细胞工程实验报告
2021 细胞工程实验报告
2021 细胞工程实验报告细胞工程试验报告要求：1、因需上报细胞工程实验成绩，实验报告要求每人一份。
2、请使用实验报告纸、手写（不能打印）。
实验1 细胞培养室的设置和无菌操作一、【实验原理】细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。
三室既相互连接又相对独立，各自完成培养过程中的不同操作。
二、【实验目的】①了解培养室的设置和设备。
②学习无菌概念和无菌操作要领。
三、【操作步骤】1．实验室设置（1）配液室（2）准备室（3）培养观察室（4）储藏室（5）清洗灭菌室 2．实验室常用设备（1）准备室的设备（2）配液室的设备（3）细胞培养室的设备 3．无菌操作（1）无菌室的灭菌：①紫外灯无人时就要打开；②进无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩；③每周清洗消毒一次；④所用物品要以外科手术方式严格消毒；—1—⑤室内台面要要保持洁净，做完实验后，用75％酒精或千分之三新洁尔灭棉球擦拭超净工作台的台内、边台的台面、倒置显微镜的载物台等；⑥所用物品要一次性准备好；⑦瓶口要用酒精火焰消毒；⑧尽量减少出入。
（2）实验人员的无菌准备：①肥皂洗手②穿好隔离衣③酒精棉球擦手四、【实验报告】画出本细胞培养室的草图，标明各室的必需设备。
（1）准备室的设备①双蒸馏水蒸馏器②酸缸③烤箱④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌。
不同物品其有效灭菌压力和时间不同。
⑤储品柜1：放置未消毒物品。
⑥储品柜2：放置已消毒物品。
⑦包装台：灭菌前的包装用。
准备室注意事项：①预防蒸馏器被烤干。
②放置水池中的水渗出。
③勿将酸液溅到衣物或地面。
④勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。
⑤已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
（2）配液室的设备①天平（扭力天平和电子天平）：称量用②pH计：③磁力搅拌器：①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，徐徐通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
细胞合成工程实验报告
实验日期： 2023年11月15日实验地点：生物技术实验室实验目的：1. 掌握细胞合成工程的基本原理和操作技术。
2. 学习如何利用基因工程技术改造细胞，使其能够合成特定的化合物。
3. 通过实验验证改造细胞的合成能力。
实验原理：细胞合成工程是利用基因工程技术，将具有特定功能的基因导入细胞中，使细胞能够合成特定的化合物。
通过调节基因表达，可以控制细胞合成产物的产量和质量。
实验材料：1. 实验细胞：大肠杆菌（E. coli）2. 基因构建工具：DNA连接酶、限制性内切酶、质粒载体等3. 实验试剂：DNA模板、引物、PCR试剂、抗生素等4. 实验仪器：PCR仪、电泳仪、离心机、培养箱等实验步骤：一、基因克隆与构建1. 设计并合成引物，用于扩增目的基因。
2. 使用PCR技术扩增目的基因。
3. 使用限制性内切酶切割目的基因和质粒载体。
4. 将目的基因与质粒载体连接，形成重组质粒。
5. 将重组质粒转化大肠杆菌，筛选阳性克隆。
二、细胞培养与转化1. 将阳性克隆接种于含有抗生素的培养基中，培养过夜。
2. 收集菌液，制备感受态细胞。
3. 将重组质粒与感受态细胞混合，进行电转化或化学转化。
4. 在含有抗生素的培养基中培养转化细胞，筛选阳性克隆。
三、基因表达与产物检测1. 将阳性克隆接种于含有诱导剂的培养基中，诱导基因表达。
2. 收集培养液，进行蛋白质检测。
3. 使用SDS-PAGE电泳分析蛋白质条带，确定目标蛋白的表达。
四、产物纯化与鉴定1. 对目标蛋白进行纯化，去除杂质。
2. 使用Western blot等方法鉴定纯化蛋白。
实验结果：1. 成功构建了重组质粒，并转化大肠杆菌。
2. 通过PCR和测序验证了重组质粒的正确性。
3. 通过SDS-PAGE电泳和Western blot检测，成功表达了目标蛋白。
4. 对目标蛋白进行纯化，并鉴定了其特性。
实验讨论：本次实验成功实现了细胞合成工程的基本操作，从基因克隆、细胞转化到基因表达和产物检测，均取得了预期的结果。
陕师大细胞工程实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞工程的基本原理和实验技术。
2. 学习细胞培养、细胞融合、基因工程等细胞工程技术的操作方法。
3. 培养学生的实验操作能力和科学思维。
二、实验原理细胞工程是利用现代生物技术手段，对细胞进行改造、培养和应用的一门新兴学科。
本实验主要涉及以下原理：1. 细胞培养：在适宜的培养条件下，使细胞在体外生长、繁殖，为后续实验提供细胞材料。
2. 细胞融合：将两个或多个细胞合并成一个细胞的过程，可用于基因转移、细胞治疗等。
3. 基因工程：通过分子生物学技术对基因进行改造，实现特定性状的表达。
三、实验材料、试剂和仪器设备1. 实验材料：人胚胎肾细胞（HEK293）、小鼠成纤维细胞（NIH3T3）、小鼠血清、胰蛋白酶、DMSO等。
2. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、Hoechst 33342染料等。
3. 仪器设备：细胞培养箱、倒置显微镜、离心机、PCR仪、凝胶成像系统等。
四、实验步骤1. 细胞培养（1）将HEK293和NIH3T3细胞分别接种于培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。
（2）待细胞长满瓶底后，用胰蛋白酶消化细胞，按1:1的比例将两种细胞混合。
（3）将混合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。
2. 细胞融合（1）将混合细胞培养至对数生长期，加入适量的聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合。
（2）将融合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。
（3）用Hoechst 33342染料检测融合细胞。
3. 基因工程（1）设计并合成目的基因的引物，进行PCR扩增。
（2）将扩增的目的基因克隆到载体上。
（3）将重组质粒转化到HEK293细胞中。
（4）用荧光素酶报告基因检测目的基因的表达。
五、实验结果与分析1. 细胞培养HEK293和NIH3T3细胞在培养过程中生长良好，细胞形态规则，细胞活力较高。
2. 细胞融合Hoechst 33342染料检测结果显示，部分细胞核融合，表明细胞融合实验成功。
3. 基因工程荧光素酶报告基因检测结果显示，目的基因在HEK293细胞中成功表达。
细胞工程实验
实验一细胞工程实验室、器皿的洗涤与灭菌一、目的要求通过实验，培养学生良好的卫生习惯、树立组织培养的无菌意识；掌握组织培养实验室器皿的洗涤与灭菌方法。
二、材料与用具2%新洁尔灭、高锰酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、喷雾器、各种培养器皿、工作服、口罩和手套等。
三、方法步骤1、地面、墙壁和工作台的灭菌将配好的2%新洁尔灭溶液倒人喷雾器中，对地面、墙壁、角落均匀地喷务。
在喷房顶时间，注意不要让药液滴入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌首先将房子关闭，然后用10ml甲醛和5g高锰酸钾的配比液进行熏蒸。
操作时要戴好口罩和手套，用甲醛与高锰酸钾配比时要注意避开烟雾。
3、培养器皿的洗涤与灭菌将培养器皿先用肥皂水或洗衣粉浸泡几小时，然后用清水冲洗，最后用三级水和一级水各冲3遍，烘干后备用。
四、实验报告1、将本次实验内容整理成实验报告2、简述组织培养实验室的灭菌过程与注意事项。
实验二:细胞培养基的配制及灭菌一、目的要求：1．了解基本设备以及有关仪器的用途与功能。
2．通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。
3．通过掌握培养基对母液制备及常用培养基的配制和灭菌方法，为植物组织培养准备合适的营养条件。
4．每四人一组，每人接种一个三角瓶，2支试管；每两组制备一套培养基母液。
二、材料用具：每组所需器皿：50ml三角瓶×8 ；试管×16试剂瓶×5（200ml、2×1000ml、100ml、500ml）容量瓶烧杯量筒漏斗玻璃棒移液管pH试纸称量纸封口膜橡皮筋标签纸记号笔所需仪器：高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、百分之一与万分之一天平、电炉、冰箱、所需药品：重铬酸钾、浓硫酸等、CaCl2·2H2O，KNO3，MgSO4·7H2O，NH4NO3，KH2PO4，Na2—EDTA，FeSO4·7H2O，MgSO4·4H2O，Zn SO4·7H2O，H3BO3，KI，NaMoO4·2H2O，CuSO4·5H2O，CoCl2·6H2O，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，肌醇，蔗糖，琼脂，HCL,NaOH,酒精。
生物技术细胞工程实验报告
课程学习报告课程名称：细胞工程大实验实验一培养基母液和培养基的配置实验二胡萝卜再生体系的建立实验三水稻再生体系的建立实验四水稻悬浮细胞系的建立及胚状体的诱导与观察实验五水稻遗传转化实验六烟草的组织培养实验七百合组织培养实验八原生质体游离、融合与培养实验九玉米幼胚再生系统的建立实验十植物快速繁殖实验1 培养基母液和培养基的配制摘要：培养基是供植物离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质，相当于人公配制的“土壤“，在植物组织培养过程中，外植体生长所必需的营养成分、生长因子、理化环境等主要由培养基提供。
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。
这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
关键词：培养基母液、培养基、无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质、有机附加物培养基实际一是一个人工模拟的植物生长、发育环境。
在植物组织培养过程中，外植体生长所必需的营养万分生长因子、理化环境等主要同培养基提供。
在植物组织培养中，选用适当的培养基，是组织培养成功与否至关重要的因素。
不同植物材料对培养基的要求不尽相同，进行一系列的预培养和筛选是很必要的。
由于离体的培养材料不像完整植物体那样具有自我平衡的能力，所以在配制培养基时，离子失衡或某种物质过量都可能导致培养物生长不良或导致死亡。
另外，组织培养物的脱分化、分化等状态的调控，次生代谢物的产出等都要通过调节培养基成分来实现。
本实验的目的是要学习并掌握培养基母液和培养基配制的方法，掌握不同物质浓度按比例稀释和转化的计算方法。
1 材料与方法步骤1.1试剂培养基母液（以MS 为例）：NH 4NO 3；KNO 3 ；CaCl 2.2H 2O ；MgSO 4.7H 2O ；KH 2PO 4；(NH4)2SO 4；H 3BO 3；KI ；MnSO 4.H 2O ；ZnSO 4.7H 2O ；NaMoO 4.2H 2O ；CuSO 4.5H 2O ；CoCl 2.6H 2O ；Na 2EDTA.2H 2O ；FeSO4. 7H2O ；甘氨酸；盐酸吡哆醇；盐酸硫氨素；烟酸；肌醇；2，4—D ；6—BA ；NAA培养基：1N HCl ；1N KOH ； 标准pH 溶液（25℃下，pH4.01和pH6.08的标准溶液各100ml ）；蔗糖；琼脂；水解蛋白酶；谷氨酰胺；脯氨酸。
细胞及细胞工程实验
实验一细胞的凝集反应一、实验目的了解细胞膜的表面结构；二、实验原理凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。
三、实验用品1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架2 ．材料: 土豆块茎、2％鸡血红细胞3 ．试剂: 抗凝血剂（3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。
四、实验步骤1２％鸡血红细胞悬液制备取已加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。
2 土豆凝集素制备土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h（写具体时间，80min）3 细胞凝集反应制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管中加入0.5ml生理盐水，混合均匀并编号1%；在1%的试管中取0.5ml的细胞悬液于另一只试管中，并加入0.5ml的生理盐水，混合均匀编号0.5%；梯度稀释制备不同浓度的土豆悬浮液：取1ml的土豆凝集素悬浮液原液于其中一只试管中，并编号1×；另取0.5ml的土豆悬浮液原液于另一只试管中，加入0.5ml的PBS缓冲液，并编号0.5×；再取一只试管，加入1ml的PBS缓冲液，并编号0×；土豆凝集素１滴、２％鸡血红细胞液１滴载玻片上混匀，静置２０min（写实际时间，5min）思考题：1、生理盐水可以用蒸馏水代替吗？为什么？不能用蒸馏水代替。
生理盐水的渗透压与血浆的渗透压相当，用生理盐水是为了维持渗透压，保持细胞正常形态,防止发生细胞破裂。
动物细胞工程实习报告
动物细胞工程实习报告一、实习背景及目的动物细胞工程是一门综合性学科，涉及生物学、医学、生物工程等多个领域。
本次实习旨在让我们了解动物细胞工程的基本原理和技术方法，提高我们的实验操作能力，为今后的科研和工作打下坚实基础。
二、实习内容与过程1. 实习前的准备在实习开始前，我们参加了为期一周的理论学习，学习了动物细胞工程的基本原理、技术方法和实验操作流程。
同时，我们还学习了实验室安全知识，了解了各种实验仪器的作用和操作方法。
2. 实习过程实习过程中，我们分为若干小组，每组负责一个实验项目。
以下是本次实习的几个主要实验项目：（1）动物细胞培养我们使用了体外培养的人胚肝细胞作为实验材料，通过添加适当的培养基、血清等物质，保持了细胞的生长和增殖。
在实验过程中，我们学会了使用细胞计数器进行细胞计数，掌握了细胞培养的基本技术。
（2）动物细胞融合我们采用了电融合法将两种不同类型的动物细胞进行融合，观察了融合后的细胞特性。
通过这个实验，我们了解了细胞融合的原理和方法。
（3）动物细胞核移植我们进行了动物细胞核移植实验，将一个细胞的细胞核移入另一个去核的细胞中，观察了重组细胞的发育情况。
这个实验让我们认识了动物细胞核移植技术及其在生物工程中的应用。
（4）动物细胞载体构建我们利用质粒载体将目的基因导入动物细胞，观察了目的基因在细胞内的表达。
这个实验让我们了解了基因工程的基本原理和方法。
3. 实习成果通过本次实习，我们掌握了动物细胞培养、细胞融合、核移植、基因导入等技术方法，了解了动物细胞工程在生物科研和医学领域的应用。
同时，我们的实验操作能力和团队协作能力得到了提高。
三、实习体会与总结本次实习让我们对动物细胞工程有了更深入的了解，实验过程中的每一个步骤都离不开理论知识的支持。
同时，实践操作也让我们发现了理论知识的不足，促使我们更加努力地学习。
此外，实习过程中的团队协作也让我们学会了与他人共同解决问题，提高了我们的综合素质。
植物细胞工程实验报告
植物细胞工程实验报告学院：农学院班级： 07生物技术（2）班姓名：袁峰学号： B0704091时间： 2009年11月指导老师：莫庭辉老师目录实验一、培养基母液的配制实验二、培养基的配制与灭菌实验三、香蕉吸芽的组织培养实验四、烟草叶片的消毒、接种和培养实验五、柱花草外植体的消毒、接种和培养实验六、木薯外植体的消毒、接种和培养实验七、桉树外植体的消毒、接种和培养实验八、玉米不成熟胚的消毒、接种和培养实验九、花生成熟胚的消毒、接种和培养实验十、水稻盾片的消毒、接种和培养实验十一、洋葱的组织培养（自选实验）植物细胞工程实验一、实验目的1、了解植物组织培养技术的基本原理。
2、掌握植物材料灭菌、接种和培养。
3、学习培养基的配制与灭菌。
二、实验原理根据植物细胞具有全能性的特点，在人工的控制条件下，将植物的任何器官、组织或细胞，放在人工合成的培养基中进行培养，使其生长、分化并形成完整植株。
实验一、培养基母液的配制一、实验目的掌握培养基母液的配制。
在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。
二、实验试剂与仪器设备1、药品试剂：母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。
2、仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
三、实验内容（一）母液的配制1、大量元素母液的配制无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70℃)。
溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。
淮师大细胞工程实验
实验室安全守则一般规定1、上课第一天请先熟悉环境，察看紧急冲洗站、洗眼站、灭火器、急救箱及安全梯等的位置，牢记“安全”是进行任何实验最重要的准则。
2、在实验室內请穿着实验服，避免穿凉鞋、拖鞋。
留有长发者，戴帽套将头发捲入套內，或以橡皮筋束于后，以防止引火危险或污染实验。
3、在实验室内禁止吸烟、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服及杂物等。
4、所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得带出实验室。
每组分配的仪器、耗材请确定清点与保管，课程结束后如数清点缴回。
公用仪器请善加爱惜使用，实验前后，请把工作区域清理擦拭，并随时保持环境卫生。
5、实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作规程，注意上课所告知的注意事项。
实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实验程序。
打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。
实验后，确切记下自己的结果，严禁抄袭，确定关闭不用的电源、水、酒精灯及煤气等。
6、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。
实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验室过夜。
7、实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及电源，离开实验室前记得洗手。
8、任何意外事件应立即报告师长，并应熟知相关的应急措施。
药品1、使用任何药品，请先看清楚标示、注意事项，翻阅物质安全资料表，查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。
2、新配制的试剂请清楚注明内溶物、浓度、注意事事项及配制日期，为避免污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。
3、挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、-mercaptoethanol、酚等）要在通风橱中戴手套量取配制，取用完后随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。
4、有毒、致癌药剂例如acrylamide（神经毒）、ethidium bromide（突变剂）、SDS、秋水仙素请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，应养成洗手的好习惯。
植物细胞工程实验 (修改版)
植物细胞工程实验一 培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
二、实验器材电子天平（称量为0.0001g ）、电子天平（称量为0.01g ）、烧杯（500ml 、100ml 、50ml ）、容量瓶（1000ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、细口瓶（1000 ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、药勺、玻璃棒、电炉。
三、实验药品NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、 H 3BO 3、 MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、 Na 2MoO 4·2H 2O 、CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、Na 2-EDTA·2H 2O 、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B 6)、盐酸硫胺素(维生素B 1)、甘氨酸。
四、实验步骤每种母液均配制500ml ，各成分的质量如下： 1、大量元素母液的配制表1 MS 培养基大量元素母液制备序号 药品名称培养基浓度（mg/L ）扩大20称量(mg)备注1 NH 4NO 3 1650 16500 蒸馏水定容至500ml2 KNO3 1900 19000 3 CaCl 2·2H 2O 440 44004 MgSO 4·7H 2O 370 37005 KH 2PO 41701700各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍，用称量为0.01g 的电子天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到500ml 的容量瓶中，即为20倍的大量元素母液。
细胞工程综合实训报告
2010—2011学年第二实践学期细胞工程综合实训报告专业：班级：姓名：学号：2011年 9月1日实验日期：2011.7.4-2011.7.12实验地点：农学院生物技术实验室及农学院创新实验室蓝莓细胞悬浮培养一、实验目的（1）掌握蓝莓细胞悬浮系建立的方法和原理（2）学会对悬浮细胞培养物进行细胞计数及绘制细胞生长曲线二、实验材料蓝莓愈伤组织三、实验试剂MS液体培养基、三氧化铬、0.1%酚藏红花、0.1%荧光素双醋酸酯（FDA）四、实验仪器超净工作台、高压灭菌锅、旋转式摇床、水浴锅、倒置显微镜、镊子、酒精灯、100ml三角瓶、移液管、PH计、漏斗、不锈钢网、血细胞计数板五、实验步骤1、配制MS液体培养基500ml（平均分装在11个三角瓶中），高压灭菌，常温放置1-2天，观察无菌后备用。
2、超净台内，镊子夹取生长旺盛的蓝莓愈伤组织，夹碎放入含MS的培养瓶中，每瓶1-1.5g.扎紧瓶口。
3、将接种完毕的三角瓶置于旋转式摇床上。
100r/min,25-28℃条件下进行振荡培养。
4、培养6-10天后，进行第一次继代培养。
5、悬浮培养物的过滤：继代培养几天后，若仍含有较大的细胞团，则用适当孔径不锈钢网过滤，再将滤后的悬浮细胞继续培养。
6、细胞数目计算：取一定体积的细胞悬液，加入2倍体积的8%三氧化铬，置于70℃水浴处理15分钟。
冷却后，用移液管重复吹打细胞悬液，以使细胞充分分散。
混匀后，取一滴悬液置于细胞计数板上计数。
六、注意事项1、各步骤均需无菌操作！培养基、用具、器皿等要高压灭菌后方可使用。
2、如培养液浑浊或呈现乳白色，表明已污染。
3、每次继代培养时，应在倒置显微镜下观察培养物中各类细胞及其残余物的情况，有意识的留下圆细胞，弃去长细胞。
七、实验记录蓝莓愈伤组织悬浮培养松江鲈鱼细胞体外培养一、实验材料松江鲈，捕于鸭绿江。
透明质酸酶、II型胶原酶、碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、胰蛋白酶、L-15、MEM、DMEM/F-12培养基、胎牛血清、含羧甲基壳多糖（50ug/ml）、N-乙酰葡萄糖盐酸盐（50ug/ml）、碱性成纤维细胞生长因子（bEGF，10ng/ mL）、表皮生长因子( EGF , 10 ng/mL)。
植物细胞工程实习报告
一、前言随着生物技术的快速发展，植物细胞工程作为一门重要的生物技术领域，在我国得到了广泛的应用。
为了使同学们深入了解植物细胞工程的基本原理和操作方法，提高实践能力，我们开展了为期两周的植物细胞工程实习。
以下是实习报告的主要内容。
二、实习目的与意义1. 目的（1）了解植物细胞工程的基本概念、原理和操作方法；（2）掌握植物组织培养、愈伤组织诱导、再生植株培养等关键技术；（3）提高动手操作能力，培养团队协作精神；（4）为今后从事相关领域的研究和工作打下基础。
2. 意义（1）提高同学们对植物细胞工程的认识，激发学习兴趣；（2）培养同学们的实践能力，为今后从事科研工作打下基础；（3）增强同学们的团队协作意识，提高沟通能力；（4）促进生物技术在我国的发展。
三、实习内容1. 植物组织培养（1）实验材料：取自某蔬菜品种的茎段；（2）实验步骤：①制备MS培养基，添加植物激素；②将茎段切成一定长度的切段；③将切段接种到MS培养基上，放入培养箱中培养；④观察愈伤组织诱导、分化、生根等过程。
2. 愈伤组织诱导（1）实验材料：取自某花卉品种的叶片；（2）实验步骤：①制备MS培养基，添加植物激素；②将叶片切成一定大小的块状；③将块状叶片接种到MS培养基上，放入培养箱中培养；④观察愈伤组织诱导、分化、生根等过程。
3. 再生植株培养（1）实验材料：取自愈伤组织的芽；（2）实验步骤：①将芽接种到MS培养基上，放入培养箱中培养；②观察芽的生长、发育、生根等过程；③将生根的植株移植到土壤中，观察成活情况。
四、实习总结1. 实习收获（1）掌握了植物组织培养、愈伤组织诱导、再生植株培养等关键技术；（2）提高了动手操作能力，培养了团队协作精神；（3）了解了植物细胞工程在农业生产、生物制药、生物能源等领域的应用。
2. 实习不足（1）部分同学对实验原理和操作方法掌握不够熟练；（2）实验过程中存在一定程度的污染，影响了实验结果；（3）实验数据记录不够完整，分析不够深入。
植物细胞工程实习报告
实习报告实习时间：2023年6月1日至2023年6月30日实习单位：XX大学植物细胞工程实验室实习内容：植物组织培养、植物再生、基因转化等一、实习目的与意义植物细胞工程是一门综合性学科，涉及到植物学、生物学、分子生物学等多个领域。
通过本次实习，我希望能够掌握植物细胞工程的基本技术，了解植物组织培养、植物再生和基因转化的原理和操作流程，为今后的科研工作打下基础。
二、实习过程1. 植物组织培养在实习的第一周，我学习了植物组织培养的基本技术。
通过无菌操作，将植物的外植体（如叶片、茎段等）接种到含有植物激素和营养成分的培养基上，诱导其发生愈伤组织、芽和根等。
我了解到，植物组织培养的关键因素包括植物激素的种类和浓度、培养基的成分、温度和光照等。
2. 植物再生在实习的第二周，我学习了植物再生的技术。
通过切割植物的组织块，将其接种到含有植物激素的培养基上，诱导其发生再生。
我掌握了植物再生的原理和方法，并学会了使用植物再生激素（如细胞分裂素和生长素）来调节再生的进程。
3. 基因转化在实习的第三周，我学习了基因转化的技术。
通过将目的基因插入到植物病毒载体中，将其导入植物细胞，实现基因的表达。
我了解了基因转化的基本步骤，包括基因克隆、载体构建、转化方法和转化效率的检测等。
三、实习收获通过本次实习，我掌握了植物细胞工程的基本技术，包括植物组织培养、植物再生和基因转化等。
我了解了植物细胞工程的应用领域和前景，如植物繁殖、遗传改良、生物制药等。
同时，我还学会了实验室的基本操作技能，如无菌操作、仪器使用、数据处理等。
四、实习体会通过本次实习，我对植物细胞工程产生了浓厚的兴趣。
实习过程中，我深刻体会到植物细胞工程技术的原理和实践的紧密结合。
同时，我也认识到植物细胞工程技术的应用前景广阔，对农业、环保和医药等领域具有重要的意义。
五、实习总结通过本次实习，我掌握了植物细胞工程的基本技术和操作流程，了解了植物组织培养、植物再生和基因转化的原理和应用。
细胞工程实验
细胞工程实验指导实验一、小鼠皮肤等细胞的体外培养及形态观察实验二、植物原生质体的分离与体外培养生命科学学院2012.10.10实验一、小鼠皮肤等细胞的体外培养及形态观察细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。
因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。
细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域，如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。
Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。
细胞工程实验
二、实验原理
是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并 不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触 抑制、以及细胞的衰老，死亡等生命现象。还可以利用培养细胞制备染色体， 分析外界因素（如理化因素）对细胞的影响，研究细胞癌变等等。在细胞培养 的基础上发展了细胞融合、细胞杂交等细胞工程技术及单克隆抗体技术。
不应用的细胞应及时丢弃处理，不应继续放置 于培养箱中不予理睬。
较为标准的实验操作
将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或1‰
新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。
将小白鼠置超净工作台 上，打开腹腔
1.用0.25%胰酶液消化 2.终止消化，吹散细胞 3.细胞传代 4.置于37℃下培养
细胞传代的几种方法
3、离心，设置离心机1000转/分，1-2分钟， 沉淀即可。 4、取出离心管，轻轻吸出上清，倒入废液 缸。吸取培养液约7mL放入离心管，轻轻吹 打细胞，使之均匀悬浮后转至另外3小平皿中 待分装，注意不要污染！ 三、细胞的冻存和复苏 详细操作见实验指导。
虽然实验失败了，没有得到预期结果， 但是不可否认的是实验整个操作过程我们都 认真参与了，每个知识点和各种方法都掌握 了，以后遇到相关类容就更熟悉。这也算是 一种收获吧。
二、离心法进行传代
1、从培养箱内取出培养的小鼠肾脏细胞，每 组一瓶。放在显微镜下观察其生长状态、密 度。 生长状态检测：台盼蓝法。 2、观察培养瓶孔中培养液量。用吸管分别吸 出瓶中的细胞连同培养液，转入15ml塑料离 心管中。再用另一支吸管吸取PBS量约2ml， 加入培养瓶中，轻轻吹打瓶壁，吸出转入离 心管中，大约总量为10ml左右。
细胞培养中液体的吸取，均需机械移液装置 移取。切勿采用口吸的方法。口吸是最大的 微生物污染源，更重要的是细胞培养液及成 分通过食入或吸入的方式及入人体，可能对 研究人员造成伤害。 细胞培养瓶在超净台中打开后，瓶盖应盖顶 超下放置与工作台中。
细胞工程实习报告
一、实习目的通过本次细胞工程实习，使学生了解细胞工程的基本原理、实验技术及在生物技术领域的应用，培养学生的动手操作能力、分析问题和解决问题的能力，提高学生的综合素质。
二、实习时间2022年6月1日至2022年6月15日三、实习地点某高校生物技术实验室四、实习内容1. 细胞培养技术（1）细胞培养的基本概念：细胞培养是指将细胞从生物体内取出，在适宜的培养基中培养，使其生长、繁殖和分化的技术。
（2）细胞培养的基本原理：细胞培养的原理是利用细胞增殖和分化的能力，在适宜的条件下使细胞生长、繁殖和分化。
（3）细胞培养的操作步骤：①制备培养基：根据细胞种类和实验要求，配制适宜的培养基。
②消毒：对实验器材进行消毒，确保无菌操作。
③接种：将细胞接种到培养皿中。
④培养：将培养皿放入培养箱中，进行适宜温度和湿度的培养。
⑤观察：定期观察细胞生长情况，记录实验数据。
2. 细胞融合技术（1）细胞融合的基本概念：细胞融合是指两个或两个以上细胞合并成一个细胞的过程。
（2）细胞融合的原理：细胞融合的原理是利用细胞膜和细胞壁的物理和化学特性，使细胞膜和细胞壁相互融合。
（3）细胞融合的操作步骤：①制备细胞悬液：将细胞制备成悬液。
②细胞融合：将细胞悬液加入适当的融合剂，如聚乙二醇（PEG）。
③培养：将融合后的细胞培养在适宜的培养基中。
④筛选：通过筛选方法，得到融合成功的细胞。
3. 细胞工程在生物技术领域的应用（1）基因工程：利用细胞工程技术，将目的基因导入受体细胞，实现基因表达和调控。
（2）蛋白质工程：利用细胞工程技术，对蛋白质进行修饰和改造，提高蛋白质的功能和稳定性。
（3）细胞治疗：利用细胞工程技术，制备具有治疗作用的细胞，如干细胞、免疫细胞等。
五、实习体会和收获1. 通过本次实习，我对细胞工程的基本原理、实验技术及在生物技术领域的应用有了更深入的了解。
2. 在实习过程中，我学会了细胞培养、细胞融合等实验操作，提高了自己的动手操作能力。
细胞工程实验报告
细胞工程实验报告专业：生物技术班级：0801 姓名：励丹学号：30804305一、实验目的1、了解动物细胞培养的相关实验器材以及实验前器材的清洗与消毒、无菌室灭菌与消毒等基本方法，以建立起无菌操作的概念。
2、了解和掌握动物细胞原代培养的基本方法，熟悉组织块法和消化法培养的基本操作过程。
初步掌握无菌操作技术。
3、学习与了解细胞超低温冻存于复苏的基本原理，初步掌握培养细胞常规超低温冻存于复苏以及玻璃化超低温冻存于复苏的方法。
4、掌握ELISA测定抗体效价的方法，细胞的超低温冻存和复苏，及MTT法测定细胞活性的方法。
5、学习和掌握制备饲养层细胞的方法，为杂交瘤细胞的制备做准备。
6、学习从脾脏组织制备免疫细胞的方法，从免疫脾脏中制备免疫细胞悬液，用于杂交瘤细胞的融合。
7、学习和掌握动物细胞融合的基本方法，通过免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，并进行选择。
8、学会细胞形态的观察和分析，细胞技术等细胞培养中常见的问题。
二、实验原理1、原代培养原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后直到第一次传代为止。
原代培养首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织或器官，切成一定大小的组织块，直接或经消化分散成单个游离的细胞，在人工培养条件下，使其不断地生长、繁殖。
2、细胞活性测定——MTT法MTT法是利用细胞线粒体呼吸链上的琥珀酸脱氢酶四氮唑蓝还原成难溶的蓝紫色结晶——甲瓒，经二甲基亚砜（DMSO）溶解后，在490nm处测吸收值，其吸收值可间接反映细胞的活性状态及活细胞数量。
3、培养细胞的超低温冻存于复苏为了保持细胞株（系）遗传的稳定性以及非连续使用细胞的长期保存，建立了细胞超低温冻存于复苏技术。
目前细胞超低温冻存技术主要有两种方法，即常规超低温冻存和玻璃化超低温冻存。
活细胞在超低温下克服了分子间的热运动，因而可长期保存而不影响活力。
在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。
细胞工程实验-烟草叶片的组织培养.
细胞工程学实验报告专业：_ 09级生物技术一班__ 姓名：___ __ 学号：____ _ _实验一实验室的设计及基本设备一、实验室的设计1、实验室设计的原因：植物细胞工程实验室的流程是：清洗玻璃器皿、配制培养基、高压气灭菌、无菌操作、培养室培养植物、植物材料的检测。
因此实验室需要有清洁器皿和配制培养基的准备室，无菌操作室或超净工作台，供培养材料用的培养室，检查培养情况并做记录的实验室。
一般在设计上，每个组分最好按工作的自然程序连续排列，如：准备室、灭菌室、无菌操作室、植物材料培养室、检测室。
实验室的安排应合理简洁，并要求无尘、灭菌、光洁、清净。
2、实验室的布局要求：（1）准备室准备室可以是一大间或几小间，主要用于进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器脿醮涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。
必要的设备有:准备室应具备实验台、药品柜、水池、仪器、药品、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器等。
洗涤灭菌区功能：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。
要求：洗涤灭菌室根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30-50m2。
在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。
中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。
如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。
准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿，地面应耐湿并排水良好。
设备：水池、落水架、中央实验台、高压灭菌锅、超声波清洗器、干燥灭菌器（如烘箱）等。
（2）无菌室（接种室）进行植物细胞、组织培养操作的关键是无菌条件。
室内的墙壁要求光滑平整；地面为光洁的水磨石，平坦无缝，避免灰尘积累，便于清扫。
紫外灯一般在3到4平方米内安装1到2只；在工作台下安置紫外灯紫外灯可使灭菌彻底。
同时，工作台上方安装平板玻璃，以防操作时落灰。
条件不好时，用无菌箱代替无菌室，箱内用紫外灯灭菌。
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细胞工程实验报告专业：生物技术班级：0801 姓名：励丹学号：30804305一、实验目的1、了解动物细胞培养的相关实验器材以及实验前器材的清洗与消毒、无菌室灭菌与消毒等基本方法，以建立起无菌操作的概念。
2、了解和掌握动物细胞原代培养的基本方法，熟悉组织块法和消化法培养的基本操作过程。
初步掌握无菌操作技术。
3、学习与了解细胞超低温冻存于复苏的基本原理，初步掌握培养细胞常规超低温冻存于复苏以及玻璃化超低温冻存于复苏的方法。
4、掌握ELISA测定抗体效价的方法，细胞的超低温冻存和复苏，及MTT法测定细胞活性的方法。
5、学习和掌握制备饲养层细胞的方法，为杂交瘤细胞的制备做准备。
6、学习从脾脏组织制备免疫细胞的方法，从免疫脾脏中制备免疫细胞悬液，用于杂交瘤细胞的融合。
7、学习和掌握动物细胞融合的基本方法，通过免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，并进行选择。
8、学会细胞形态的观察和分析，细胞技术等细胞培养中常见的问题。
二、实验原理1、原代培养原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后直到第一次传代为止。
原代培养首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织或器官，切成一定大小的组织块，直接或经消化分散成单个游离的细胞，在人工培养条件下，使其不断地生长、繁殖。
2、细胞活性测定——MTT法MTT法是利用细胞线粒体呼吸链上的琥珀酸脱氢酶四氮唑蓝还原成难溶的蓝紫色结晶——甲瓒，经二甲基亚砜（DMSO）溶解后，在490nm处测吸收值，其吸收值可间接反映细胞的活性状态及活细胞数量。
3、培养细胞的超低温冻存于复苏为了保持细胞株（系）遗传的稳定性以及非连续使用细胞的长期保存，建立了细胞超低温冻存于复苏技术。
目前细胞超低温冻存技术主要有两种方法，即常规超低温冻存和玻璃化超低温冻存。
活细胞在超低温下克服了分子间的热运动，因而可长期保存而不影响活力。
在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。
如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。
在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。
贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
4、饲养层细胞的制备在体外培养细胞实验中，对于难养的细胞或者数量较少的细胞，常常需要预先在培养瓶或培养板底部加入一些活的原代细胞或者静息的肿瘤细胞以辅助目的细胞的生长，这就是饲养层细胞。
它可能在饲养细胞的生长过程中会释放一些细胞生长刺激因子或提供细胞接触的信号。
5、免疫脾细胞的制备小鼠经抗原多次免疫后，可从脾脏组织细胞分裂和分化出较多能分泌相应抗体的B淋巴细胞，脾脏内细胞连接不紧密可通过机械分离和过滤网筛选，将这些细胞制备成游离的单个细胞悬液。
6、杂交瘤细胞的制备（细胞融合）通过对免疫动物B细胞和某一个永久细胞系进行融合，杂交后代称之为杂交瘤。
杂交瘤细胞可以将分泌特异性抗体B细胞的遗传特性和骨髓瘤细胞系体外增殖的遗传特性合二为一。
一种淋巴细胞克隆只产生一种特异性抗体；细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持亲代双方的特性；杂交瘤细胞的筛选，体外培养大量增殖，获得所需抗体。
7、ELISA检测使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。
由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
三、实验内容1、动物细胞培养技术2、杂交瘤技术与单克隆抗体制备3、细胞工程相关技术1）动物细胞培养实验器材的准备无菌室：首次启用的无菌室一般可采用福尔马林熏蒸（5～6m2无菌室用KMnO4 50g，倒入100ml甲醛（用搪瓷盘），冒浓烟，24hr，氨水中和至无甲醛味），经常使用的无菌室在每次实验前必须开启紫外灯照射0.5至l小时，然后避光0.5至l小时后方可进入操作。
培养器材的消毒：干热灭菌法：玻璃器皿、金属器具等的消毒方法，140～150℃，2～3小时；湿热灭菌法：橡胶制品、无菌衣、帽和口罩以及除菌过滤器的清毒，高压蒸汽灭菌15磅20—30分钟；紫外线照射灭菌：多孔培养板的灭菌－30分钟。
抽滤除菌：培养基等（培养基通过0.22过滤装置－除菌）2）杂交瘤技术与单克隆抗体制备1、小鼠的免疫方法：脾脏直接注射：一般免疫后3～4天即可制备抗体。
其它途径注射：一般采用间隔免疫的方法，分3次，间隔2～3周进行免疫。
步骤：取绵羊静脉血0.2mL（加肝素或枸橼酸钠抗凝）用0.9％NaCl或PBS 1000~ 1500rpm离心5分钟涤洗3次，收集血细胞。
血球计数板计数，用0.9％NaCl或PBS调整细胞浓度至4×107个/ml（10个/小格）。
向小鼠腹腔注射血细胞悬液0.5ml 。
每隔15天重复注射作加强免疫，共重复2次，第2次加强免疫后10天，检测血清效价，若血清效价低则要继续免疫。
小鼠处死前2～3天加强免疫1次，以活化B淋巴细胞。
注：细胞计数：一个大方格被分成16个中方格。
每一个大方格边长为1mm，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。
一个大方格被分成16个中方格。
每一个大方格边长为1mm，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。
细胞浓度（个/ml）=细胞数/体积即：细胞浓度（个/ml）= 一个大格的细胞数×104。
打入的免疫红细胞数要在一定范围内，细胞数量太多会免疫耐受；太少得到的免疫细胞数少。
2、小鼠血清的制备取五只没有免疫过的小鼠---每只小鼠眼球取血0.5mL以上于1mLEP管中----小鼠短颈处死后，放于装有75%酒精的烧杯中消毒灭菌，带入无菌室备用——取出血清放于37℃水浴保温30min——2000转离心10min——取上清于干净的离心管中，作为ELISA的阴性对照取五只免疫过的小鼠——同上操作——取血清作为ELISA的阳性对照3、单克隆抗体的制备流程4、骨髓瘤细胞的培养1、选择生长旺盛，形态良好的细胞2、将上清倒入离心管内，剩余贴壁的细胞用0.02％EDTA消化液消化细胞5分钟后倒入同一离心管，1000～1500rpm离心5分钟，收集细胞。
3、加6mL含10％小牛血清的DMEM培养液悬浮细胞，分装于两个细胞培养瓶，5％CO2培养箱37℃培养。
5、饲养层细胞的制备1、每组1只小鼠，断颈处死后浸泡在75％乙醇消毒5分钟。
2、在无菌室内小心剪开小鼠腹部皮肤，暴露腹腔，用注射器腹腔注射3～4ml 1640培养液，按摩片刻。
3、左手用镊子夹起腹腔肌肉，右手用剪刀剪开一个小口，小心用吸管吸出腹腔液体于离心管。
4、低速离心洗涤细胞一次后，用12~15ml 1640培养液悬浮细胞（5×104），取100~200l滴96孔板（一般用吸管滴2~3滴）。
5、免疫脾细胞的制备1.将免疫过并取完血清后的浸泡在75％乙醇中的小鼠带入无菌室。
2.小心剪开腹腔，取出脾脏。
3.用一次性注射器将脾脏刺几个洞，再吸3～4mLPBS液吹打脾脏。
4.收集吹打的细胞悬液，经低速离心洗涤后将细胞悬浮在培养液。
6、杂交瘤细胞的制备（细胞融合）1.将骨髓瘤细胞(2×107）与脾细胞按1:10的比例混合，低速离心后弃上清，用手指弹匀细胞。
2.将1mL50％的PEG在1分钟内缓缓加到混合的细胞内，注意边滴加PEG边摇动离心管。
3.PEG作用1分钟后，迅速滴加培养液终止PEG作用，低速离心洗涤细胞。
4.用10mLDEME培养液悬浮融合细胞，按每孔3滴的量滴加到含滋养层的96孔板内，置37℃5％CO2培养箱中培养。
（注：因为实验时间有限，我们只是操练单克隆抗体的制备方法和过程，并没有制备到单克隆抗体，但是单克隆抗体的制备过程和操作注意事项已经基本了解。
）3）原代细胞的培养组织块法培养小鼠肝脏组织:1.取出肝脏，经PBS漂洗三次后，放在表面皿中。
2.在表面皿中，用滴管加入少量PBS（RPMI1640含20％小牛血清，0.2%白蛋白，10ug/ml胰岛素，100U青霉素和链霉素）用锋利的剪刀将组织块剪成约1mm3的小块。
3.用弯头镊子将组织小块移入细胞瓶中，把它们排列成行，每块组织相距约0.5cm，每瓶细胞贴20～30小块，随即翻转细胞瓶，使贴组织块的一面朝上，然后加培养液3ml。
4．将细胞瓶置于37℃，5％CO2培养箱中静置2~4小时，然后将瓶轻轻翻转，使组织块浸入培养液中，继续静止培养。
5．72小时后在显微镜下检查，若见细胞自组织边缘长出，则继续培养3-5日，再换部分或全部培养液，待多数组织块的生长晕相接时，可进行传代培养。
肝细胞培养的实验结果：若培养液显为淡黄且清澈，一般显示细胞生长良好。
培养3～5日，在相差显微镜下观察，若见细胞自组织边缘长出，更换部分或全部培养液，待多数组织块的生长晕相接，小心挑掉组织块，继续培养3～4天。
7天左右后，生长晕扩大到直径为15mm左右小鼠肝脏细胞原代培养的生长晕是多角形上皮样细胞与梭形细胞混合的细胞群体。
24～48小时后若培养液变成黄色且混浊，表示已被污染；若培养液变成紫色，一般细胞生长不好，则培养液pH过高；消化法培养小鼠肾细胞:1、将消毒过的小鼠，剖腹取出肾脏于放有ＰＢＳ的培养皿中洗涤。
2、尽量剪碎肾脏。
3、用ＰＢＳ洗涤２～３次。
4、加入５mL胰酶，37℃（30min）。
5、过筛，１０００转离心１０min，用PBS洗涤2~3次。
6、加培养液，计数至3~5×105/Ml.(1.5个每中格)。
7、细胞悬液装瓶3mL 放于CO2培养箱培养。
4）抗体IgG ELISA检测1.取0.2ml绵羊红细胞，加6ml PBS 1000rpm离心10min洗涤，重复一次。
2.取下层红细胞，加1.2ml磷酸盐缓冲液（Na2HPO45mmol/L, NaH2PO45mmol/L pH7.6）（低渗）混匀后，常温处理20~25min，4℃12000~13000 rpm离心15min，去上清，重复一次。
3.取乳白色沉淀（血影）用包被液稀释至后，按50g（老师制备）加入96孔酶标板内，放于湿盒4℃冰箱过夜，备用。
4.吸去孔中的抗原液（自制吸头，这样冲击力会小，不会使包被的抗原脱落），用洗涤液洗涤3次（将洗涤液沿孔壁注入200L/孔，放置3分钟，甩去洗涤液，重新注入），加封闭液（含1％牛血清白蛋白的洗涤液）200L/孔，封闭30min。