实验一 土壤脲酶活性测定

3、在过滤的间隙时间取两个50ml比色管，各加入10,00ml 4%硼酸溶液。现将50ml比色管在冷凝管下，使冷凝管出口 尖端插入硼酸溶液中，准备蒸馏。 4、过滤完毕后，迅速往蒸氨瓶内注入20ml 4N 的NaOH溶液， 立即塞上塞子。接通冷凝水，加热蒸馏。 5、当馏出液达到50ml左右，停止蒸馏。取下比色管，将管 内接收液定量转入到50ml锥形瓶中加4-5滴指示剂（甲基 红-亚甲基蓝混合液），用0.1N HCL滴定瓶内的氨，滴定 到淡紫色为终点。记录试样和对照消耗的HCL体积V和V0 （ml）。
对于脲酶，它能促使尿素水解转化成氨、二氧化碳，反 应如下 :
在土壤中，在pH值为6.5~7.0Biblioteka Baidu脲酶活性最大，通过测 定释放出的NH3量，可以确定脲酶的活性。土壤中脲酶活 性一般以37℃培养48小时每克土壤释放出的NH3–N毫克数 表示。
三、步骤概要
1、取二个250ml锥形瓶，各加入10.0克土壤，再各加入10ml 混合磷酸盐缓冲溶液（pH6.8）。摇动处理15分钟，使均 匀。在往第一瓶内加入10ml浓度10%的尿素溶液，再经屏 内容物充分混匀，作为试样。第二瓶内加入10ml蒸馏水， 作为对照。将两个瓶置于37℃培养箱中培养48小时（要塞 上纱布塞子）。 2、培养结束后，往两个瓶内各加入50ml 2N KCL 溶液。塞 紧后再振荡30分钟。到时立即将试样过滤（滤纸可以用蒸 馏水润湿）到蒸氨瓶内。
实验一 土壤脲酶活性测定
一、实验目的
1. 掌握土壤脲酶活性测定第一种方法，了解所取土壤的脲酶 活性。 2. 了解尿素这一有机物在土壤环境中的降解转化。
二、简单原理
酶是一类具有蛋白质性质的、高分子的生物催化剂。土 壤酶 是活的有机体所合成的，或者在其生长过程中分泌 与体外，或者在其死亡后自溶而释放出。所有的酶均能显 示其活性。显著的酶的特征之一是其催化反应的专一性。 例如，脲酶对尿素的催化降解就及其专一。土壤中的酶的 来源有二种。一是来自于高等植物根系分泌及土壤中动植 物残体分解。二是来源于土壤微生物的生命活动。土壤酶 可分为胞内酶和胞外酶两种。胞外酶或溶出后的胞内酶进 入土壤结构后，均具有相对稳定性，如能抗微生物分解和 抗热稳定性等。它们以三种形式存在于土壤中，一是以吸 附状态贮积于土壤中。二是于土壤腐殖质复合存在。三是 以游离状态存在。
四、计算
式中，W为称取的样品重（g），N为HCL当量浓度。
五、问题讨论
1、除了测定尿素降解产物氨外，还能有什么方法可以测定 脲酶的活性？ 2、实验中为什么要加入甲苯？ 3、步骤4中为什么要迅速加入NaOH？ 4、如果蒸氨时吸收液倒吸到冷凝管中如何解决？