实验六 大肠杆菌和沙门氏杆菌
实验六 肠杆菌科细菌的微生物学鉴定
实验六肠杆菌科细菌的微生物学鉴定课程名称：兽医微生物学实验学时：6学时一、目的要求1．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性；2．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法；3．掌握大肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理；4．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现；5．熟悉沙门氏菌血清分群、定型的方法和步骤。
二、知识背景肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌，运动者周身鞭毛；在普通培养基上生长好；发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气；在麦康凯琼脂上生长；细胞色素氧化酶阴性；还原硝酸盐为亚硝酸盐等。
碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。
大肠埃希氏菌（E.coli）简称大肠杆菌，作为原发和继发病原可引起多种动物疾病：犊牛的肠道感染和水泻；幼猪的水泻和腹泻，二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病；狗的尿道感染；鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿（Coligranuloma）。
沙门氏菌（Salmonella），虽然沙门氏菌血清型超过2200个，但承认的种为数不多，在O抗原的基础上，沙门氏菌血清组（群）用字母A、B、C…表示，然后根据它的H抗原（鞭毛抗原）再分，用阿拉伯数字1、2、3…等表示，沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病，是肠杆菌科重要的致病菌，如鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium）可引起动物流产，胃肠炎和败血症。
其它肠杆菌科成员：肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎，这个菌常形成厚的荚膜。
变形杆菌（proteus）引起动物的尿道和胃肠道疾病。
耶尔森氏菌（yersinia）引起鼠疫、胃肠炎等。
生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。
三、实验材料每6人一组，每组所需材料：1．普通琼脂斜面培养物2管：分别为大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌（提供实验用菌种）；2．普通肉汤2管：分别用来接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌；3．普通琼脂平板2个分别用来划线接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌；4．生化试验用培养基2套，包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管、靛基质，M．R、V．P试验、柠檬酸盐利用，硝酸盐还原试验等；5．三糖铁琼脂斜面培养基2管；6．选择性培养基2个，如：麦康凯琼脂平板或远滕氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板；7．各种生化试验试剂：靛基质试剂，M．R试剂，V．P试剂，硝酸盐还原试剂；8．沙门氏菌因子血清。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。
（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
实验原理：1、大肠杆菌的性质:大肠杆菌是G无芽抱直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，口引噪试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用xx酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：-沙门氏杆菌是G直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产呵噪，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：(1) 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
(2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
(3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37 C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：(1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37 C恒温培养24小时。
(2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37 C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：(1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
沙门氏菌的实验报告
沙门氏菌的实验报告沙门氏菌的实验报告引言：沙门氏菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然环境中，尤其是在动物体内。
它是引起人类食物中毒的主要病原菌之一。
为了更好地了解沙门氏菌的特性和对人类健康的影响，我们进行了一系列的实验。
实验一：沙门氏菌的分离与培养我们从市场购买了一份新鲜鸡蛋，并在实验室中进行了分离与培养的操作。
首先，我们将鸡蛋表面进行消毒处理，然后用无菌的工具将鸡蛋壳上的细菌刮取到培养基上。
接着，我们将培养基置于恒温箱中，控制温度和湿度，以促进沙门氏菌的生长。
经过一段时间的培养，我们成功地分离出了纯净的沙门氏菌菌落。
实验二：沙门氏菌的形态观察为了观察沙门氏菌的形态特征，我们使用了光学显微镜对其进行了观察。
在显微镜下，我们发现沙门氏菌呈杆状或球状，大小约为0.5至1.5微米。
沙门氏菌具有鞭毛，使其能够在液体中快速移动。
此外，我们还观察到沙门氏菌菌落呈灰白色或淡黄色，有时会形成粘液。
实验三：沙门氏菌的生长条件为了确定沙门氏菌的适宜生长条件，我们进行了一系列的实验。
首先，我们将沙门氏菌接种于不同温度的培养基上，发现其最适宜生长的温度为37摄氏度。
此外，我们还研究了沙门氏菌在不同pH值下的生长情况，结果显示其最适宜生长的pH值为6.5至7.5。
这些实验结果为控制沙门氏菌的生长提供了重要的参考。
实验四：沙门氏菌的致病机制为了研究沙门氏菌对人类健康的影响，我们进行了一系列的实验来探索其致病机制。
首先，我们将沙门氏菌接种于小鼠体内，并观察其对小鼠的影响。
结果显示，被感染的小鼠出现了食欲不振、腹泻和发热等症状。
进一步的实验表明，沙门氏菌通过侵入人体细胞并释放毒素来引起病症。
这些实验结果为预防和治疗沙门氏菌感染提供了重要的依据。
实验五：沙门氏菌的控制方法为了控制沙门氏菌的传播和感染，我们进行了一些实验来研究其控制方法。
首先，我们发现煮沸可以有效地杀死沙门氏菌，因此在食物加工过程中要确保充分的加热。
此外，我们还研究了一些抗生素对沙门氏菌的抑制作用，结果显示某些抗生素可以有效地抑制其生长。
沙门氏菌
大肠杆菌和沙门氏菌的微生物学检查摘要：大肠杆菌和沙门氏菌的微生物学检查主要是了解大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性，熟悉大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性，掌握大肠杆菌与沙门氏菌的常规检查方法。
通过用糖发酵、MR、VP、吲哚、硫化氢实验的方法的结果为麦康凯试验琼脂上呈现红色菌落的为大肠杆菌，糖发酵试验A组葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇变为黄色含气泡，表示该菌对此糖产酸产气。
B组葡萄糖、麦芽糖、甘露醇变为黄色，表示该菌对此糖产酸产气。
MR试验：A管为黄色，为阴性；B管为红色，为阳性。
VP试验A管为红为阳性；B管不变色，为阴性。
吲哚试验A管出现红色，为阳性反应；B管不变色，为阴性反应。
硫化氢试验A管无黑色，为阴性反应；B管出现黑色沉淀，为阳性反应。
结论为A为大肠杆菌，B 为沙门氏菌。
关键词：大肠杆菌、沙门氏菌、硫化氢、吲哚、MRVP引言：大肠杆菌是肠杆菌科中埃希氏菌属的代表种。
根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌的株分为不同的血清型。
自然界中大肠杆菌的血清型可达数万种，但致病性大肠杆菌的数量有限。
在兽医上最重要的致病性血清型有：O8、O138、O141等多见于猪，O8、O78、O101等多见于牛羊，O4、O5、O75等多见于马，O1、O2、O36、O 78等多见于鸡，O10、O85、O119等多见于兔。
沙门氏菌属是由一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧无牙孢组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对人和多种动物均有致病性，可引起人的伤寒、副伤寒、肠炎和食物中毒，对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。
大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特性，如形态、染色特性等。
但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。
1. 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液1.1.2 增菌液：亚硒酸盐亮绿增菌液、四磺酸钠增菌液1.1.3 普通培养基：肉汤、普通琼脂、半固体培养基1.1.4 鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂1.1.5 生化培养基：糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂1.1.6 生化试剂：MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原试剂等1.1.7 沙门氏菌诊断血清：A~E群多价O血清及单因子血清1.1.8 革兰氏染液、显微镜、吸管等1.2 方法1.2.1 麦康凯试验：将样液分别划线接种在麦康凯培养基上，温箱培养24小时后观察生长情况，根据菌落的大小、形态、颜色等来鉴别大肠杆菌和沙门氏菌。
实验五 大肠杆菌与沙门氏菌
扬州大学兽医学院
2019年12月31日星期二
实验原理
各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养 物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦 不同，所以利用这点进行生化试验，可达 到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆 菌时，生化试验是极其常用的一种方法。
一、目的要求
1. 学习常用的生化实验方法； 2. 掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。
＋(－) ；＋(－)
3. 细菌的染色、镜检
大肠杆菌
沙门氏菌
G－直杆菌，大小0.4-0.7×2-3μm， 无芽胞，两端钝圆，散在或成对。
4. 生化管接种培养
大肠杆菌
沙门氏菌
葡乳麦甘蔗
⊕⊕H/⊕2-
S⊕ －
尿⊕ 枸 －
葡乳麦甘蔗
H⊕ ＋ － 2
S⊕ －
尿⊕ ＋
枸－
5. 吲哚、M.R、V-P试验结果
2. 沙门氏菌
G－
个体为杆状 散在或成对
① 是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构 相似，G－，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。
② 在医学、兽医和公共卫生上均十分重要： • 绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性； • 能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病； • 人类食物中毒的主要病原之一。
大肠杆菌
沙门氏菌
吲 M V哚 .R P 试试 试
吲 M V哚 .R P 试试 试
六、思考题
大肠杆菌与沙门氏菌：
1. 革兰氏染色特性与形态特点？ 2. 在麦康凯平板上的生长表现？ 3. 在三糖铁琼脂上的生长表现？ 4. 常规糖发酵情况？ 5. IMViC试验结果？
二、背景知识介绍
1. 大肠杆菌
G－
个体为杆状 散在或成对
大肠杆菌与沙门氏菌
大肠杆菌大肠细菌（E. coli）为埃希氏菌属(Escherichia)代表菌。
一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。
某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称病致病大肠杆菌。
一、生物学性状（一）形态与染色大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。
有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌。
（二）培养特性在血琼脂平板上，有些菌株产生β型溶血。
在鉴别性或选择性培养基上形成有颜色、直径2～3mm的光滑型菌落。
生化反应：大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、麦芽胞、甘露醇、木胶糖、阿拉伯胶等产酸产气。
IMViC试验为“+、+、-、-”。
即为典型大肠杆菌。
（三）抗原构造较复杂，有O、K、H、F四种抗原。
O抗原为脂多糖，已有171种，其中162种与腹泻有关，是分群的基础。
K抗原有103种，为荚脂多糖抗原。
从病人新分离的大肠杆菌多有K抗原，有抗吞噬和补体杀菌作用。
根据耐热性等不同，K抗原分为L、A、B三种，其中L、B不耐热，有60种。
F抗原至少有5种，与大肠杆菌的粘附作用有关、表明大肠杆菌血清型的方式是按O：K：H排列，例如O111：K58（B4）：H2。
（四）抵抗力该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。
在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。
胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。
对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。
二、致病性（一）致病物质1．定居因子（Colonization factor ,CF）;也称粘附素(Adhesin)，即大肠杆菌的菌毛。
致病大肠杆菌须先粘附于宿主肠壁，以免被肠蠕动和肠分泌液清除。
使人类致泻的定居因子为CFAⅠ、CTAⅡ(Colonization factor antigen Ⅰ、Ⅱ)，定居因子具有较强的免疫原性，能刺激机体产生特异性抗体。
肠道病原菌的分离与鉴定实验报告
肠道病原菌的分离与鉴定实验报告摘要本实验旨在分离、鉴定肠道病原菌，并深入了解肠道病原菌对人们健康的影响。
本实验采用选择性培养基和生化试剂对样品进行处理和鉴定，最终成功分离出大肠杆菌、沙门菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等肠道病原菌。
引言肠道病原菌是导致肠胃疾病的主要病因之一。
一些细菌和病毒都可引起肠道感染，导致腹泻、呕吐、腹痛等不适症状。
有些肠道病原菌很难通过常规的培养方法进行分离和鉴定，因此对于其鉴定至关重要。
在临床和实验室中，肠道病原菌的鉴定是非常重要的。
在本实验中，我们将通过选择性培养基和生化试剂来分离和鉴定肠道病原菌。
材料与方法实验所需材料：-食品样品（牛肉、猪肉、家禽产品等）-选择性培养基（MacConkey agar, SS agar, XLD agar）-氯霉素（50μg/ml）-β-半乳糖苷酶-生化试剂（甲基红、青田霉素、麦芽糖、尿素、甲酸氢钠、甲酸亚铁、碳酸氢铵、硫代硫酸钠、氧化亚铁、硫酸铜、氯化铵、硝酸钴、聚苯乙烯乳胶、过氧化氢）实验步骤：1. 食品样品的处理：将样品切成小块，加入100 ml的含氯霉素（50μg/ml)的生理盐水中，放在室温下搅动10分钟，再将悬浮液离心10分钟，取沉淀制备10倍连续稀释液备用。
2. 分离培养：取三个不同的选择性培养基MacConkey agar、SS agar和XLD agar，分别接种均匀悬浮液并用无菌环展开，然后使其在37℃恒温箱中孵化24小时。
3. 生化识别：观察菌落的形态、颜色和表面涂膜，并用生化试剂行革兰染色、甲基红反应、青田霉素试验、尿素酶试验、甲酸氢钠氧化试验、甲酸亚铁还原试验、碳酸氢铵水解试验、硫代硫酸钠还原试验、氧化亚铁试验、硫酸铜凝集试验、氯化铵水解试验、硝酸钴试验、聚苯乙烯乳胶凝聚试验和过氧化氢试验，根据结果进行分类鉴定。
结果经过实验分离和鉴定，本实验成功分离出大肠杆菌和沙门菌等常见的肠道病原菌，并且还分离出一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
大肠埃希氏菌沙门氏菌实训小结
大肠埃希氏菌沙门氏菌实训小结
大肠埃希氏菌和沙门氏菌都是常见的肠道细菌，但它们也可能成为人体致病菌，引发感染疾病。
以下是本人对于实训进行的一些小结：
1. 实验前需要做好防护措施，包括佩戴口罩、手套、实验服等，防止细菌污染。
2. 将培养基均匀地涂抹在平板上，避免有气泡或滴落。
同时，需要注意放置位置，防止相邻培养基互相污染。
3. 大肠杆菌的产生是很容易的，因此需要注意无菌操作，以避免实验的误差。
4. 在判断菌落大小和颜色时，需要注意照明，避免太暗或太亮造成误判。
同时,也需要根据字母或数字的大小进行分类。
5. 在不同培养基上进行细菌压条，需要注意细菌涂抹的夹角和数量。
总而言之，实验的结果与操作的方法、环境都息息相关，一定要保持严谨的态度和仔细的操作，最终得出的实验数据才更有说服力。
实验6 常见病原菌的形态观察.
液体培养基生长特征
在肉汤培养基中24小时后呈均匀混浊生长， 管底稍有沉淀。
链球菌
染色镜检形态特征
1. 革兰阳性，球形或卵圆形，直径小于0.８ ~ 1.0μm) 。
2. 呈链状或成双排列，短者4~8个细菌组成， 长者有20~30个细菌组成。
固体培养基生长特征
1. 营养要求较高。普通培养基中需加有血液、 血清、葡萄糖等才能生长。菌落小，灰白 透明，稍黏。
2. 血琼脂平板上形成灰白、光滑、圆形突起 小菌落，有不同溶血现象。
液体培养基生长特征
血清肉汤中生长，初呈均匀浑浊，后因 细菌形成长链呈颗粒状沉淀管底，上清 透明。
大肠杆菌
染色镜检形态特征
1. 革兰阴性中等大小杆菌。 2. 无芽胞，两端钝圆，散在或成对，通常无
可见荚膜。
固体培养基生长特征
1. 在营养琼脂上生长24h后，形成圆形凸起、 光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径 约 2~3mm。
本属大多数细菌的培养特性与埃希氏菌属 相似。普通肉汤培养基中生长呈均匀混浊。
巴氏杆菌
染色镜检形态特征
1. 革兰阴性。 2.为球杆状或短杆状菌，两端钝圆，大小为
0.25~0.4μm×0.5~2.5μm；单个存在，有 时成双排列； 3. 病料涂片用瑞氏染色或美蓝染色时，可见 典型的两极着色。
固体培养基生长特征
2. 麦康凯琼脂上形成红色菌落。 3. 在伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属闪光的
菌落。 4. 一些致病性菌株在绵羊血平板上呈β溶血。
液体培养基生长特征
S型菌株在肉汤中培养18~24h，呈均匀浑 浊，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌环。
沙门菌
染色镜检形态特征
1. 革兰阴性的中等大小杆菌（比大肠杆菌 细）；
家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验
家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验方法鸡大肠杆菌病主要依靠药物防治，但药物的大量使用带来了大肠杆菌多重耐药性和药物残留等诸多问题。
目前世界许多地方开展了调查研究试验材料1.病料来源。
养殖户送检样本有典型大肠杆菌和沙门氏菌病变的病死鸡，孵化后期死亡鸡胚（没有出壳鸡苗）作病料。
毛蛋没有出壳小鸡小鸡卵黄囊青年鸡病料2.细菌分离用的培养基：麦康凯培养基、普通培养基、SS培养基、亚硫酸铋培养基等二、试验方法1.大肠杆菌的分离培养。
无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊（没有出壳鸡苗）在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，在麦康凯培养基上生长出边缘整齐稍凸起、表面光滑湿润、直径1～2毫米的红色圆形菌落，革兰氏阴性，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出粉红菌落。
亚硫酸铋琼脂大肠杆菌不生长。
2.沙门氏菌分离培养。
无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊在在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，然后挑取麦康凯琼脂平板上淡黄色半透明单个菌落，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出黄色半透明或黑色菌落。
亚硫酸铋琼脂沙门氏菌生长绿色单个菌落。
如图：SS培养基沙门氏亚硫酸铋琼脂沙门氏菌麦康凯培养基大肠杆菌SS培养基大肠杆菌和沙门氏菌普通培养基大肠杆菌和沙门氏菌三．药敏试验分离到的大肠杆菌和沙门氏菌混合在一起，涂匀营养培养基，选用的药敏片做好标号，平整贴在培养基上37℃培养12~24小时，观察细菌抑菌圈大小，选抑菌圈越大药物敏感度越高，使用疗效越好。
同时考虑某些药物肠道不吸收问题。
四．药敏分析及预防：该地区的大肠杆菌和沙门氏菌对粘杆菌素、痢菌净、氟苯尼考、硫酸阿米卡星、头孢噻呋、硫酸新霉素较敏感。
合理搭配抗生素使用减少细菌耐药性的产生，临床上长期大量使用不规范抗菌药物，致使大肠杆菌沙门氏菌耐药菌株不断产生，敏感的药物越来越少，也可以据本场的大肠杆菌和沙门氏菌血清型做疫苗预防。
这提示我们每隔一定时间要对本地区的大肠杆菌耐药性进行检测，以便更好地选择敏感有效的药物，以控制该病的流行。
实验六 大肠杆菌和沙门氏杆菌
增 菌 ：血清肉汤
运动性
不溶血
G-菌球杆
动物接种：小白鼠皮下接种 死亡检剖败血症 可疑菌落
脏器涂片镜检
分离培养纯培养源自血液、肠淋巴结及肠黏膜刮取物
及其他病变组织
革
兰
麦康凯或伊红美
麦康凯或血琼脂
氏
兰平板划线分离
平板划线分离
染
色
镜
挑取疑似菌落5-10个分别接种TSI和普通琼脂斜面
检
TSI呈A（K）/A 反应的，其 STI
+（-） 生长物或普通琼脂斜面纯培养菌
生化试验鉴定 猪水肿病菌株 血清型鉴定
ETEC菌株毒力因子鉴定
沙门氏杆菌微生生学诊断程序
未污染病料
在肠道杆菌鉴别培 养基上划线分离
病料
革
兰
污染病料
氏
染
色
用肠道杆菌增菌
镜
培养基增菌
检
挑取疑似菌落分别接种TSI和尿素培养基
普 通
斜
TSI呈 K（A）/K 反应的，尿素分解阴性的STI培养菌
面
+(-), +(-)
纯
培
菌株鉴定
养
沙门菌生化鉴定
沙门菌A-F群多价 O血清平板凝集
大肠杆菌
大肠杆菌
大肠杆菌
麦康凯培养基上形成红色菌落； 伊红美蓝平板：黑色带有金属光泽菌 落； 远腾琼脂平板：红色带有光泽菌落
大肠杆菌
大肠杆菌
大肠杆菌（E．coli）
结果观察
大肠杆菌 葡乳麦甘蔗
⊕⊕⊕⊕⊕
沙门氏菌 葡乳麦甘蔗
+- + + -
动物致病性大肠杆菌分离鉴定程序
病料
粪便、肠内容物
大肠杆菌和沙门氏菌的鉴别诊断要点。
大肠杆菌和沙门氏菌的鉴别诊断要点。
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大肠杆菌与沙门氏菌的分离鉴定
一、立题依据1、现状分析及研究意义仔猪白痢病是农村养猪中的常发病、多发病。
常常由于延误医治时间，往往发生整窝死亡，造成很大经济损失。
仔猪白痢病在临床上十分多见, 它主要是由致病性大肠杆菌所引起的以仔猪肠炎或败血症为主要症状的一种病症。
仔猪副伤寒是由猪伤寒沙门氏菌等引起的仔猪细菌性传染病。
沙门氏菌属是肠道杆菌科的一个重要属，包括 2 500 种以上血清型，它们主要在人及动物的肠道内寄生，绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性，能引起人和动物多种不同临床病变的沙门氏菌病，在医学和公共卫生上均十分重要。
我小组主要基于以上的情况，针对疑似仔猪白痢与仔猪副伤寒病死猪肝脏病样进行病原菌的分离鉴定，以便通过实验来对两种重要病原菌的主要特征进行更深入的了解和掌握。
二、研究方案（一）研究目的，研究内容和拟解决的问题。
1、研究目的：本次设计性病原菌分离鉴定实验，意在提高我们的实践动手能力，让我们将所学的知识综合运用，开拓自我思维，学会主动思考。
在病原菌的分离鉴定中，还可以促进我们对病原菌生理特性的了解，以及对各种分离鉴定方法和技术的掌握以此提高我们对知识的综合运用能力以及设计实验的谨慎思维能力。
2、研究内容：将疑似疑似仔猪白痢与仔猪副伤寒病死猪肝脏病样进行初步观察并用取样进行实验室病原菌的分离鉴定。
3、拟解决的关键问题：①确定并掌握病原菌的分离鉴定方法。
②充分描述病原菌的特征，将它与已知的细菌特征对比，得出结论。
（二）、所需材料试剂、研究方法及预期结果1、所需材料试剂1.1材料：病死猪肝脏病样1.2试剂：氯化镁孔雀绿增菌培养基、麦康凯琼脂培养基、SS营养琼脂培养基、微量生化发酵管（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、葡磷胨、尿素、枸橼酸盐、甘露醇、H2 S），美兰，结晶紫，碘液，酒精，品红，三糖铁培养基、厌氧肉汤和普通肉汤。
附：普通肉汤：牛肉膏0.15g+蛋白胨0.3g+Nacl 0.l5g+H2O 30mL混合倒入容器搅拌均匀（牛肉膏和蛋白胨均用玻璃纸称量后一起放入容器加热后取出，Nacl用标准纸）—称总重—加热融化（搅拌至煮沸）—补水（10g=10mL)—加NaoH调PH（7.4-7.6），用试纸检验—过滤—分装3管—包装好进行灭菌厌氧肉汤：之前步骤与普通肉汤相同，在普通肉汤的基础上没管加入肝粒5~6块，每管加石蜡密封，包装好灭菌2、研究方法2.1指出所给病样及组织2.2初步观察病样2.3.细茵分离病例需进行实验室检查，可从实质器官中取少量病样，依次进行直接染色镜检观察，增菌培养同时鉴别培养，菌落特征观察，麦康凯平板扩大培养，染色镜检，接种肉汤和厌氧肉汤，生化鉴定。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定
青岛农业大学兽医微生物学课程论文题目：大肠杆菌和沙门氏菌的别离鉴定姓名：学院：动物科技学院班级：马业科学1201班学号： 2012 ****：***二0一四年四月一日大肠杆菌和沙门氏菌的别离鉴定马业科学1201任课教师温建新摘要：为了鉴别大肠杆菌和沙门氏菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。
关键词：大肠杆菌沙门氏菌三糖铁糖发酵麦康凯琼脂引言：大肠杆菌是肠杆菌中埃希氏菌中的代表种。
根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌株分为不同的血清型。
自然界中大肠杆菌的血清型可分为数万种，但致病性大肠杆菌的数量有限。
沙门氏菌属是有一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对任何动物均有致病性，可以欺人的伤寒、副伤寒、肠炎和食物中毒，对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。
大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特征，如形态、染色特性等。
但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。
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1 材料 (1)1.1 菌种 (1)培养基 (1)生化试剂 (1)沙门氏菌诊断血清 (1)器材 (1)2 方法 (1)2.1 增菌培养 (1)2.2 直接别离培养 (1)形态观察 (1)培养特性观察 (1)生化试验 (2) (2)2.5.2 蛋白胨水接种 (2)2.5.3 葡萄糖蛋白胨水接种 (2)尿素琼脂接种 (2)2.5.5 枸橼酸盐琼脂接种 (2)2.6 生化特性的观察 (2)糖发酵实验 (2)2.6.2 MR实验 (2)2.6.3 VP实验 (2)2.6.4 吲哚实验 (3)枸橼酸盐利用实验 (3)2.6.6硫化氢实验 (3)2.7 药物敏感试验-扩散法 (3)3 结果观察 (3)3.1 大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况错误!未定义书签。
医学课件大肠杆菌和沙门氏菌
② 于培养物中加入0.5mL V-P甲液；
③ 随后加V-P乙液0.5mL，轻摇；
④ 静置10-15min。
⑤ 15min内变红者为阳性。
V-P甲液
V-P乙液
阳性 阴性
M.R与V-P试验原理
① M.R试验：
• 甲基红是一种pH指示剂：
pH 4.4 - 6.2 红→黄
• 当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时；
3. 生化管接种培养
① 糖发酵试验：
葡乳麦甘蔗
② H2S试验； ③ 尿素酶试验； ④ 枸橼酸盐利用试验。
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
大肠杆菌
沙门氏菌
大肠杆菌 沙门氏菌 置 37℃培养
4. 吲哚试验
① 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中， 置37℃培养3-5d；
一、目的要求
1. 学习常用的生化实验方法； 2. 掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。
二、背景知识介绍
1. 大肠杆菌
G－
个体为杆状 散在或成对
① 大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；
② 与广泛的兽医临床病征有关，如：
• 犊牛的肠道感中染和等水大泻小；
• •
幼狗猪的的尿水道泻感0和染.4腹；-0泻.7，×断2-奶3μ仔m猪水肿病；
实验原理?各种细菌在其新陈代谢中由于利用营养物质的能力有所差异排泄的代谢产物亦不同所以利用这点进行生化试验可达到鉴定细菌种的目的尤其在鉴定肠道杆菌时生化试验是极其常用的一种方法
实验原理
各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养 物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦 不同，所以利用这点进行生化试验，可达 到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆 菌时，生化试验是极其常用的一种方法。
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麦康凯或伊红美 兰平板划线分离
麦康凯或血琼脂 平板划线分离
挑取疑似菌落5-10个分别接种TSI和普通琼脂斜面 TSI呈A（K）/A 反应的，其STI +（ -） 生长物或普通琼脂斜面纯培养菌
革 兰 氏 染 色 镜 检
生化试验鉴定
猪水肿病菌株
血清型鉴定
ETEC菌株毒力因子鉴定
沙门氏杆菌微生生学诊断程序
病料 未污染病料 Байду номын сангаас染病料
革 兰 氏 染 色 镜 检 普 通 斜 面 纯 培 养
在肠道杆菌鉴别培 养基上划线分离
用肠道杆菌增菌 培养基增菌
挑取疑似菌落分别接种TSI和尿素培养基 TSI呈 K（A）/K +(-), +(-) 反应的，尿素分解阴性的STI培养菌 菌株鉴定 沙门菌生化鉴定
大肠杆菌
大肠杆菌
大肠杆菌
麦康凯培养基上形成红色菌落； 伊红美蓝平板：黑色带有金属光泽菌 落； 远腾琼脂平板：红色带有光泽菌落
大肠杆菌
大肠杆菌
大肠杆菌（E．coli）
大肠杆菌 葡 乳 麦 甘 蔗 结果观察
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕
沙门氏菌 葡 乳 麦 甘 蔗
+ -
+
+
-
动物致病性大肠杆菌分离鉴定程序
实验六 大肠杆菌和沙门氏杆菌
目的要求：
1、掌握致病大肠杆菌、沙门氏杆菌的微生物学诊断方法。 2、熟悉致病大肠杆菌、沙门氏杆菌形态、培养特性。
实验内容：
一、观察致病大肠杆菌、沙门氏杆菌形态、培养特性。 二、接种大肠杆菌、沙门氏杆菌于鉴别培养基（远腾、SS、BTB），观察结果。 三、大肠杆菌、沙门氏杆菌的微生物学诊断程序。
E.Coli为兼性厌氧菌，在普通培养基上生长 良好，最适宜生长温度为37℃，最适合生 长pH为7.2～7.4。麦康凯琼脂上形成红色 菌落，在伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属 闪光的菌落，在SS琼脂上一般不生长或者 生长较差，生长的菌落呈红色。 一些致病性菌株在绵羊血液平板上呈β 型溶血。在营养琼脂上生长24h，形成圆形、 隆起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落， 直径2～3mm。
沙门菌A-F群多价 O血清平板凝集 血清型鉴定
报告鉴定结果
多杀性巴氏菌
革兰氏染色的肺组织中有 大量阴性球杆菌
多杀性巴氏杆菌（Ｐasteurelloa
微生物学诊断
maltocida ）
病料：（渗出液、心血、肝、脾、淋巴结、骨髓等） 涂片镜检：G-；瑞氏/美兰（新鲜病料）两极着染；球杆菌 培养 分离培养：血液/血清裂解血平板 菌落形状 增 菌 ：血清肉汤 运动性 不溶血 G-菌球杆 动物接种：小白鼠皮下接种 死亡检剖败血症 脏器涂片镜检 分离培养 可疑菌落 纯培养