成份：油脂、蛋白质增加微生物的耐热 性。 传热与混合状况：影响受热均匀度。 培养基中固体颗粒的存在影响热穿透。 蒸汽中空气的存在降低蒸汽分压和灭菌温度。 pH：酸性pH下可加快微生物热死速率 。
•培养基的灭菌
2 .反应速率常数K
如何通过实验根据对数残存定律确定某一温度,
某一微生物的K ？ 1). K 与菌种的特性有关
相同温度下，微生物越耐热， k值越小。 相同温度下，微生物越不耐热，k值越大。
•培养基的灭菌2). K源自与灭菌温度有关K=A e –△E / RT
（阿累尼乌斯方程）
嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的热死曲线
•培养基的灭菌
第一节 灭菌的原理及方法
一. 几种常见的灭菌方法 1. 化学试剂灭菌法
原理：药物与微生物细胞中的成分反应，使 蛋白质变性、酶失活。
常用的灭菌剂:
使用范围： 器皿、双手和实验室、无菌室的环境灭菌， 不能用于培养基灭菌。
•培养基的灭菌
常用的灭菌剂
化学物质名称 有效浓度
新洁尔灭 (苯扎溴铵) 杜灭芬 高锰酸钾 漂白粉
1．定义：将培养基通过专门设计的灭菌器，进行连 续流动灭菌后，进入预先灭过菌的发酵罐中的灭菌 方式。
2．流程：
1)由热交换器组成的灭菌系统 2)蒸汽直接喷射型的连续灭菌系统 3)由连消塔、维持罐和喷淋冷却组成的灭菌系统
•培养基的灭菌
1)由热交换器组成的灭菌系统工艺流程图
•培养基的灭菌
温度随时间的变化
•培养基的灭菌
•培养基的灭菌
温度随灭菌时间的变化
•培养基的灭菌
分批灭菌设备示意图
培养基消毒灭菌的方法
培养基消毒灭菌的方法
培养基消毒灭菌的方法有以下几种：
1. 高压蒸汽灭菌：将培养基装入培养器中，使用高压蒸汽进行灭菌，常见的设备是高压蒸汽灭菌器或压力灭菌锅。
该方法可以有效地杀灭细菌，真菌和病毒，且操作简单方便。
2. 干热灭菌：将培养基放入烘箱中，在高温下进行干热灭菌，常见的设备是干热灭菌器或烘箱。
该方法适用于一些耐热的培养基，能够杀灭大多数微生物。
3. 紫外线辐射灭菌：将培养基暴露于紫外线辐射下，使用紫外线灭菌器进行灭菌。
该方法适用于对热敏感的培养基，但不能灭活孢子。
4. 化学消毒方法：将培养基暴露于适当浓度的消毒剂中，常见的消毒剂包括酒精、漂白粉、过氧化氢等。
不同消毒剂的使用方法和消毒效果略有不同，需要根据具体情况选择合适的消毒剂。
无论使用哪种方法进行消毒灭菌，都需要注意操作的严密性，保证培养基在消毒过程中不受污染。
此外，消毒灭菌后的培养基应密封保存，尽量减少二次污染的可能性。
培养基灭菌的常用方法
培养基灭菌的常用方法培养基灭菌是在微生物实验室中进行微生物研究和培养时必不可少的步骤之一、灭菌的目的是杀死或去除培养基中的所有微生物，以确保实验得出的结果是由引入的特定微生物引起的，而不是其他微生物的污染。
下面将介绍一些常用的培养基灭菌方法。
1.热灭菌方法（高温灭菌）：热灭菌是一种简单而广泛使用的培养基灭菌方法。
高温能有效地杀死或去除培养基中的大部分微生物。
常见的热灭菌方法包括：-干热灭菌：将培养基放入烤箱或高温灭菌器中，在170°C至180°C下加热2至3小时。
这种方法适用于含有熔点较高的成分的培养基，如糖肉汤。
-湿热灭菌（压力灭菌）：常用的方法是使用高压蒸汽灭菌器（也称为压力釜）进行培养基的灭菌。
在121°C至134°C的高温下，通过给培养基施加高压蒸汽，可以在短时间内杀死或去除培养基中的微生物。
这种方法适用于绝大多数常见的培养基。
2.过滤灭菌方法：过滤灭菌是一种无需高温的灭菌方法，适用于含有热敏感成分的培养基。
过滤灭菌方法通常使用微孔过滤器将培养基通过过滤膜来除去微生物。
常见的过滤灭菌方法包括：-常压过滤：将培养基通过微孔滤膜过滤，常用的滤器孔径为0.22微米或0.45微米，以保留大部分微生物。
这种方法适用于灭菌前培养基体积较小的情况。
-打压力过滤灭菌：通过使用活性碳或膜微孔过滤器，将压力加到过滤器上，可以加速微生物的过滤速度。
这种方法适用于较大体积的培养基。
3.化学灭菌方法：化学灭菌是使用化学物质来杀灭或去除培养基中的微生物的方法。
常见的化学灭菌方法包括：-醋酸灭菌：将培养基浸入醋酸中浸泡3至4小时，然后用蒸馏水冲洗，可以有效地杀死或去除绝大多数微生物。
这种方法适用于含有热敏感成分的培养基。
-过氧化氢灭菌：将过氧化氢加入培养基中，使其达到高浓度，然后静置一段时间，再用蒸馏水冲洗。
过氧化氢可以氧化微生物细胞的组分，以达到杀菌的效果。
这种方法适用于较小体积的培养基。
培养基灭菌的常用方法
培养基灭菌的常用方法以培养基灭菌的常用方法为标题，来探讨一下在微生物实验室中常用的培养基灭菌方法。
在微生物实验室中，培养基的灭菌是非常关键的步骤，因为只有保证培养基的无菌性，才能确保实验结果的准确性和可靠性。
下面将介绍几种常用的培养基灭菌方法。
1. 高温热灭菌法高温热灭菌法是一种常见且简单的培养基灭菌方法。
它的原理是通过加热使培养基中的微生物死亡。
常见的高温热灭菌方法是使用高压高温的压力锅或者自动灭菌器，将培养基加热到121摄氏度以上，保持一定时间（通常为15-20分钟），以确保所有微生物被彻底杀死。
2. 过滤灭菌法过滤灭菌法是一种常用的无菌技术，它通过使用0.22微米的过滤器来过滤掉培养基中的微生物。
这种方法适用于一些热敏感的培养基，因为过滤不需要高温处理。
过滤灭菌法的优点是简单、快速，并且可以保留培养基中的一些热敏感的营养成分。
3. 化学灭菌法化学灭菌法是使用化学物质来杀灭培养基中的微生物。
常见的化学灭菌剂有酒精、酚类化合物、氯化物等。
使用化学灭菌法时，需要将培养基浸泡在含有灭菌剂的溶液中一定时间，以确保微生物被灭活。
然后，通过洗涤等方法将残留的灭菌剂去除，以避免对微生物的影响。
4. 紫外线灭菌法紫外线灭菌法是一种常用的表面灭菌方法，它使用紫外线照射来杀灭培养基表面的微生物。
这种方法适用于一些无法通过高温或过滤灭菌的培养基。
在使用紫外线灭菌法时，需要将培养基暴露在紫外线下一定时间，以确保微生物被灭活。
但需要注意的是，紫外线灭菌只对表面的微生物有效，对于培养基内部的微生物无法灭活。
总结起来，培养基灭菌是微生物实验中至关重要的步骤。
高温热灭菌法、过滤灭菌法、化学灭菌法和紫外线灭菌法是常用的培养基灭菌方法。
在选择灭菌方法时，需要根据实验的需要和培养基的特性来进行选择。
同时，在进行培养基灭菌时，需要严格遵守操作规范，确保灭菌效果的可靠性。
这样才能保证实验结果的准确性，并确保实验的顺利进行。
对培养基灭菌的常用方法
对培养基灭菌的常用方法常用的培养基灭菌方法有以下几种：1. 高温灭菌法：将培养基装入培养器中，加热至高温，一般为121摄氏度，保持一定时间，通常为15-20分钟。
高温能够有效灭活细菌、病毒和真菌等微生物，确保培养基的无菌状态。
2. 过滤灭菌法：将培养基通过特制的膜过滤器进行过滤，膜孔径一般为0.22微米或0.45微米。
膜过滤器能够有效阻隔微生物的传播，使培养基中的微生物被滤除，从而实现无菌的目的。
需要注意的是，过滤灭菌法适用于不含热敏性成分的培养基。
3. 化学灭菌法：通过添加化学消毒剂来灭活培养基中的微生物。
常用的消毒剂有酒精、酚类、过氧化氢等。
化学灭菌法适用于无法进行高温灭菌或过滤灭菌的情况下，能够有效地杀灭细菌、病毒和真菌。
4. 辐射灭菌法：利用辐射能对培养基进行灭菌。
常用的辐射灭菌方法有紫外线照射和γ射线照射。
紫外线照射能够破坏微生物的DNA 结构，从而使其失去活性。
γ射线具有较高的穿透力，能够深入杀灭微生物。
辐射灭菌法适用于对热敏性物质进行灭菌。
在进行培养基灭菌时，需要注意以下几点：1. 根据不同的培养基成分和用途选择合适的灭菌方法。
不同的培养基可能对温度、辐射或化学消毒剂有不同的耐受性，因此需要根据实际情况选择合适的灭菌方法。
2. 灭菌前要将培养基装入适当的容器中。
常见的容器有试管、烧杯、培养皿等。
容器必须具备耐高温、耐辐射或耐化学消毒剂的特性，以确保灭菌的有效性。
3. 确保灭菌设备的正常工作状态。
高温灭菌法需要使用高压高温的压力锅或高压灭菌器，因此需要检查设备的压力表、温度计等是否正常工作，以确保灭菌的可靠性。
4. 灭菌后要及时密封容器。
灭菌后的培养基容器应立即密封，以防止外界微生物的污染。
密封后的培养基应存放在干燥、阴凉的地方，以延长其保存期限。
培养基的灭菌是微生物实验中的重要步骤，通过合适的灭菌方法可以确保培养基的无菌状态，为后续的微生物培养和研究提供可靠的基础。
在进行培养基灭菌时，需要选择合适的灭菌方法，并注意操作的细节，以确保灭菌的有效性和培养基的质量。
培养基灭菌方法
培养基灭菌方法培养基是微生物学实验中常用的一种培养微生物的营养物质，而培养基的灭菌则是非常重要的一步，它可以有效地杀死培养基中的细菌、真菌和其他微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
在进行微生物学实验时，正确的培养基灭菌方法是非常重要的，下面将介绍几种常用的培养基灭菌方法。
一、高压蒸汽灭菌法。
高压蒸汽灭菌法是一种常用的培养基灭菌方法，它利用高温高压的蒸汽来杀死培养基中的微生物。
首先将培养基装入耐高温高压的容器中，然后将容器密封好，放入高压灭菌锅中进行高压蒸汽灭菌。
在灭菌过程中，要保证蒸汽的温度和压力达到一定的标准，以确保培养基中的微生物可以被有效地杀灭。
二、紫外线灭菌法。
紫外线灭菌法是利用紫外线的辐射来杀死培养基中的微生物。
在进行紫外线灭菌时，首先将培养基倒入培养皿中，然后将培养皿放置在紫外线灭菌箱中，开启紫外线灯进行灭菌。
需要注意的是，紫外线灭菌的效果受到光照强度和照射时间的影响，因此在进行紫外线灭菌时，要控制好照射的时间和强度，以确保培养基中的微生物可以被有效地杀灭。
三、化学消毒灭菌法。
化学消毒灭菌法是利用化学消毒剂来杀死培养基中的微生物。
常用的化学消毒剂包括乙醇、过氧化氢、漂白粉等。
在进行化学消毒灭菌时，首先将培养基浸泡在化学消毒剂中一定的时间，然后将培养基取出并进行充分的清洗，以去除化学消毒剂的残留。
需要注意的是，化学消毒剂的种类和浓度会影响到灭菌的效果，因此在进行化学消毒灭菌时，要选择合适的化学消毒剂和浓度，并控制好消毒的时间，以确保培养基中的微生物可以被有效地杀灭。
四、过滤灭菌法。
过滤灭菌法是利用微孔滤膜来过滤掉培养基中的微生物。
在进行过滤灭菌时，首先将培养基通过微孔滤膜进行过滤，然后将滤膜上的微生物用适当的消毒剂进行灭菌。
需要注意的是，选择合适的微孔滤膜和消毒剂对于过滤灭菌的效果至关重要，因此在进行过滤灭菌时，要选择合适的微孔滤膜和消毒剂，并控制好过滤的条件，以确保培养基中的微生物可以被有效地杀灭。
培养基灭菌的方法
培养基灭菌的方法
培养基灭菌的方法包括以下几种：
1. 自然灭菌：将培养基装入培养瓶中，在121摄氏度高压蒸汽下进行自然灭菌，通常需要15-20分钟。
这种方法适用于能够耐受高温高压的培养基。
2. 干热灭菌：将培养基装入干热灭菌器中，在160摄氏度下进行干热灭菌，通常需要2-4小时。
这种方法适用于不耐受高温高压的培养基，如含有蛋白质成分的培养基。
3. 滤过灭菌：将培养基装入无菌滤膜器中，通过滤膜将其中的细菌和孢子滤除，得到无菌培养基。
这种方法适用于不能耐受高温高压的培养基，如含有抗生素成分的培养基。
4. 化学灭菌：在培养基中加入化学灭菌剂，如乙醚、酒精或过氧化氢等，在一定时间内进行灭菌。
这种方法适用于一些特殊情况下，如无法使用高温高压或滤过灭菌的情况。
需要注意的是，不同类型的培养基可能需要不同的灭菌方法，请根据具体的培养基成分和要求选择适当的灭菌方法。
同时，在进行培养基灭菌时，必须保证操作的环境和工具都是严格无菌的，以防止再次污染。
对培养基灭菌的方法
对培养基灭菌的方法一、物理灭菌法（一）加热灭菌法：加热可破坏微生物中酶、蛋白质和核酸，导致微生物死亡。
加热灭菌又分干热灭菌法和湿热灭菌法。
在同一温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好。
主要是因湿热灭菌时，有水分存在，蛋白质容易变性。
水分又易使微生物膜壁润湿，湿热的穿透力比干热大。
干热灭菌法常用的有火焰灭菌法与干热空气灭菌法两种。
（二）紫外线灭菌法：是指用紫外线照射杀灭微生物的方法。
一般用于灭菌的紫外线波长是200～300nm，灭菌力最强的波长是253.7ｎｍ。
紫外线作用于核酸蛋白促使其变性，同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧，从而起共同杀菌作用。
紫外线进行直线传播，可被不同的表面反射，穿透力微弱，但较易穿透清洁空气及纯净的水。
因此本法适用于照射物体表面之灭菌、无菌室的空气及水的灭菌；不适用于药液的灭菌、固体物质深部的灭菌；普通玻璃可吸收紫外线，因此装于玻璃容器中的药物不能用此法灭菌。
紫外线对人体照射过久，会发生结膜炎，红斑及皮肤烧灼等现象，故一般在人入室前开启紫外线灯1～2小时，关闭后人才进入洁净室。
如果必须在人进去后仍要开紫外线灭菌，则人的皮肤及眼睛应有有效的防护措施。
一般在6～15m3的空间可装置30瓦紫外线灯一盏，离地面2.5～3m 为宜。
用紫外线照射灭菌时要注意下列问题：紫外线的杀菌力，随使用时间增加而减退，一般使用时间达到额定时间70%时应更换紫外线灯管，以保证杀菌效果。
国产紫外线灯平均寿命一般为2000h。
紫外线的杀菌作用随菌种不同而不同，杀霉菌的照射量要比杀杆菌大40～50倍。
紫外线照射通常按相对湿度为60%的基础设计，室内湿度增加时，照射量应相应增加。
紫外线灭菌效果与照射的时间长短有关，这需要通过验证来确定照射时间。
紫外照射灯的安装形式及高度，应根据实际情况，参考使用说明决定。
灭菌方法的验证采用生物指示剂挑战试验，生物指示剂多用枯草芽孢杆菌。
（三）微波灭菌法：微波是指频率在30～3000MHz之间的电磁波。
第6章培养基的灭菌
主要灭菌方法
湿热灭菌相关定义 • 杀死微生物的极限温度称为致死温度。在致死温度
下，杀死全部微生物所需的时间称为致死时间；在 致死温度以上，温度愈高，致死时间愈短。 • 微生物的热阻：是指微生物在某一特定条件（主 要是温度和加热方式）下的致死时间。相对热阻是 指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物 在相同条件下的致死时间的比值。
组分的破坏，是由两个基本类型的反应引起的： 培养基中不同营养成分间的相互作用； 对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。
主要灭菌方法
灭菌的方法 • 化学法
– 化学药品灭菌法 • 物理法
– 干热灭菌法 – 热灭菌法 – 射线灭菌法
主要灭菌方法
主要灭菌方法
• 干热灭菌法：将金属制品或清洁玻璃器皿放入电热烘箱内， 在150～170℃下维持1～2 h后，即可达到彻底灭菌的目 的。
第一节 培养基灭菌的目的、要求 和方法
第二节 湿热灭菌的理论基础 第三节 培养基灭菌的工程设计
培养基灭菌的要求和方法
1，培养基灭菌的定义 是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其
孢子，或从中将其除去。工业规模的液体培养基灭菌， 杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。
2，灭菌与消毒的区别 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微
湿热灭菌的理论基础
湿热灭菌的优点 • 蒸汽来源容易，操作费用低，本身无毒； • 蒸汽有强的穿透力，灭菌易于彻底； • 蒸汽有很大的潜热； • 操作方便，易管理。
第二节 湿热灭菌的理论基础
培养基湿热灭菌需解决的工程问题 • 将培养基中的杂菌总数N0杀灭到可以接受的总数N
（10-3），需要多高的温度、多长的时间为合理。 • 灭菌温度和时间的确定取决于：
培养基用什么方法灭菌
培养基用什么方法灭菌在微生物实验室中，培养基的制备是实验的第一步，而灭菌则是保证培养基无菌的重要步骤。
那么，我们应该选择什么方法来灭菌呢？首先，我们需要了解一下常见的灭菌方法有哪些。
常见的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌、干热灭菌、紫外线灭菌和化学灭菌等。
这些方法各有特点，适用于不同的情况。
接下来，我们将分别介绍这些方法的原理和适用范围。
高压蒸汽灭菌是一种常见的灭菌方法，它利用高压蒸汽对培养基进行灭菌。
高压蒸汽能够穿透培养基中的各种障碍物，对其中的微生物进行有效的杀灭。
这种方法适用于大部分固体培养基的灭菌，但需要专门的高压灭菌器材，操作相对较为复杂。
干热灭菌是利用高温对培养基进行灭菌的方法。
与高压蒸汽灭菌相比，干热灭菌的操作相对简单，无需特殊设备，只需将培养基置于高温箱中进行灭菌即可。
但是，需要注意的是，干热灭菌需要较长的时间才能达到灭菌的效果，而且对一些热敏感的成分可能会产生影响。
紫外线灭菌是一种利用紫外线对培养基进行灭菌的方法。
这种方法操作简单，无需特殊设备，只需将培养基暴露在紫外线下一定时间即可。
但是，紫外线灭菌的效果受到环境因素的影响较大，比如湿度、温度等因素都会影响紫外线的杀菌效果。
化学灭菌是利用化学药剂对培养基进行灭菌的方法。
这种方法操作简单，适用范围广，但需要注意的是，化学药剂对培养基中的成分可能会产生影响，需要根据具体的情况选择合适的化学药剂。
综上所述，针对不同的情况，我们可以选择不同的灭菌方法。
在实际操作中，需要根据培养基的成分、使用场景等因素综合考虑，选择合适的灭菌方法。
希望本文的介绍能够帮助大家更好地选择合适的灭菌方法，保证培养基的无菌状态，为实验的顺利进行提供保障。
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焦碳酸二乙酯 0.01%-0.1%
煤酚皂（来苏 1%-5% 尔）
2. 辐射灭菌
原理：利用高能量的电磁辐射与菌体核酸 的光化学反应造成菌体死亡。 常用：紫外线、X射线和γ射线。 使用范围：用于室内空气及器皿表面灭菌。
3．干热灭菌法
原理：利用高温对微生物有氧化、蛋白质变 性和电解质浓缩作用而杀灭微生物。 常用方法：灼烧和电热箱加热，140-180℃ 1-2小时。 使用范围：玻璃及金属用具及沙土管灭菌
二. 培养基灭菌温度的选择
选择即能达到灭菌要求， 又保证营养成分不被破坏的温度。
三 ．影响灭菌效果的因素
微生物种类：不同的微生物k值不同。 初始菌量：在保持N值不变的前提下，t 与初 始菌量N0的对数成正比。 培养基成份：油脂、蛋白质增加微生物的耐热 性。 传热与混合状况：影响受热均匀度。 培养基中固体颗粒的存在影响热穿透。 蒸汽中空气的存在降低蒸汽分压和灭菌温度。 pH：酸性pH下可加快微生物热死速率 。
四、高温对培养基成分的有害影响及其防止
消除高温有害影响的措施
(1）采用特殊加热灭菌法(连续灭菌方法） （2）对易破坏的含糖培养基进行灭菌时，应先 将糖液与其他成分分别灭菌后再合并； （3）对含Ca2+或Fe3+的培养基与磷酸盐先作 分别灭菌，然后再混合，就不易形成磷酸盐沉 淀； (4）对含有在高温下易破坏成分的培养基（如 含糖组合培养基）可进行低压灭菌。
6．火焰灭菌法
原理：利用火焰直接杀死微生物。
使用范围：接种针、玻璃棒、三角瓶口
二. 湿热灭菌原理
1.微生物热死动力学（对数残存定律） - dN / dt =K N N：菌体个数（个） t : 灭菌时间（S） k：反应速度常数（S-1） dN / dt: 菌体受热死亡速率
Ln N/ N0 = - K t
培养基的灭菌
灭菌的原理及方法 培养基和发酵设备的灭菌工艺
灭菌：指用化学或物理的方法杀灭或去 除物料及设备中所有生命物质的技术或工 艺过程。 消毒：消除病原微生物的措施。 在工业中一般都笼统地称为杀菌或灭菌。
如有杂菌，可引起以下的后果： ①生产菌和杂菌同时在培养基中生长，结果丧失了生产 能力。 ②杂菌的生长速度有时比生产菌生长得快，结果使反应 器中以杂菌为主。 ③杂菌会污染最终产品。 ④杂菌所产生的物质，使提取产物时发生困难。 ⑤杂菌降解所需要的产物。 ⑥发酵如污染了噬菌体，可使生产菌株发生溶菌现象。
1．定义：
将配制好的培养基输入发酵罐中，用蒸汽加 热，使培养基和设备同时灭菌的一种灭菌方 式。
2．操作过程： 空罐准备：清洗、检修和检测。 升温：把培养基加热到灭菌所需的温度。 保温维持：在灭菌温度下保持灭菌所需时 间。 冷却保压：把培养基的温度降低到接种的 温度。
温度随灭菌时间的变化
分批灭菌设备示意图
四. 培养基和发酵设备的灭菌方法
（一）实验室种子培养基灭菌方法
使用高压蒸汽灭菌锅
手提式灭菌锅。 容量小。
立式或卧式灭菌锅。
容量较大， 一般能装几十瓶或几百瓶。
灭菌柜。 要和蒸汽锅炉配套，用于大 量种瓶培养基的灭菌，一次 能装几百至几千瓶(袋)。
（二）分批灭菌(batch sterilization）
1)由热交换器组成的灭菌系统工艺流程图
温度随时间的变化
2)蒸汽直接喷射型的连续灭菌系统
温度随灭菌时间的变化
3)由连消塔、维持罐和喷淋冷却组成的灭菌系统
（四）连续灭菌与分批灭菌的比较与选择
分批灭菌 优点： 1. 不需附加设备 2. 蒸汽利用率高 3. 节约劳动力 连续灭菌 优点: 1.采用高温快速灭菌法 2.可以把培养基按性质分开灭菌 3.有利于自动控制 4.节省冷却水 缺点 1.投资费用高 2.对物料要求高
(六)、补料液的灭菌
在发酵过程中，往往要向发酵罐中补入各种不 同的料液。这些料液都必需经过灭菌。 灭菌的方法则视料液的性质、体积和补料速率 而定。 如果补料量较大，而具有连续性时，则采用连 续灭菌较为合适。 也有利用过滤法对另补料液进行除菌。 补料液的分批灭菌，通常是向盛有物料的容器 中直接通入蒸汽。 所有的附属设备和管道都要经过灭菌。
4．湿热灭菌法
原理：蒸汽冷凝放出大量潜热，具有穿透力， 且在高温有水分条件下，蛋白质易变性。 常用方法： 水煮常压灭菌：100℃ 饱和蒸汽灭菌：一般121℃，30分钟
使用范围：培养基和发酵设备灭菌
5．过滤除菌法
原理：利用微生物不能透过滤膜除菌。 方法: 0.01~0.45 m孔径滤膜。
使用范围：用于压缩空气、酶溶液及其他不耐 热化合物溶液除菌。
第一节 灭菌的原理及方法
一. 几种常见的灭菌方法 1. 化学试剂灭菌法 原理：药物与微生物细胞中的成分反应，使 蛋白质变性、酶失活。
常用的灭菌剂:
使用范围： 器皿、双手和实验室、无菌室的环境灭菌， 不能用于培养基灭菌。
常用的灭菌剂
化学物质名称 有效浓度 新洁尔灭 (苯扎溴铵) 杜灭芬 高锰酸钾 漂白粉 酒精 0.25% 0.25% 0.1%-0.25% 5% 75% 化学物质名称 有效浓度 甲醛 戊二醛 苯酚 过氧乙酸 37% 2% 0.1-0.15% 0.02%-0.2%
2). K 与灭菌温度有 关
K=A e –△E / RT
1 （阿累尼乌斯方程） Ln K =Ln A- △ E/ RT 0.1 A：比例常数 0.01 R：气体常数(J/ mol K) 0.001 T：绝对温度( K) 0.0001 △E：杀死细菌所需的活 0 化能（J/ mol）
È ¬ ¾ ¿ ß Ë ú ¿ ß Ä À ú ß Ê È Ö ·Ñ æ ¸ ¾ Ñ æ µ È Ë Ç Ï
105℃
N/N 0
118℃ 121℃
115℃ 110℃
5
10
15
20
25
Ó ±¼ ¨ © ¼ È Ê ä £ min£
第二节 培养基和发酵设备的灭菌工艺
一．培养基灭菌时间的选择 t =1/ k * Ln( N0/ N) 其中 K：一般耐热的细菌芽孢的K值 N0 ：细菌及芽孢数之和 N：10 -3
N= N0 e- K t
以菌体的残留数Ln N/ N0的对数与时间t 作图，得出一条直线，其斜率为- K 。
2 .反应速率常数K
如何通过实验根据对数残存定律确定某一温度, 某一微生物的K ？ 1). K 与菌种的特性有关 相同温度下，微生物越耐热， k值越小。 相同温度下，微生物越不耐热，k值越大。
缺点 1.培养基质量比较差 2.罐的利用率低 3.冷却水用量大
选择原则：
1． 培养基成份（易降解成分、液化情况等 )
2． 设备状况（冷却面积、传动装置等） 3. 动力条件
(五)、发酵罐Βιβλιοθήκη 灭菌培养基的灭菌如果是采用连续灭菌法。则发 酵罐应在加入灭菌的培养基前先行单独灭菌。 通常是用蒸汽加热发酵罐的夹套或设管并从 空气分布管中通入蒸汽，充满整个容器后， 再从排气管中缓缓排出。容器内的蒸汽压力 保持1公斤，20分钟。在保温结束后，关键 是随即通入无菌空气，使容器保持正压，防 止形成真空而吸入带菌的空气。
三路进汽：直接蒸汽从 通风、取样和出料口进 入罐内直接加热，直到 所规定的温度，并维持 一定的时间。这就是所 谓的“三路进气”。 四路出汽：直接蒸汽 从排气、接种、进料 和消沫剂管排气
（三）连续灭菌（continuous sterilization）
1．定义：将培养基通过专门设计的灭菌器，进行连 续流动灭菌后，进入预先灭过菌的发酵罐中的灭菌 方式。 2．流程： 1)由热交换器组成的灭菌系统 2)蒸汽直接喷射型的连续灭菌系统 3)由连消塔、维持罐和喷淋冷却组成的灭菌系统