HPLC手动积分原则

手动积分规定

实验室数据完整性之手动积分实验室数据完整性已成FDA检查制药企业的一把利器，其中一条关于随意手动积分或者无书面程序规定手动积分，说明了FDA本身并不是不认可手动积分，而是要求是要有操作规程规定什么情况可以手动积分，如何积分，并且应保存并记录积分参数。

1.什么情况下可以进行手动积分？1）低分离度或低响应；2）流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小；3）色谱柱性能：运行过程中，出现异常峰；4）软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误（峰未积分和错误识别峰）；5）由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降（由于某些梯度程序）、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。

2.手动积分的权限及操作操作员在数据系统自动积分不正确时，领取手动积分处理报告表并填写，手动积分申请被QC经理批准后由QC经理或QC组长（若有）或其指定人员（一般是指经验丰富的资深QC方可进行手动积分。

3.手动积分注意事项1）手动积分不能试图通过以下动作来使数据符合标准要求：减少峰（减少峰面积）；增加峰（增加峰面积）；改变峰高；2）同一次检验的所有标准品、工作对照品、样品等必须使用同一方法进行手动积分。

3）手动积分结束后，应打印自动积分图谱和手动积分图谱附于手动积分申请表之后，提交QC经理审核；QC经理应复核完整的数据找出根因, 基于根因制定相应的CAPA措施来避免类似事件。

4）自动积分的图谱不得删除或被覆盖，应与手动积分图谱保存于计算机中；打印的自动积分图谱和手动积分图谱应标识清楚签名，随同手动积分申请表附于检验原始记录后面一起交质量管理部经理、QP审核无问题后归档。

4•附件：手动积分处理报告表手动积分处理报告表A）手动积分申请如由于软件参数阈值的设置导致峰不积分，峰6.软件积分的局限性起点和终点间出现肩峰和异常的基B）手动积分审批表注释（如有）：结论：口批准口拒绝指定手动积分人员QC经理签名/日期C）手动积分处理表根本原因：纠正与预防措施结论：欢迎您的下载，资料仅供参考!致力为企业和个人提供合同协议，策划案计划书，学习资料等等打造全网一站式需求。

手动积分规定

手动积分规定TYYGROUP system office room 【TYYUA16H-TYY-TYYYUA8Q8-实验室数据完整性之手动积分实验室数据完整性已成FDA检查制药企业的一把利器，其中一条关于随意手动积分或者无书面程序规定手动积分，说明了FDA本身并不是不认可手动积分，而是要求是要有操作规程规定什么情况可以手动积分，如何积分，并且应保存并记录积分参数。

1.什么情况下可以进行手动积分？1）低分离度或低响应；2）流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小；3）色谱柱性能：运行过程中，出现异常峰；4）软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误（峰未积分和错误识别峰）；5）由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降（由于某些梯度程序）、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。

2.手动积分的权限及操作操作员在数据系统自动积分不正确时，领取手动积分处理报告表并填写，手动积分申请被QC经理批准后由QC经理或QC组长（若有）或其指定人员（一般是指经验丰富的资深QC）方可进行手动积分。

3.手动积分注意事项1）手动积分不能试图通过以下动作来使数据符合标准要求：减少峰（减少峰面积）；增加峰（增加峰面积）；改变峰高；2）同一次检验的所有标准品、工作对照品、样品等必须使用同一方法进行手动积分。

3）手动积分结束后，应打印自动积分图谱和手动积分图谱附于手动积分申请表之后，提交QC经理审核；QC经理应复核完整的数据找出根因，基于根因制定相应的CAPA措施来避免类似事件。

4）自动积分的图谱不得删除或被覆盖，应与手动积分图谱保存于计算机中；打印的自动积分图谱和手动积分图谱应标识清楚签名，随同手动积分申请表附于检验原始记录后面一起交质量管理部经理、QP审核无问题后归档。

4.附件：手动积分处理报告表手动积分处理报告表。

色谱系统数据积分处理标准管理规程

色谱系统数据积分处理标准管理规程————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：色谱系统数据积分处理标准管理规程文件审定起草人审核人审核人批准人部门质量管理部质量管理部质量管理部质量管理部签名日期年月日年月日年月日年月日颁发部门质量管理部生效日期年月日分发部门质量保证部[1]份、质量控制部[1]份1、目的：为了规范化验室色谱软件正确的积分方法，确保检测数据的准确性、完整性和可追溯性,制定本规程。

2、适用范围：本规程适用于实验室内色谱的所有积分的管理。

3、责任者：质量管理部、中心化验室4、管理规程4.1化验室色谱系统数据处理积分的定义及分类4.1.1定义积分是指色谱软件定量测定峰面积或峰高的过程。

4.1.2分类4.1.2.1自动积分自动积分是指采用色谱软件内臵的积分事件设臵积分参数进行积分。

4. 1.2.2手动积分手动积分是指采用手动积分工具进行积分。

4.2色谱系统数据处理积分的基本概念和术语4.2.1色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elutionprofile)。

4.2.2基线(baseline)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。

一般应平行于时间轴。

4.2.3噪音(noise)——基线信号的波动。

通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。

4.2.4漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。

主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。

4.2.5色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。

流出曲线上的突起部分。

正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。

不对称色谱峰有两种。

气相色谱手动积分

气相色谱手动积分气相色谱手动积分在气相色谱分析中，手动积分是一项非常重要的步骤。

正确地进行手动积分可以确保分析结果的准确性和可重复性。

本文将介绍手动积分的方法和一些注意事项。

手动积分的方法1. 确定积分范围手动积分需要明确积分范围。

一般情况下，积分范围是峰的起始点和终止点，但在实际分析中，还需要考虑到背景噪声、峰宽度和对峰的完全统计等因素。

因此，为了准确积分，积分范围需要根据实际情况进行调整。

2. 选择合适的基线手动积分的另一个关键步骤是选择合适的基线。

基线的选择应该在峰的前后都能够很好地拟合。

一般情况下，可以选择一条平均基线或者一段斜坡基线。

需要注意的是，基线选择应该与峰的形状相适应，否则会影响积分的准确性。

3. 积分量的确定手动积分中，积分量的确定是关键之一。

积分量应该足够大，保证对峰的完全统计，同时还需要考虑到峰宽度和信噪比等因素。

一般情况下，积分量可以选择峰高度的50%或者面积的50%。

注意事项1. 操作规范手动积分需要操作者熟练掌握操作流程和步骤，操作规范。

操作者需要熟悉手动积分仪器的使用方法，确保仪器的稳定性和准确性。

2. 基线选择基线选择需要基于峰的形状和采集环境中的噪声情况，不同的基线选择会影响积分结果和峰的形状。

因此，需要在进行手动积分前进行基线调整和优化。

3. 积分量的选择积分量的选择需要考虑峰宽度、信噪比等因素。

对于峰的积分，积分量需要保证对峰的完全统计，同时还需要考虑到峰宽度和信噪比的因素，以保证结果的准确性。

总结手动积分是气相色谱分析中非常重要的一环。

正确的手动积分方法和注意事项可以保证分析结果的准确性和可重复性。

操作者需要熟悉手动积分仪器的使用方法，掌握基线选择和积分量确定的技巧。

手动积分原则及SOP

手动积分原则及SOPData Processing and Peak Integration数据处理和峰的积分Chromatographic software uses dynamic peak detection algorithms and automatic peak detection algorithms. Integrating the chromatograms using software to apply the integration events, such as peak width, threshold, height, and area, etc., and then visually observing the peak integration for its correctness is generally recommended. The inherent or analytical variations and combination of various and drifting baselines in which the auto-integration will either underreport or overintegrate the peak areas.色谱软件使用动态寻峰算法和自动寻峰算法。

通常建议先用软件积分色谱来处理像峰宽、阈值、峰高及峰面积等需要积分的情形，再人工确定积分的正确性。

因为一些固有的或分析变化或两者皆有以及基线漂移的原因，自动积分将会使峰面积偏大或者偏小。

Once acquired, the electronic raw data of the measurements (measured values and metadata) are stored and available for processing. Some acquired electronic raw data already represent usable results (e.g., weight, temperature, and humidity). Other acquired electronic raw data, such as intensity values correlated with time or wavelength and generated by chromatography or spectroscopy, require further processing to obtain usable results (e.g., retention times, peak areas, and amounts). These processes, such as integration and calibration, are defined by processing parameters or calibration factors and affect only the resultant data after processing, but not the acquired electronic raw data. In contrast to the acquired electronic raw data, the processing parameters, such as integration events and calibration curves, may be changed during data evaluation. The changed processing parameters, methods, and processed data should be identified by versioning (i.e., number of times reprocessed) either on the results or from the audit trail data (25).实验的电子原始数据（测试结果和元数据）一经（色谱软件）获取，将会被（软件）存储并可用来进行处理。

色谱积分原理和手动积分的规则

色谱积分原理和手动积分的规则Questions of Quality: Where Can I Draw The Line?质量问题：我能在哪里划这条线？A question that keeps raising its head when working in a regulated laboratory is can chromatographers integrate peaks manually? If they can, when can they do it? Also if they can manually integrate, when should they not do it?一个问题正在持续发酵并且占据了头条：在受控实验室何时能手动去对色谱峰积分？如果他们能这样做，何时可以做呢？同样如果他们能够手动积分，何时不能这样做呢？One of the red rags to a regulatory bull is the issue of manual integration of chromatograms. If seen during an inspection, you can almost see the wheels in the inspector’s brain turn in mechanical precision as they question: are they testing into compliance? In a 2014 FDA inspection of a laboratory in Europe, one FDA 483 observation stated:色谱手动积分问题就像是斗牛中的一块红布。

如果在检查期间被发现，你几乎能够看到检查官的脑中条件反射地联想到一个问题：他们的检验是否合规？在2014年FDA检查一个欧洲试验室时，一个FDA483的缺陷项如下： No procedure exists describing how to perform manual integration.没有关于怎样进行手动积分的规程。

实验室数据完整性已成FDA检查制药企业的一把利器，其中一条关于随意手动积分或者无书面程序规定手动积分，说明了FDA本身并不是不认可手动积分，而是要求有操作规程规定什么情况可以手动积分，如何积分，并且应保存并记录积分参数。

CFDA紧跟FDA的步伐，在2016年度多次飞检中，开具多条数据完整性方面的缺陷，收回多张GMP证书。

关于手动积分并没有开具缺陷，制药企业应防患于未然，提前把手动积分管理好。

一、关于手动积分的指南关于手动积分，并没有指南给出明确的定义。

笔者只查到有两篇生物样本分析的方法验证指南规定了再积分（Reintegration）的注意事项。

FDA的2001年定稿指南 Bioanalytical Method Validation，及相应的2013年草案指南也有类似的要求。

生物样本分析的方法验证2013草案指南，第节“样本数据再积分”规定：SOP应该确定再积分的标准，和怎样进行再积分；应清楚描述、并记录再积分的理由；应报告原始和再积分数据。

第节还规定：再积分数据应有管理人员授权再积分。

EMA的2011年指南 Guideline on bioanalytical method validation，第节规定：应该有SOP描述色谱的积分和再积分。

应在分析报告中讨论偏离这个SOP的任何偏差。

应该记录色谱积分、再积分的积分参数、初始积分数据、最终积分数据，并在要求时立即可得。

二、什么情况下可以进行手动积分1）低分离度或低响应；2）流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小；?3）运行过程中，出现异常峰；?4）软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误（峰未积分和错误识别峰）；5）由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降（由于某些梯度程序）、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。

三、手动积分的权限及操作操作员在数据系统自动积分不正确时，领取手动积分处理报告表并填写，手动积分申请被QC经理批准后由QC经理或QC组长（若有）或其指定人员（一般是指经验丰富的资深QC）方可进行手动积分。

新规下HPLC色谱图积分方法的关键点

新规下HPLC色谱图积分方法的关键点色谱积分方法，最近几年控制的比较严格，官方审计的时候甚至有要求将积分方法固定在SOP中，任何的积分方法修改都要经过批准。

本文我们来探讨积分的那些事吧。

一、定义1、积分指在信号中确定峰并计算其大小，积分包括以下操作及步骤：识别、校正、定量。

2、积分事件的参数控制对于某个信号进行积分时，软件将识别每个峰的开始和结束时间，并用竖线标记这些点，寻找每个峰的峰顶点，确定保留时间/迁移时间，建立基线，以及计算每个峰的峰面积、峰高和峰宽。

这些过程积分事件的参数控制。

3、自动积分自动积分功能为设置初始事件提供开始点。

自动积分功能设置以下参数：初始斜率灵敏度（阈值）、初始峰高、初始峰宽、初始最小峰面积。

4、手动积分此类型的积分允许对选定的峰或峰组进行积分，在指定的手动积分范围内，将忽略此软件的事件积分（初始最小峰面积除外）。

如果手动积分出来的一个或多个峰低于最小峰面积阈值，则此积分将被废弃。

手动积分时间使用绝对时间值。

它们不会为信号漂移作调整。

在报告中。

手动积分提供以下功能：划基线：指定为一个峰或一组峰划基线的位置；负峰：指定何时将基线以下的面积当作负峰处理；切线撇去：计算从主峰切线撇去的峰面积；分裂峰：指定用垂线分裂峰的点；删除峰：从积分结果中删除一个或多个峰。

二、积分参数无论是Agilent液相还是waters液相，自动积分主要是修改以下4个积分参数实现的，具体如下：1> 斜率灵敏度（Slope Sensitivity）也称阈值，指设置信号斜率的值，该斜率用于识别积分过程中峰的起点和终点。

如何信号斜率大于“斜率灵敏度”值，将建立峰起点，如果信号斜率降到“斜率灵敏度”以下，将建立峰止点。

设置值越低，峰响应越灵敏，当然，不同品牌的仪器对设置值的响应程度会有所区别，一般情况下，岛津液相斜率灵敏度的修改对积分效果产生的影响较大，相对来说，Agilent 和waters敏感度较低；2、峰宽值(PeakWidth)用于控制积分器的选择性以区分峰与基线噪音。

有关物质积分原则

有关物质积分原则
- 目的：规范仪器分析QC在分析图谱时的积分操作。

- 定义：对某个信号进行积分时，识别每个峰的开始和结束时间，寻找峰的顶点，确定保留时间，计算每个峰的峰面积、峰高和峰宽。

- 手动积分的权限及操作：操作人员在数据分析系统自动积分操作不正确时，立即通知QC主管和班长。

只有班长和QC主管亲自操作或其指定的资深化验员（在本单位连续从事色谱分析工作3上者）方可进行手动积分。

- 手动积分注意事项：同一次检验的所有标准品、工作对照品、样品等必须使用同一方法进行手动积分；手动积分结束后，打印出手动积分过图谱，并在图谱上写明手动积分的原因及采用的方式；QC主管复核完整数据，找出原因以避免再次发生；手动积分图谱要保存于计算机中，不得删除或修改。

物质积分原则是确保物质分析结果准确性的重要保障，在进行积分操作时，应严格遵守相关规定，确保积分的准确性和可靠性。

相当精要的HPLC操作说明

一数据采集(方法和运行控制界面)1 开机: 开电脑--开所有模块电源,等30 秒--点击工作站图标(Instrument1 Online),进入工作站--将左边绿色的模块添加到右边.( 检查视图下的6 个√;检查视图下的“短菜单”; 信号窗口已打开)2 准备: 点击总开关按钮,打开仪器所有模块--打开冲洗阀--设置泵流量为2.5mL/min,依次对四个通道排气泡--设置泵流量为0,关闭冲洗阀3 方法: 编辑一个方法,或调用一个已经编辑好的方法(方法—调出方法)① 方法—编辑完整方法,留下“仪器/采集”② 泵: 流量,停止数据采集时间,溶剂比例,梯度③ 自动进样器: 进样体积;洗针程序(洗瓶的位置)④ 柱温箱: 温度⑤ 检测器: 波长*⑥方法—另存为方法,給方法取一个名字4 样品:① 手动进样: 运行控制—样品信息,输入数据文件名;子目录② 自动进样:A 序列—序列参数,输入数据文件名;子目录B 序列—序列表,输入样品瓶位置;进样次数*C 序列—另存为序列,给序列取一个名字5 准备: 等待仪器处于准备好的状态① 仪器状态栏变为绿色,显示就绪② 信号窗口中基线平稳6 进样:① 手动进样: 在“Load”位置用进样针将样品注入进样口,将进样器扳到“Inject”位置② 自动进样: 点击左上角“三个瓶子”图标,点击Start7 关机: 冲洗柱子(一般先用水冲5--10 分钟,再用甲醇冲20--25 分钟)--点击总开关按钮,关闭仪器所有模块--关工作站--关所有模块电源--关电脑二数据分析1 视图—数据分析,切换至数据分析界面2 文件—调用—方法,调出要分析的谱图所用的方法3 文件—调用信号,调出要分析的谱图4 图形—信号选项,做谱图显示优化:一般在“范围”选择“满量程”5 积分—积分事件,做积分优化① 修改斜率灵敏度,得到合适的基线② 修改最小峰高或最小峰面积,删除杂峰(每次修改过后点击积分—积分,重新积分)③ 点击“蓝色的√”图标,保存积分参数并退出5 报告—设定报告,在“计算”选择“面积百分比”6 文件—保存—方法,保存方法7 报告—打印报告,打印面积百分比报告三定量分析(外标法)1 按照数据分析的操作做好谱图显示优化和积分优化2 文件—调用信号,调出第一个浓度的谱图3 校正—新建校正表--直接点击“确定”—输入化合物的名字和浓度—点击“确定”.第一级校准曲线已经建立好了4 文件—调用信号,调出第二(n)级浓度的谱图5 校正—添加级—直接点击“确定”—输入化合物的第二(n)级浓度—点击“确定”.二级校准曲线已经建立好了6 重复4 和5,直到所有级别都已经输入到表格中7 校正—校正设置,输入浓度单位8 报告—设定报告,在“计算”选择“外标法”9 文件—保存—方法,保存方法10 报告—打印报告,打印外标定量报告四使用技巧1 快照: 文件—快照,截取当前正在运行的方法所产生的谱图2 多谱图比较:① 文件—调用信号,调出第一个谱图② 文件—重叠信号,调出第二(n)个谱图③ 图形—信号选项, 在“量程”下选择“全部使用相同量程”A 在“版面”下选择“分别显示”,几个谱图分开显示B 在“版面”下选择“重叠显示”,几个谱图重叠显示3 手动积分(在积分界面下):① 文件—调用信号,调出要分析的谱图② 点击“红色的×”图标,再点击谱图上已经积分的峰,让这个峰不积分点击“积分符号”图标,再用鼠标拖动基线,对峰做手动积分4 背景扣除① 文件—调用信号,调出要分析的谱图② 文件—扣除空白运行,调入背景谱图,同时就进行了背景扣除5 打印有关性能报告(报告—设定报告)① 在“报告格式”下选择“性能报告”,再报告—打印报告,可得到理论塔板数,分离度,峰对称度② 在“报告格式”下选择“性能报告+噪音报告”,再回到报告—系统适应性—编辑噪音范围,选择噪音的时间段;再报告—打印报告,可得到信噪比测试报告五仪器维护1 溶剂和样品一定要过滤2 流动相使用前一定要脱气3 用缓冲盐时加seal-wash.且缓冲盐接 A 通道,用完后一定要马上用水冲洗.定期用水冲洗4 防止溶剂瓶内过滤器的堵塞.(35%硝酸浸泡1 小时,水冲洗至中性)5 及时更换冲洗阀的滤芯即过滤白头(冲洗阀打开时5mL/min 流量下压力超过10bar)6 关机前一定要把柱子冲洗干净.一般水5--10 分钟,甲醇20--25 分钟7 长时间不用的柱子,6 个月之内一定要拿出来冲洗一次(最好3 个月)8 灯的更换.9 手动进样器的清洗10 真空脱气机:不能存放纯水在内超过一周。

033色谱系统数据积分处理标准管理规程(完整资料).doc

色谱系统数据积分处理标准管理规程1、目的：为了规范化验室色谱软件正确的积分方法，确保检测数据的准确性、完整性和可追溯性,制定本规程。

2、适用范围：本规程适用于实验室内色谱的所有积分的管理。

3、责任者：质量管理部、中心化验室4、管理规程4.1化验室色谱系统数据处理积分的定义及分类4.1.1定义积分是指色谱软件定量测定峰面积或峰高的过程。

4.1.2分类4.1.2.1自动积分自动积分是指采用色谱软件内臵的积分事件设臵积分参数进行积分。

4. 1.2.2手动积分手动积分是指采用手动积分工具进行积分。

4.2色谱系统数据处理积分的基本概念和术语4.2.1色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elutionprofile)。

4.2.2基线(baseline)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。

一般应平行于时间轴。

4.2.3噪音(noise)——基线信号的波动。

通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。

4.2.4漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。

主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。

4.2.5色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。

流出曲线上的突起部分。

正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。

不对称色谱峰有两种。

4.2.6前延峰(leadingpeak)和拖尾峰(tailingpeak)，前者少见。

4.2.7峰底—基线上峰的起点至终点的距离。

4.2.8峰高(peakheight，h)—峰的最高点至峰底的距离。

4.2.9峰宽（peakwidth，W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。

W=4σ。

4.2.10半峰宽（peakwidthathalf-height，Wh/2)—峰高一半处的峰宽。

离子色谱峰手动积分

离子色谱峰手动积分
离子色谱峰手动积分是指在离子色谱分析中，通过手动的方式对色谱峰进行峰面积的计算和积分。

下面是一些进行离子色谱峰手动积分的基本步骤：
1. 首先，通过离子色谱仪获得色谱图，在图上可以观察到各个峰的形状和位置。

2. 确定需要进行积分的目标峰，通常是某个特定的溶质或化合物。

3. 使用直尺或计算机软件等工具，手动测量目标峰的起点和终点，并记录下对应的峰宽。

4. 在测量的过程中，要注意确保起点和终点的选择准确、合理，并尽可能避免与其他峰的重叠。

5. 根据峰的起点和终点的位置以及峰宽，计算出目标峰的峰面积。

可以使用简单的几何图形计算方法，如矩形法、梯形法或高斯拟合法等。

6. 将获得的峰面积与样品的浓度或其他相关参数进行关联，从而得到目标物质的定量结果。

需要注意的是，手动积分可能存在主观性和人为误差，因此在实际操作中，为了提高准确性和可重复性，常常借助计算机软件等自动积分的工具来完成峰面积的计算。

这样可以更精确地获得离子色谱分析结果，并提高分析的可靠性。

色谱图手动积分操作规程

色谱图手动积分操作规
程
TTA standardization office【TTA 5AB- TTAK 08- TTA 2C】
1.目的：建立色谱图手动积分操作规程，使操作者能够正确地对色谱图手动积
分
2.适用范围：适用于色谱图需要手动积分的情况
3. 标准依据：中国药典2015版及GMP附录内容
4.内容：
可以进行手动积分的情况
1）低分离度或低响应；
2）流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小；
3）色谱柱性能：运行过程中，出现异常峰；
4）软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误（峰未积分和错误识别峰）；
5）由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降（由于某些梯度程序）、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。

手动积分的权限及操作
操作员在数据系统自动积分不正确时，报告QC负责人、质量授权人，经批准后由其指定人员（一般是指经验丰富的QC人员）进行手动积分。

并在相应图谱上记录手动积分过程，由检验人、手动积分人、QC负责人、质量授权人签字确认后，使用检验结果。

手动积分注意事项
1）手动积分不能通过以下动作来使数据符合标准要求：减少峰（减少峰面积）；增加峰（增加峰面积）；改变峰高；
2）同一次检验的所有标准品、工作对照品、样品等必须使用同一方法进行手动积分。

3）手动积分结束后，应打印自动积分图谱和手动积分图谱提交QC部门负责人或质量部负责人审核；并制定相应的措施来避免类似事件。

******************文件终结符。

色谱积分方法

色谱积分方法色谱积分方法，最近几年控制的比较严格，官方审计的时候甚至有要求将积分方法固定在SOP中，任何的积分方法修改都要经过批准。

本文我们来探讨积分的那些事吧。

一、定义1、积分指在信号中确定峰并计算其大小，积分包括以下操作及步骤：识别、校正、定量。

2、积分事件的参数控制对于某个信号进行积分时，软件将识别每个峰的开始和结束时间，并用竖线标记这些点，寻找每个峰的峰顶点，确定保留时间/迁移时间，建立基线，以及计算每个峰的峰面积、峰高和峰宽。

这些过程积分事件的参数控制。

3、自动积分自动积分功能为设置初始事件提供开始点。

自动积分功能设置以下参数：初始斜率灵敏度（阈值）、初始峰高、初始峰宽、初始最小峰面积。

4、手动积分此类型的积分允许对选定的峰或峰组进行积分，在指定的手动积分范围内，将忽略此软件的事件积分（初始最小峰面积除外）。

如果手动积分出来的一个或多个峰低于最小峰面积阈值，则此积分将被废弃。

手动积分时间使用绝对时间值。

它们不会为信号漂移作调整。

在报告中。

手动积分提供以下功能：A、划基线：指定为一个峰或一组峰划基线的位置；B、负峰：指定何时将基线以下的面积当作负峰处理；C、切线撇去：计算从主峰切线撇去的峰面积；D、分裂峰：指定用垂线分裂峰的点；E、删除峰：从积分结果中删除一个或多个峰。

二、积分参数无论是Agilent液相还是waters液相，自动积分主要是修改以下4个积分参数实现的，具体如下：1、斜率灵敏度（Slope Sensitivity）也称阈值，指设置信号斜率的值，该斜率用于识别积分过程中峰的起点和终点。

如何信号斜率大于“斜率灵敏度”值，将建立峰起点，如果信号斜率降到“斜率灵敏度”以下，将建立峰止点。

设置值越低，峰响应越灵敏，当然，不同品牌的仪器对设置值的响应程度会有所区别，一般情况下，岛津液相斜率灵敏度的修改对积分效果产生的影响较大，相对来说，Agilent和waters敏感度较低；2、峰宽值（Peak Width）用于控制积分器的选择性以区分峰与基线噪音。

色谱系统数据积分管理方案计划规范标准管理方案计划规章

-!色谱系统数据积分处理标准管理规程1、目的：为了规范化验室色谱软件正确的积分方法，确保检测数据的准确性、完整性和可追溯性,制定本规程。

2、适用范围：本规程适用于实验室内色谱的所有积分的管理。

3、责任者：质量管理部、中心化验室4、管理规程4.1化验室色谱系统数据处理积分的定义及分类4.1.1定义积分是指色谱软件定量测定峰面积或峰高的过程。

4.1.2分类4.1.2.1自动积分自动积分是指采用色谱软件内臵的积分事件设臵积分参数进行积分。

4. 1.2.2手动积分手动积分是指采用手动积分工具进行积分。

4.2色谱系统数据处理积分的基本概念和术语4.2.1色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elutionprofile)。

4.2.2基线(baseline)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。

一般应平行于时间轴。

4.2.3噪音(noise)——基线信号的波动。

通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。

4.2.4漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。

主要由于操作条件如电压、温-! 度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。

4.2.5色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。

流出曲线上的突起部分。

正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。

不对称色谱峰有两种。

4.2.6前延峰(leadingpeak)和拖尾峰(tailingpeak)，前者少见。

4.2.7峰底—基线上峰的起点至终点的距离。

4.2.8峰高(peakheight，h)—峰的最高点至峰底的距离。

4.2.9峰宽（peakwidth，W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。

W=4σ。

4.2.10半峰宽（peakwidthathalf-height，Wh/2)—峰高一半处的峰宽。

HPLC手动积分原则

实验室数据完整性已成FDA检查制药企业的一把利器，其中一条关于随意手动积分或者无书面程序规定手动积分，说明了FDA本身并不是不认可手动积分，而是要求有操作规程规定什么情况可以手动积分，如何积分，并且应保存并记录积分参数。

CFDA紧跟FDA的步伐，在2016年度多次飞检中，开具多条数据完整性方面的缺陷，收回多张GMP证书。

关于手动积分并没有开具缺陷，制药企业应防患于未然，提前把手动积分管理好。

一、关于手动积分的指南关于手动积分，并没有指南给出明确的定义。

笔者只查到有两篇生物样本分析的方法验证指南规定了再积分（Reintegration）的注意事项。

FDA的2001年定稿指南Bioanalytical Method Validation，及相应的2013年草案指南也有类似的要求。

生物样本分析的方法验证2013草案指南，第III.C节“样本数据再积分”规定：SOP应该确定再积分的标准，和怎样进行再积分；应清楚描述、并记录再积分的理由；应报告原始和再积分数据。

第VII.D节还规定：再积分数据应有管理人员授权再积分。

EMA的2011年指南Guideline on bioanalytical method validation，第5.5节规定：应该有SOP描述色谱的积分和再积分。

应在分析报告中讨论偏离这个SOP 的任何偏差。

应该记录色谱积分、再积分的积分参数、初始积分数据、最终积分数据，并在要求时立即可得。

二、什么情况下可以进行手动积分？1）低分离度或低响应；2）流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小；3）运行过程中，出现异常峰；4）软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误（峰未积分和错误识别峰）；5）由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降（由于某些梯度程序）、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。

手动积分管理规程

1 目的：制定气相和高效液相色谱软件正确的手动积分方法，确保检测数据的准确性、完整性和可追溯性。

2 范围：适用于气相和高效液相色谱的所有手动积分3 职责：检验员应按规定正确执行手动积分方法，QA、QC主管、软件管理员监督和管理，检验人员正确执行本规定。

4 内容：手动积分的定义：手动积分是数据用户使用色谱软件，手动设置基线对峰高或峰面积进行积分的数据处理行为。

允许手动积分条件：有如下情况但不限于以下涉及的，需要检验员根据实际情况辨别。

烃类存在，自动积分没有正确积分时，需要手动积分，常使用色谱峰垂直切割、水平切割及切线分割等方法切割后用积分法测定色谱峰面积的方法（具体图例见附件）。

手动积分权限及操作：检验员在处理某产品检验批次数据时，需要进行手动积分时，报告仪器组组长，经组长核对后再决定是否需要进行手动积分。

如果不需要手动积分，就照自动积分方法进行数据处理；如果需要手动积分，检验人员填写手动积分申请表，仪器组组长审核批准后协同检验员调整积分参数，共同完成本次手动积分的操作。

手动积分方法：放大图谱，辨别是否是基线噪音。

检验员必须以正确的方式进行手动积分。

将峰的面积去掉“峰消除”、添加“峰扩大”和改变峰高的手动积分都不符合标准。

同一次检验的所有标准品、工作对照品和样品等必须用同一方法进行手动积分。

手动积分的文件归档：电脑中必须保存原始图谱和手动积分图谱。

打印原始图谱和手动积分图谱并标示清楚，检验员签上姓名和日期。

审核者审核电子数据和打印数据，确认无误后，在原始图谱和手动积分图谱上签上姓名和日期。

将每次手动积分图谱和原图谱打印出来附在申请表及检验原始批记录后面，随同批检验记录一起归档。

5 附件色谱图例1:分裂峰自动积分图谱手动积分图谱色谱图例2: 主峰与肩峰重复积分自动积分图谱手动积分图谱色谱图例3: 基线噪声自动积分图谱手动积分图谱色谱图例4: 负峰自动积分图谱手动积分图谱色谱图例5: 峰上升或下降自动积分图谱手动积分图谱色谱图例6: 峰拖尾严重自动积分图谱手动积分图谱色谱图例7: 烃基的积分自动积分图谱手动积分图谱6 相关记录R-SOP-QC-018A《手动积分申请表》7 修订历史。

有关物质积分处理原则

有关物质积分处理原则目的：为规范仪器分析QC在分析图谱时的积分操作，特制定本规范，使仪器分析QC有章可循。

二、定义自动积分：对某个信号进行积分时，识别每个峰的开始和结束时间；寻找峰的顶点。

确定保留时间；计算每个峰的峰面积、峰高和峰宽。

该过程是由积分事件里的积分参数控制。

手动积分：定义峰的开始点和结束点，并在定量和报告包括重新计算的面积。

Agilent ChemStation“手动积分”提供以下功能：1.划基线：指定要为一个峰或一组峰划基线的位置，也可以指定是否在所有的峰谷点处都自动分离给定范围内的峰。

2.负峰：指定何时将基线以下的峰面积当做负峰处理，也可以指定是否在所在的峰谷点处都自动分离给定范围内的峰。

3.切线撒去：计算从主峰切线撇去的峰面积。

切线撒去的峰面积将从主峰的峰面积中扣除。

4.分裂峰：指定用垂线分裂峰的点。

5.删除峰：从积分结果中删除一个或多个峰。

三、遇到下列情况可手动积分（1）分离度低或响应低；（2）流动相有问题，基线噪声大，素乱且保留时间变化小的，（3）样品运行中，出现异常峰（4）软件积分局限性，如由于软件参数的设置导致未积分，峰起点和终点间出现肩缝和异常的基线漂移，软件错误（峰未积分和错误识别峰）（5）由于样品母体杂质多导致的复杂色谱图：裂缝、目标杂质同时洗脱/肩峰、基线噪声、负峰、基线上升或下降（梯度洗脱照成）、峰严重拖尾导致自动积分不正确。

四、手动积分的权限及操作操作人员在数据分析系统自动积分操作不正确时，立即通知QC主管和班长。

由班长和QC主管亲自操作或其指定的资深化验员（在本单位连续从事色谱分析工作3年以上者）方可进行手动积分。

五、手动积分注意事项：（1）手动积分不能通过试图通过以下动作来数据符合标准要求：减少峰、减少峰面积、增加峰、增加峰面积、改变峰高。

（2）同一次检验的所有标准品、工作对照品、样品等必须使用同一方法进行手动积分。

（3）手动积分结束后，打印出手动积分过图谱，并在图谱上写明手动积分的原因及采用的方式。