液质联用操作规程

1．适用范围

本设备配备ACQUITY UPLC液相色谱仪、TQS MS/MS 质谱仪，适用于食品、药品中各种有机物的定性、定量分析，是一种具有高灵敏度的检测仪器，仪器由主机、计算机和数据处理软件等组成。

2. 职责

2.1操作人员按照本规程操作仪器，认真填写实验使用记录。

2.2保管人员负责对仪器进行定期维护和保养。

2.3 科室负责人负责监督检查规程的执行。

3．操作程序

日常操作步骤：

准备UPLC —→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告。

注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。

建立新方法和project的操作步骤：

准备UPLC —→建立新的project —→用标准品调谐—→编辑质谱方法—→编辑UPLC方法—→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告。

3.1开机：

3.1.1 彻底开机顺序（仪器已关闭）

确定MS及其它仪器电源电缆已连接，开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa。

打开计算机电源 > 等待windows正常启动 >电脑界面右下角网络图标红叉。

打开UPLC自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！。

打开UPLC泵电源，等约30s或者是有响声。

打开质谱电源，等待5min，离子源透视镜里面亮。

打开Masslynx软件，masslynx主界面 -----左侧instrument----Mass tune---界面菜单栏vacuum---pump 同样界面左侧偏上

diagnostics---vacuum---analyser MS1 turbo speed[%]要在5分钟内升到80。至少抽真空4个小时 > 查看真空状态主界面mass console---界面左侧xevo tq ms detector加号展开---ms display > 碰撞室真空度 >达

到 7.x e-5mbar 。

3.1.2 日常开机顺序（仪器未关闭）

开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa，打开Masslynx软件，进入工作站。

3.2建立项目

点击file下的project wizard ,出现对话框，单击yes 出现对话框，输入project ,location 为C:\MS DATA ,单击next ,选择create existing project as template,并以c:\masslynx\default.pro 为模板，单击finish .点击OK。

3.3 准备UPLC系统

准备液相的一般流程：准备流动相> 准备样品> 灌注二元泵 > 灌注自动进样器 > 建立液相方法> 平衡液相

3.3.1. 准备流动相

用0.22um的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天，缓冲盐一定要是可挥发的，而且浓度不要大于10mM。

3.3.2.样品要求

所有样品都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22um的膜过滤。

3.3.3灌注二元泵

在Masslynx 主界面，单击MS Console,进入UPLC交互显示界面，点击左栏Acquity UPLC System> Control > Start Up System ，单击QSM，选择需要用到的流动相位置，如A 和B，选择seal wash，时间设为3分钟。

单击SM，选择 Strong Wash 5 cycles , Sample syringe 20

单击 Equilibrate to Method，将流速设为0 ,单击 Start 开始灌注. 时间大约为9min 左右。

设定流速，平衡液相

在Masslynx主界面，单击Inlet Method 图标，打开液相方法编辑窗口，单击status > ACQUITY Additional Status ，进入液相控制台，单击A 或B或流速的位置，出现流速、比例设定对话框, 设定液相流速与比例，单击对勾，开始平衡液相，如果后面要做调谐，可设定流速0.2ml/min,有机相与水相的比例为50:50。

3.4 准备质谱

3.4.1. 计算化合物单同位素质量数

Masslynx主界面> 单击Tools> Molecular Weight Calculator, 输入化合物的分子式（大写-注意Cl、Br等正确的输入方法） ,注意选单同位素Monoiso ,Ion Mode:离子化模式，+ve 正离子，-ve 负离子 ,单击Calculate。

3.4.2 用Intellistart进行自动调谐

在Masslynx 主界面单击MS Tune图标，打开调谐窗口，

单击 Ion Mode> ES+ 或 ES- ，单击 API Gas 图标打开氮气，单击打开高压

选择MS Mode 图标，设定液相流速0.2ml/min, 水：乙腈的比例为50:50。

把标准品调谐液放入质谱仪塑料瓶位置处的A（或B或C）号位(注:浓度在200ppb 左右)

单击Fluidics ,选择Reservoir为A ,Flow State 为LC 模式，点击Purge 图标。Purge 结束后，将Flow State 改为Combine 模式，设定Function 为MS1 scan，Mass为计算出化合物的质量数，span 为5，点击进样，开始进样，直到离子的响应比较稳定。保存调谐文件：File > Save As至已建的项目下。

在Masslynx主界面，选择Ms Console> Xevo TQ MS Detector

选择Intellistart ，选择 Sample Tune and Develop Method ，ES+

单击 Start 图标，出现Intellistart 自动调谐编辑窗口，选择Switch to Advanced

mode ，输入Compound name (化合物名称) ，Molecular Mass/Formula (分子量或分子式) Adduct A+（[ M+H] +，选择 Load Existing Sample Tune ,在Sample Tune Name 方框后的“。。。”处调用开始保存的调谐文件，在Develop MRM Method 前的方框打钩，并在方框出输入MRM 方法的文件名，路径为已建的项目下。在Print Report 前方框打钩，Cone Voltage ，Collision Energy 处为默认值，Fluidics 下的Flow Path 选择Combined 模式，Sample Reservoir 和Sample Flow Rate 参数与Fuldics 下Combined 模式下的进样参数保持一致。单击右边的