黄酮
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20
2与金属盐类试剂的络合反应
• 黄酮类化合物分子中有游离的3-OH、5-OH或邻二酚羟基 时可与Al3＋、Zr4+、Pb2＋、Sr2+等形成配合物，这些配合
物有的产生荧光或颜色加深（如Al3＋、Zr4+），有的产生 沉淀（如Pb2＋、Sr2+）。
• Al3＋：1%AlCl3或Al(NO3)3;黄色(λmax=415nm)，有荧光
• 2与金属盐类试剂的络合反应
24
1还原反应-盐酸-镁粉（或锌粉）的反应
方法 将甲醇或乙醇提取液5~10ml，加入几滴浓盐
酸，然后加入少许镁（或锌）粉（必要时微热），
如果有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇存在，
数分钟后即可出现橙色～红色。
此反应要先加盐酸再加镁粉，因为像花色素等成分在单纯加 盐酸后就能产生颜色变化；为避免在该反应中供试品液本身 颜色的干扰，可注意观察上升的泡沫(阳性)
花色素类
橙酮类
高异黄酮类
结构和分类
黄酮
8 7 6 5 4 1 2 2
' B
3
' ' 4
O C
A
3
6
'
5
'
芹菜素（5，7，4′-三OH黄酮） 木犀草素（5，7，3′，4′-四OH黄酮） 黄芩素(5，6，7-三OH黄酮)
O
O
2
橙皮苷（5，7，3 - 三OH，4′-OCH3二氢黄酮） 甘草苷（甘草素-7-O-glu苷） 甘草素（7，4′– 二OH二氢黄酮
3
O
二氢黄 酮
结构和分类
• 黄酮醇
O
2 3
OH O
山柰酚（5，7，4′-三OH黄酮醇） 槲皮素（5，7，3′，4′-四OH黄酮醇） 杨梅素（5，7，3′，4′，5′-五OH黄酮醇 ）
二氢黄酮醇
O
2 3
二氢槲皮素（5，7，3′，4′-四OH二氢黄酮醇） 二氢 桑色素（5，7，2′，4′-四OH二氢黄酮醇）
31
薄层板为氢氧化钠溶液制备的硅胶G板，可有效地
减少黄酮类成分在硅胶板上的拖尾现象；进行二
次展开，可有效地增大极性黄酮类成分在硅胶G板
上的分离度；三氯化铝显色后检视荧光，有效地
增大其检测的灵敏度。
32
2.聚酰胺薄层色谱
• 游离酚羟基的苷和苷元 • 原理：黄酮中的酚羟基和聚酰胺中的酰 胺基形成氢键。 • 展开剂：醇、酸、水
• Ⅱ带在240～285nm范围内，由A环上的苯甲酰基引起。 • 黄酮类化合物当加入一些移位剂如甲醇钠、醋酸钠、氯化 铝等，可使最大吸收波长发生位移。选择性提高，可消除 杂质的干扰，有利于含量测定。
三、鉴别
• （一）显色反应
• （二）薄层色谱鉴别
23
（一）显色反应
• 黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的 酚羟基及γ-吡喃酮环有关。 • 1还原反应
420nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、
浓度为横坐标、绘制标准曲线。
41
测定法 精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加60% 乙醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中， 照标准曲线的制备项下的方法，自“加0.1mol/L三 氯化铝溶液”起依法操作，精密量取本品2ml，置
50ml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，精密量取
25
例 牛黄解毒片（黄芩）的鉴别： 取本品6片，研细，加乙醇10ml，温热10分钟， 滤过，取滤液5ml，加盐酸0.5ml与少量镁粉，加 热，溶液显红色。
26
2与金属盐类试剂的络合反应
黄酮类化合物分子中有游离的3-OH、5-OH或 邻二酚羟基时可与Al3+、Zr4+、Pb2+、Sr2+等 形成络合物，这些络合物有的产生荧光或颜色 加深（如Al3+、Zr4+），有的产生沉淀（如 Pb2+、Sr2+） 此性质可用于定性、定量分析 三氯化铝、硝酸铝、二氯氧锆是重要的定性 试剂和显色剂。
' '
CH O
6
'
5
硫磺菊素（6，3′，4′-三OH橙酮）
橙酮
结构和分类
双苯吡酮
O
HO O glc OH
HO O OH
O
异芒果素
O
高异黄 酮
O
结构和分类
O HO O H O OH H OH H CH2OH OCH3
OH
O
H
木脂素黄酮 （水飞蓟素）
二、一般性质
• 溶解度 • 酸碱性 • 紫外光谱特征
27
2与金属盐类试剂的络合反应
例 银黄注射液的鉴别： 取本品1ml于试管中，加5%亚硝酸钠溶液、 10%硝酸铝溶液各0.3ml，溶液呈黄色；另取 注射液0.1ml，加水10ml，摇匀，取稀释液 2ml，加5%二氯氧锆溶液1-2滴，溶液呈黄色，
再加盐酸1-2滴，颜色不褪。
28
（二）薄层色谱鉴别
• 吸附剂：硅胶、聚酰胺、纤维素
例 二陈丸中橙皮苷的鉴别
处方 陈皮 半夏（制） 茯苓 甘草
取本品5g，加甲醇30ml，置水浴上加热回流30分钟，滤过， 滤液浓缩至约5ml，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加 甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各 2µl，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板 上，以乙酸乙酯-甲酸-水（100﹕17﹕13）为展开剂，展开， 展 距 约 3cm ， 取 出 ， 晾 干 ， 再 以 甲 苯 - 乙 酸 乙 酯 - 甲 酸 - 水 （20﹕10﹕1﹕1）的上层溶液为展开剂，展开，展距约8cm， 取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下 检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相 同颜色的荧光斑点。
60%乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量
取10ml，置50ml量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇
匀，即得（每1ml含无水芦丁60µg）。
40
标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0.5ml、 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml与5.0ml，分别置 10ml量瓶中，各加0.1mol/L三氯化铝溶液2ml、 1mol/L醋酸钾溶液3ml，加60%乙醇至刻度，摇 匀 ， 放 置 30 分 钟 ； 以 相 应 的 溶 液 为 空 白 。 在
• 硅胶色谱分离弱极性化合物较好
• 聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳 • 纤维素薄层板则适用于分离多糖苷混合物 • 显色：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配 合的方法。
29
1.硅胶薄层色谱
• 正相色谱 • 常用展开剂：
• • • • • • 甲苯-甲酸乙酯-甲酸（5：4：1） 苯-甲醇-乙酸（35：5：5） 氯仿-甲醇（8：2） 苯-乙酸乙酯（7.5：2.5） 苯-丙酮（9：1） 甲苯-甲酸乙酯-甲酸（5：4：1）
第二节 黄酮类成分分析
• 概述 • 一般性质 • 鉴别 • 含量测定
1
一、概述
7 6
8
1
2 2
' B
3
'
4
O C
'
A
5
3 4
6
'
5
'
O
• 黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮类化 合物。 • 现泛指两苯环通过中央三碳键相互联结而成的一
系列化合物。
• 在植物体内大部分与糖结合成苷，一部分以游离
形式存在。
• Pb2＋：1%PbAc2或碱式PbAc2；黄↓～红↓，有荧光
• Zr4+ ：2%ZrOCl2的甲醇溶液；↑枸椽酸， 5-OH黄酮的黄
色aq显著褪色；3-OH黄酮的aq呈鲜黄色
21
紫外光谱特征
• 因有2-苯基色原酮的基本结构，具有特定的紫外吸收峰， 两个较强的吸收带：
• Ⅰ带在300~400nm范围内，由B环桂皮酰基引起。
1ml，置10ml量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀， 作空白，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试 品溶液中芦丁的重量，计算，即得。
42
（二）黄酮类单体成分含量测定
• 1薄层色谱法
• 2高效液相色谱法
43
1薄层色谱法
• 样品经有机溶剂或水提取后，可用硅胶、纤维素或
聚酰胺进行层析，达到分离目的。
• 层析后将含有待测组分的色斑刮下，用适宜溶剂洗
脱，用紫外-可见分光光度法测定。
• 用薄层扫描仪（单波长或双波长法）可直接在薄层
板上扫描测定。
44
2高效液相色谱法
• 常用法： HPLC法，黄酮类成分在紫外区有较强 的吸收，检测灵敏度较高，故在黄酮类单体成分 的定量分析中常用。
• HPLC条件：正相和反相色谱两类，反相色谱应用
较多。
• 反相色谱测定多用C18 键合相固定液，流动相常用
例 双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸鉴别
处方 金银花 黄芩 连翘
取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。 另取黄芩苷、绿原酸对照品，分别加75%乙醇制成每1ml含 0.1mg的溶液。吸取上述三种溶液各1~2µl，分别点于同一聚 酰胺薄膜（5cm×7cm）上，以醋酸为展开剂，展开，取出，
16
溶解度
• 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷
元，单糖苷、双糖或三糖苷）不同而有很大差异。
• 游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙
酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。
• 黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，
但难溶或不溶与苯、氯仿等。
17
酸碱性
• 酸性：黄酮类化合物因分子中多有羟基，故显酸性，可 溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。
二氢查耳酮
O
OH
glc
O
O
梨根苷
结构和分类
黄烷3-醇
O
3
OH HO
OH
O
H OH H
OH
OH
黄烷-3， 4-二醇
O
3 4
（+）儿茶素
OH HO O OH OH OH OH OH
OH
OH
无色飞燕草素
结构和分类
OH
花色素
O
3 4
+
HO
O
+
OH OH OH
OH
7 6 5 3 4
O
' 2
2
' 3
4
OH
飞燕草苷元
38
2比色法
• 黄酮类化合物显色以后显色物与背景最大 吸收波长差别较大，可消除背景（即阴性 空白）的干扰，以提高本法的选择性及灵 敏度。常用铝盐作显色试剂。
39
例 消咳喘糖浆中总黄酮含量测定
处方 满山红
对照品溶液的制备 精密称取在120℃减压干燥至
恒重的芦丁对照品30mg，置100ml量瓶中，加
19
1还原反应
• 常用：与盐酸-镁粉（或锌粉）的反应。
• 反应时多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇
类化合物显橙红-紫红色，少数显紫-蓝色，且B环
上有-OH或-OCH3取代时，颜色即随之加深。 • 查耳酮、橙酮、儿茶素类则不发生色变。 • 花青素及部分橙酮，查耳酮等在单纯浓盐酸下也会 发生色变，须预先作一对照，以便排除。
37
灯盏细辛注射液中总咖啡酸酯的测定
处方 灯盏细辛提取物
对照品溶液的制备 取1,5-氧-二咖啡酰奎宁酸对照品适 量，精密称定，加0.1mol/L碳酸氢钠溶液制成每1ml含总咖 啡酸酯以1,5－氧－二咖啡酰奎宁酸10 mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置200ml量瓶中， 加水至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别取对照品溶液与供试品溶液，照紫外-可见 分光光度法，在305nm波长处测定吸光度，即得。 本品每1ml含总咖啡酸酯以1,5－氧－二咖啡酰奎宁酸计， 应为2.0～3.0mg。
OH
O
结构和分类
O
2 3
大豆素（7，4′-二OH异黄酮） 大豆苷（大豆素-7-O-glc苷） 葛根素（7，4′-二OH，8- glc异黄酮苷）
O
异黄酮
O
2 3
紫檀素 鱼藤酮
O
二氢异黄 酮
结构和分类
3 4
'
2
3 4
HO
OH
' '
6Baidu Nhomakorabea
' 2 OH
HO
6 5
OH
查耳酮
5
' O
glc
O
O
红花苷
OH
HO
OH
甲醇-水-乙酸（或磷酸缓冲液）及乙腈-水。 • 检测器主要采用紫外检测器或荧光检测器。
45
例 心通口服液中葛根素含量测定—HPLC法
• 碱性：氧原子的性质：黄酮类化合物分子中γ-吡喃酮环
上的1－位氧原子，因有未共用的电子对，故表现出微弱
的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成盐，常
表现出特殊的颜色，可用于鉴别。 • 生成的盐极不稳定，加水后即可分解。
18
显色反应
• 黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚 羟基及γ-吡喃酮环有关。 • 1还原反应 • 2与金属盐类试剂的络合反应
晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与
对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
34
四、含量测定
• （一）总黄酮含量测定
• （二）黄酮类单体成分含量测定
35
（一）总黄酮含量测定
• 1直接测定
• 2比色法
36
1直接测定
• 黄酮类化合物具有特定的紫外吸收峰，含 黄酮类化合物的原料药及部分制剂经一定 的提取纯化后，可直接于最大吸收波长处 测定其吸收度，以芦丁等为对照品计算其 含量。
2
一、概述
• 常见中药：
• 黄芩、槐米、葛根、陈皮、枳实、银杏 叶、山楂、淫羊藿、射干、补骨脂、山 奈、蒲黄、广藿香、金线草、化橘红、 白果、忍冬藤、茵陈、满山红、高良姜、 桑白皮、骨碎补
结构和分类
氧化型
黄酮 黄酮醇 异黄酮 查耳酮 黄烷3-醇类
还原型
二氢黄酮
二氢黄酮醇
二氢异黄酮 二氢查耳酮 黄烷3、4-二醇类 汕酮
2与金属盐类试剂的络合反应
• 黄酮类化合物分子中有游离的3-OH、5-OH或邻二酚羟基 时可与Al3＋、Zr4+、Pb2＋、Sr2+等形成配合物，这些配合
物有的产生荧光或颜色加深（如Al3＋、Zr4+），有的产生 沉淀（如Pb2＋、Sr2+）。
• Al3＋：1%AlCl3或Al(NO3)3;黄色(λmax=415nm)，有荧光
• 2与金属盐类试剂的络合反应
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1还原反应-盐酸-镁粉（或锌粉）的反应
方法 将甲醇或乙醇提取液5~10ml，加入几滴浓盐
酸，然后加入少许镁（或锌）粉（必要时微热），
如果有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇存在，
数分钟后即可出现橙色～红色。
此反应要先加盐酸再加镁粉，因为像花色素等成分在单纯加 盐酸后就能产生颜色变化；为避免在该反应中供试品液本身 颜色的干扰，可注意观察上升的泡沫(阳性)
花色素类
橙酮类
高异黄酮类
结构和分类
黄酮
8 7 6 5 4 1 2 2
' B
3
' ' 4
O C
A
3
6
'
5
'
芹菜素（5，7，4′-三OH黄酮） 木犀草素（5，7，3′，4′-四OH黄酮） 黄芩素(5，6，7-三OH黄酮)
O
O
2
橙皮苷（5，7，3 - 三OH，4′-OCH3二氢黄酮） 甘草苷（甘草素-7-O-glu苷） 甘草素（7，4′– 二OH二氢黄酮
3
O
二氢黄 酮
结构和分类
• 黄酮醇
O
2 3
OH O
山柰酚（5，7，4′-三OH黄酮醇） 槲皮素（5，7，3′，4′-四OH黄酮醇） 杨梅素（5，7，3′，4′，5′-五OH黄酮醇 ）
二氢黄酮醇
O
2 3
二氢槲皮素（5，7，3′，4′-四OH二氢黄酮醇） 二氢 桑色素（5，7，2′，4′-四OH二氢黄酮醇）
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薄层板为氢氧化钠溶液制备的硅胶G板，可有效地
减少黄酮类成分在硅胶板上的拖尾现象；进行二
次展开，可有效地增大极性黄酮类成分在硅胶G板
上的分离度；三氯化铝显色后检视荧光，有效地
增大其检测的灵敏度。
32
2.聚酰胺薄层色谱
• 游离酚羟基的苷和苷元 • 原理：黄酮中的酚羟基和聚酰胺中的酰 胺基形成氢键。 • 展开剂：醇、酸、水
• Ⅱ带在240～285nm范围内，由A环上的苯甲酰基引起。 • 黄酮类化合物当加入一些移位剂如甲醇钠、醋酸钠、氯化 铝等，可使最大吸收波长发生位移。选择性提高，可消除 杂质的干扰，有利于含量测定。
三、鉴别
• （一）显色反应
• （二）薄层色谱鉴别
23
（一）显色反应
• 黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的 酚羟基及γ-吡喃酮环有关。 • 1还原反应
420nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、
浓度为横坐标、绘制标准曲线。
41
测定法 精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加60% 乙醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中， 照标准曲线的制备项下的方法，自“加0.1mol/L三 氯化铝溶液”起依法操作，精密量取本品2ml，置
50ml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，精密量取
25
例 牛黄解毒片（黄芩）的鉴别： 取本品6片，研细，加乙醇10ml，温热10分钟， 滤过，取滤液5ml，加盐酸0.5ml与少量镁粉，加 热，溶液显红色。
26
2与金属盐类试剂的络合反应
黄酮类化合物分子中有游离的3-OH、5-OH或 邻二酚羟基时可与Al3+、Zr4+、Pb2+、Sr2+等 形成络合物，这些络合物有的产生荧光或颜色 加深（如Al3+、Zr4+），有的产生沉淀（如 Pb2+、Sr2+） 此性质可用于定性、定量分析 三氯化铝、硝酸铝、二氯氧锆是重要的定性 试剂和显色剂。
' '
CH O
6
'
5
硫磺菊素（6，3′，4′-三OH橙酮）
橙酮
结构和分类
双苯吡酮
O
HO O glc OH
HO O OH
O
异芒果素
O
高异黄 酮
O
结构和分类
O HO O H O OH H OH H CH2OH OCH3
OH
O
H
木脂素黄酮 （水飞蓟素）
二、一般性质
• 溶解度 • 酸碱性 • 紫外光谱特征
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2与金属盐类试剂的络合反应
例 银黄注射液的鉴别： 取本品1ml于试管中，加5%亚硝酸钠溶液、 10%硝酸铝溶液各0.3ml，溶液呈黄色；另取 注射液0.1ml，加水10ml，摇匀，取稀释液 2ml，加5%二氯氧锆溶液1-2滴，溶液呈黄色，
再加盐酸1-2滴，颜色不褪。
28
（二）薄层色谱鉴别
• 吸附剂：硅胶、聚酰胺、纤维素
例 二陈丸中橙皮苷的鉴别
处方 陈皮 半夏（制） 茯苓 甘草
取本品5g，加甲醇30ml，置水浴上加热回流30分钟，滤过， 滤液浓缩至约5ml，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加 甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各 2µl，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板 上，以乙酸乙酯-甲酸-水（100﹕17﹕13）为展开剂，展开， 展 距 约 3cm ， 取 出 ， 晾 干 ， 再 以 甲 苯 - 乙 酸 乙 酯 - 甲 酸 - 水 （20﹕10﹕1﹕1）的上层溶液为展开剂，展开，展距约8cm， 取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下 检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相 同颜色的荧光斑点。
60%乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量
取10ml，置50ml量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇
匀，即得（每1ml含无水芦丁60µg）。
40
标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0.5ml、 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml与5.0ml，分别置 10ml量瓶中，各加0.1mol/L三氯化铝溶液2ml、 1mol/L醋酸钾溶液3ml，加60%乙醇至刻度，摇 匀 ， 放 置 30 分 钟 ； 以 相 应 的 溶 液 为 空 白 。 在
• 硅胶色谱分离弱极性化合物较好
• 聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳 • 纤维素薄层板则适用于分离多糖苷混合物 • 显色：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配 合的方法。
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1.硅胶薄层色谱
• 正相色谱 • 常用展开剂：
• • • • • • 甲苯-甲酸乙酯-甲酸（5：4：1） 苯-甲醇-乙酸（35：5：5） 氯仿-甲醇（8：2） 苯-乙酸乙酯（7.5：2.5） 苯-丙酮（9：1） 甲苯-甲酸乙酯-甲酸（5：4：1）
第二节 黄酮类成分分析
• 概述 • 一般性质 • 鉴别 • 含量测定
1
一、概述
7 6
8
1
2 2
' B
3
'
4
O C
'
A
5
3 4
6
'
5
'
O
• 黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮类化 合物。 • 现泛指两苯环通过中央三碳键相互联结而成的一
系列化合物。
• 在植物体内大部分与糖结合成苷，一部分以游离
形式存在。
• Pb2＋：1%PbAc2或碱式PbAc2；黄↓～红↓，有荧光
• Zr4+ ：2%ZrOCl2的甲醇溶液；↑枸椽酸， 5-OH黄酮的黄
色aq显著褪色；3-OH黄酮的aq呈鲜黄色
21
紫外光谱特征
• 因有2-苯基色原酮的基本结构，具有特定的紫外吸收峰， 两个较强的吸收带：
• Ⅰ带在300~400nm范围内，由B环桂皮酰基引起。
1ml，置10ml量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀， 作空白，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试 品溶液中芦丁的重量，计算，即得。
42
（二）黄酮类单体成分含量测定
• 1薄层色谱法
• 2高效液相色谱法
43
1薄层色谱法
• 样品经有机溶剂或水提取后，可用硅胶、纤维素或
聚酰胺进行层析，达到分离目的。
• 层析后将含有待测组分的色斑刮下，用适宜溶剂洗
脱，用紫外-可见分光光度法测定。
• 用薄层扫描仪（单波长或双波长法）可直接在薄层
板上扫描测定。
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2高效液相色谱法
• 常用法： HPLC法，黄酮类成分在紫外区有较强 的吸收，检测灵敏度较高，故在黄酮类单体成分 的定量分析中常用。
• HPLC条件：正相和反相色谱两类，反相色谱应用
较多。
• 反相色谱测定多用C18 键合相固定液，流动相常用
例 双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸鉴别
处方 金银花 黄芩 连翘
取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。 另取黄芩苷、绿原酸对照品，分别加75%乙醇制成每1ml含 0.1mg的溶液。吸取上述三种溶液各1~2µl，分别点于同一聚 酰胺薄膜（5cm×7cm）上，以醋酸为展开剂，展开，取出，
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溶解度
• 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷
元，单糖苷、双糖或三糖苷）不同而有很大差异。
• 游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙
酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。
• 黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，
但难溶或不溶与苯、氯仿等。
17
酸碱性
• 酸性：黄酮类化合物因分子中多有羟基，故显酸性，可 溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。
二氢查耳酮
O
OH
glc
O
O
梨根苷
结构和分类
黄烷3-醇
O
3
OH HO
OH
O
H OH H
OH
OH
黄烷-3， 4-二醇
O
3 4
（+）儿茶素
OH HO O OH OH OH OH OH
OH
OH
无色飞燕草素
结构和分类
OH
花色素
O
3 4
+
HO
O
+
OH OH OH
OH
7 6 5 3 4
O
' 2
2
' 3
4
OH
飞燕草苷元
38
2比色法
• 黄酮类化合物显色以后显色物与背景最大 吸收波长差别较大，可消除背景（即阴性 空白）的干扰，以提高本法的选择性及灵 敏度。常用铝盐作显色试剂。
39
例 消咳喘糖浆中总黄酮含量测定
处方 满山红
对照品溶液的制备 精密称取在120℃减压干燥至
恒重的芦丁对照品30mg，置100ml量瓶中，加
19
1还原反应
• 常用：与盐酸-镁粉（或锌粉）的反应。
• 反应时多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇
类化合物显橙红-紫红色，少数显紫-蓝色，且B环
上有-OH或-OCH3取代时，颜色即随之加深。 • 查耳酮、橙酮、儿茶素类则不发生色变。 • 花青素及部分橙酮，查耳酮等在单纯浓盐酸下也会 发生色变，须预先作一对照，以便排除。
37
灯盏细辛注射液中总咖啡酸酯的测定
处方 灯盏细辛提取物
对照品溶液的制备 取1,5-氧-二咖啡酰奎宁酸对照品适 量，精密称定，加0.1mol/L碳酸氢钠溶液制成每1ml含总咖 啡酸酯以1,5－氧－二咖啡酰奎宁酸10 mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置200ml量瓶中， 加水至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别取对照品溶液与供试品溶液，照紫外-可见 分光光度法，在305nm波长处测定吸光度，即得。 本品每1ml含总咖啡酸酯以1,5－氧－二咖啡酰奎宁酸计， 应为2.0～3.0mg。
OH
O
结构和分类
O
2 3
大豆素（7，4′-二OH异黄酮） 大豆苷（大豆素-7-O-glc苷） 葛根素（7，4′-二OH，8- glc异黄酮苷）
O
异黄酮
O
2 3
紫檀素 鱼藤酮
O
二氢异黄 酮
结构和分类
3 4
'
2
3 4
HO
OH
' '
6Baidu Nhomakorabea
' 2 OH
HO
6 5
OH
查耳酮
5
' O
glc
O
O
红花苷
OH
HO
OH
甲醇-水-乙酸（或磷酸缓冲液）及乙腈-水。 • 检测器主要采用紫外检测器或荧光检测器。
45
例 心通口服液中葛根素含量测定—HPLC法
• 碱性：氧原子的性质：黄酮类化合物分子中γ-吡喃酮环
上的1－位氧原子，因有未共用的电子对，故表现出微弱
的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成盐，常
表现出特殊的颜色，可用于鉴别。 • 生成的盐极不稳定，加水后即可分解。
18
显色反应
• 黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚 羟基及γ-吡喃酮环有关。 • 1还原反应 • 2与金属盐类试剂的络合反应
晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与
对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
34
四、含量测定
• （一）总黄酮含量测定
• （二）黄酮类单体成分含量测定
35
（一）总黄酮含量测定
• 1直接测定
• 2比色法
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1直接测定
• 黄酮类化合物具有特定的紫外吸收峰，含 黄酮类化合物的原料药及部分制剂经一定 的提取纯化后，可直接于最大吸收波长处 测定其吸收度，以芦丁等为对照品计算其 含量。
2
一、概述
• 常见中药：
• 黄芩、槐米、葛根、陈皮、枳实、银杏 叶、山楂、淫羊藿、射干、补骨脂、山 奈、蒲黄、广藿香、金线草、化橘红、 白果、忍冬藤、茵陈、满山红、高良姜、 桑白皮、骨碎补
结构和分类
氧化型
黄酮 黄酮醇 异黄酮 查耳酮 黄烷3-醇类
还原型
二氢黄酮
二氢黄酮醇
二氢异黄酮 二氢查耳酮 黄烷3、4-二醇类 汕酮